依托咪酯对大鼠海马CA1区兴奋性突触后电流的影响

目的 探讨依托咪酯对大鼠海马CA1区兴奋性突触后电流的影响.方法 将32只Wistar大鼠海马脑片均分为四组:脂肪乳剂组;10μM依托咪酯组;荷包牡丹碱+10μM依托咪酯组;士的宁+10μM 依托咪酯组.记录用药前和40 min后膜钳制电压为-70 mV时的兴奋性突触后电流(EPSC)幅值.结果 在膜钳制电压为-70 mV时,脂肪乳剂对CA1区锥体神经元细胞EPSC幅值无明显影响,而10μM依托咪酯可明显降低EPSC幅值(P＜0.05).应用荷包牡丹碱预孵脑片可完全消除10μM依托咪酯对大鼠海马CA1区EPSC值的抑制作用(P＜0.05).在应用士的宁预孵脑片后,10μM依托咪酯可使EPSC值下降约16.2％;但与依托咪酯组相比,该抑制作用被明显削弱(P＜0.05).结论 依托咪酯可能主要通过增强突触 γ-氨基丁酸A受体功能而抑制兴奋性突触活动.甘氨酸受体在其中亦起到一定的调节作用.     

异丙酚对大鼠前扣带回突触传递的影响

目的探讨异丙酚对大鼠前扣带回突触传递的影响。方法应用全细胞膜片钳技术,在成年大鼠前脑前扣带回区域(ACC)脑片上观察异丙酚对ACCⅡ/Ⅲ突触传递的影响。结果不同浓度的异丙酚能够剂量依赖性的显著增强ACCⅡ/Ⅲ层神经元GABA能微小抑制性电流(mIPSC)的幅度和半波宽,但对其频率没有显著影响。而对于微小兴奋性的突触后电流(mEPSC),异丙酚对ACCⅡ/Ⅲ层神经元mEPSC的频率,幅度半波宽都无显著影响。结论异丙酚对ACCⅡ/Ⅲ层神经元兴奋性突触传递没有直接的影响,但是却可以通过延长GABA受体的平均开放时间和增加突触后GABAA受体的数目来增强抑制性突触传递的效果。     

三环哌酯对海马脑片神经元烟碱受体及谷氨酸能兴奋性突触传递的阻断作用

目的研究中枢抗胆碱药三环哌酯(TCPN)对海马脑片神经元烟碱受体(nAChR)及谷氨酸能兴奋性突触传递的阻断作用。方法采用海马脑片盲法全细胞记录技术,以自发兴奋性与抑制性突触后电流(sEPSC和sIPSC)为观测指标。结果TCPN(10～500μmol.L-1)浓度依赖地对抗nAChR激动剂碘化二甲基苯基哌嗪(DMPP)增强海马脑片CA1锥体神经元sEPSC的作用,500μmol.L-1完全阻断DMPP的增强作用。同时,TCPN浓度依赖地直接抑制神经元的sEPSC。但TCPN不抑制神经元的sIPSC,也不阻断DMPP对sIPSC的增强作用。结论TCPN对海马脑片神经元突触传递的影响具有双重作用,既能通过阻断谷氨酸能突触前末梢nAChR而抑制sEPSC,同时还能直接抑制sEPSC。     

趋化因子MCP-1对大鼠海马区NMDA受体介导的兴奋性突触后电流的影响

目的研究趋化因子MCP-1对大鼠海马CA1区NMDA受体介导的兴奋性突触后电流的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,记录2.3 nmol·L~(-1)MCP-1对大鼠海马脑片CA1区NMDA受体尤其是其重要受体亚型NR2BR介导的兴奋性突触后电流的影响,观察MCP-1是否对海马CA1区神经元有易化兴奋性作用;应用微管相关蛋白-2(MAP-2)抗体染色的方法,观察海马CA1区神经元轴突结构的完整性,研究在NMDAR、AMPAR、CCR2受体拮抗剂分别存在的情况下,MCP-1引发海马脑片神经元结构损害的差异,观察上述各种拮抗剂是否对MCP-1导致的神经细胞结构损害有保护作用。结果灌流液内加入MCP-1能明显增加EPSCs、EPSCAMPAR、EPSCNMDAR电流幅度(P<0.05),MCP-1能增加EPSCNR2BR的电流幅度,冲洗掉MCP-1后上述电流可恢复到接近给药前基础值,说明MCP-1对EPSCNR2BR的易化和促进作用是可逆的。在海马脑片上所做的MAP-2免疫组化染色的实验结果显示MCP-1对神经元轴突结构有损害作用,该作用可被NMDA和AMPA受体拮抗剂或CCR2受体拮抗剂逆转。结论 MCP-1对大脑海马CA1区NMDA受体,尤其是NR2B受体介导的突触后神经元的兴奋性有明显易化作用,神经元过度兴奋引发兴奋性神经毒性而导致神经损伤。NMDA和AMPA受体拮抗剂或CCR2受体拮抗剂对MCP-1诱导的神经元轴突结构损伤起到明显保护作用,这些拮抗剂的神经保护效应可为寻找神经退行性疾病的潜在治疗方法提供非常有价值的线索。     

M胆碱能受体和GABAB受体在脊髓背角Ⅱ板层神经元上的表达

目的观察M胆碱能受体亚型M2和B型γ-氨基丁酸（GABAB）受体在脊髓Ⅱ板层神经元的表达情况。方法SD雄性大鼠,体重160～180g,麻醉后快速取下L4-6脊髓,进行冰冻切片,M2受体和GABAB受体进行免疫荧光组化双重染色。结果在激光共聚焦显微镜下观察,在脊髓Ⅱ板层神经元上,表达有丰富的M2受体和GABAB受体,其中56．57％的神经元可同时表达2种受体。结论脊髓背角Ⅱ板层神经元可接受M胆碱能受体与GABAB受体的共调节。     

周边γ-氨基丁酸通过GABA_B受体调控骶髓后联合核神经元谷氨酸能突触

目的研究突触周边γ-氨基丁酸(ambient GABA)通过GABAB受体调控骶髓后联合核(SDCN)神经元谷氨酸能突触的机制。方法在急性切取的骶段脊髓薄片上,利用全细胞膜片钳法记录骶髓后联合核神经元谷氨酸能兴奋性突触后电流(EPSCs),将GABAB受体用其特异性受体拮抗剂CGP52432阻断,观察谷氨酸突触终末上的GABAB受体被周边GABA作用的影响。结果在突触后GABAB受体被从胞内阻断的条件下,再灌流CGP52432阻断谷氨酸能突触前GABAB受体,可增加刺激引发的EPSCs(eEPSCs)幅度;改变配对刺激的两个EPSC比率(paired-pulse ratio,PPR),并激发沉默突触(silent synapse)。但CGP52432对微小兴奋性突触后电流(mEPSCs)无影响。结论位于SDCN神经元谷氨酸能突触前的GABAB受体受周边GABA调控。这种影响参与调节谷氨酸释放并可能参与痛觉信息在脊髓水平的传递。     

辣椒素受体参与骶髓后联合核神经元突触传递

目的研究辣椒素受体对大鼠骶髓后联合核(SDCN)神经元突触传递的影响。方法在脊髓骶段横切薄片上,利用全细胞膜片钳法记录骶髓后联合核神经元谷氨酸能兴奋性突触后电流(EPSCs)和γ-氨基丁酸(GABA)能抑制性突触后电流(IPSCs),比较激动辣椒素受体后上述突触电流的变化;观察激动辣椒素受体对SDCN神经元动作电位发放的影响。结果辣椒素受体被其特异性激动剂辣椒素(1μmol.L-1)激动后,自发EPSCs(sEPSCs)的频率和振幅均有明显增加(P<0.05,n=17)。在河豚毒素(0.5μmol.L-1)存在的条件下,辣椒素明显增加微小EPSCs(mEPSCs)的频率(P<0.01,n=13),但对mEPSCs的振幅无影响(P>0.05,n=13),提示辣椒素的作用在突触前。辣椒素也明显增加动作电位发放(P<0.05,n=19)。上述作用均可被辣椒素受体特异性拮抗剂capsazepine(10μmol.L-1)阻断。辣椒素也增加GABA能的自发IPSCs(sIPSCs)的频率(P<0.05,n=20),但对其不依赖动作电位的微小IPSCs(mIPSCs)的频率或振幅均无作用(P>0.05,n=9)。结论在SDCN,辣椒素受体主要表达于兴奋性突触终末;激动辣椒素受体影响兴奋性和抑制性突触活动,并可能参与痛觉信息在脊髓水平的传递和调制。     

反复吗啡暴露后短期戒断时大鼠伏核大麻素CB1受体的功能变化

目的獉獉:探索反复吗啡暴露后短期戒断时,大麻素信号对大鼠伏核中等有棘神经元接受的自发性抑制性突触后电流调节功能的变化。方法獉獉:24只SD大鼠(♂)随机分为吗啡组和对照组,并分别按10 mg.kg-1.d-1的剂量腹部皮下注射吗啡和生理盐水,连续注射7 d。在药物戒断后的d3分别制备伏核脑片,在全细胞膜片钳模式下分别记录两组大鼠伏核中等有棘神经元所接受的自发性抑制性突触后电流,观察两组电流的频率和幅度是否存在差异,以及两者对大麻素受体激动剂的反应性的异同。结果獉獉:(1)在戒断3 d后,吗啡组和对照组自发性抑制性突触后电流的幅度分别为23.40±s 3.9 pA,21.60±s 4.1 pA,两组比较无显著差异(P>0.05);频率分别是1.62±s0.47 Hz,1.46±s 0.51 Hz,二者比较无显著差异(P>0.05)。(2)灌流大麻素CB1受体激动剂WIN55,212-2后,吗啡组和对照组自发性抑制性突触后电流的幅度分别为基线水平的75.1±s 7.6(%)和93.7±s 8.4(%),两组差异显著(P<0.05);频率分别为基线水平的64.6±s 6.3(%)和89.8±s 9.7(%),两组差异显著(P<0.05)。结论獉獉:大鼠反复吗啡暴露后短期戒断时,伏核大麻素CB1受体功能发生变化,表现为其对吗啡组伏核中等有棘神经元接受的自发性抑制性突触后电流的抑制作用显著增强。     

盐酸埃他卡林对大鼠海马神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响

目的 :研究盐酸埃他卡林 (Ipt)对脑神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响。方法 :采用原代培养的大鼠海马神经元 ,应用膜片钳全细胞记录技术 ,记录Ipt对培养的海马神经元谷氨酸或天冬氨酸(NMDA)诱发电流及神经元突触后电流的影响。结果 :Ipt(1～ 1 0 0 μmol·L- 1)可浓度依赖性地对抗培养的海马神经元谷氨酸或NMDA诱发电流 ,并为ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲 30 μmol·L- 1所对抗。Ipt抑制培养的海马神经元之间突触联系形成的自发兴奋性突触后电流 ,降低其发放频率 ,抑制其电流幅度 ;但对微小兴奋性突触后电流无显著性影响。结论 :Ipt可阻断脑神经元谷氨酸受体功能 ,抑制脑神经元谷氨酸的兴奋性突触传递 ,其作用与ATP敏感性钾通道相关     

SKF97541抑制大鼠骶髓后联合核神经元

目的研究GABAB受体特异性激动剂SKF97541对骶髓后联合核(SDCN)神经元的作用。方法在大鼠骶段脊髓横切薄片上,利用全细胞膜片钳法记录骶髓后联合核神经元。电流钳记录模式下,观察SKF97541对神经元膜电位和动作电位发放的影响。电压钳模式下,观察谷氨酸能兴奋性突触后电流(EPSCs)对SKF97541处理的变化。结果SKF97541(0.5μmol.L-1)通过作用于GABAB受体,减少SDCN神经元动作电位发放,同时促进细胞膜超极化。SKF97541在电压钳模式下,减少谷氨酸介导的微小EPSCs的频率,但对振幅无影响,提示SKF97541通过作用于突触前GABAB受体抑制谷氨酸释放。突触前刺激引起的突触后电位,也被SKF97541抑制。结论在骶髓后联合核,SKF97541通过作用于突触后GABAB受体,直接抑制神经元的兴奋性和动作电位发放;并通过突触前GABAB受体,抑制谷氨酸的释放。以上结果提示SKF97541的抑制作用可能抑制骶髓后联合核神经元对伤害性信息的传递。     

吗啡短期戒断时大鼠伏核TRPV1受体对兴奋性突触后电流调节功能的变化

目的：研究吗啡短期戒断后,TRPV1受体功能变化对大鼠伏核中等大小有棘神经元接受的自发性兴奋性突触后电流的影响。方法：20只sD大鼠随机分配为对照组和吗啡组,每天分别接受10mg·kg-1的盐酸吗啡和生理盐水腹腔注射,连续5d。在自然戒断的d3制作伏核脑片,采用红外可视全细胞膜片钳记录技术,检测对照组和吗啡组大鼠的TRPV1受体功能变化对伏核中等大小有棘神经元接受的自发性兴奋性突触后电流的频率及幅度的影响。结果：（I）脑片灌流足量TRPV1受体激动剂capsaicin（CAP）后,对照组和吗啡组自发性兴奋性突触后电流的频率分别为基线水平的138．9±s5．3（％）和176．3±s8．8（％）,两组差异显著（P〈0．05）;幅度分别为基线水平的的101．9±s2．2（％）和103．9±s2．3（％）,无显著差异（P〉0．05）。（2）吗啡组脑片依次灌流TRPV1受体拮抗剂capsazepine（CPZ）及激动剂CAP后,记录到自发性兴奋性突触后电流的频率分别为基线水平的99．1±s1．8（％）和101．2±s0．9（％）,两组无显著差异（P〉0．05）。结论：大鼠反复吗啡暴露短期戒断时伏核TRPV1受体功能增强。     

异丙酚对大鼠脊髓背角神经元TTX敏感型钠通道失活和去失活效应的影响

目的：观察异丙酚对急性分离的大鼠脊髓背角神经元TTX敏感型钠通道电流的影响及相关机制。方法：取出生后7d的雄性SD大鼠,击昏后断头取脊髓腰膨大部位,分离背角神经元,应用全细胞膜片钳记录模式记录钠电流。距离神经细胞100μm施加0.3-30μmol/L不同浓度的异丙酚,应用-10mV（持续30 ms）刺激电压诱发钠电流,求出异丙酚对钠电流的半效抑制浓度（IC50）。观察异丙酚对钠通道失活效应的影响时,应用从-80mV至-20mV的预刺激电压（阶差为10mV,持续30ms）,再应用0mV刺激电压（持续30ms）诱发钠电流产生,向神经细胞施加IC50水平的异丙酚。观察异丙酚对钠通道去失活效应的影响时,应用-10mV的预刺激电压（持续30ms）,再给予-10mV、持续30 ms的刺激电压诱发钠电流产生,两刺激电压的间隔时间为2-24ms。结果：异丙酚可浓度依赖性地抑制TTX敏感型钠电流,其IC50为（5.35±0.25）μmol/L。钠通道失活实验中,预刺激电压在-60mV到-40mV范围内,IC50水平的异丙酚可显著抑制由刺激电压（0mV）诱发的钠电流（P〈0.05）。钠通道去失活实验中,两刺激的间隔时间在2-6ms之间时,IC50水平的异丙酚可显著性抑制由刺激电压（-10mV）诱发的钠电流（P〈0.01,P〈0.05）。结论：异丙酚可抑制大鼠脊髓背角电压依赖性钠通道电流,这一作用与促进钠通道的失活和抑制钠通道的去失活有关。     

Collybistin对神经病理性疼痛的调控作用

目的 探讨collybistin在痛觉调控中的作用。方法 利用免疫组织染色,观察collybistin在脊髓中的分布;利用行为学实验,评估collybistin在痛觉传递中的作用;利用电生理实验,研究collybistin对抑制性突触传递的影响。结果 Collybistin分布于脊髓神经元中;通过转染针对collybistin的shRNA (shRNA-collybistin),发现shRNA-collybistin能够诱发正常小鼠的痛觉敏化(P<0.05);脊髓过表达collybistin,可明显缓解外周神经损伤诱发的痛觉敏化(P<0.05);ShRNA-collybistin也可明显降低脊髓背角浅层神经元中的微小抑制性突触后电流(miniature inhibitory postsynaptic currents; mIPSCs)的幅值和频率(P<0.05);脊髓过表达collybistin,可逆转外周神经损伤对mIPSCs的降低作用(P<0.05)。结论 Collybistin参与外周神经损伤诱发小鼠痛觉敏化的过程。     

丙泊酚对大鼠海马CA1区突触传递长时程抑制的作用

目的研究丙泊酚对大鼠海马CA1区兴奋性突触反应及突触可塑性的影响。方法取3周龄Wistar大鼠,快速断头取脑,用振动切片机切取400μm厚的海马脑片,电刺激靠近海马CA1区的Schaffer纤维,用全细胞膜片钳技术记录CA1区锥体细胞的兴奋性突触后电流(excitatory post-synaptic current,EPSC)。循环液中加入不同浓度的丙泊酚,观察其对EPSC的影响。然后给与低频刺激(900pulse,3Hz)诱导长时程抑制(long-termdepression,LTD),并观察丙泊酚对LTD诱导的影响。结果丙泊酚呈剂量依赖性地抑制EPSC,其作用可被印防己毒素(picrotoxin)阻断;丙泊酚可易化由N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体介导的LTD的诱导。结论丙泊酚可影响大鼠海马CA1区的兴奋性突触传递和突触可塑性,从而对大鼠的学习和记忆产生影响。     

三七总皂苷对海马CA1区长时程增强效应的影响

三七总皂苷(Panax notoginseng saponins，PNS)是从传统中药三七的根中提取的主要有效成分， 具有改善血液循环、 耐缺氧、 改善记忆力、 抗衰老等多方面的生理活性。本研究采用“盲法”全细胞膜片钳技术观察PNS对大鼠海马CA1区锥体神经元长时程增强效应(LTP)的影响， 以分析其增强学习记忆功能的神经电生理机制。以断头法分离Wistar大鼠(3～4周)海马半脑， 用切片机切出400 μm厚度的海马脑片， 以全细胞电压钳制方式记录CA1区锥体细胞的兴奋性突触后电流(EPSCs)， 给予高频刺激HFS(100 Hz)诱导LTP， 分析PNS对大鼠海马CA1区EPSCs和LTP的影响。结果表明， PNS(0.1～0.4 g·L^-1)能显著抑制EPSCs(P<0.05)， 且对海马CA1区LTP无易化作用； 但PNS(0.04～0.05 g·L^-1)不影响CA1区的EPSCs基础突触传递(P>0.05)， 却可以增强HFS诱发的LTP(P<0.05)。上述结果提示， PNS(0.04～0.05 g·L^-1)能易化海马CA1区锥体神经元的长时程增强效应，该作用应是其增进学习记忆力的神经电生理机制。     

皮质酮对大鼠海马神经元电压门控性钙通道及其突触活动的影响

目的　研究皮质酮对海马神经元电压门控性钙通道和突触活动的影响 ,以阐明其作用机理。方法　以培养的新生大鼠海马神经元为标本 ,使用膜片钳技术的全细胞记录方式 ,通过压力注射给药的方法观察皮质酮对神经元电压门控性钙通道及其自发性突触活动的影响。结果　皮质酮 1、10和 10 0μmol·L- 1可使神经元电压门控性钙电流的幅度分别增加 (14± 8) %、(41± 13) %和 (5 8± 9) % ,其增强效应具有明显的浓度依赖性特征 ,但没有电压依赖性 ,也不改变钙通道的电学特征。 10 0 μmol·L- 1皮质酮可使海马神经元突触活动的发生频率增加约 4倍。在使用河豚毒素阻断神经元的突触传递活动后 ,皮质酮仍然可以诱发低频 (4.6± 1.0 )Hz低幅 (0 .18±0 .0 9)nA的兴奋性突触后电流。结论　皮质酮对海马神经元电压门控性钙电流及其突触活动有明显的增强作用。皮质酮的即刻增强效应可能与其调节基因表达的作用无关。     

慢性吗啡成瘾戒断大鼠海马Schaffer侧支-海马CA1区突触可塑性的改变

目的利用离体脑片细胞外微电极记录技术,研究吗啡慢性成瘾戒断后大鼠海马Schaffer侧支至CA1区辐射层突触可塑性的改变。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组、吗啡戒断组(n=9)。吗啡戒断组大鼠连续7 d sc注射吗啡5 mg·kg-1),建立吗啡依赖模型,空白对照组大鼠sc注射等体积生理盐水。停止给予吗啡戒断14 d后断头取脑,置于冰冷人工脑脊液中制备400μm冠状切片。采用离体脑片细胞外微电极记录技术,经Schaffer侧支刺激神经元,在海马CA1区记录细胞外场兴奋性突触后电位的变化。结果高频刺激后30 min,空白对照组fEPSP斜率标准化后的数值为基础测量值的(152±7)%,而吗啡戒断组fEPSP斜率为(213±18)%,明显高于空白对照组,有统计学意义(P<0.05)。结论慢性吗啡成瘾戒断后海马CA1区LTP增强,导致海马Schaffer侧支至CA1区突触传递功能增强。     

氯苯氨丁酸抑制脊髓背角神经元谷氨酸量子释放的机制

目的　研究GABAB 受体特异性激动剂氯苯氨丁酸(baclofen)在脊髓背角神经元抑制谷氨酸量子释放的机制。方法　在脊髓薄片标本上 ,采用全细胞电压钳法记录脊髓背角神经元谷氨酸能的微兴奋性突触后电流 (miniatureexcita torypostsynapticcurrents;mEPSCs) ,通过分析这些电流的变化来研究baclofen影响谷氨酸量子释放的机制。结果　ba clofen抑制mEPSCs的发放频率 ,但对平均幅度无明显影响 ,表明baclofen抑制谷氨酸释放的作用部位在突触前。在无钙溶液或者K+ 通道阻滞剂 4 AP存在的条件下 ,baclofen对mEPSCs发放频率的抑制作用不受影响 ,但腺苷酸环化酶激动剂foskolin (可使cAMP保持在较高水平 )能降低其抑制作用。而蛋白激酶C (PKC)激动剂PDBu对baclofen的抑制作用无影响。用NEM破坏G蛋白 ,则可取消baclofen的抑制效果。结论　baclofen不是通过影响突触前Ca2 + 通道或K+通道 ,或PKC途径 ,而是通过作用于G蛋白和 (或 )cAMP途径抑制谷氨酸的释放 ;这种抑制作用可能参与baclofen在脊髓水平的镇痛     

单次可卡因注射对VTA区DA神经元兴奋性突触传递和内在兴奋性的影响

目的:研究单次可卡因注射24 h后VTA区多巴胺能(DA)神经元兴奋性突触传递强度和内在兴奋性的变化。方法:采用离体膜片钳技术,检测单次可卡因注射24 h后VTA区DA神经元自发性慢性内向流(slow inwardcurrents,SICs)、内在兴奋性以及兴奋性突触后电流(EPSCs)的变化。结果:DA神经元的SICs、内在兴奋性和EPSCs均有显著增强。结论:单次可卡因注射后VTA区DA神经元兴奋性突触传递强度和内在兴奋性呈现协同增强效应。     

皮质酮对大鼠海马CA1区长时程抑制的影响

目的 观察皮质酮对大鼠海马CA1区锥体神经元产生的长时程抑制(LTD)的影响.方法 断头法分离Wistar大鼠海马半脑,切片机切出400μm厚度的海马脑片.对照组不加任何药品,皮质酮组、D-APV组和D-APV 皮质酮组的脑片分别以10μmol/L皮质酮、50μmol/L D-APV和50μmol/L D-APV 10μmol/L皮质酮预孵60min.记录基础兴奋性突触后电流(EPSC)10min,然后给予低频刺激(LFS),记录LTD的表达情况.结果 对照组给予LFS后,产生LTD,LFS后EPSC值为基础值的58.2 %(P＜0.05);皮质酮组给予LFS后EPSC值为基础值的45.4 %(P＜0.05),明显低于对照组(P＜0.05);给予NMDA受体特异性拮抗剂D-APV后,D-APV组和D-APV 皮质酮组大鼠海马CA1区LFS不能诱发LTD.结论 该实验条件诱发的LTD是NMDA受体依赖型的,10 μmol/L皮质酮使大鼠海马CA1区锥体神经元LTD表达增强.