血管内皮细胞生长因子基因体外转染小鼠NIH3T3细胞的生物活性

目的：用基因工程方法改造成纤维细胞，使其分泌血管内皮细胞生长因子，观察成纤维细胞作为基因转染的靶细胞的可行性。 方法：实验于2005-11在解放军第四军医大学西京医院全军整形外科研究所完成。PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒的扩增、提取、纯化和鉴定后，将培养14d细胞融合约80％的小鼠NIH3T3细胞在24孔板中进行转染，细胞随机分为3组，每组10孔，分别为PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染组．空质粒转染组和不转染质粒组。采用免疫组织化学化学检测血管内皮细胞生长因子表达。ELISA方法检测血管内皮细胞生长因子外分泌。四甲基偶氮唑盐法检测小鼠NIH3T3细胞对PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染的敏感性。 结果：①PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒的基因测序结果显示序列正确。②免疫组织化学染色显示：小鼠NIH3T3细胞转染4d后胞浆内可观察到阳性表达产物，对照组呈阴性结果。③ELISA检测结果：小鼠NIH3T3细胞转染14d后，PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组3组培养上清中血管内皮细胞生长因子浓度分别346&;#177;23，0，0ng／L（P〈0．05）。④四甲基偶氮唑盐法检测结果：PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组所测的490nm的A值比较差异均无显著性（依次为0．96&;#177;0.11，0．91&;#177;0．10，0．98&;#177;0．16，P〉0．05）。PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染对小鼠NIH3T3细胞增殖无影响。 结论：小鼠NIH3T3细胞可作为血管内皮细胞生长因子基因转染的靶细胞，用于基因治疗。     

WAVE1基因在K562/A02白血病细胞多药耐药中的作用

目的 探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVE1）基因在K562／A02白血病细胞多药耐药机制中的作用。方法 将pEFBOS—WAVE1真核表达质粒转染K562细胞构建WAVE1高表达的K562细胞，将WAVE1基因的特异性小片段干扰RNA（WAVE1siRNA）转染K562／A02细胞构建WAVE1低表达的K562／A02细胞。Western blot和RT-PCR法检测基因转染前后K562／A02细胞及K562细胞WAVE1基因及蛋白的表达；可溶性噻唑盐WST-8染色法检测阿霉素对转染前后细胞的半数抑制浓度（IC50）；Hoechest33258染色法检测细胞形态学改变并计算凋亡细胞百分率；RT—PCR检测多药耐药基因mdrl mRNA表达；Western blot检测Bcl-2表达。结果 ①与K562细胞相比，K562／A02细胞WAVE1 mRNA表达水平增加70％，蛋白表达水平增加63％。②转染WAVE1基因的K562细胞WAVE1过表达，并降低了对阿霉素的药物敏感性，使IC50从转染前的（0．05±0．00）μg／ml，增加到（2．99±0．12）μg／ml，在阿霉素浓度为1.5μg／ml时，凋亡细胞分别下降30％、35％。③转染WAVE1 siRNA的K562／A02细胞WAVE1蛋白表达水平与未转染组相比明显降低，并可增强对阿霉素的药物敏感性，使IC50从转染前的（4．29±0．15）μg／ml下降到（1．85±0．07）μg／ml，阿霉素浓度为1.5μg／ml时，凋亡细胞分别增加24％、21％。④转染WAVE1的K562细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平均增高，而转染WAVE1 siRNA的K562／A02细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平比转染前明显降低。结论 WAVE1参与了K562／A02细胞多药耐药的形成，其机制可能与调控mdr1和Bcl-2水平有关。     

腺病毒介导白细胞介素-10基因转染抑制血管平滑肌细胞的增殖及机制

目的：观察白细胞介素（interleukin，IL-10基因转染对血管平滑肌细胞增殖的影响，初步研究其相关机制。方法：不同感染复数（multiplicity of infection，MOI）的IL-10重组腺病毒（Ad／IL-10）转染原代培养的人脐带动脉平滑肌细胞（HUASMcs），用酶联免疫吸附试验检测培养上清中IL-10的表达，噻唑蓝法测定吸光度值（OD570值），绘制细胞生长曲线，流式细胞术分析细胞周期、细胞凋亡，实时荧光定量聚合酶链反应检测p21的表达。结果：MOI=100时培养上清中IL-10含量最高，为5．746ng／ml；转染72h、96h，MOI为100、150、200组与MOI为10、20组及空白对照组比较，显著抑制HUASMCs的增殖（P〈0．01）；与空白及空载体转染对照组比较，MOI100的Ad／IL-10转染组的Gn-1期细胞数、凋亡细胞的平均百分数均显著增加（P〈0．01），p21基因表达的拷贝数较低。结论：MOI为100的Ad／IL-10可有效抑制HUASMCs的增殖，此作用与细胞周期阻滞和凋亡有关，为ID-10基因转染治疗血管内膜增生提供了理论依据。     

胡桃楸提取物抗弓形虫作用的体外实验和超微研究

目的了解胡桃楸提取物（JMME）在体外杀灭弓形虫速殖子的作用效果及其机制。方法收集感染弓形虫小鼠腹水并稀释至含虫1×10^7个／d,加入胡桃楸提取物使其终浓度为60μg/ml、30μg／ml、15μg/ml、7．5μg／ml、3．25μg/ml、1．625μg/ml;乙酰螺旋霉素为阳性对照组,终浓度25μg／ml,同时设培养液阴性对照组。用MTT法测定胡桃楸提取物及其含药血清对虫体增殖情况的影响。应用透射电镜观察药物作用24h虫体超微结构的变化并拍照。结果胡桃楸提取物可明显抑制弓形虫增殖,且具有剂量依赖性,浓度大于30-ml的抑虫效果优于乙酰螺旋霉素组（P〈0．05）。胡桃楸提取物含药血清对弓形虫具有明显的增殖抑制作用,且随含药血清浓度的增加作用效果增强,JMME浓度为0．278g／（kg·d）的含药血清抑虫效果优于SM组（P〈0．05）。透射电镜下可观察到虫体电子密度增高、大量空泡形成、细胞器被破坏、细胞膜破裂、内容物溢出。结论胡桃楸提取物对弓形虫具有明显的增殖抑制和破坏作用。     

高磷对血管平滑肌钙化的影响及骨保护素干预作用

目的研究高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响和骨保护素（OPG）mRNA表达的影响,及骨保护素对高磷诱导RVSMC钙化的作用及其相关机制。方法用不同的试剂培养RVSMC,分别为正常磷组（Pi1.4mmol/L）、高磷组（Pi2.0mmol/L、Pi2.6mmol/L）、凋亡抑制组（Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK0.1μmol/L,Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK1.0μmol/L,Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK2.0μmol/L）、骨保护素组（Pi2.6mmol/L＋OPG1μg/ml,Pi2.6mmol/L＋OPG10μg/ml,Pi2.6mmol/L＋OPG100μg/ml）。全自动生化仪比色法测定钙含量,BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量。同时行VonKossa染色观察细胞钙化情况。用半定量PCR（RT-PCR）法检测RVSMCOPGmRNA的表达。流式细胞仪测定各组的细胞凋亡量。结果①培养3天,6天,9天时,高磷组（Pi2.0mmol/L,Pi2.6mmol/L）与Pi1.4mmol/L相比,RVSMC钙沉积较多（P＆lt;0.05）;②培养第6天时,Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FNK0．1μmol／L组的钙沉积与Pi2．6mmol／L组相比无统计学差异,而Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FMK1．0μmol／L,Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FMK2．0μmol／L组与Pi2．6μmol／L组相比,RVSMC钙沉积较少（P〈0．05）。Pi2．6mmol／L＋OPG10μg／ml、Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml组与Pi2．6mmol／L组相比,细胞钙沉积较少（P〈0．05）。Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml与Pi2．6mmol／L相比,细胞钙沉积明显降低（P〈0．01）;③Von Kossa染色显录Pi1．4mmol／L组钙化不明显．Pi2．6mmol／L组细胞有大量黑色颗粒沉积而Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml组较少。培养第6天时,Pi2．6mmol／L组与Pi2．0mmol／L组;Pi2．0mmol／L,Pil．4mmol／L相比,OPG mRNA表达较多（P〈0．05）。培养第6天时,Pi2．6mmol／L与Pi1．4mmol／L相比,细胞凋亡量较多（P〈0．05）;Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml与Pi2．6mmol／L相比细胞凋亡量较少（P〈0．05）。结论高磷可能通过诱导RVSMC凋亡而导致钙化,骨保护素对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用,此作用与其降低RVSMC凋亡有关。     

siRNA靶向沉默hTERT基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的研究hTERT—siRNA对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。方法利用RNAi技术靶向沉默Capan-2的hTERT基因表达，应用细胞直接计数法和流式细胞术（FCM）检测Capan-2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化。结果在hTERT-siRNA的使用浓度为50nm、Lipo转染浓度为3μl／2ml转染体积和hTERT沉默效率为100％的条件下，转染hTERT—siRNA24h后，细胞生长已明显减慢，抑制细胞增殖率为26．39％（P〈0．05），第2、3、5、7天抑制细胞增殖率分别为46．77％、70．61％、84．71％和85．99％（P〈0．001）。随着转染细胞按常规培养时间的延长，早期凋亡细胞明显增多（P〈0．001），以24h后更明显；活性细胞明显减少（P〈0．001），而损伤细胞明显增多（P〈0．001），以6h后明显；死亡细胞明显增多（P〈0．001），以24h后更明显。siRNA组与阴性对照组和Lipo对照组均有明显差异（P〈0．001）。G0-G1期细胞明显增多（P〈0．01），S期细胞明显减少（P〈0．01），以24h后明显；G2～M期细胞明显减少（P〈0．01），以48h后明显；晚期凋亡细胞增多（P〈0．05），以48h后明显。结论hTERT—siRNA可抑制人胰腺癌Capan-2细胞生长，使较多的细胞停留在G0～G1期，而进入G2～M期和S期的细胞减少，可促进细胞凋亡。     

膜型基质金属蛋白酶1在黏着斑激酶相关非激酶诱导肝星状细胞凋亡中的作用

目的应用黏着斑激酶相关非激酶（FRNK）表达质粒瞬时转染纤维连接蛋白（FN）刺激的肝星状细胞（HSC）,探讨膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）在FRNK诱导HSC凋亡中的作用。方法在体外,以FN刺激HSC增殖,采用脂质体介导的方法用FRNK表达质粒瞬时转染HSC,应用膜联蛋白／碘化丙啶双标记流式细胞术和透射电镜技术检测细胞的凋亡,蛋白免疫印迹及RT—PCR方法检测FRNK、FAK、p-FAK（Tyr397）、MTI-MMP蛋白及其inRNA表达。结果FRNK表达质粒成功转染HSC,在翻译后水平抑制FAK磷酸化。与空质粒组比较,FRNK表达质粒转染HSC48小时后,HSC凋亡率由（9．28±1．05）％增加至（25．37±1．92）％（P〈0．01）。FRNK抑制FAK磷酸化后在翻译和转录水平上调MT1—MMP表达,2．26±0．14VS1．09±0．15（P〈0．01）;1．58±0．18VS1．00±0．10（P〈0．01）。结论在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒可诱导HSC发生凋亡,上调MT1-MMP可能是其机制之一。     

不同浓度舒芬太尼用于术后静脉自控镇痛的比较

目的观察不同浓度的舒芬太尼应用于脊柱手术病人术后静脉自控镇痛（PCIA）的疗效,探讨舒芬太尼PCIA的安全有效浓度。方法选择择期脊柱手术病人90例,随机分为3组,每组30例。S．组：1．0μg／ml舒芬太尼＋80μg／ml恩丹西酮;s2组：1．2μg／ml舒芬太尼＋80μg／ml恩丹西酮;s3组：1．5μg／ml舒芬太尼＋80μg／ml恩丹西酮。应用PCA泵LCP给药模式设置：总量100ml,背景输注2ml／h,PCA2ml,锁定时间30min。观察术后4、8、12、24、48h各时间点的镇痛效果和不良反应。结果镇痛效果S。组较差（P〈0．05）,S：、S,组相当;镇静、恶心呕吐发生率S1、S2组低于S,组（P〈0．05）。结论1．2μg／ml的舒芬太尼为合适镇痛浓度,可安全有效地用于脊柱手术术后PCIA的镇痛治疗。     

K562细胞血管内皮生长因子自分泌链作用的实验研究

目的探讨抗VEGF抗体及抗VEGF发夹状核酶基因对K562细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响及其分子机制。方法将不同浓度的VEGF抗体作用于K562细胞，应用脂质体介导的方法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体pcDNA-RZ转染K562细胞，采用MTT法、甲基纤维素半固体培养法和细胞周期测定分析抗VEGF抗体及发夹状核酶基因对白血病细胞增殖的影响；DNA凝胶电泳和AnnexinⅤ标记法检测白血病细胞的凋亡程度；RT-PCR法测定K562细胞中相关基因表达的变化。结果抗VEGF抗体能抑制K562细胞生长，促进其凋亡，这一作用呈剂量依赖关系。0．165μg／ml VEGF抗体作用于K562细胞72h，DNA凝胶电泳出现梯状条带，当抗体浓度增加到0．825μg／ml时，梯状条带更为清晰；RT-PCR显示，VEGF抗体作用后，K562细胞MRP、TOPOⅡ基因的表达较对照组下调，而GST基因表达无明显改变。与K562及K562／PC细胞（转染空质粒的K562细胞）相比，转染抗VEGF核酶基因的K562／RZ细胞VEGF mRNA和蛋白的表达量明显降低；生长曲线提示K562／RZ细胞生长缓慢，甲基纤维素集落形成率较对照组明显下降，对照组集落形成率为（30．5±3．3）％，而K562／RZ组为（16．3±2．8）％，细胞周期动力学分析结果显示K562／RZ细胞G1期细胞增多，S期细胞显著减少；在小剂量As2O3作用下，K562／RZ细胞凋亡数量较对照明显增高（凋亡率对照组为13．4％，K562／RZ组为31．5％）。结论抗VEGF抗体阻断K562细胞VEGF自分泌环路或者抗VEGF发夹状核酶减少K562细胞中VEGF的合成，能抑制K562细胞的增殖，促进K562细胞的凋亡，引起部分与细胞凋亡和多药耐药相关的基因表达改变。     

细胞间粘附分子-1在小鼠间充质干细胞体外迁移中的作用及其机制

本研究旨在探讨细胞间粘附分子-1（ICAM-1）在小鼠间充质干细胞（MSC）体外迁移中的作用及其相关机制。采用transwell法研究小鼠MSC（C3H10T1／2）、转染空载体的小鼠MSC（C3H10T1／2-MIGR1）和转染了ICAM-1的小鼠MSC（C2H10T1／2-ICAM-1）的体外迁移能力，即将各组Msc种植在孔径为8μm的通透膜上面，以胎牛血清作为趋化物质诱导MSC迁移。分别在迁移8h和12h后对膜下的MSC进行结晶紫和荧光染料DAPI染色，然后统计各组的MSC的细胞数和迁移率。为了探究调控Msc迁移的机制，丝裂原活化蛋白激酶通路的抑制剂（SB203580，PD98059和JNKinhibitorⅡ）被添加到transwell体系中，并进一步观察MSC迁移能力的改变。结果表明：3种细胞8h和12h的transwell体外迁移结果显示，转染了ICAM-1的MSC组迁移的细胞数和迁移率均显著高于未转染组MSC和转染空载体组MSC（P〈0．05），未转染组MSC和转染空载体组MSC之间无统计学差异（P〉0．05）；加入JNK／SAPK通路的抑制剂JNKinhibitorⅡ可以抑制ICAM-1对MSC的促迁移作用，无论是迁移的细胞数还是迁移率均显著降低（P〈0．05）。本研究中p38／MAPK通路的抑制剂SB203580和ERK／MAPK通路的抑制剂PD98059对于ICAM-1的促MSC迁移作用无显著影响。结论：ICAM-1可增强小鼠MSC的体外迁移能力，这种促进作用部分依赖于活化JNK／SAPK通路实现。     

姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的初步研究

目的观察姜黄素对体外培养的人子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法将体外培养的HEC-1-B细胞随机分为5组:对照组、姜黄素Ⅰ组、姜黄素Ⅱ组、姜黄素Ⅲ组和姜黄素Ⅳ组。分别给予不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/L培养48 h。采用MTT法和Western blot法检测HEC-1-B细胞的增殖程度;流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果①MTT法显示培养48 h后,姜黄素组的吸光度值A490 nm低于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。②Western blot法结果显示,与对照组比较,姜黄素作用48 h后,姜黄素各组的PCNA表达减少(P<0.01),且在10～80μmol/L范围内呈剂量依赖性。提示姜黄素可抑制HEC-1-B细胞内PCNA的表达。③流式细胞仪检测显示培养48 h后,姜黄素组的G2/M比例高于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。结论在一定浓度(10～80μmol/L)范围内,姜黄素可抑制体外培养的HEC-1-B细胞增殖,阻止细胞周期进展。这可能是姜黄素抗HEC-1-B细胞作用的机制之一。     

促血小板生成素在小胶质细胞炎症模型中的表达及与NF-кB的关系

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预小胶质细胞后细胞内NK-кB及促血小板生成素(thrombo-poietin,TPO)的分泌.方法 将BV2细胞分为6组:(1)空白12 h组;(2)LPS 0.5μg/ml 12 h组;(3)LPS 1μg/ml12 h组;(4)空白24 h组;(5)LPS 0.5μg/ml 24 h组;(6)LPS 1μg/ml 24 h组.采用ELISA法检测细胞内NF-кB和TPO的表达;实时荧光定量PCR法检测细胞内NF-кB及TPO mRNA的表达水平.结果 NF-кB和TPO的表达和mRNA均较空白组升高,且12 h组高于24 h组(P<0.05).TPO与NF-кB的表达呈显著的正相关(P<0.01).结论 LPS干预小胶质细胞后NF-кB和TPO表达升高,参与炎症、凋亡和神经元保护等多种调控机制.     

奥曲肽对Hep-2细胞增殖的抑制作用

目的喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤,喉癌的发病率目前有逐年提高的趋势。近年来的研究表明,奥曲肽对许多实体肿瘤及正常组织有抗增生作用,还具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用。本实验旨在研究奥曲肽对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用及其机制的初步探讨。方法通过MTT比色试验和测定细胞生长曲线研究奥曲肽对Hep-2细胞增殖的作用,经流式细胞仪检测研究奥曲肽对Hep-2细胞凋亡和细胞周期的影响。结果奥曲肽浓度在0.05μg/ml-20μg/ml范围内对Hep-2细胞均有抑制作用,48 h时最显著,但血清组与无血清组比较,抑制率明显下降(P0.05)。无血清组奥曲肽浓度在0.1μg/ml的奥曲肽抑制作用最为显著,为24.67%(P0.01,vs con-trol)。在奥曲肽作用下72 h内,Hep-2细胞的生长曲线有明显下降(P0.05),奥曲肽浓度在0.05μg/ml和0.1μg/ml范围内,Hep-2细胞生长曲线较低平。经流式细胞仪检测,Hep-2细胞出现G0/G1阻滞,0.1μg/ml的奥曲肽最显著(73.97±0.48)%(P0.05);实验组G2/M期细胞比例亦有下降(P0.05 vs control);而实验组与对照组S期细胞的比例无显著性差异(P0.05)。结论本研究结果提示奥曲肽抑制Hep-2细胞增殖可能是通过诱导G0/G1阻滞和诱导细胞凋亡而实现的,为喉癌的综合治疗提供了理论依据。     

顺铂抑制IL-8诱导人卵巢癌SKOV-3细胞的迁移作用及相关机制的研究

目的 观察外源性人白细胞介素-8 （IL-8）对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移的影响,及顺铂对它的干预作用,初步探讨顺铂抑制细胞迁移的机制.方法 顺铂处理SKOV-3细胞,MTT法确定顺铂使用的最佳作用浓度;Transwell法观察顺铂对IL-8诱导SKOV-3细胞迁移的干预作用;ELISA法检测顺铂分泌IL-8情况;Western blot法检测NF-κB蛋白表达水平.结果 MTT结果显示：与对照组相比,顺铂浓度为100μg/ml对细胞增殖有显著抑制作用（P＜0.05）.浓度区间在200～400μg/ml的顺铂对细胞的增殖也有抑制作用,该范围内对细胞的生长抑制率无统计学差异（P＞0.05）.浓度为100μg/ml的顺铂,分别作用于SKOV-3细胞24 h、48 h、72 h,各时间组比较无统计学差异（P＞0.05）.IL-8（100 ng/L）处理细胞后,SKOV-3细胞的迁移能力增强,顺铂（100 μg/ml）具有抑制IL-8诱导的SKOV-3细胞迁移的作用,随着浓度的增高,迁移的细胞数由241.67减少到155.99,差异有统计学意义（P＜0.05）.顺铂刺激细胞后,与空白对照组相比,NF-κB蛋白表达水平降低（64.04±4.6）.结论 IL-8具有促进人卵巢癌SKOV-3细胞迁移的作用,顺铂可能是通过NF-κB细胞信号通路对卵巢癌细胞的迁移起抑制作用.     

促红细胞生成素对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡及坏死的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)对对缺氧心肌细胞的保护效应及量效关系。方法将当日生乳鼠,局部碘酒酒精消毒后胸骨正中开胸,取心尖前1/2心室肌进行细胞培养。培养4 d后选择细胞生长情况良好的培养瓶(>106个细胞/瓶)分为3组:A,对照组,正常培养;B,缺氧组,缺氧1h/复氧12 h;C,EPO组,缺氧/复氧加EPO干预。EPO组根据不同EPO干预浓度又分为C1,EPO干预浓度0.1 IU/ml;C2,EPO浓度1 IU/ml;C3,EPO干预浓度10 IU/ml。然后以荧光染色-流式细胞仪检测缺氧/复氧后心肌细胞的凋亡及坏死情况。结果缺氧组细胞的凋亡、坏死比率分别为(20.78±2.98)%和(50.10±0.29)%,明显高于EPO各组(P均小于0.01),也明显高于对照组[(2.3±1.09)%和(1.5±0.48)%,P<0.01]。不同浓度EPO浓度干预组间比较,C1组的存活率(40.18±7.49)%低于C2组、C3组(65.56±6.37)%,(62.56±11.32)%,均P<0.01,凋亡率(13.78±3.74)%和坏死率(42.51±5.49)%则明显高于后二者(P<0.05或P<0.01)。C2及C3间各指标差异无统计学意义。结论早期应用EPO可明显减少体外培养的乳鼠心室肌细胞缺氧/复氧后凋亡和坏死的发生。而且EPO在0.1 IU/ml至1 IU/ml浓度范围内其保护作用存在一定的量效关系。     

辛伐他汀和普罗布考对TNF-α诱导的内皮细胞凋亡的影响

【目的】探讨辛伐他汀和普罗布考对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的影响及其影响的量效关系和时效关系。【方法】体外培养HUVES,取对数生长期的细胞分为四个组：①TNF-α干预的浓度依赖性组（Ac组）[按浓度分为Acl（Ong／mL）,Ac2（1ng／mL）,Ac3（10ng／mL）,Ac4（25ng／mL）];②TNF-α干预的时间依赖性组（At组）[按时间分为Atl（Oh）,At2（12h）,At3（24h）,At4（48h）];③10ng／mLTNF_a＋不同浓度辛伐他汀干预组（B组）[浓度分为B1（O μmol／L）,B2（O．01 μmol／L。）,B3（O．1 μmol／L。）,B4（1．0t μmol／L）];④1O ng／mL TNF-a不同浓度普罗布考干预组（c组）[浓度分为C1 （0 μmol／L。）,C2（20 μmol／L）,c3（40 μmol／L）,C4（80 μmol／L）]。以上四组均干预12h后,用流式细胞术检测各组凋亡率。【结果】①Ac组凋亡率分别为：Acl（O．81±0．25％）,Ac2（2．35±0．04％）,Ac3（4．54±0．32％）,Ac4（6．17±0．28％）,各组之间存在统计学差异（P〈0．01）。②At组凋亡率分别为,Atl（0．87±o．35％）,At2（4．53±0．32％）,At3（7．45±1．97％）,At4（10．92±1．27％）,各组间存在统计学差异（P〈O．01）。③B组凋亡率分别为,B1（4．46±0．53％）,B2（1．38±0．12％）,B3（2．89±0．27％）,B4（3．65±0．08％）,各干预组与对照组之间存在统计学差异（P〈O．01）。④C组细胞凋亡率分别为,C1（4．60±0．64％）,C2（2．61±0．18％）,C3（2．21±0．22％）,c4（1．28±0．34％）,各干预组与对照组之间存在统计学差异（P〈0．01）。【结论】①TNF-α可以诱导内皮细胞凋亡,且存在浓度依赖性和时．：良赖性。②辛伐他汀可以抑制TNF-α口诱导的内皮细胞凋亡,但无浓度依赖性。③普罗布考可以抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,但无浓度依赖性。     

抑制葡萄糖调节蛋白78基因表达逆转卵巢癌顺铂耐药作用的实验研究

目的探讨以葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因为靶向的RNA干扰(RNAi)抑制GRP78基因的表达,对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的影响。方法以GRP78基因为靶向的pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒的构建,脂质法转染至细胞中;RT-PCR及Western blot方法检测GRP78 mRNA及蛋白表达;Western blot方法检测CHOP蛋白表达;MTT法检测不同浓度顺铂作用下细胞存活率,计算IC50及耐药指数。结果 RT-PCR及Western blot检测转染GRP78 siRNA重组质粒24 h、48 h7、2 h均能明显抑制SKOV3/DDP细胞GRP78基因表达,其中48h抑制效果最为明显;抑制SKOV3/DDP细胞GRP78基因表达能上调CHOP蛋白表达;顺铂作用24h,SKOV3/DDP细胞的IC50(26.13μg/ml)是其亲本SKOV3细胞IC50(8.25μg/ml)的3.1倍;转染pSH1Si-GRP78重组质粒后SKOV3/DDP细胞IC50(11.62μg/ml)明显降低。结论转染GRP78 siRNA重组质粒有效抑制SKOV3/DDP细胞GRP78基因表达;抑制GRP78基因表达能逆转SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药性。     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。