甲状腺激素对大鼠脑海马发育期神经元烟碱受体α4亚单位表达的影响

目的探讨甲状腺激素(TH)对发育关键期大鼠脑海马区域神经元烟碱受体α4亚单位(nAChRα4)表达的作用和影响。方法实验分成正常对照组(n=42)和甲减组(n=36)。选用甲巯咪唑(MM)复制甲状腺机能减退大鼠模型,收集出生后第0,4,7,14,21,30,120天的正常、甲减仔鼠脑组织,每组6只。采用原位杂交组织化学法检测发育关键期仔鼠大脑海马区域神经元烟碱受体α4亚单位(nAChRα4)的表达变化情况。结果①正常对照组nAChRα4 mRNA在生后不同发育阶段的表达变化明显且具有层状分布的特点。生后第0天表达很低,在生后第14-21天nAChRα4 mRNA表达最高,然后下降,直至成年鼠水平(生后第120天)。②正常对照组nAChRα4 mRNA海马CA1区阳性信号表达高峰(生后第21天)是成年鼠的4-5倍,海马CA2、CA3区阳性信号表达高峰(生后第21天)是成年鼠的8倍左右,海马齿状回(DG)区阳性信号表达高峰(生后第14天)是成年鼠的5倍左右。③甲减组nAChRα4 mRNA表达在各时点均明显低于正常对照组(P<0.001)。甲减组表达的高峰时间与正常对照组的高峰时间相一致,无高峰延迟。结论在脑发育关键期,甲状腺激素水平的减少改变了大鼠脑海马神经元烟碱受体α4亚单位的表达,进一步影响了该区域突触的发生及相关神经回路的建立,出现神经元的旷置或错误神经通路,这可能阻碍了脑发育与其功能的成熟。     

甲状腺素对胎鼠脑bcl—2和bax基因表达的影响

目的　研究甲状腺素对胎鼠脑bcl 2和bax基因表达的影响。方法　采用丙基硫氧嘧啶灌胃制备甲减孕鼠模型 ,出生后小鼠即为先天性甲减鼠 ,另一组出生后即日起用腹腔注射T4,剂量为 2 μg/ 10 0g·d-1(替代组 ) ,采用逆转录 -聚合酶链反应检测胎鼠出生后 1、5、10d胎鼠bcl 2和bax基因的表达。结果　bax基因在甲减胎鼠脑第 1天表达最高 ,随着鼠龄增长 ,表达降低 ;正常第 1天胎鼠及替代组胎鼠脑未检测到bax表达 ;bcl 2基因在第 1天甲减胎鼠表达高于正常对照组 ;第 5天、第 10天降低 ;bcl 2在替代组鼠脑中表达较甲减组高。结论　甲状腺激素对bcl 2和bax基因表达的不同影响 ,在脑细胞凋亡中有重要的作用。     

探索学习对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质巢蛋白及突触素表达的影响

目的探讨探索学习对局灶性脑梗死大鼠巢蛋白（nestin）及突触素（synaptophysin,SYP）表达的影响。方法健康雄性SD大鼠70只,其中60只经电凝法造成右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型后,随机分为探索学习组（n=30）和手术对照组（n=30）,探索学习组居于探索笼,手术对照组5只一组群居于标准笼;假手术组（n=10）仅开颅不电凝大脑中动脉,居于标准笼。探索学习组和手术对照组分别于术后第1、7、14、28天随机选取5只大鼠处死,假手术组分别于术后第7、28天随机选取5只大鼠处死,即进行巢蛋白及突触素免疫组化染色,测定其在脑梗死灶周围皮质的表达情况。结果探索学习组大鼠巢蛋白阳性神经元数在第7、14天明显多于手术对照组（P〈0.01）,探索学习组突触素的表达在第14、28天明显多于手术对照组（P〈0.01）。结论探索学习能促进梗死灶周围皮质巢蛋白及突触素的表达。     

异丙酚对新生大鼠海马突触后致密物-95和突触素表达的影响

目的 观察异丙酚对新生大鼠海马突触后致密物-95（PSD-95）和突触素mRNA表达的影响。方法 雄性SD大鼠30只,日龄7 d,体重10～15 g,随机分为对照组和异丙酚组,每组15只。异丙酚组腹腔注射异丙酚总量为200 mg/kg,对照组不注射任何药物。透射电镜下观察海马CA1区突触结构的变化,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测海马组织中PSD-95和突触素mRNA的表达情况。结果 对照组海马CA1区突触结构正常;异丙酚组突触结构明显改变：突触数目减少、突触间隙变窄甚至融合、PSD减少;RT-PCR结果显示,与对照组比较,异丙酚组海马组织PSD-95和突触素mRNA表达降低（P<0.05）。结论 异丙酚降低了新生大鼠海马PSD-95和突触素mRNA的表达,破坏了海马突触结构。     

围生期甲减对鼠脑Goα基因表达的影响

目的　定量分析甲状腺激素缺乏对围生期大鼠脑Goα mRNA的影响。方法　以PTU溶液灌胃造成大鼠围生期甲减模型,部分甲减仔鼠每天腹腔注射T4 2μg/ 100g体重。收集5、15、25d的正常、甲减及T4-替代仔鼠脑组织,用竞争性RT-PCR法测定脑Goα mRNA。结果　生后5、15、25d的甲减仔鼠脑Goα mRNA水平均较同日龄正常仔鼠明显升高,尤以15d时最为显著。T4-替代可明显减轻这种变化。结论　甲状腺激素对发育期鼠脑Goα基因的表达有下调作用,这可能是甲状腺激素调节脑发育的机制之一。     

甲减影响新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα的基因表达

目的研究甲状腺功能低下对新生期鼠脑梨状皮质Goα及GsαmRNA表达的影响。　方法采用地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术 ,对围生期正常及甲减Wistar大鼠动物模型梨状皮质Goα及GsαmRNA的表达状况进行研究。　结果 14d龄甲减鼠脑梨状皮质GoαmRNA的表达明显升高 ,但其GsαmRNA与对照组无显著差异。结论在鼠脑发育过程中 ,甲状腺激素对梨状皮质Goα基因的表达具有负调作用 ,而对该区Gsα基因的表达则不具备调节功能     

蛋白激酶C抑制剂对发育期甲状腺功能减退大鼠智力的改善作用

目的研究发育期甲状腺功能减退(甲减)的大鼠经蛋白激酶C(PKC)抑制剂bisindolylmaleimideⅪ处理后智力的变化,从信号转导途径进一步探讨甲减时鼠脑发育异常的机制。方法2只SD孕鼠自孕第15天起以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃,出生的仔鼠即为甲减仔鼠。部分甲减仔鼠于出生当日起腹腔注射PKC抑制剂bisindolylmaleimideⅪ0.6μg.g-1.d-1。另外1只未灌注丙基硫氧嘧啶溶液的雌鼠所产仔鼠作为正常对照组。仔鼠龄达1个月时,对正常对照组(n=8)、甲减组(n=8)、PKC抑制剂处理组(n=8)仔鼠行水迷宫实验测试其智力水平。结果三组仔鼠学习记忆过程存在明显差异。PKC抑制剂组及甲减组皆较正常对照组逃避潜伏期长,找到终点的比率低,游速较正常对照组明显降低;且甲减组比PKC抑制剂组的逃避潜伏期更长,找到终点的比率更低,游速更慢,总体变化有显著性差异(P<0.01)。结论蛋白激酶C抑制剂bisindolylmaleimideⅪ对发育期甲状腺功能减退大鼠的智力有改善作用,PKC信号转导系统可能参与了甲减性脑发育障碍的发生。     

甲状腺激素对新生鼠脑NOS基因表达的调节

目的"观察不同日龄新生鼠脑一氧化氮(NO)含量,一氧化氮合酶(NOS)活性的变化及甲状腺激素对nNOS基因表达的调节. 方法"采用丙基硫氧嘧啶(PTU)灌注孕母鼠造成甲减模型.采用NO、NOS的生化测定法以及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR). 结果"生化测定法显示,不同年龄段大鼠随着年龄的增加NO含量上升(P＜0.01),NOS的活性上升(P＜0.01);同一年龄段仔鼠,甲减组较正常组NO含量下降(P＜0.01),NOS活性下降(P＜0.01);RT-PCR测定显示,幼鼠nNOS mRNA水平随着年龄的增加而上升;同一年龄组,甲减组较正常组nNOS mRNA表达下降. 结论"提示甲状腺激素对nNOS mRNA表达有上调作用;NO信号系统可能参与鼠脑发育阶段甲状腺激素缺乏所致的脑损害过程.     

甲减影响新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα的基因表达

目的"研究甲状腺功能低下对新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα mRNA表达的影响. 方法"采用地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术,对围生期正常及甲减Wistar大鼠动物模型梨状皮质Goα及Gsα mRNA的表达状况进行研究. 结果"14d龄甲减鼠脑梨状皮质Goα mRNA的表达明显升高,但其Gsα mRNA与对照组无显著差异.结论"在鼠脑发育过程中,甲状腺激素对梨状皮质Goα基因的表达具有负调作用,而对该区Gsα基因的表达则不具备调节功能.     

围生期甲状腺功能减退对新生仔鼠心肌细胞自噬的影响

目的探讨心肌细胞自噬在仔鼠围生期甲状腺功能减退（简称甲减）致心功能损害中的作用,并观察左旋甲状腺素（L-T4）替代治疗后自噬指标的改变。方法SD孕鼠自孕15d起每日予丙基硫氧嘧啶（PTU）50mg/d灌胃至仔鼠出生并持续整个哺乳期,制成围生期甲减模型,出生仔鼠为甲减组,其余孕鼠每日予0.9%氯化钠溶液灌胃,出生仔鼠为对照组,部分甲减仔鼠自出生当日起予以每日腹腔注射L-T42μg/100g,为治疗组,收集甲减组、治疗组及对照组（每组8只）出生7d龄仔鼠的心室肌组织,采用Westernblot法测定并比较心肌组织自噬相关蛋白LC3与cathepsinD的表达,同时测定并比较血清甲状腺激素水平及CK-MB、LDH与AST水平。结果甲减组仔鼠CK-MB、LDH及AST水平均高于对照组（均P＜0.01）,治疗组仔鼠3者水平均较甲减组下降（均P＜0.01）;甲减组仔鼠LC3II/LC3I及cathepsinD表达水平均高于对照组（均P＜0.01）,治疗组仔鼠2者的表达水平均较甲减组降低（均P＜0.01）。结论心肌细胞自噬在围生期甲减诱发新生仔鼠心功能损害中起重要作用。     

围生期甲状腺功能低下对仔鼠大脑皮质及海马ARmRNA影响的研究

目的:研究围生期甲状腺功能低下(甲低)对仔鼠大脑皮质及海马雄激素受体mRNA(ARmRNA)表达的影响.方法:对雌大鼠从孕15 d起每日以丙基硫氧嘧啶(PTU)溶液灌胃(50mg/d)至断奶,造成大鼠围生期甲低模型 , 部分甲低仔鼠每日腹腔注射左旋甲状腺素(L-T4)2μg/100g体重.收集出生后1、 5、10、15、20 d的正常、甲低及T4-替代仔鼠的大脑皮质及海马组织,用竞争性RT -PCR法测定ARmRNA水平.结果:正常组仔鼠生后ARmRNA水平随日龄增加而增高,海马高于大脑皮质,雄性组高于雌性组.与同日龄正常对照组相比,甲低组大脑皮质及海马ARmRNA水平明显降低.T4-替代组ARmRNA水平增加,但在10、20日龄的雄性组和15、20日龄的雌性组海马的表达仍未达正常对照组水平,大脑皮质各组与正常组已无显著性差异.结论:围生期甲状腺功能低下会引起发育期大鼠大脑皮质和海马的ARmRNA表达下降,及时替代治疗能恢复大脑皮质ARmRNA的正常表达,但海马的ARmRNA表达则未能达到正常水平.     

甲状腺功能低下大鼠仔鼠大脑皮质中NO及NOS活性的变化

目的　观察甲状腺功能低下大鼠仔鼠大脑皮质中一氧化氮 (NO)含量 ,一氧化氮合酶 (NOS)活性和环鸟苷酸 (cGMP)含量的变化 ,为探讨甲状腺激素对神经系统发育的作用机制 ,提供实验资料。方法　取怀孕 3日的SD大鼠 10只 ,随机分为实验组与对照组。实验组饮含 0 1%高氯酸钠的自来水 ,对照组饮自来水直至仔鼠产下 15日 ,其产下的仔鼠分别为甲状腺功能低下仔鼠及正常仔鼠。用放射免疫法测定仔鼠血清中游离三碘甲腺原氨酸 (FT3 )、游离四碘甲腺原氨酸 (FT4)、促甲状腺激素 (TSH)和cGMP含量 ,采用硝酸还原酶法测仔鼠大脑皮质中NO含量 ,采用分光光度计法测NOS活性。结果　 15日龄甲低组仔鼠血清FT3 、FT4含量较对照组明显降低 (P <0 0 1) ,而血清TSH含量较对照组明显增高 (P <0 0 1)。实验组仔鼠大脑皮质中NO含量、NOS活性及cGMP含量较对照组显著降低 (P <0 0 1)。相关分析表明 :血清FT3 含量与大脑皮质中NO、cGMP含量呈显著正相关 ,r值分别为 0 91、 0 97,P <0 0 1。血清FT4含量与大脑皮质中NO、cGMP含量也呈显著正相关 ,r值分别为 0 90、 0 96 ,P <0 0 1。大脑皮质中NO含量与cGMP含量呈显著正相关 ,r值为 0 90 ,P <0 0 1。血清TSH与大脑皮质中NO、cGMP含量呈显著负相关 ,r值分别为 - 0 86、 - 0 8     

甲状腺激素对新生鼠脑NOS基因表达的调节

目的 观察不同日龄新生鼠脑一氧化氮（ＮＯ）含量，一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的变化及甲状腺激素对ｎＮＯＳ基因表达的调节。方法 采用丙基硫氧嘧啶（ＰＴＵ）淮注孕母鼠造成甲减模型。采用ＮＯ、ＮＯＳ的生化测定法以及半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）。结果 生化测定法显示，不同年龄段大鼠随着年龄的增加ＮＯ含量上升（Ｐ〈０．０１），ＮＯＳ的活性上升（Ｐ〈０．０１）；同一年龄段仔鼠，甲减组较正常组ＮＯ含量     

促红细胞生成素及其受体在脑外伤后的表达及意义

目的观察促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在急性重型脑外伤后大脑皮质内的动态表达规律,并探讨其意义。方法将130只Wistar大鼠分为3组:正常组10只、对照组60只(仅行开颅术)和脑损伤组60只(Feeney法)。分别在伤后5、12、24h及3、5、7d断头取脑。采用RT-PCR、免疫荧光法检测EPO和EPOR的mRNA及蛋白的表达。结果正常组和对照组各时间点有微量EPO及EPOR的表达,脑损伤组在伤后5h见少量EPOmRNA和蛋白的表达,12h和24h表达升高,至3d(mRNA0.691±0.035,免疫阳性细胞78.4±6.32)达到高峰,5d时下降,7d时降至正常水平。而EPORmRNA和蛋白在伤后5h见少量表达,12h时表达升高,至24h(mRNA0.736±0.017,免疫阳性细胞70.2±6.31)达到高峰,3d(mRNA0.641±0.027,免疫阳性细胞74.8±5.49)、5d(mRNA0.656±0.011,免疫阳性细胞69.5±7.21)和7d(mRNA0.771±0.017,免疫阳性细胞70.2±6.59)时仍维持在高表达水平,未见减弱。结论大鼠急性重型颅脑损伤后大脑皮质内EPO短暂升高,而EPOR持续高水平表达且呈时间依赖性,提示颅脑损伤后外源性EPO能与持续高表达的EPOR结合产生神经保护作用。     

胡黄连对缺血再灌注大鼠脑内NMDAR1 mRNA表达的影响

目的 观察缺血再灌注模型大鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1（NMDAR1）mRNA的变化,探讨胡黄连对神经元的保护作用。方法 参照线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,胡黄连干预,原位杂交方法观察皮质、纹状体NMDAR1 mRNA表达。结果 对照组缺血侧皮质区、纹状体区于缺血再灌注1d时NMDAR1 mRNA表达达高峰,7d后逐渐下降,但各时间点与假手术组比较,均有显著性差异（F=3．6、7．2,q=11．4～16．7,P〈0．01）;胡黄连治疗组大鼠脑皮质与纹状体NMDAR1 mRNA基本接近假手术组,明显低于对照组（t=9．43～10．55,P〈0．01）。结论 胡黄连对脑缺血再灌注损伤神经元有一定保护作用,其机制可能与下调脑内NMDAR1 mRNA表达有关。     

二甲双胍对甲状腺功能减退大鼠甲状腺激素的影响

目的 探讨二甲双胍对甲状腺功能减退大鼠甲状腺激素水平的影响及其机制.方法 取3个月龄雄性SD大鼠36只,随机分为正常对照(NC)组、甲状腺功能减退(HT)组、二甲双胍(Met)组.HT组和Met组以含0.01％氨基三唑的饮用水喂养大鼠4周制备甲状腺功能减退大鼠模型,NC组大鼠喂养普通饮用水.造模成功后,Met组用200 mg/kg二甲双胍灌胃,HT组和NC组用等体积0.05％羟甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃.于灌胃第8周时对3组大鼠甲状腺组织行H-E染色,采用qPCR检测下丘脑促甲状腺激素释放激素前体(proTRH) mRNA的表达;于灌胃第8、12周时采用电化学发光法检测3组大鼠血清T3、T4水平,采用qPCR和蛋白质印迹法检测甲状腺组织钠碘同向转运体(NIS) mRNA和蛋白表达.结果 在灌胃8、12周时,HT组大鼠血清T3、T4水平均低于NC组,而Met组T3、T4水平均高于HT组(P＜0.05).灌胃8周时,H-E染色结果显示NC组滤泡大小不等,内见大量胶质及吸收空泡;HT组大鼠甲状腺滤泡缩小,滤泡上皮成柱状,滤泡周围吸收空泡减少;Met组滤泡上皮增生较HT组稍改善.灌胃8周时,qPCR结果显示HT组大鼠下丘脑proTRH和甲状腺组织NIS mRNA表达均高于NC组,而Met组均低于HT组(P＜0.05);蛋白质印迹法检测结果显示Met组NIS蛋白表达低于HT组(P＜0.05),而HT组和NC组NIS蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).灌胃12周时,HT组和Met组甲状腺组织NIS mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),Met组NIS蛋白表达高于HT组(P＜0.05).结论 二甲双胍能升高甲状腺功能减退大鼠的甲状腺激素水平,但短期内并不是由甲状腺NIS表达升高所致.     

发育中Wistar大鼠大脑皮层甲基化结合蛋白-2基因表达变化

目的:研究甲基化结合蛋白-2(methyl-CpG-binding protein 2,mecp2)基因在发育中正常Wistar大鼠大脑皮层表达水平的变化.方法:应用实时定量PCR(real-time PCR),Northern印迹杂交对mecp2基因在正常Wistar大鼠发育的不同阶段:胚胎第15天(E15)、第17天(E17)、第19天(E19)、出生当日(P0),生后第7天(P7)、生后第14天(P14)、生后第28天(P28),成年期大鼠mRNA的表达水平进行定性、定量分析;应用Western印迹杂交对MeCP2的表达水平进行半定量分析.结果:mecp2基因是在正常Wistar大鼠大脑皮层中表达的mRNA,约为10kb.从胚胎至成年期的发育过程中,mecp2基因mRNA的表达虽有波动,但差异无显著性.mecp2基因在正常Wistar大鼠大脑皮层中仅表达一种MeCP2,相对分子质量为75 000.在不同发育阶段其表达水平表现为,胚胎E15表达水平最低,自胚胎E19始至成年期MeCP2表达水平较E15明显增高.生后第7日至成年期,各时间点间表达水平的变化差异没有显著性.结论:随着正常Wistar大鼠大脑皮层神经元的发育成熟,MeCP2的表达水平逐渐增高,说明MeCP2对神经元的成熟有重要作用,并可能与维持神经元的成熟状态有关.     

大鼠脑缺血再灌注后NCAM基因表达的变化

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞黏附分子（NCAM）基因表达的变化及规律.方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,原位杂交技术检测脑缺血90 min再灌注2 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d和14 d时间点神经细胞NCAM mRNA表达的变化.结果 NCAM mRNA于再灌注2 h时在皮质出现,12 h时达高峰,14 d降至基础水平;纹状体NCAM mRNA于2 h时出现,1 d后达高峰,14 d降至基础水平.结论脑缺血再灌注后NCAM基因表达持续增加,提示其在神经损伤修复过程中可能起重要作用.