Effect of methylprednisolone on neuropathic pain and spinal glial activation in rats

BACKGROUND: Basic data are lacking regarding the efficacy and mechanisms of action of corticosteroids in neuropathic pain. Because recent studies indicate that spinal glial activation mediates the pathologic pain states, the authors sought to determine the effects of systemic and intrathecal methylprednisolone on the development and maintenance of neuropathic pain and spinal glial activation in a rat model. METHODS: Rats were anesthetized, and L5 and L6 spinal nerves were tightly ligated. Then, continuous infusion of systemic (4 mg x kg(-1) x day(-1)) or intrathecal (80 microg x kg(-1) x day(-1)) methylprednisolone or saline was started. Mechanical allodynia and thermal hyperalgesia were evaluated on days 4 and 7 postoperatively with von Frey and Hargreaves tests, respectively. Spinal astrocytic activation was evaluated with glial fibrillary acidic protein immunoreactivity on day 7. In other groups of rats, continuous 3-day treatment with intrathecal methylprednisolone or saline was started 7 days after spinal nerve ligation, when neuropathic pain had already developed. Behavioral tests and immunostaining were performed up to 3 weeks after the treatment. RESULTS: Spinal nerve ligation induced mechanical allodynia and thermal hyperalgesia on days 4 and 7 postoperatively. Glial fibrillary acidic protein immunoreactivity was remarkably enhanced on day 7. Both systemic and intrathecal methylprednisolone inhibited the development of neuropathic pain states and glial activation. Three-day treatment with intrathecal methylprednisolone reversed existing neuropathic pain state and glial activation up to 3 weeks after the treatment. CONCLUSION:: Systemic and intrathecal methylprednisolone inhibited spinal glial activation and the development and maintenance of a neuropathic pain state in a rat model of spinal nerve ligation.     

CREB结合蛋白质在神经病理性痛大鼠脊髓COX-2表达中的作用

目的 评价CREB结合蛋白质(CBP)在神经病理性痛大鼠脊髓COX-2表达中的作用.方法 雄性SD大鼠40只,体重220 ～ 250 g,鞘内置管成功后5d时采用坐骨神经慢性缩窄性损伤的方法制备大鼠神经病理性痛模型,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、神经病理性痛组(NP组)、阴性对照病毒载体组(NC组)和CBP组.NC组和CBP组制备模型后7d时分别鞘内注射阴性对照病毒载体(RNAi-NC-LV)、CBPshRNA病毒载体(CBP RNAi-LV)20μl.于术前1d、术后3、5、7、10、12、14 d时测定大鼠术侧机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于术后14 d时取腰段脊髓,免疫组化法检测CBP、乙酰化组蛋白H3/H4(Ac-H3,Ac-H4)、COX-2蛋白的表达,RT-PCR法检测CBP、COX-2 mRNA的表达.结果 与Sham组比较,NP组、NC组和CBP组大鼠术后各时点术侧MWT和TWL降低,NP组和NC组大鼠术后14 d时脊髓CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2蛋白表达和CBP、COX-2 mRNA表达上调(P＜0.05),CBP组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与NP组比较,CBP组术后10、12和14 d时MWT和TWL升高,术后14 d时脊髓CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2蛋白表达和CBP、COX-2 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 CBP表达上调导致组蛋白H3、H4乙酰化水平升高,脊髓神经元COX-2表达上调,参与了神经病理性痛的形成.     

腹腔注射右美托咪定对糖尿病神经病理性疼痛大鼠脊髓胶质细胞活化的影响

目的 探讨腹腔注射右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠脊髓胶质细胞活化及炎症因子表达的影响. 方法 健康清洁级雄性SD大鼠32只,体重180～200 g,采用随机数字表法大鼠分为4组(每组8只):对照组(C组)、DNP组、Dex组和α2受体拮抗剂组(YOH组).采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射法建立大鼠DNP模型.从STZ注射28 d开始:Dex组连续7d腹腔注射Dex 50 μg/kg;YOH组连续7d腹腔注射育亨宾0.1 mg/kg,之后30 min腹腔注射Dex 50 μg/kg.于注射STZ后29～35 d测定各组大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT).于35 d测定MWT后处死大鼠,采用免疫荧光双标法测定各组大鼠脊髓内小胶质细胞和星形胶质细胞的活化情况,采用ELISA法检测各组大鼠脊髓内TNF-α和IL-1的含量. 结果 与C组比较,DNP组、Dex组、YOH组3组大鼠均体重下降、血糖升高(P＜0.05);DNP组、Dex组和YOH组3组大鼠组间比较,体重和血糖差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,DNP组和YOH组术后各时点MWT均降低(P＜0.05);与DNP组比较,Dex组术后各时点MWT均升高(P＜0.05).与C组比较,DNP组和YOH组大鼠脊髓内小胶质细胞活化率、TNF-α和IL-1的含量均升高(P＜0.05);与DNP组比较,Dex组大鼠脊髓内小胶质细胞活化率、TNF-α和IL-1的含量均降低(P＜0.05);各组大鼠组间比较,脊髓内星形胶质细胞活化率差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 Dex能够缓解DNP大鼠的痛觉过敏,其机制可能与抑制小胶质细胞活化,从而减轻脊髓内炎症反应有关.     

脊髓背角ERK激活在大鼠神经病理性疼痛中的作用

目的探讨脊髓背角细胞外信号调节激酶(ERK)的激活在大鼠神经病理性疼痛诱发和维持中的作用。方法雄性SD大鼠,体重200～300 g。本研究分多剂量给药和单剂量给药两部分,均进行行为学实验和脊髓背角磷酸化ERK(p-ERK)表达检测。实验一48只鞘内置管大鼠随机分6组(n=8):假手术 生理盐水(NS)组(S组)、慢性压迫性损伤(CCI) NS组(C组)、CCI 5%二甲亚砜(DMSO)组(D组)、CCI 错义寡核苷酸10μg组(M组)、CCI U0126 5μg组(U组)、CCI 反义寡核苷酸组10μg组(A组)。鞘内给药后记录大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。实验二48只鞘内置管大鼠随机分3组(n=16),自CCI术前1 d至术后3 d分别注射NS(G1组)、U0126 5μg(G2组)或ERK反义寡核苷酸10μg(G3组),假手术大鼠4只为阴性对照组,检测脊髓p-ERK的表达。实验三CCI术后5 d大鼠40只随机分5组(n=8):CCI 5%DMSO组(D’组)、CCI U0126 0.2μg组(U0.2组)、CCI U0126 0.5μg组(U0.5组)、CCI U0126μg组(U1组)、CCI U0126 5μg组(U5组),假手术大鼠8只注射5%DMSO(S组)为阴性对照组,记录MWT和TWL;实验四另选CCI术后5 d大鼠20只为实验组,鞘内注射U0126 5μg,假手术5 d大鼠(阴性对照组)与CCI术后5 d大鼠(阳性对照组)各4只,鞘内注射5%DMSO 0.5 h后取材,检测脊髓p-ERK的表达。结果实验一与C组比较,U组与A组MWT和TWL升高,作用持续至术后13 d;实验二与G1组比较,G2组与G3组术后3、5 d胞浆p-ERK2表达以及术后3、5、10 d胞核p-ERK1与p-ERK2表达降低;实验三与D组比较,U0.5组给药后MWT和TWL升高,其作用分别持续至鞘内给药后6 h和2 h;与U0.2组比较,MWT:U0.5组鞘内给药后0.5、2、6 h、U1组给药后0.5、2、6、12 h、U5组鞘内给药后0.5、2、6、12、24 h升高,TWL:U1组鞘内给药后12 h、U5组鞘内给药后0.5、6、12、24 h升高;与U0.5组比较,U5组MWT鞘内给药后0.5、12、24 h和TWL鞘内给药后0.5、12 h升高;实验四与阴性对照组比较,实验组鞘内注射U0126 5μg后0.5 h胞浆与胞核p-ERK1和p-ERK2表达下降,与实验组0.5 h比较,实验组胞浆p-ERK1于6、12、24 h升高,胞核p-ERK1于2、6、12、24 h升高,胞浆与胞核p-ERK2于6、12、24 h均升高(P<0.05)。结论脊髓背角ERK激活参与了大鼠神经病理性疼痛的诱发和维持过程。     

神经病理性疼痛大鼠脊髓星形胶质细胞增殖活化的变化

目的观察神经病理性疼痛大鼠脊髓星形胶质细胞增殖活化的变化。方法健康成年雄性SD大鼠48只，随机分为假手术组和手术组（n=24），慢性坐骨神经挤压损伤（CCI）前1d、CCI后1、4、7、14、28d各随机取4只大鼠，测定机械痛阈和热痛阈后立即处死大鼠，取L4，5脊髓，用免疫组化方法观察胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达以反映星形胶质细胞激活情况。结果CCI后1d术侧机械痛阈和热痛阈开始下降，机械痛阈CCI后7d下降至最低，热痛阈CCI后4d下降至最低，CCI后28d仍处于较低水平（P〈0．05或0．01）；手术组术侧脊髓后角GFAP表达于CCI后4d开始增加，至CIC后7d达高峰，至CCI后28d仍维持于高水平（P〈0．05）。结论脊髓星形胶质细胞的增殖活化参与神经病理性疼痛的发生和维持。     

脊髓神经元和胶质细胞激活在三种神经病理性疼痛大鼠模型脊髓水平致痛机制中的作用

目的比较脊髓神经元和胶质细胞(星形胶质细胞和小胶质细胞)激活在三种大鼠神经病理性疼痛模型脊髓水平致痛机制中的作用。方法 SD 大鼠24只,体重150g～200g,随机分为4 组,每组6只,分别为对照组、CCI 组、SNL 组和 SNI 组。对照组不实施手术；CCI、SNL、SNI 组分别于左侧制作慢性坐骨神经缩窄损伤模型(CCI)、脊神经结扎模型(SNL)和保留性脊神经损伤模型(SNI)。术前3d 至术后15d 隔日使用机械刺激测定术侧后爪50%缩爪阈值。术后15d 测痛后,用多聚甲醛灌注大鼠,取L_(5,6)脊髓,进行免疫组化实验；用抗原癌基因蛋白 c-Fos、星形胶质细胞标记蛋白(GFAP)和小胶质细胞标记蛋白(OX-42)抗体分别检测神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞的激活状况。结果术后7d CCI、SNL、SNI 组术侧50%缩爪阈值均达到最低值,并维持至术后15d；术后15d,对照组、CCI 组、SNL 组和 SNI 组50%缩爪阈值分别为14.1±1.5、2.6±0.5、1.5±0.6、(0.8±0.4)g,大小顺序依次为对照组、CCI 组、SNL 组、SNI 组(P＜0.05)。与对照组比较,CCI、SNL 和 SNI 组Ⅳ～Ⅵ层 c-Fos 阳性神经元数量增加,脊髓背角Ⅰ或Ⅱ层星形胶质细胞及Ⅰ～Ⅳ层小胶质细胞的激活状态升高(P＜0.05), 但 CCI、SNL 和 SNI 组间脊髓背有Ⅳ～Ⅵ层 c-Fos 阳性神经元数量、术侧脊髓背角Ⅰ或Ⅱ层星形胶质细胞的及Ⅰ～Ⅳ层小胶质细胞激活状态差异无统计学意义(P＞0.05)。结论三种神经病理性疼痛大鼠模型中脊髓背角神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞的激活状况一致,提示其在脊髓水平致痛机制相似。     

桔梗皂苷D对大鼠神经病理性疼痛及脊髓小胶质细胞活化的影响

目的:探讨桔梗皂苷D（platycodin D, PD）对大鼠神经病理性疼痛模型的镇痛作用及其对脊髓小胶质细胞活化的影响。方法:将60只雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为6组（每组10只）：假手术组（Sham组）、脊神经结扎（spinal nerve ligation, SNL）组（SNL组）、SNL+生理盐水组（SN...     

脊髓背角内NDRG2在脊神经结扎神经病理性痛模型大鼠中的作用

目的通过鞘内注射N-myc下游调节基因2(NDRG2)干扰腺病毒(AD-Ndrg2-RNAi),研究脊髓背角内NDRG2在脊神经结扎(SNL)神经病理性痛模型大鼠中的作用。方法雄性SD大鼠42只,体重180~230 g,随机分为假手术组(sham组,n=6)和SNL组(n=36),sham组仅暴露脊神经不结扎,SNL组行L5脊神经结扎术。分别测定术前1 d、术后1、3、7、10、14和21 d大鼠术侧足底机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。SNL组大鼠各相应时点行为学测试后分别处死,取术侧脊髓腰膨大,检测NDRG2蛋白含量和mRNA表达量。另取48只雄性SD大鼠行鞘内置管后随机分为四组(n=12):sham+生理盐水组(CS组)、sham+AD-Ndrg2-RNAi组(CA组)、SNL+生理盐水组(SS组)和SNL+AD-Ndrg2-RNAi组(SA组);CS、SS两组大鼠术后3 d鞘内单次注射生理盐水10μl,CA、SA两组大鼠相同时点鞘内单次注射10μl,滴度为2×109PFU/ml的AD-Ndrg2-RNAi。于SNL术前1 d、术后1、3、7和10 d分别测定大鼠足底MWT和TWL。术后10 d行为学测试后处死大鼠,取术侧脊髓腰膨大,检测NDRG2和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白含量,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测NDRG2 mRNA的表达量。结果与sham组比较,SNL组术后1、3、7、10、14、21 d MWT明显降低(P0.01),术后3、7、10、14、21 d TWL明显缩短(P0.01)。与术前1 d比较,SNL组脊髓背角内NDRG2的蛋白含量和mRNA表达量在术后1 d明显降低,术后7、10、14、21 d明显升高(P0.05)。与CS组比较,SS组和SA组术后1、3、7、10 d MWT明显降低,TWL明显缩短(P0.05);与SS组比较,SA组术后7、10 d MWT明显升高,TWL明显延长(P0.05)。与CS组比较,术后10 d CA组脊髓背角内NDRG2的蛋白含量和mRNA表达量均明显降低(P0.05),SS组均明显升高(P0.05);与SS组比较,SA组脊髓背角内NDRG2的蛋白含量和mRNA表达量均明显降低(P0.05)。与CS组比较,术后10 d CA、SS、SA组脊髓背角内GFAP蛋白含量均明显升高(P0.05)。结论 NDRG2蛋白含量升高参与了神经病理性痛的形成,鞘内注射AD-Ndrg2-RNAi明显抑制大鼠脊神经结扎造成的慢性病理性疼痛,提示星形胶质细胞中的NDRG2参与慢性病理性疼痛的发生和发展。     

脊髓神经元型一氧化氮合酶在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 探讨脊髓神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 健康雄性SD大鼠40只,体重220～280 g,采用结扎坐骨神经干的方法建立坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型.随机分为4组(n=10),Ⅰ组及Ⅱ组暴露坐骨神经干,分别于术后1 d开始鞘内注射选择性nNOS抑制剂7-NI 60 μg[溶于20%二甲基亚砜(DMSO)]10μl)、20%DMSO 10μl,1次/d,连续6d;Ⅲ组及Ⅳ组制备CCI模型,分别于术后1 d开始鞘内注射7-NI 60μg(溶于20%DMSO 10μl)、20%DMSO 10 μl,1次/d,连续6 d.分别于CCI前1 d、CCI后1、3、5、7 d时测定大鼠机械痛阈和热痛阈.于CCI后7 d,各组分别取5只大鼠,取术侧L_(4～6)背根神经节,分别采用实时定量PCR和Western blot法测定nNOS mRNA及蛋白的表达水平.结果 与Ⅰ组和Ⅱ组比较,T_(1～4)时Ⅲ组和Ⅳ组术侧后肢机械痛阈和热痛阈降低(P＜0.05),背根神经节nNOS蛋白及mRNA的表达上调(P＜0.05);与Ⅲ组比较,T_(1～4)时Ⅳ组机械痛阈和热痛阈降低,背根神经节nNOS蛋白及mRNA的表达上调(P＜0.05).结论 脊髓nNOS参与了大鼠神经病理性痛的形成.     

脊髓P2X4受体在糖尿病大鼠神经病理性痛中的作用

目的探讨脊髓P2X4受体在链脲菌素诱导的糖尿病大鼠神经病理性痛中的作用。方法雄性Wistar大鼠84只,3月龄,体重180～220 g,随机分为2组（n=42）：对照组（C组）和糖尿病神经病理性痛组（D组）。C组单次腹腔注射等体积（3.25 ml/kg）枸橼酸缓冲液,D组单次腹腔注射链脲菌素65 mg/kg制备糖尿病模型。2组分别于给药前1 d（基础值）、给药后3、7、14、21、28 d各随机选取7只大鼠,测定机械缩足阈值和热痛阈潜伏期,痛阈测定后断头处死大鼠,取L（4,5）脊髓组织,用RT-PCR方法测定P2X4受体mRNA表达水平。结果与C组相比,D组脊髓P2X4受体mRNA表达上调,机械缩足阈值降低（P〈0.05）,热痛阈潜伏期差异无统计学意义（P〉0.05）;与基础值比较,D组给药后14 d机械缩足阈值逐渐降低,给药后28 d时达最低值;给药后3 d脊髓P2X4受体mRNA表达逐渐上调,给药后7d达峰值（P〈0.05）。结论脊髓P2X4受体表达上调参与了糖尿病大鼠神经病理性痛的发生。     

脊髓G蛋白耦联受体激酶2在神经病理性疼痛中作用的研究进展

背景 近年研究发现脊髓G蛋白耦联受体激酶2（Gprotein-coupled receptor kinase 2,GRK2）在神经病理性疼痛（neuropathic pain,NP）形成和维持中起到至关重要的作用.目的 对脊髓GRK2在NP中作用的研究有助于人们更清楚地理解NP产生和维持的相关分子机制,为NP的治疗提供新思路.内容 分别描述GRK2、脊髓GRK2与NP以及GRK2参与NP的可能机制.趋势 鉴于脊髓GRK2在NP中的重要作用,GRK2将有可能为针对NP发病机制的治疗提供新的靶点.     

细胞因子和胶质细胞在神经病理性疼痛中的作用

在神经病理性疼痛的机制研究中,许多学者发现神经免疫及神经系统炎症反应是造成疼痛的重要原因之一.其中,细胞因子和胶质细胞激活在疼痛的产生和维持中起到非常重要的作用.因而它们有可能成为治疗神经病理性疼痛的新的靶点.     

脊髓NMDA受体在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用

目的 评价脊髓NMDA受体在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用.方法 雌性Wistar大鼠,月龄3月,体重180～220 g,腹腔注射链脲菌素65 mg/kg制备糖尿病大鼠神经病理性痛模型.取模型制备成功的大鼠96只,随机分为3组(n=32):糖尿病神经病理性痛组(D组)、p38MAPK抑制剂组(I组)和NMDA受体阻断剂组(M组),另取32只正常大鼠作为对照组(C组).模型制备成功后每周一上午,I组和M组分别腹腔注射p38MAPK抑制剂SB203580 1 mg/kg、NMDA受体阻断剂MK-8011 mg/kg,1次/周,直至处死大鼠.各组分别于模型制备成功后第1、3、5、7周(T1～4)末随机取8只大鼠,采用yon Frey纤维丝测定双后足机械缩足反应阚值(MWT),采用肌电图仪测定左侧坐骨神经传导速度(NCV)后处死大鼠;取L3～6的背根神经节和脊髓,采用免疫组化法和Western blot法检测p38MAPK磷酸化水平,采用RT-PCR法检测NMDA受体1(NR1)mRNA表达.结果 与C组比较,D组、I组和M组T1～4时MWT降低,NCV减慢,p38MAPK磷酸化水平升高,NR1 mRNA表达上调(P<0.05);与D组比较,I组和M组MWT升高,NCV加快,T2～4时I组和M组p38MAPK磷酸化水平降低,M组NR1 mRNA表达下调(P<0.05).结论 脊髓NMDA受体激活可能通过p38MAPK信号通路参与大鼠糖尿病神经病理性痛的维持.     

星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环在大鼠神经病理性痛形成中的作用

目的 评价星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环在大鼠神经病理性痛形成中的作用.方法 成年雄性SD大鼠48只,体重200～230 g,采用结扎胫神经和腓总神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型.随机分成8组(n=6):对照组(C组)不进行任何处理;假手术组(S组)仅穿线不结扎;神经病理性痛组(NP组)模型制备成功后鞘内注射PBS 50μl,M1～4组分别鞘内注射0.01、0.03、0.05、0.10 mmol/L谷氨酰胺合成酶抑制剂MSO 50μl,MG组鞘内注射0.05 mmol/L MSO 50μl,15 min后鞘内注射0.25 mmol/L氨酰胺50μl.于结扎前1周(T0)、结扎后1周(T1)、注射MSO后15、30、45、60 min(T2～5)时测定机械痛阈,最后1次测痛阈后处死大鼠,取L4～6段脊髓,采用免疫组化法测定神经胶质酸性蛋白(GFAP)和谷氨酰胺合成酶(GS)的表达及共表达(GFAP/GS)情况.结果 与NP组和MG组相比,S组CP组T1～5时、M3,4组T2～4时机械痛阈升高,S组、C组和M3组脊髓背角GFAP、GS和GFAP/GS表达下调(P＜0.05);MG组和NP组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环参与了大鼠神经病理性痛的形成.     

NADPH氧化酶介导的小胶质细胞活化在神经病理性疼痛和抑郁共病中的作用

目的观察神经病理性疼痛和抑郁共病中磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶及小胶质细胞的变化,并探讨其相关机制。方法采用保留性坐骨神经损伤模型(SNI模型)。健康成年雄性SD大鼠44只,随机分为四组:假手术+溶剂组(SV组)、假手术+夹竹桃麻素(APO)组(SA组)、SNI+溶剂组(SNV组)、SNI+APO组(SNA组),每组11只。SA组和SNA组术前24h及术前1h腹腔注射APO 15mg/kg,以后每天注射1次直至SNI术后14d;其余两组在相同时点注射等容量溶剂。术前1d和术后7、14d进行机械缩足反射阈值(MWT)测试,术后14d进行旷场实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验等行为学测试。行为学后2h取大鼠前额叶皮层组织,采用Western blot法检测gp91~(phox)的含量,免疫荧光共标法检测Iba1和gp91~(phox)的表达量。结果与SV、SA、SNA组比较,SNV组MWT明显降低,强迫游泳不动时间明显延长,糖水消耗比例明显减少,gp91~(phox)含量明显增多(P0.05)。与SV、SA、SNA组比较,SNV组Iba1和gp91~(~(phox))表达量增多。旷场实验中,四组探索总路程差异无统计学意义;糖水偏好实验中,四组总液体消耗量差异无统计学意义。结论神经病理性疼痛可导致抑郁样行为,并引起前额叶皮层的NADPH氧化酶活化;NADPH氧化酶抑制剂APO可减轻疼痛和抑郁样行为,其机制可能与抑制小胶质细胞活化有关。     

脊髓背角膜结合型补体调节蛋白表达在大鼠神经病理性痛形成中的作用

目的 评价脊髓背角膜结合型补体调节蛋白表达在大鼠神经病理性痛形成中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体重200 ～ 250 g.取48只鞘内置管成功的大鼠,采用随机数字表法,将其分为4组(n=12):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、生理盐水组(NS组)和米诺环素组(M组).NP组、NS组和M组采用坐骨神经环形结扎法制备大鼠神经病理性痛模型,S组只分离坐骨神经后逐层缝合.M组于结扎坐骨神经前ld开始鞘内注射米诺环素50 μg,NS组鞘内注射等容量生理盐水,1次/d,连续7d.于结扎坐骨神经前1 d(T0)、结扎后1 d(T1)、3 d(T2)和7 d(T3)时测定大鼠机械痛阈和热痛阈.于T3痛阈测定结束后断头处死大鼠,取L4.5脊髓背角组织,分别用Western blot法和RT-PCR法检测CD46、CD55、CD59蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与S组比较,NP组、NS组和M组T1-3时机械痛阈和热痛阈降低,T3时脊髓背角CD46、CD55、CD59蛋白及其mRNA表达下调(P＜0.05);与NS组和NP组比较,M组T2.3时机械痛阈和热痛阈升高,T3时脊髓背角CD46、CD55、CD59蛋白及其mRNA表达上调(P＜0.05).结论 脊髓背角膜结合补体调节蛋白表达下调,补体异常活化参与了大鼠神经病理性痛的形成.     

脊髓趋化因子CXC配体13在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 评价脊髓趋化因子CXC配体13(CXCL13)在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 雄性成年SD大鼠108只,体重150～200g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=27):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(NC-siRNA)组(NS组)和CXCL13-siRNA组(CS组).NP组、NS组和CS组采用结扎L5脊神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型,S组仅暴露L5脊神经,但不结扎.NS组和CS组分别鞘内注射NC-siRNA慢病毒和CXCL13-siRNA慢病毒10μl.分别于术后3、7和14 d时测定机械痛阈,然后处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫荧光法检测CXCL13和Neun的共表达情况以及星形胶质细胞活化情况.采用Western blot法测定CXCL13和GFAP的蛋白表达,采用RT-PCR法测定CXCL13和GFAP的mRNA表达.结果 与S组比较,NP、NS组和CS组术后各时点机械痛阈下降,脊髓CXCL13和GFAP的蛋白及其mRNA表达上调(P＜0.05);与NP组比较,CS组术后各时点机械痛阈升高,脊髓CXCL13和GFAP的蛋白及其mRNA表达下调(P＜0.05),NS组各时点机械痛阈、脊髓CXCL13和GFAP的蛋白及其mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓CXCL13通过激活星形胶质细胞参与大鼠神经病理性痛的形成和维持.     

Role of Rho-associated coiled-coil containing protein kinase in the spinal cord injury induced neuropathic pain

BACKGROUND CONTEXTSpinal cord injury (SCI) can lead to increased phosphorylation of p38 in spinal cord microglia. This is one of the main causes for the development of persistent pain. Recently, we reported our study on the activation of p38 mitogen-activated protein kinases (MAPK) in spinal microglia, which has been considered the key molecule for the onset and maintenance of neuropathic pain after peripheral nerve injury, using a rat model. We also reported that the RhoA/Rho-associated coiled-coil containing protein kinase (ROCK) pathway mediates p38 activation in spinal microglia in peripheral nerve injury. But the precise mechanisms of neuropathic pain induced by SCI are still unclear.PURPOSEThis study aimed to examine the activation of microglia and the p38 MAPK expression in the lumbar spinal cord after thoracic SCI in rats, and the correlation to the therapeutic effect of ROCK inhibitor ripasudil in rats with SCI.STUDY DESIGNMale Sprague–Dawley rats underwent thoracic (T10) spinal cord contusion injury using an Infinite Horizon impactor device. SCI rats received ROCK inhibitor ripasudil (24 nmol/day or 240 nmol/day) from just before SCI to 3 days after SCI.METHODSThe mechanical threshold in the rat's hind paws was measured over four weeks. Morphology of microglia and phosphorylation of p38 (p-p38) in the lumbar spinal cord and were analyzed using immunohistochemistry.RESULTSThe p-p38 positive cell and Iba1 (a maker of microglia) positive area were significantly increased at the lumbar spinal dorsal horn (L4–5) 3 days and 7 days after SCI compared with the sham-control (p<.05), whereas phosphorylated p38 was co-localized with microglia. Three days after SCI, the intensity of phosphorylated p38 and Iba1 immunoreactive cells in the dorsal horn was significantly lower in the ripasudil treated groups than in the saline group. However, administration of ROCK inhibitor did not affect the numbers of microglia. Moreover, the withdrawal threshold of the ripasudil-treated rats was significantly higher than that of the saline-injected rats on 14 days and 28 days after SCI.CONCLUSIONSOur results suggest that activation of ROCK in spinal cord microglia is likely to have an important role in the activation of p38 MAPK, which has been considered as a key molecule that switches on neuropathic pain after SCI. Inhibition of ROCK signaling may offer a means in developing a novel neuropathic pain treatment after SCI. It may help patients with neuropathic pain after SCI.CLINICAL SIGNIFICANCEThe findings in the present study regarding intracellular mechanisms suggest that modulation of ROCK signaling may be a focus for novel treatment for neuropathic pain after SCI.     

中脑导水管周围灰质小胶质细胞活化在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 评价中脑导水管周围灰质小胶质细胞活化在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 雄性SD大鼠176只,体重200 ～ 250 g,9周龄,采用随机数字法,将其分为4组:假手术组(S组,n=40)、神经病理性痛组(NP组,n=40)、生理盐水组(NS组,n=48)和米诺环素组(M组,n=48).NP组、NS组和M组采用慢性坐骨神经缩窄性损伤法制备大鼠神经病理性痛模型;S组仅暴露坐骨神经,而不结扎.术后第7天时,NS组和M组分别于中脑导水管周围灰质的腹外侧区注射生理盐水或米诺环素0.5μl.取8只大鼠,分别于术前1 d(T0)、术后第3天(T1)、第7天给药前30 min(T2)、第7天给药后30 min(T3)、第14天(T4)和第21天(T5)时测定机械痛阈.于T1-5时各处死8只大鼠,取脑组织,行小胶质细胞计数.结果 与S组比较,NP组、NS组和M组T1-5时机械痛阈降低,小胶质细胞计数升高(P＜0.05);NP组和NS组各时点机械痛阈和小胶质细胞计数差异无统计学意义(P＞0.05);与NP组和NS组比较,M组T3时机械痛阈升高,小胶质细胞计数降低(P＜0.05).结论 中脑导水管周围灰质小胶质细胞的活化参与了大鼠神经病理性痛中的形成与维持.