缺氧缺血性脑损伤新生大鼠Caspase-12的表达及参附注射液对其的影响

目的:研究新生大鼠缺氧缺血脑损伤后海马神经元细胞Caspase-12的表达及参附注射液对其的影响,探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后可能的凋亡机制及参附注射液的作用机制。方法:新生7天SD大鼠随机分为假手术组(S组)、生理盐水对照组(C组)、参附治疗组(SF组),每1组均设3、6、12、24 h及3、7天6个亚组,每个亚组8只,用Rice法制备新生大鼠HIBD模型,取右侧海马脑组织匀浆,RT-PCR检测Caspase-12 mRNA的表达,Western-blot检测Caspase-12蛋白表达,TUNEL法检测凋亡形态变化。结果:S组Caspase-12 mRNA表达最低,C组和SF组Caspase-12 mRNA均在12 h达到峰值,SF组Caspase-12 mRNA在6、12、24 h及3天较C组表达明显下降(P<0.01);Caspase-12蛋白表达S组最弱,HI后3hC组和SF组较S组明显增加(P<0.01),24 h达到峰值,7天仍较S组高(P<0.01),SF组表达在12、24 h及3天较C组显著降低(P<0.01);TUNEL法显示HI后3 h C组和SF组脑海马即出现少量凋亡细胞,随时间延长凋亡细胞呈增多趋势,24 h达高峰后开始下降;SF组24 h及3、7天均明显低于C组(P<0.05)。结论:缺氧缺血后脑海马神经元细胞Caspase-12表达增加,细胞凋亡增加,Caspase-12参与了新生大鼠HIBD后神经元损伤的凋亡机制,参附注射液能下调Caspase-12的表达,从而起到对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

创伤性脑损伤后肠黏膜细胞凋亡和c-fos基因表达

目的:研究创伤性脑损伤(TBI)后小肠黏膜细胞凋亡及c-fos基因表达,探讨肠黏膜上皮细胞凋亡在破坏肠黏膜屏障中的作用及c-fos基因表达与凋亡的关系.方法:雄性Wistar大鼠,随机分为假手术(对照)组和脑创伤后3 h、12 h、24h、72 h和7 d组,采用自由落体撞击致重型颅脑损伤.在各时相点取空肠近端,应用TUNEL法观测小肠黏膜细胞凋亡,应用免疫组化法观察c-fos基因的表达.结果:①凋亡细胞以肠黏膜上皮细胞为主;②脑损伤后3 h肠黏膜上皮即出现明显凋亡,凋亡细胞的数量以伤后72 h最多,分布于绒毛顶端,后延伸至绒毛中下部;③脑损伤后肠黏膜上皮细胞的c-fos基因表达逐渐增强,主要出现在上皮细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞,伤后24h、72h和7d的表达明显升高.结论:创伤性脑损伤可引起大鼠小肠黏膜细胞明显凋亡和c-fos基因的显著表达.     

创伤性脑损伤后小鼠肠道Toll样受体4的表达

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在创伤性脑损伤后肠道的表达变化。方法:将小鼠随机分为对照组和脑损伤后4 h、24 h和7 d组,每组5只。观察小鼠脑损伤后肠黏膜组织的改变,用免疫组化技术观察TLR4蛋白表达,实时RNA检测肠道TLR4mRNA表达。结果:小鼠创伤后4 h肠黏膜出现病理改变,并逐渐加重。TLR4蛋白阳性细胞伤后4 h升高,24 h达到高峰,7 d下降。TLR4mRNA水平伤后4 h升高,24 h达到高峰,7 d下降。结论:小鼠创伤性脑损伤后,可引起肠道TLR4表达增高。     

大鼠弥漫性轴索损伤后丘脑NGBmRNA的表达

目的研究弥漫性轴索损伤后大鼠丘脑组织中脑红蛋白（NGB）mRNA的表达变化,初步探讨NGB与颅脑损伤的关系。方法选择改进的Mamarou法制作弥漫性轴索损伤模型,采用RT-PCR检测颅脑损伤后不同时间丘脑组织中NGBmRNA的表达情况,并对所得数据进行分析。结果在伤后30min脑组织中NGBmRNA的表达明显升高,而24h时则有所下降,48h又上升达高峰。结论弥漫性颅脑损伤后,丘脑组织中NGBmRNA表达升高,提示其可能参与神经元损伤后应激及继发缺血、缺氧性脑损伤的应答机制。     

大鼠脑损伤后血浆ET-1的含量变化与损伤时间的关系

目的检测大鼠脑损伤后血浆内皮素-1（ET-1）的含量,观察其与损伤时间的相关性。方法参照Feeney＇s法建立大鼠脑损伤模型,于伤后1h、6h、24h、48h、3d、7d采血,运用酶联免疫法检测血浆ET-1含量。结果与对照组相比,大鼠脑损伤后血浆ET-1含量于伤后1h开始显著升高（P〈0.05）,于损伤后24h达到高峰（P〈0.05）。损伤后48h开始逐渐下降,3 d后开始逐渐趋于假损伤组（P〈0.05）,7d后基本恢复正常值,无统计学意义（P〉0.05）。结论大鼠脑损伤后血浆ET-1的含量随损伤时间呈规律性变化。     

谷氨酰胺对创伤性脑损伤后肠黏膜超微结构和细胞凋亡的影响

目的:探讨谷氨酰胺(Gln)对创伤性脑损伤(TBI)后大鼠肠黏膜超微结构和细胞凋亡的影响.方法:将54只大鼠随机分为对照组(N组,6只)、脑损伤组(TBI组,24只)和脑损伤后Gln治疗组(Gln组,24只),TBI组和Gln组按脑损伤后检测时间再分为1、3、5、7d组,每组6只大鼠,对回肠黏膜行电镜检查,并以TUNEL法观察细胞凋亡.结果:TBI后3d肠黏膜超微结构的损伤及细胞凋亡达到高峰,Gln可使细胞凋亡下调,明显减轻肠黏膜超微结构的损伤.结论:Gln能抑制TBI后肠黏膜细胞凋亡,保护肠黏膜结构.     

创伤性脑损伤后肠黏膜结构和屏障功能的变化

目的:探讨创伤性脑损伤后肠黏膜形态和屏障功能的变化,了解肠黏膜屏障功能障碍的发生时间及其严重程度. 方法:雄性Wistar 大鼠随机分为无脑损伤的对照组和脑损伤后3、12、24、72 h和7天组,每组6只.应用组织病理和电镜观察肠黏膜结构的变化,通过测定血浆内毒素水平和肠黏膜通透性,以评价肠黏膜屏障功能. 结果:创伤性脑损伤后3 h即出现肠黏膜的病理改变,然后逐渐加重.与对照组相比,脑损伤后3、12和24 h血浆内毒素水平明显升高,伤后72 h达到高峰,第7天开始下降.血浆内毒素水平在伤后3 h和72 h出现两个峰值.脑损伤后肠黏膜通透性明显增加. 结论:创伤性脑损伤后3 h即可引起明显的肠黏膜结构和屏障功能损害,至伤后72 h达高峰,此损害可持续7天以上.     

甲基强的松龙对大鼠颅脑损伤后TNF的影响

目的观察甲基强的松龙对大鼠颅脑损伤后血脑组织中TNF含量的影响,并探讨其作用机制。方法将55只SD大鼠随机分为3组,采用骨窗形成后硬膜外打击法造成鼠脑挫裂伤模型,正常组5只,麻醉行开颅手术,不作头颅打击;治疗组大鼠致伤后即刻腹腔内注射30mg/kg甲基强的松龙,对照组则即刻腹腔内注射30mg/kg生理盐水。对照组和治疗组大鼠分别在伤后6h、24h、48h、72h、96h时间点断头取脑,对大鼠脑外伤后脑组织中TNF含量进行检测。结果大鼠脑皮质中的TNF活性在伤后6h后较对照组升高显著(P<0.01),48h达高峰,96h降至基础水平。甲基强的松龙治疗组在伤后6~48hTNF活性较损伤组明显降低(P<0.05)。结论颅脑损伤后,受损脑组织中TNF含量升高,甲基强的松龙可通过抑制损伤后TNF活性,起到保护创伤神经元的作用。     

探讨脑细胞Bcl-2、Fas的表达推断脑损伤时间

目的 探讨脑挫伤后细胞凋亡相关基因Bcl—2、Fas表达的变化规律推断脑损伤时间。方法 通过组织学和免疫组织化学法（SP法)观察、分析大鼠脑挫伤早期脑组织病理形态学改变及Bcl—2、Fas表达的变化规律。结果 伤后30min在脑挫伤周围神经细胞可见Bcl—2、Fas阳性表达，以后呈上升趋势，并且范围逐渐扩大，其中Bcl—2蛋白表达在6h达高峰，随着呈下降趋势，8h后可见典型的凋亡神经细胞。结论 检测凋亡相关基因的表达可推断脑损伤时间及生前伤与死后伤的鉴别。     

脊髓型减压病神经损伤机制及外源性神经生长因子的效用

目的观察脊髓型减压病(DCS)的神经损伤变化过程,探讨DCS致神经损伤的机制,并观察外源性神经生长因子(NGF)对DCS脊髓神经损伤的效用。方法92只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、安全减压组、生理氯化钠(NS)组、NGF治疗组、高压氧(HBO)暴露组、NGF与HBO联用组,通过建立大鼠脊髓型DCS模型,给予外源性NGF。观察NGF及其受体酪氨酸激酶(TrkA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达情况。结果脊髓组织NGF及其受体Tr-kA1免疫组织化学阳性表达在极快速减压致伤后24 h达到高峰,NGF阳性细胞主要为神经元胞体和胶质细胞。TNF-αIHC阳性率、组织内蛋白含量和神经细胞凋亡指数在48 h达到高峰,TNF-αIHC阳性染色主要为灰质胶质细胞,凋亡阳性染色主要分布在脊髓灰质神经元,TNF-α蛋白表达的时间分布特点与神经细胞凋亡相似,两者变化趋势一致。NGF处理组TNF-α含量和神经细胞凋亡指数均在24、48和72 h较生理氯化钠组明显减少。NGF与HBO联用组的TNF-α含量和神经细胞凋亡指数明显低于单纯NGF组和HBO暴露组。结论NGF、TrkA、TNF-α和神经元凋亡参与了DCS脊髓损伤过程,NGF可起到自身神经元保护作用,TNF-α可能参与介导了脊髓型DCS神经元凋亡,给予外源性NGF有神经元保护效用,与HBO联用可在改善DCS诱发的脊髓神经细胞损伤中起协同作用。     

孕酮对大鼠脑挫裂伤后水通道蛋白-4与血脑屏障通透性的影响

目的探讨孕酮减轻创伤性脑水肿的机制。方法建立雄性大鼠额叶脑挫裂伤模型并予孕酮干预治疗。免疫组织化学法检测脑组织星形胶质细胞AQP4表达的变化;伊文氏蓝法测定脑组织血脑屏障通透性的变化。结果经孕酮干预治疗,脑组织含水量在各时相点均下降（P〈0．05）。脑挫裂伤后24、72、120h时间段伤灶及其周边脑组织星形胶质细胞AQP4阳性细胞计数下降（P〈0．05）;伤后6h和24hEB含量明显下降（P〈0．01）。结论孕酮减轻创伤性脑水肿的作用,可能与它降低外伤后脑组织AQP4表达水平和减轻伤后早期血脑屏障通透性有关。     

谷氨酰胺对创伤性脑损伤后肠黏膜屏障的影响

目的探讨谷氨酰胺对大鼠创伤性脑损伤后肠黏膜屏障的影响。方法54只雄性Wistar成年大鼠分为对照组（N组，6只）、脑损伤组（T组，24只）及脑损伤后谷氨酰胺治疗组（G组，24只），T和G组按脑损伤后检测时间分为1、3、5．7d组，6只／组，应用组织病理和电镜观察肠黏膜结构的变化，并测定血浆内毒素水平，来评价肠黏膜屏障功能。结果谷氨酰胺能减轻创伤性脑损伤后肠黏膜的病理损害，使血浆内毒素水平降低。结论谷氨酰胺对创伤性脑损伤后肠黏膜屏障损害有一定的保护作用。     

丹参对大鼠液压脑损伤后神经生长因子表达的调节作用

目的探讨丹参对大鼠脑损伤后神经生长因子（NGF）的表达是否有促进作用;脑损伤后神经生长因子水平与时间的关系。方法SD大鼠72只,分成三组（假手术组、脑损伤组及丹参治疗组）,采用液压脑损伤装置建立侧方液压打击脑损伤模型,利用免疫组织化学SABC法显示脑损伤后不同时相点神经生长因子的表达及丹参处理后对神经生长因子表达的影响。结果当发生脑损伤后,脑损伤组脑组织NGF的表达量3d后开始升高（1．29±0．61）,7d后达高峰（2．03±0．42）,14d后则降至一般水平（0．87±0．23）。丹参治疗组脑组织NGF的表达早期较假手术组有明显增加（1．77±0．54,3．35±0．37,0．65±0．21VS0．75±0．31,1．58±0．52,0．49±0．36,P〈0．05～0．01）,丹参治疗组14d后的水平低于脑损伤组（0．65±O．21VS0．87±0．23,P〈0．05）。结论脑损伤后脑组织中NGF表达量显著升高,并呈现一定的规律性,这对于探索脑损伤时间的推断方法具有重要的实验研究意义。丹参注射液能促进脑外伤后神经因子的表达,对脑损伤有保护作用。     

醉酒对大鼠重型颅脑创伤后水通道蛋白-4表达的影响

目的观察醉酒对大鼠重型颅脑创伤后脑组织水通道蛋白-4（AQP4）表达的影响。方法雄性Wistar大鼠70只,随机分为假手术（SO组）、颅脑创伤（TBI组）、乙醇预处理（ETH组）。ETH组给予白酒3g/kg灌胃。除SO组外,其余两组采用自由落体打击法制作颅脑创伤模型。分别于伤后不同时间点,采用干湿重法检测脑组织含水量,应用免疫组织化学法检测AQP4表达。结果与TBI组相比,ETH组脑组织含水量及AQP4表达水平显著升高（P〈0.05）,且通过相关性分析发现,大鼠脑损伤后脑组织AQP4表达水平与脑水肿呈正相关（r=0.684,P=0.001）。结论醉酒加重颅脑创伤后脑水肿与其升高AQP4表达有关。     

大鼠脑损伤后脑水肿与精氨酸加压素含量的相关性研究

目的探讨颅脑损伤后血浆中精氨酸加压素（AVP）的动态变化与继发性脑水肿的关系。方法以自由落体硬膜外撞击方法制作轻度和重度大鼠脑损伤模型，应用放射免疫法检测大鼠脑伤后24h、48h、72h和5d血浆中AVP的含量，干湿重法测定脑组织含水量。结果颅脑损伤早期血浆AVP含量与脑水肿严重程度呈正相关。颅脑损伤越严重，AVP升高越明显，脑水肿程度越重（P〈0．05）。结论颅脑损伤后血浆中AVP的含量与继发性脑水肿密切相关，AVP是参与颅脑损伤后继发性脑水肿形成的重要因素之一。     

亚低温对重型颅脑损伤患者脑实质压力的影响

目的研究亚低温治疗对重型颅脑损伤患者脑实质压力的影响。方法选择确诊重型颅脑损伤患者14例,入院后分别于两侧额部钻颅置入光导纤维传感器行两侧大脑半球脑组织压（brain parenchyma pressure,BPP）监护,术后给予亚低温治疗,分别于不同时间点收集两侧大脑半球BPP数据,并行配对对照。结果术前监测的两侧BPP差异有统计学意义（P〈0．01）。术后24h、48h、72h不同时间点监测的两侧BPP差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后两侧脑实质压力均比术前明显下降,亚低温治疗后,患者两侧脑实质压力差基本消失。结论亚低温治疗能有效降低两侧脑实质压力差,改善预后。     

小剂量激素对大鼠脑创伤后认知影响的研究

目的探讨小剂量糖皮质激素对大鼠颅脑创伤后认知功能的影响及其可能机制。方法对成年雄性Wistar大鼠实施液压打击术,制备颅脑创伤模型,mNSS评分评价大鼠伤后神经功能;免疫组织化学染色观察患侧海马区血管内皮生长因子(VEGF)表达水平;Morris水迷宫实验评价大鼠创伤后认知功能恢复程度。结果与TBI对照组相比,创伤后14d、21dTBI后给药组大鼠mNSS评分降低;与TBI对照组比较,创伤后4d、7dTBI后给药组大鼠海马区VEGF表达增加;与TBI对照组相比,Morris水迷宫实验训练第3天时TBI后给药组大鼠逃避潜伏期开始缩短,伴随训练时间延长,组间差异明显增加并具有统计学意义(P0.05)。结论小剂量糖皮质激素可促进颅脑创伤后认知功能的恢复。其潜在机制可能是与其促进伤后VEGF表达升高有关。     

A substance P antagonist increases brain intracellular free magnesium concentration after diffuse traumatic brain injury in rats

OBJECTIVE: Magnesium (Mg) deficiency has been shown to increase substance P release and induce a pro-inflammatory response that can be attenuated with the administration of a substance P-antagonist. Neurogenic inflammation has also been implicated in traumatic brain injury (TBI), a condition where brain intracellular free magnesium (Mg(f)) decline is known to occur and has been correlated with functional outcome. We therefore examined whether a substance P antagonist restores brain intracellular free magnesium concentration following TBI. METHODS: Male, adult Sprague-Dawley rats were injured using the Cernak impact acceleration model of diffuse TBI. At 30 min after injury, animals were administered either 0.25 mg/kg i.v. n-acetyl tryptophan or equal volume saline. Prior to and 4 h after induction of injury, phosphorus magnetic resonance spectra were acquired using a 7-tesla magnet interfaced with a Bruker console. Mg(f) was calculated from the chemical shift of the beta ATP. Before injury, Mg(f) was 0.51 +/- 0.05 mM (SEM). RESULTS: By 4 hr after injury, Mg(f) had significantly declined to 0.27 +/- 0.02 mM in saline treated rats. In contrast, rats treated with n-acetyl tryptophan had a Mg(f) of 0.47 +/- 0.06 mM at 4 h after injury, which was not significantly different from preinjury values. There were no significant differences in pH between the treatment groups. CONCLUSION: It seems that any beneficial effect of a substance P antagonist on functional outcome following TBI may be related to improvement in brain Mg homeostasis induced by the compound.