顺铂对表达Hsp 27基因细胞株的细胞毒影响的实验观察

目的：观察顺铂对表达Hsp27基因的细胞株P1-Hsp27细胞毒作用的影响。方法：利用MTT法检测顺铂对Hsp27基因表达组和非基因表达组细胞增殖的影响。采用Hoechst/Propidium Iodide(PI)双重染色。动态观察两种不同剂量的顺铂处理组细胞核在荧光显微镜下的形态变化。结果：顺铂对该细胞株具有剂量相关性细胞毒作用。除500umol组12小时外，Hsp27基因表达对顺铂的细胞毒作用无明显保护作用（P＞0．05），在大剂量顺铂（500umol)处理组，12小时，24小时后，大约有40％和66％的细胞死亡，而所有死亡细胞其细胞膜完整性丢失，细胞核呈PI染色阳性，在小剂量顺铂（25umol)处理组，细胞生长在早期稍受影响，少数细胞死亡，而死亡细胞的胞也呈PI染色阳性，结论：顺铂能诱导恶性转化的大鼠成纤维细胞坏死，在本实验条件下，诱导的Hsp27顺铂的细胞毒作用无明显保护作用。     

三七总皂苷对前列腺癌PC-3细胞增殖及迁移的抑制作用

探讨三七总皂苷对人前列腺癌PC-3细胞增殖及迁移的抑制作用,初步研究该药物的作用机制,并为前列腺癌的药物治疗及扩展tPNS的临床应用提供实验依据。方法：采用MTT实验、细胞计数、伤口愈合实验等方法检测tPNS对PC-3细胞增殖及迁移的影响;采用Western blot及明胶酶图分析等方法对增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、血管细胞间黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1）及迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinases 2,MMP-2）等进行检测。通过检测p38 MAPK及ERK途径的磷酸化变化,探讨tPNS对PC-3细胞作用的可能信号途径。结果：tPNS可抑制PC-3细胞增殖,随着tPNS浓度（200、400、800 mg/L）的增加,对PC-3细胞的抑制率分别增加至13.0%、29.5%和35.9%（P<0.05）。tPNS下调PC-3细胞增殖标志物PCNA的表达水平,该效应呈量效及时效关系。tPNS（200、400、800 mg/L）可显著抑制PC-3细胞迁移。tPNS还可显著下调迁移相关蛋白MMP-2及黏附分子VCAM-1的表达水平。tPNS可显著增加p38 MAPK的磷酸化水平,但对ERK磷酸化影响不明显。结论：tPNS抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及迁移活性,这些生物学作用可能与该药抑制PCNA、VCAM-1、MMP-2的表达及激活p38 MAPK信号通路有关。     

顺铂联合土贝母皂苷甲对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的:探讨土贝母皂苷甲与顺铂单独及联合应用对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用,以期对临床上药物治疗宫颈癌提供新的思路和理论依据.方法:采用MTT法检测单用土贝母皂苷甲、DDP及两药联合时对HeLa细胞的生长抑制率.用流式细胞仪测定细胞周期变化.结果:土贝母皂苷甲组(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)、顺铂组(10μmol/L)及联合组(40μg/ml土贝母皂苷甲+10μmol/L顺铂)宫颈癌Hela细胞株均有不同程度的生长抑制作用;土贝母皂苷甲组随着药物浓度增加,作用时间延长,对Hela细胞的生长抑制率逐渐升高;土贝母皂苷甲与顺铂联合用药较单一用药对Hela细胞的生长抑制率增高,具有浓度―时间依赖性.流式细胞仪分析结果显示:土贝母皂苷甲组、顺铂组及联合组作用于宫颈癌Hela细胞株24小时,可阻滞细胞周期于G2/M期.结论:土贝母皂苷甲对宫颈癌HeLa细胞株具有生长抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,其与顺铂联合应用具有协同作用,联合应用可减少顺铂用药剂量;土贝母皂苷甲与顺铂单独及联合作用于宫颈癌Hela细胞株24h可阻滞细胞周期于G2/M期.     

HSP70ASODN转染增强顺铂抑制肝癌细胞HepG2增殖的试验研究

目的:研究HSP70ASODN联合顺铂对于肝癌细胞的增殖抑制作用。方法:运用MTT法比较转染组和未转染组联合顺铂在肝癌细胞增殖方面的差异。结果:观察转染HSP70组与未转染组HepG2细胞株对化疗药物顺铂的敏感性时,24h、48h、72h、96h未转染组与转染组的细胞生长抑制率分别为,0.329±0.029、0.583±0.022;0.356±0.035、0.684±0.052;0.497±0.033、0.723±0.048;0.523±0.035、0.715±0.047。结论:HSP70ASODN能增强顺铂对HepG2增殖抑制作用。     

人参皂苷Rg3与顺铂对荷卵巢癌裸鼠免疫功能及肿瘤相关蛋白的影响

[目的]观察人参皂苷Rg3联合顺铂对荷高转移人卵巢癌细胞系HO．8910PM转移瘤裸鼠白细胞介素．2（IL-2）、干扰素-γ（INF-γ）及nm23、血管内皮生长因子（VEGF）及增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。[方法]移植瘤裸鼠随机分成6组腹腔给药：荷瘤空白对照组fA组）;不同Rg3浓度药物组：2．5mg／kg（B组）、5mg／kg（C组）和lOmg／kg（D组）;Rg3和顺铂联用组（E组）以及顺铂阳性对照组（F组）。分别测定各组裸鼠转移瘤体积变化、IL-2、INF-γ、nm23、VEGF及PCNA的变化情况。[结果]与A组比较,E组（P〈0．05）和F组（P〈0．01）小鼠血清中IL-2、INF-γ含量均能显著降低;B（P〈0．05）、C、D和E（P〈0．01）组小鼠移植瘤组织nm23的表达均增强。Rg3给药后,小鼠移植瘤组织VEGF、PCNA表达均呈下降趋势。[结论]人参皂苷Rg3和顺铂联用具有协同抗肿瘤及减毒的作用。Rg3可能通过增强mm23的表达．使VEGF及PCNA表达呈下降趋势等多途径产生抗肿瘤作用。     

雾化吸入顺铂对大鼠肺组织损伤的研究

目的：探讨雾化吸入不同浓度顺铂对大鼠肺组织的损伤情况。方法：将45只SD大鼠随机分为3组,每组15只,分别为高剂量组、低剂量组及空白组。高剂量组和低剂量组分别给予顺铂6ｍG/ｋG、2ｍG/ｋG雾化吸入,每天1次,连续60天;空白组仅给予生理盐水雾化吸入,其余同高剂量组和低剂量组。分别在实验开始后第15天、30天、60天时取大鼠肺组织行病理切片观察,同时通过酶联免疫吸附法测定肺组织中基质金属蛋白酶9和转化生长因子β的浓度,了解不同剂量顺铂雾化对大鼠肺组织的损伤情况。结果：随着雾化时间延长,大鼠肺组织损伤呈进行性加重,60天时,各组大鼠肺组织呈现不同病理改变,三组之间差异明显。ＭＭP-9在高剂量组中表现为先升高后降低,在低剂量组中呈现持续性升高。30天时,高剂量组ＭＭP-9表达为(25.378±1.248)μG/L,低剂量组为(21.168±0.899)μG/L,差异无统计学意义(P＜0.001);60天时,高剂量组ＭＭP-9值为(21.802±0.847)μG/L,低剂量组为(22.850±1.338)μG/L,差异无统计学意义(P＝0.141)。TGF β在高剂量组与低剂量组都呈现持续性升高,60天时,高剂量组TGF β表达为(55.180±2.108)μG/L,低剂量组为(52.188±1.396)μG/L,差异有统计学意义(P＝0.041)。结论：雾化吸入顺铂对大鼠肺组织有明确的损害,提示临床工作中相关医务人员应注意采取对应防护措施。     

维生素C对顺铂治疗大鼠卵巢癌疗效的影响

目的：探讨维生素 C 是否能影响顺铂对于大鼠卵巢癌的化疗效用,并对其作用机制进行初探。方法：建立卵巢癌大鼠模型,将大鼠随机分组后腹腔给药,每周观察一般状况变化。8周后,脱颈处死各组大鼠,取血清检测 CA125、HE4并计算 ROMA 值,测量腹水容积,解剖并观察统计肿瘤生长情况,对局部肿块及主要组织进行测量,常规病理学检查。结果：所有大鼠外观消瘦,体重随着腹水和肿瘤的出现呈现增长,顺铂+高剂量维生素 C 组的肿瘤质量及腹水容积明显小于其余三组,实验组的 CA125、HE4及 ROMA 明显低于对照组,顺铂+高剂量维生素 C 组的 CA125、HE4及 ROMA 则明显低于顺铂+低剂量维生素 C 组及顺铂组,实验组患恶性肿瘤的大鼠比例降低,而是否添加维生素 C 对数据则无明显影响。结论：注射较高浓度维生素 C 能增强顺铂杀伤卵巢癌的能力,并呈现一定的剂量依赖性。     

不同水化方案对乳癌患者顺铂肾毒性的影响

我们根据血浆和尿铂药代动力学与顺铂肾毒性关系的研究，提出了改良水化方案，并对３７例接受大剂量顺铂的乳癌患者，进行了两种不同水化方案的系统比较。结果表明，改良水化方案把原来输药后的利尿剂改为输药中，并增加了顺铂前１０００ｍｌ摄水量，使顺铂输注期间的尿量由平均８３７ｍｌ／３ｈ，增至２１８５ｍｌ／３ｈ，同时尿铂峰浓度从４７．３４μｇ／ｍｌ降至１３．４９μｇ／ｍｌ；并增加了夜间１２点肌注速尿一次，确保了夜间尿量不低于１００ｍｌ／ｈ，从而使肾毒性的发生率从７／１９（３６．８％）减少到１／１８（５．６％）。本研究证实了，改良水化方案通过降低尿铂峰浓度，能够进一步降低顺铂的肾毒性，且对其疗效无明显影响。     

改良肠道水化对顺铂治疗肺癌的肾毒性的影响

目的：观察改良肠道水化对顺铂（PDD）治疗肺癌的肾毒性的影响.方法：212例肺癌予以PDD为主的联合化疗,PDD 75～80mg/m^2静滴,第1天,化疗当天通常静脉补液1 000～2 000ml,摄水量1 500～2 000ml,PDD后半小时静脉推注速尿,并予积极止吐处理,连续3天记录24小时出入量,化疗前后测定肾功能.结果：212例肺癌均顺利完成化疗,仅11例（5.1%）有一过性轻度肾功能异常,与常规水化方案相比未增加肾毒性,所有病例无胸闷、气急.结论：改良的肠道水化方案也能较好地预防顺铂的肾毒性,且补液量少,患者易接受,临床上是可行的.     

儿茶素对顺铂所致人胚肾细胞氧化损伤的影响

目的：研究儿茶素对顺铂（DDP）所致人胚肾细胞（HEK293）氧化损伤的影响并探讨其作用机制。方法：体外培养HEK293细胞,分为对照组、DDP组、儿茶素组、儿茶素（5、10、20 mg/L）+DDP组。MTT法检测儿茶素和DDP分别作用后的HEK293细胞存活率,以及儿茶素预处理对DDP所致细胞存活率下降的影响。黄嘌呤氧化酶法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活力,硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛（MDA）含量,二硫代二硝基苯甲酸法测定还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。结果：与对照组比较,随着浓度的增加,DDP导致HEK293细胞存活率逐渐降低,儿茶素导致细胞存活率先增加后降低。儿茶素预处理后,对DDP（20 mg/L）所致细胞存活率的抑制作用未见明显减弱（P > 0.05）,但与DDP组相比,能显著抑制DDP所致细胞内MDA含量的升高以及SOD活力和GSH含量的下降（P < 0.05）。结论：体外培养条件下,儿茶素预处理虽不能改变DDP对HEK293细胞存活率的影响,但可在一定程度上缓解DDP所致HEK293细胞的氧化损伤。     

TMT定量蛋白组学方法筛选乳腺癌腋窝淋巴结转移患者血清差异蛋白

目的:分析有腋窝淋巴结转移和无腋窝淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌患者血清中的差异蛋白,筛选与乳腺癌转移相关的生物标志物和治疗靶点.方法:本研究采用定量蛋白质组学串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记技术分别对14例有腋窝淋巴结转移及14例无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清蛋白进行检测,并对蛋白质进行定量分析,筛选出发生显著变化的差异蛋白,再搜索Uniprot数据库和用Proteome Discoverer软件分析,进一步进行生物信息学分析.结果:有腋窝淋巴结转移组中共筛选出差异蛋白119个,其中6个表达上调,113个表达下调.基因本体(gene ontology,GO)注释分析和功能聚类分析表明,这些差异蛋白质主要定位于细胞外区,与肿瘤的生物合成、细胞增殖、血管生成相关.Western boltting和qRT-PCR验证了K1C19(下调0.11倍)和PSME2(上调2.02倍)的表达.结论:TMT定量蛋白组学方法能有效筛选有腋窝淋巴结转移的和无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清中的差异蛋白.其中,K1C19和PSME2是值得进一步研究的乳腺癌淋巴结转移的候选血清标志物.     

大肠癌组织中HSP27和bcl-2及p53蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨热休克蛋白27(heatshockprotein,HSP27)、bcl-2和p53蛋白在大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:运用免疫组织化学SP方法检测HSP27、bcl-2和p53在72例大肠癌组织中的表达,并运用多因素COX比例风险模型分析患者的预后。结果:HSP27在大肠癌组织中的阳性率为69·44%(50/72),bcl-2为54·17%(39/72),p53为59·72%(43/72)。HSP27在高分化腺癌组的表达率为84·85%,显著高于低分化组的28·57%,χ2=29·614,P=0·000。bcl-2和p53在高分化腺癌组的表达率也高于低分化腺癌组,χ2=5·771,P=0·016;χ2=4·714,P=0·030。HSP27和bcl-2在大肠癌中的表达具有相关性,r=0·380,P=0·001。COX回归分析提示,HSP27表达与生存期呈负相关。结论:HSP27和bcl-2及p53与大肠癌耐药有关;联合检测对临床制定合理的化疗方案具有指导意义;HSP27可作为判断大肠癌预后的一个独立预测指标。     

HSP70-肿瘤肽对小鼠肝癌的抗肿瘤免疫效应

目的：观察HSP70肿瘤肽介导的非MHCⅠ限制性抗肿瘤免疫效应。方法：通过主动免疫和继承性免疫保护试验，观察从热休克小鼠肝癌HCaF细胞纯化的HSP70肿瘤肽对HCaF（MHCⅠ类分子表达阴性）的抗肿瘤免疫效果。结果：用源自HCaF细胞的HSP70肿瘤肽主动免疫小鼠，可获得对HCaF细胞攻击的主动免疫保护效果，雌性组明显优于雄性组。转输HSP70肿瘤肽免疫后抗HCaF细胞攻击的小鼠脾细胞，能产生良好的过继性免疫保护效果，可耐受HCaF细胞反复攻击，以1×107个活瘤细胞攻击亦未致瘤。转输HSP70肿瘤肽体外致敏的脾细胞，也能使宿主产生一定的抗HCaF免疫效果。结论：从HCaF细胞纯化的HSP70肿瘤肽可激发宿主产生非MHCⅠ限制性抗肿瘤免疫保护效应，其强度可藉反复攻击而增强，并可通过免疫脾细胞继承性传递。     

Effects on the expression of heat shock proteins by step-down heating and hypothermia in rat hepatoma cells with a different degree of heat sensitivity

Thermosensitization induced by pretreatment at supra- and subnormal temperatures, rate of protein synthesis and expression of the major heat shock proteins under such conditions was investigated in relation to intrinsic heat sensitivity of rat hepatoma cells, i.e. Reuber H35 and HTC. The high degree of heat susceptibility of H35 cells was reflected by a high degree of thermosensitization after pretreatment by heat (step-down heating) at temperatures of 42–44°C for 30 min or cold for 16 h at temperatures ranging from 0 to 25°C. Sensitization under step-down heating conditions was found to be paralleled by a delayed recovery of protein synthesis. Despite an increased relative rate, enhancement of the absolute rate of synthesis of the major heat shock proteins, HSP28, HSP60, HSP68, HSP70, HSP84 and HSP100, was less pronounced during step-down exposure. Comparable results were obtained during recovery of sensitized H35 cells at 37°C after exposure to heat following pretreatment at 0°C. Furthermore, clear differences in the regulation of the specific HSP synthesis, depending on the particular treatment protocol, were observed.     

Effect of social housing condition on heat shock protein (HSP) expression in the Shionogi mouse mammary carcinoma (SC115)

Our previous studies have shown that social housing conditions can significantly alter the growth rate of the Shionogi mouse mammary carcinoma (SC115). The present study extended our investigations to the molecular level by examining stressor effects on the expression of a group of stress-responsive proteins, the heat shock proteins (HSPs). We hypothesized that HSP expression in SC115 cells may be altered by (a) different social housing conditions in vivo and (b) steroid hormone and growth factor exposure in vitro. Mice were reared in groups (G) or as individuals (I). Immediately following tumor cell injection, mice were rehoused from group to individual (GI), from individual to group (IG), or they remained in groups (GG). Tumor tissue was resected at 0.8 g or 3.0 g, as evidence suggests that tumor size affects HSP expression, which in turn affects proliferation. The data demonstrate that expression of HSP25, 70, and 90 was increased in tumors from mice in the IG compared to GG and GI mice, at both tumor weights examined. In addition, in IG mice, HSP90 expression was greater in 0.8 g compared to 3.0 g tumors. Under controlled culture conditions, hormones known to stimulate SC115 growth both in vivo and in vitro altered HSP expression. Physiological levels of dihydrotestosterone (DHT) and pharmacological levels of hydrocortisone (HC) upregulated expression of HSP25, whereas physiological levels of -estradiol (E₂) upregulated expression of HSP90. These data are the first to demonstrate that a psychosocial stressor, a change in social housing condition, can induce differential HSP expression. Further, these data show that hormones that regulate SC115 tumor growth, also alter HSP expression.     

HSPgp96体外诱导腹腔巨噬细胞抗肿瘤细胞毒作用

目的:探讨HSPgp96对小鼠PEMφ体外抗肿瘤细胞毒作用的影响.方法:分离巯基乙酸盐诱导的小鼠PEMφ,随机分为培养液对照组、LPS诱导组、HSPgp96诱导组.应用硝酸还原酶法、MTT法、扫描电镜分别观测PEMφNO的生成、对肝癌细胞H22的细胞毒作用及形态学变化.结果:在HSPgp96的体外诱导下,小鼠PEMφNO的生成量显著增加,对肝癌细胞H22的细胞毒作用明显增强,其效应与LPS相当.结论:HSPgp96可在体外有效激活PEMφ的抗肿瘤细胞毒作用,NO是PEMφ杀瘤机制中的重要效应分子之一.     

维生素E琥珀酸酯对人胃癌细胞增殖分化和热休克蛋白70表达的影响

背景与目的 :研究维生素E琥珀酸酯(VitaminESucciaate,VES)对人胃癌SGC_7901细胞增殖和分化作用及其可能机制。材料与方法 :采用噻唑蓝(3_[4,5_dimethylthiazol_2_yl]_2,5diphenyltetrazoliumbroide,MTT)法检测细胞的生长 ;流式细胞术检测细胞周期的分布 ;分光光度法检测分化标志酶的活性 ;WesternBlot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC_7901细胞热休克蛋白70(HSP70)的影响。 结果 :VES可抑制SGC_7901细胞的生长 ;VES作用48h可使细胞出现G0/G1期停滞 ,分化标志酶AKP、LDH活性降低 ,并使HSP70蛋白表达降低。结论 :VES可抑制SGC_7901细胞的生长并诱导分化 ,其机制可能是通过抑制HSP70的表达而使细胞发生G0/G1 期阻滞 ,从而抑制肿瘤细胞的增殖 ,诱导SGC_7901细胞发生分化。