卵巢冷冻保存和移植的研究进展

卵巢冷冻保存和移植是建立卵子库的一项有效技术，近年来取得了很大进展。本文介绍了卵巢组织冷冻保存和移植的方法及近年来的研究情况。     

兔卵巢组织移植后组织学研究

目的:构建母兔自体及异体卵巢组织移植模型,揭示卵巢组织移植后组织学特征。方法:以母兔为实验动物,A组阳性对照,不做任何处理;B组阴性对照,切除双侧卵巢;C组自体移植组,分离卵巢组织,切成1mm3左右大小的米粒块,种植于颈部皮下;D组异体移植组,卵巢组织处理方法与C组相同,移植时将卵巢组织异体进行种植。术后60d处死母兔,子宫称重,对移植物及子宫内膜进行组织学检查。结果:1C组与D组中分别有5与3只母兔阴道呈红色或者粉红色、湿润、肿胀,进入发情期;2自体、异体皮下移植后存活的卵巢组织形态与移植前相似,表面血管较为丰富,皮质内可见正常形态的原始卵泡、初级卵泡,部分移植物可见成熟的窦状卵泡;3A组、C组、D组母兔子宫内膜表层细胞呈锯齿状,宫腔间隙较宽,被复粘膜层子宫腺发育,固有膜宽大,肌壁厚,而B组母兔宫腔呈裂隙状,粘膜层平坦,缺乏子宫腺,固有膜变窄,肌壁变薄。结论:母兔卵巢组织移植后,移植物可存活,并进一步释放内源性激素,对靶器官产生作用。     

单合子双胎间部分卵巢组织原位移植及冷冻保存

【目的】 总结1例单合子双胎间卵巢组织原位移植手术的体会。 【方法】 卵巢组织受者:单合子双胎之一(姐姐)诊断“卵巢早衰”,卵巢组织供者:双胎之二(妹妹)卵巢储备正常,育有一子。2012年2月8日于中山大学附属第六医院生殖医学研究中心分别进行供者卵巢部分组织获取术及卵巢早衰的受者卵巢组织原位移植术。【结果】 供者术后月经规则,受者在移植术后108 d恢复月经,术后受者血清卵泡生成素(FSH)和黄体生成素(LH)水平逐渐下降。 【结论】 异体卵巢组织原位移植可以帮助卵巢早衰患者恢复内分泌功能,并可能恢复其生殖功能。     

人类卵巢组织冻存与移植

近年来,癌症诊断和治疗水平的不断提高大大延长了儿童,青春期及生育期女性的生存期.由于卵巢对放化疗非常敏感,往往导致女性在癌症治疗过程丧失卵巢功能造成医源性的卵巢早衰.因此,保存卵巢功能被视为是一个对提高癌症预后生活质量的关键性问题.     

裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型的建立

目的 :建立裸鼠皮下人肝癌移植模型 .方法 :人肝癌细胞株SMMC - 772 1制成 0 2mL 含 5× 10 6个细胞悬液接种于 4～ 6周龄裸小鼠颈背部皮下 ,按时观察肿瘤生长情况 ,36d处死 .瘤组织作病理及电镜检查 ,周围血作与肿瘤相关的甲胎蛋白 (AFP)检测 .结果 :该模型具有类似原发性肝癌的形态学特征 .结论 :成功建立了人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型 .     

人胚和鼠类气管裸鼠皮下移植

本实验在13只裸小鼠皮下移植BABC小鼠和Wistar大鼠气管及人胚气管、支气管,共26段。观察1～8周,移植气管的总存活率为77%。以气管裸鼠皮下移植为模型的实验,在10天以后加刺激因子比较适宜。     

宿主状态对人卵巢组织异种皮下移植的影响

【目的】 探讨异种移植宿主状态对解冻后人类卵巢组织皮下移植效果的影响。【方法】 利用解冻后的人类卵巢组织片进行SCID小鼠皮下移植。按照卵巢组织在宿主不同的性别、去势以及局部创伤情况分为六组,观察移植后人类卵巢组织片中卵泡存活、生长、凋亡以及间质重构等情况。【结果】各组原始卵泡存活率与解冻后未移植组织相比明显下降(P < 0.05)。六组间比较,移植后第一周原始卵泡形态正常率差别有统计学意义(P = 0.046),无菌创伤雄性小鼠组最高(64.6%),完整雌性小鼠组最低(39.7%)。性别、去势情况对移植后一周原始卵泡形态正常率无明显影响,差别无统计学意义(P均 > 0.05)。异种移植10周中,随移植时间推移,生长期的卵泡百分比明显增加(P均 < 0.05);而六组间比较,不同时间点差别都没有统计学意义(P均 > 0.05)。移植后组织中的Ki-67和TUNEL原位杂交表达情况与解冻组织相似,而MMP-9的表达在间质中显得更加广泛。经过10周的SCID小鼠异种移植后,有肉眼可见小窦卵泡形成。 【结论】 人类卵巢组织异种皮下移植后能存活并生长,但有着不一样的间质重构;宿主性别和去势情况对10周移植效果影响不大,局部无菌性创口可改善卵泡存活率。     

KIAA1456抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长

目的：探讨KIAA1456对人卵巢癌细胞株HO-8910PM裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法：将15只裸鼠随机分成3组：空白组（PM组）,阴性对照组[PM（NC）组],实验组[PM（KIAA1456）组]。利用人卵巢癌细胞株HO8910PM及本课题组前期通过慢病毒介导建立的阴性对照组细胞株HO8910PM（NC）和过表达KIAA1456的细胞株HO8910PM（KIAA1456）分别在空白组、阴性对照组、实验组建立裸鼠皮下移植瘤,待成瘤成功后,分别用PBS缓冲液和携带针对随机无关序列（NC）的慢病毒液Lentivirus-NC（作为阴性对照,LV-NC）,携带KIAA1456病毒液Lentivirus-KIAA1456（LV-KIAA1456）每隔4 d进行一次瘤内定点注射治疗至28 d处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;采用实时荧光定量PCR和Western blot检测移植瘤组织中KI－AA1456的表达情况;免疫组化检测移植瘤中ki-67和PCNA的表达情况。结果：HO8910PM（KIAA1456）移植瘤组KIAA1456表达量明显高于阴性对照组和空白对照组（P=0.000）;28 d后处死裸鼠,HO8910PM（KIAA1456）组皮下移植瘤的体积明显小于阴性对照组和空白对照组（P=0.000）,抑瘤效果明显;移植瘤组织中KIAA1456的表达上调,ki-67和PCNA表达明显下调。HO8910PM（KIAA1456）组移植瘤组织中ki-67和PCNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义（P=0.000）。结论：过表达KIAA1456基因对人上皮性卵巢癌细胞HO8910PM裸鼠皮下成瘤的生长具有抑制作用,有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取

目的 探求冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取。方法 取手术切除的5例患者的卵巢皮质，放入1．5mol／L的二甲基亚砜＋10％血清中，应用可控程序冻冰仪逐渐降温，移入液氮中冻存。3个月后，将融解的卵巢皮质移植入90只裸鼠皮下，注射hFSH12周，刺激卵泡生长。注射hCG36h后，用18号针头穿刺提取卵细胞。结果 卵巢直径为3～9mm，穿刺获19个卵细胞，放入TC-199培养基，加20％胎牛血清。25mmol／L丙酮酸，75mIU／mLFSH和LH培养，获15个分裂中期的次级卵母细胞。结论 人卵巢组织冻融后可异体移植生长，且其卵细胞可在体外发育成熟。     

人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法将30只裸鼠随机分为两组,实验组15只,对照组15只。培养人卵巢癌细胞系SKOV3细胞,并将浓度调制2×10~7个·mL~(-1),取0.2 mL注射于实验组裸鼠右侧肩胛背部皮下,接种后每日观察两组裸鼠精神、活动、摄食、排便、体质量等情况,是否有肿瘤生长和肿瘤生长速度等。每3 d使用游标卡尺测量肿瘤最长径和最短径,计算肿瘤体积。于接种后第42天将荷瘤裸鼠处死,剥出肿瘤,测量瘤体长径和短径,称取瘤体质量,取肿瘤组织切片后行HE染色,观察肿瘤病理变化。结果细胞注射法可成功建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型,瘤体出现时间为3～7 d,成瘤率为93.33%。实验组裸鼠的体质量、精神、活动等情况与对照组无明显差异。共有2例瘤体表面出现破溃。观察结束后,处死裸鼠后完整剥除瘤体,测得肿瘤平均体积为(416.21±134.67)mm~3,肿瘤平均质量为(0.88±0.19)g。剖开瘤体,发现4例可见瘤体中间有坏死液化,取移植瘤组织进行病理检查,肿瘤组织大体表现符合人卵巢癌的特点。结论初步建立了人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,为卵巢癌的进一步研究奠定了基础。     

人卵巢组织玻璃化冷冻技术研究进展

卵巢组织的玻璃化冷冻技术是一项极有希望的保护生殖能力的技术,特别是对于接受放疗化疗后出现月经紊乱、闭经和不孕的女性肿瘤患者。这一技术的广泛接受,要求其具有安全、易于操作、效果理想的特点。通过对国内外的研究进展进行综述,对卵巢组织玻璃化冷冻的方法和应用的优缺点进行分析。     

慢速冷冻-快速复苏法对人胎儿卵巢组织超微结构的影响

171的探讨慢速冷冻-快速复苏法对人胎儿巢组织超微结构的影响。方法将人胎儿卵巢组织分为新鲜组和冻融组，对冻融前后的胎儿卵巢组织超微结构进行比较。结果与新鲜组相比，冻融组卵巢组织中细胞的超微结构大部分保存良好。冷冻损伤在卵母细胞主要表现为胞浆内的空泡，线粒体水肿，偶见核膜的皱缩；在颗粒细胞主要为轻度盼水肿和少量空泡；间质组织未见明显损伤。结论慢速冷冻-快速复苏法可以较好地保存人胎儿卵巢组织超微结构。     

玻璃化冷冻保存对小鼠卵巢组织的影响

目的探讨玻璃化冷冻保存对小鼠卵巢组织内卵泡形态及卵巢组织激素分泌功能的影响。方法将23只4周龄ICR雌鼠随机分为新鲜卵巢组、去势组和玻璃化冷冻组，应用乙二醇（EG）和二甲基亚砜（DMSO）玻璃化冷冻小鼠卵巢组织。冷冻前后取部分小鼠卵巢组织行组织学观察；同时将部分新鲜和复苏组织自体移植入小鼠肾被膜下。移植术后5d开始观察小鼠的动情周期，术后30d测定小鼠血清雌激素浓度。结果冻融卵巢组织内存活的原始卵泡和初级卵泡与新鲜组织无显著差异（P〉0．05）；而次级卵泡的存活率显著下降（P〈0．01）。移植术后玻璃化冷冻组和新鲜卵巢组小鼠均出现动情周期，两组动情周期出现时间无明显差异（P〉0．05）。移植术后第30天两组小鼠血清雌激素浓度无显著差异（P〉0．05）。结论玻璃化冷冻法可以较好地保存小鼠卵巢组织内的原始卵泡和初级卵泡，且不影响卵巢组织的激素分泌。     

耳廓复合组织游离移植功能性美容修复前鼻孔疤痕挛缩畸形

目的探讨修复前鼻孔疤痕挛缩畸形的方法．方法采用自体耳廓复合组织游离移植的方法对12例外伤后前鼻孔疤痕挛缩畸形病人进行功能性美容修复．术中根据挛缩部位，切口选择在“软三角”或鼻翼外侧脚，做前鼻孔全层切开，松解疤痕；根据鼻翼缺损的的大小，在患者的耳轮上脚切取相应大小的耳廓复合组织，然后将其嵌入移植在创面上．术后观察耳廓复合组织成活情况，通气功能及外形改善情况．结果本组20块移植组织，除1块坏死外全部成活．术后随访所有病人前鼻孔外形和通气功能恢复良好．结论耳廓复合组织游离移植是功能性美容修复前鼻孔疤痕挛缩畸形较好的方法．     

人肝癌裸小鼠常位移植实验研究

采用硫贲妥钠（３０ｍｇ／ｋｇ、３０％乙醇配制）麻醉和蘸上立止血（２５０ｋＩＵ／ｍｌ）的明胶海棉止血措施确保了人肝癌裸小鼠常位移植术能安全、可靠地进行。本中心建立的两株人肝癌裸小鼠移植瘤株（ＨＨＣ４、ＨＨＣ１５）已成功地移植于裸小鼠（ＳＰＦ级）肝脏内，移植瘤生长良好、传代稳定和持续分泌ＡＦＰ。荷瘤（ＨＨＣ１５）３～６周裸小鼠血清ＡＦＰ含量与瘤体积的增加呈正相关。常位移植前（７ｄ）裸小鼠皮下注射０．１ｍｌ０．５％ＣＣ１（Ｖ／Ｖ。橄榄油配制）能明显提高ＨＨＣ４常位移植的成功率（Ｘ２检验、Ｐ＜０．０１）；在微量ＣＣｌ４作用下，裸小鼠肝细胞受损伤，发生肝硬化，在此基础上所移植和生长的人肝癌常位移植瘤与大多数人肝癌病变发生的肝脏病理生理学特点相似，本模型的建立更适用于抗肝癌药物的模拟治疗和筛选。     

裸鼠荷瘤实验中常见问题的解析和总结

目的探讨裸鼠荷瘤过程中的出现的常见问题,提高裸鼠荷瘤的成功率。方法通过分析实验过程中影响裸鼠荷瘤的各种因素,寻求裸鼠荷瘤常见问题的解决方案。结果总结了在裸鼠荷瘤实验中的各种影响因素,并提出了合理的建议。结论裸鼠肿瘤模型的制备是研究肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价以及有效性筛选等研究课题的基础,本文为制备良好的裸小鼠肿瘤模型提供合理的建议。     

卵巢组织冷冻保存

卵巢组织冻存移植技术是近年来新兴的生育力保护技术,不仅可保护患者生育力,还可以保护卵巢内分泌功能。无需卵巢刺激,不延迟后续抗癌治疗,一次可冻存成千上万个卵泡,移植后可实现自然妊娠,是青春期女童和无法延迟抗癌治疗年轻女性的唯一生育力保护方法。2019年美国生殖医学学会声称卵巢组织冻存移植技术不再是试验性技术。     

FAP蛋白在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activationprotein,FAP)在卵巢癌组织中的表达及与微血管密度(microvessel density,MVD)的关系.方法 通过体外实验研究,用免疫组化法检测FAP在卵巢正常组织、卵巢交界性肿瘤和卵巢癌组织中的表达并分析FAP与卵巢癌的分化程度、侵袭程度的相关性.结果 FAP在卵巢癌间质成纤维细胞中有表达,而在卵巢癌细胞和正常卵巢组织及卵巢交界性肿瘤中未见表达,且FAP表达与卵巢癌的分化程度和侵袭程度有关.间质中的MVD与卵巢癌的分化程度有关,且随着FAP表达水平的增加、MVD表达阳性率则逐渐上升,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FAP的异常表达可能与卵巢癌(浆液性囊腺癌)的发生、发展有关,其可通过促进肿瘤微血管的生成,诱导癌组织产生反应性间质,加快肿瘤的演进.     

裸小鼠常位移植人肝癌模型的建立

作者用32只裸小鼠,将人肝癌移植瘤株LTNM_4瘤组织进行肝内移植,结果31只裸小鼠肝内形成肿瘤结节,移植成功率为96.8％;同时给以腋下异位移植,虽此法成功率为100％,但常位移植有所需组织少、生长速度快、更接近临床状态等特点,是研究肝癌的独具特色的动物模型。     

白血病化疗及造血干细胞移植对卵巢功能的影响

目的 研究造血干细胞移植对卵巢功能的影响。方法 观察45例因急性非淋巴细胞白血病分别接受同种异体造血干细胞移植（Allogeneic stem cell transplantation，Allo-SCT）和自体造血干细胞移植（Autologous stem cell transplantation，Auto-SCT）患者的月经恢复情况和性激素变化，同时抽取45名同年龄段健康妇女作为对照。结果 Allo-SCT组有2例患者月经恢复，Auto-SCT组有4例恢复；移植时年龄越小，卵巢功能越易恢复。Allo-SCT和Auto-SCT后促性腺激素较对照组显著升高，而雌激素显著降低，Allo-SCT患者雄激素也显著降低。结论 造血干细胞移植后引起的卵巢功能降低主要是因为移植前化疗对卵巢的损害，但Allo-SCT引起的免疫调节障碍可进一步使卵巢功能减退。