12月龄与3月龄大鼠心脏α1肾上腺素受体亚型的比较

采用［¹²⁵I］BE2254放射配体结合实验和离体灌流左心房收缩功能实验, 比较12月龄与3月龄大鼠心脏α₁肾上腺素受体(α₁-AR)三种亚型分布及其介导的正性变力效应的差别. 结果显示与3月龄大鼠相比, 12月龄大鼠: (1) 心脏α₁-AR最大结合容量显著减少; 去甲肾上腺素(NE)通过激动α₁-AR引起的左心房累积浓度-收缩效应曲线显著右移; (2) (+)尼古地平, BMY7378和WB4101的高亲和性位点所占百分比显著下降; (3)氯乙基可乐定预处理使NE引起的左心房最大收缩效应的下降幅度, 以及舍吲哚, BMY7378和WB4101拮抗NE介导正性变力效应的pA₂值均无显著差异. 提示12月龄大鼠较3月龄大鼠心脏α₁-AR总数减少, 且以α_1A和α_1D-AR亚型更为显著; α₁-AR介导的正性变力效应明显降低, α_1B-AR的功能效率降低最为明显.     

长期饮用普萘洛尔对大鼠心脏和血淋巴细胞β肾上腺素受体效应及亚型的影响

采用放射配体结合实验，离体左心房收缩功能实验，逆转录聚合酶链反应及高效液相色谱等方法研究长期饮用普萘洛尔(70 mg·kg^-1·d^-1，8 wk)对大鼠心脏β肾上腺素受体(β-AR)及其亚型，外周血淋巴细胞β₂-AR和血浆儿茶酚胺水平的影响. 结果表明长期饮用普萘洛尔后：(1)心脏β- AR密度从对照组的41±8 pmol·g^-1蛋白上调到61±9 pmol·g^-1蛋白，CGP20712A竞争抑制曲线2位点分析结果显示为β₁和β₂-AR同等程度上调；(2)心脏β₁-AR mRNA水平不变而β₂-AR mRNA水平显著增加；(3)β-AR及其亚型介导的离体左心房正性变力效应增强，以β₂-AR的功能改变更为显著；(4)血淋巴细胞β₂-AR数目从对照组的19±7 pmol·g^-1蛋白上调至32±8 pmol·g^-1蛋白；(5)血浆去甲肾上腺素水平(0.21±0.12 μg·L^-1)明显低于对照组(0.38±0.15 μg·L^-1).     

大鼠左心耳三种亚型α1肾上腺素受体对β肾上腺素受体正性变力效应的不同影响

采用电驱动离体大鼠左心耳收缩功能实验研究三种亚型α₁-肾上腺素受体(AR)激动时对β-AR介导正性变力效应的影响. 结果发现,RS 17053(选择性拮抗α_1A-AR)或WB 4101(选择性拮抗α_1A和α_1D-AR)可使去甲肾上腺素(NE)的累积浓度 收缩效应曲线(CRC)显著左移;在BMY 7378(选择性拮抗α_1D-AR)和RS 17053存在下,NE仅激动α_1B和β-AR,其CRC较单独激动β-AR时显著左移;在WB 4101和去氧肾上腺素(Phe)同时存在下(仅激动α_1B-AR),异丙肾上腺素(Iso)的CRC较对照显著左移;用BMY 7378阻断α_1D-AR后,NE的CRC不发生明显的偏移;用RS 17053和螺哌隆阻断α_1A和α_1B-AR,用Phe仅激动α_1D-AR时,对Iso的CRC也无影响. 结果说明在大鼠左心耳α_1A-AR抑制,α_1B-AR增强,而α_1D-AR则不参与对β-AR介导正性变力效应的调节.     

α2A-肾上腺素受体重组细胞株信号转导活性

目的 α₂-肾上腺素受体(α₂-ARs)是G蛋白偶联受体超家族中成员之一,α₂-ARs在人体多种生理活动中发挥着极其重要的作用,介导低血压、镇静、催眠、镇痛、麻醉等多种重要的生理应答和药理学效应,其相关配体在医学治疗领域中具有很大潜力。本研究旨在建立以α_2A-AR亚型为作用靶点的高选择性药物筛选平台,为该类药物的活性评价提供新研究方法。方法 对大鼠脑α_2A-AR进行基因克隆和CHO真核细胞表达,获得阳性重组单克隆细胞株。（1）阳性重组CHO-K1细胞准备：取冻存阳性重组CHO-K1单克隆细胞株及转染空质粒的细胞株复苏,用筛选培养基培养并传代。（2）cAMP浓度标准工作曲线制备：配制cAMP浓度系列分别为0, 0.195, 0.78, 3.1, 12.5, 50和200 pmol·ml^-1（B0~B6）,同时设非特异管（NSB）和空白对照管（N）,酶联免疫法检测各管A₄₅₀值,以浓度为0的A₄₅₀值减去NSB的A₄₅₀值为B0,其余各浓度A₄₅₀值减去NSB的A₄₅₀值为B值,以B/B0(%)作为纵坐标,以标准cAMP浓度的常用对数值为横坐标,列出线性回归方程。（3）重组表达受体与激动剂结合后介导胞内cAMP信号反应检测：将培养的8个重组阳性细胞株与1个重组阴性细胞株按5×10⁸ L^-1分别接种至96孔板,每孔100 μl,37℃5％CO₂培养过夜;每孔加入肾上腺素8 μmol·L^-1作为激动剂,37℃5％CO₂培养30 min;去掉细胞培养液并用生理盐水洗涤,加入盐酸0.1 mol·L^-1作为细胞溶解液,室温下振摇10~20 min以使细胞充分溶解,将细胞溶解样品转入96孔酶联检测板,进行酶联免疫检测胞内cAMP的含量变化情况。结果 （1）阳性重组CHO-K1细胞复苏后,在筛选培养基中生长状况良好,表明α_2A-AR在CHO-K1细胞中稳定表达。（2）cAMP浓度测定标准工作曲线制备：以标准cAMP浓度的常用对数值为横坐标,以B/B0(%)作为纵坐标作图得到一条近似直线,线性回归方程为B/B0(%)＝-27.6 lg［cAMP］＋89.8,r＝-0.9776,P<0.01。（3）重组表达受体与激动剂结合后介导胞内cAMP信号反应检测：8个重组阳性细胞株与1个重组阴性细胞株,在激动剂处理前后,细胞内A₄₅₀变化情况为：重组阴性细胞株cAMP水平无明显变化;8个重组阳性细胞株cAMP水平变化并不一致,其中,5株重组阳性细胞株cAMP水平未见明显变化;2株重组阳性细胞株cAMP水平下调,加入肾上腺素激动剂后的cAMP含量分别为加入肾上腺素激动剂前的74.7％, 59.6%;1株重组阳性细胞株cAMP水平明显下调,加入肾上腺素激动剂后的cAMP含量为加入肾上腺素激动剂前的1.47%。结论 8个α_2A-AR受体重组阳性细胞株对肾上腺素激动剂的信号转导反应存在有较大差异。野生型CHO细胞本身不表达α_2A-AR受体,人为导入α_2A-AR受体基因,重组受体的信号转导活性存在差异,可能是由诸多不确定因素造成的,诸如：细胞自身的活性状态及质粒进入细胞后的整合状态差异;α_2A-AR在不同细胞株的表达水平差异;α_2A-AR受体表达过程中的修饰加工差异以及真核细胞其他相对复杂的表达调控环节差异等。     

12月龄自发性高血压大鼠肾动脉α1肾上腺素受体亚型与同龄WKY大鼠的比较

采用RNA酶保护分析法及离体血管收缩实验比较12月龄自发性高血压大鼠(SHR)和同龄WKY大鼠肾动脉α₁肾上腺素受体(α₁-AR)亚型. 功能实验结果表明去甲肾上腺素(NE)引起SHR肾动脉收缩的pD₂值和最大收缩反应与WKY大鼠相比没有显著差异. 但舍吲哚和WB4101抑制NE收缩SHR肾动脉的pA₂值与WKY大鼠相比显著增加,同时BMY7378抑制NE收缩SHR肾动脉的pA₂值与WKY大鼠相比无显著改变. 提示SHR肾动脉对NE的敏感性与WKY大鼠相比没有差异,但α_1A-AR在介导NE收缩SHR肾动脉中的作用与WKY大鼠相比增加. RNA酶保护分析法结果显示在SHR肾动脉α₁-AR三种亚型的mRNA水平与WKY大鼠相比没有显著改变. 提示α₁-AR亚型在介导收缩反应中的改变可能因受体蛋白水平和(或)受体后信号转导的改变所致.     

吲哚哌啶-哌嗪类衍生物在α1肾上腺素受体介导的收缩反应中的生物学活性

目的 检测一批新合成的α₁-肾上腺素受体(α₁-AR)拮抗剂对α₁-AR的选择性拮抗活性。方法 1 通过吲哚哌啶与哌嗪分子耦合衍生,得到一系列α₁-肾上腺素受体拮抗剂分子,化合物B1~B9,分别具有吲哚哌啶基和不同的取代基团。2 应用离体大鼠左心耳收缩功能实验,检测IPD, 化合物B1~B9对PE刺激下离体大鼠左心耳上α₁-AR的拮抗活性。3 采用Western印迹法检测IPD, 化合物B1~B9对PE刺激下293细胞内细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的影响。结果 1 成功合成了具有吲哚哌啶基和不同取代基团的潜在 α₁-AR拮抗剂。2 提前孵育α₁-AR 拮抗剂酚妥拉明或IPD, 化合物B1, B3, B4, B7, B8, B9, PE引起的离体大鼠左心耳的收缩反应均被有效抑制;其中IPD, 化合物B4和B8引起收缩曲线的明显右移,IPD, 化合物B4和 B8的pA₂值分别是6.72±0.21, 6.86±0.29 和 6.67±0.19。3 在稳定表达α_1A-AR的HEK293细胞内,化合物B1, B2, B3, B5, B6, B7, B8, B9或 IPD均较明显地抑制PE引起的ERK1/2的磷酸化增强;在稳定表达α_1B-AR 的HEK293细胞内,化合物B2, B4, B7或B8较明显地抑制PE引起的ERK1/2的磷酸化增强。 结论 化合物B4能够选择性地拮抗α_1B-AR的活性;化合物B1, B3, B5, B6, B9和 IPD能够选择性地拮抗α_1A-AR的活性。     

氨甲酰取代的苯氧烷胺衍生物的合成及其活性测试

目的 设计合成氨甲酰取代的苯氧烷胺类α1-肾上腺素受体 (α₁-AR) 拮抗剂,并研究其对大鼠肛尾肌收缩功能的影响。方法 以2,4-二羟基苯甲酸甲酯或2,5-二羟基苯甲酸甲酯为原料,经多步反应合成关键中间体4a、4b,该中间体再与取代苯乙胺经还原胺化反应制得目标化合物,并测试它们对α₁-AR的拮抗活性。结果 共合成了12个新的氨甲酰取代的苯氧烷胺类化合物,其结构经IR、MS、¹H-NMR谱确证。结论 生物活性测试显示目标化合物均具有一定的α1-AR拮抗作用。     

胍丁胺对异丙肾上腺素诱发人心房纤维迟后除极的影响

用标准微电极技术研究胍丁胺对异丙肾上腺素 (Iso) 诱发人心房纤维迟后除极的影响. 结果如下：(1) 胍丁胺 (1-10 mmol·L^-1)以浓度依赖地方式明显抑制Iso (20 nmol·L^-1) 诱发人心房纤维的迟后除极;(2) 预先应用咪唑啉受体和α₂肾上腺素受体拮抗剂咪唑克生(0.1 mmol·L^-1) 可阻断胍丁胺 (10 mmol·L^-1) 对Iso(20 nmol·L^-1)诱发迟后除极的抑制作用;(3) 预先应用一氧化氮合酶抑制剂硝基-L-精氨酸甲酯(0.5 mmol·L^-1),不影响胍丁胺 (10 mmol·L^-1) 对Iso(20 nmol·L^-1)诱发迟后除极的抑制作用. 结果表明,胍丁胺对Iso诱发人心房纤维迟后除极的抑制作用可能是由于咪唑啉受体和α₂肾上腺素受体介导钙内流减少所致.     

一种新的α1A肾上腺素受体选择性拮抗剂—Sertindole

本工作分别在稳定表达α_1A,α_1B和α_1D肾上腺素受体(adrenoceptor,AR)的人胚胎肾脏细胞( human embryonic kidney 293,HEK 293)和大鼠离体血管上,用放射配体结合实验和离体血管收缩功能实验方法以确定sertindole对α₁-AR亚型的选择性拮抗作用。结果显示sertindole与克隆α_1A-AR的亲和性分别是与克隆α_1B-AR和克隆α_1D-AR的69倍和132倍。Sertindole拮抗去甲肾上腺素引起的主动脉和肾动脉收缩反应的pA₂值分别与其对α_1D和α_1A亚型的pKI值相符。分别稳定表达3种亚型受体的HEK293细胞膜标本经与sertindole预温育30min后,受体与¹²⁵IBE2254结合的B_max值显著降低,KD值无显著变化;而在 sertindole 存在条件下,α₁-AR3种亚型与¹²⁵IBE2254 结合的KD值显著增大,但B_max值无显著改变。上述结果表明sertindole为不可逆性竞争性α₁-AR拮抗剂,并有α_1A亚型选择性。     

异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚时心肌细胞核Ca2+转运

目的 观察异丙肾上腺素(Iso)致大鼠心肌肥厚模型心肌细胞核⁴⁵Ca²⁺摄取、钙释放通道肌醇1,4,5-三磷酸(IP₃)受体(IP₃R)和ryanodine受体(RyR)的动力学变化，以探讨细胞核Ca²⁺的转运是否参与心肌肥厚发生。方法 Iso(sc 20、10和5 mg·kg^-1剂量递减3 d，3 mg·kg^-1维持7 d)制备大鼠心肌肥厚模型，用差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯心肌细胞核，用⁴⁵Ca²⁺同位素法测定细胞核钙摄取，用［³H］标记配体分析心肌细胞核IP₃R和RyR的动力学特点。结果 与对照组相比，Iso可导致大鼠心肌显著肥大，伴有显著心肌纤维化；心肌细胞核膜IP₃R与其配体的最大结合容量(B_max)减少23.4%(P<0.05)，解离常数(K_d)无明显变化(P>0.05)；细胞核RyR的B_max增加59.9%(P<0.01)，K_d无明显变化(P>0.05)；⁴⁵Ca²⁺摄取显著低于对照组(P<0.01)，最大摄取与对照组相比降低62%(P<0.01)，达半数最大摄取时［Ca²⁺］无显著变化。结论 Iso导致大鼠心肌肥厚纤维化发生过程中，心肌细胞核⁴⁵Ca²⁺摄取能力降低，核上RyR数目上调，而IP₃R数目下调，受体亲和力无变化，提示心肌细胞核钙调节系统参与心肌肥厚的发生过程。     

1-(2,6-二甲氧基)-2-(3,4-二甲基苯乙氨基)丙烷盐酸盐(DDPH)拮抗α1肾上腺素受体的特性

目的　研究DDPH对α₁-肾上腺素受体(α₁-AR)及其亚型的拮抗作用。方法　放射配体结合实验和离体血管收缩功能实验。结果　DDPH对¹²⁵I-BE2254与大鼠脑皮质和脾脏α₁-AR结合呈竞争性拮抗作用。pK_I值在两者间无显著性差别, Hill系数均接近于1.0。在分别稳定表达α_1A,α_1B或α_1D-AR的克隆HEK293细胞中,其拮抗的pK_I值α_1A和α_1D比α_1B-AR高约2倍,Hill系数均接近于1.0。并拮抗去甲肾上腺素(NE)介导大鼠主动脉,肾动脉和脾脏收缩的pA₂值,在三者间无显著差别,斜率接近1.0。结论　DDPH对α₁-AR有竞争性拮抗作用,但其作用对α₁-AR亚型无选择性。     

大鼠盆总神经节腺苷三磷酸释放的调节

用荧光素-荧光素酶方法测定大鼠盆总神经节腺苷三磷酸(ATP)释放. 钠通道阻断剂河豚毒素(1 μmol·L^-1)抑制电刺激诱发的盆总神经节ATP的释放. 灌流液中去除Ca^2＋并加入EGTA(1 mmol·L^-1)后消除ATP的释放. 腺苷(100 μmol·L^-1)，A₁腺苷受体激动剂环戊腺苷 (0.1 μmol·L^-1)，毒蕈碱性受体激动剂氧化震颤素(1 μmol·L^-1)和5-羟色胺(100 μmol·L^-1)减少ATP的释放. A₁腺苷受体拮抗剂8-环戊基-1，3-二丙基黄嘌呤(10 nmol·L^-1)，α₂肾上腺素受体拮抗剂育亨宾(3 μmol·L^-1)，D₂多巴胺受体拮抗剂舒必利(20 μmol·L^-1)和组胺(100 μmol·L^-1)增加ATP的释放.　结果提示， 在大鼠盆总神经节存在着作为神经递质参与突触传递的ATP释放. A₁腺苷受体，毒蕈碱性受体，α₂肾上腺素受体，D₂多巴胺受体，5-羟色胺受体及H₁组胺受体激动剂或拮抗剂可以通过节前机制影响ATP的释放.     

去甲肾上腺素引起大鼠后肢血管平滑肌收缩的Ca2＋依赖特征

在大鼠后肢血管床灌流标本功能性实验中，以灌流压为指标，研究了去甲肾上腺素(NE)引起血管平滑肌细胞收缩的Ca^2＋依赖特征. 标本经无Ca^2＋ Krebs液预灌流30 min后，血管床对NE的最大反应降至对照时的8％；如再经咖啡因和NE耗竭胞内贮存Ca^2＋后，则反应完全消失. 硝苯地平(0.01-10 μmol ·L^-1)呈浓度依赖性抑制NE的收缩反应，最大抑制作用为65％. 硝苯地平不能抑制的反应可被CdCl₂抑制. 肌浆网Ca^2＋-ATP酶抑制剂环匹阿尼酸(CPA)能使NE升高灌流压的效应降低80%左右. 在无Ca^2＋ Krebs液中， 咖啡因耗竭其敏感的细胞内Ca^2＋ 池后，NE的效应不变，用NE耗竭Ca^2＋池后，也不影响咖啡因的反应. 结果提示，α_1A肾上腺素受体激动引起大鼠后肢血管床细胞收缩反应主要由细胞外Ca^2＋经硝苯地平敏感的钙通道和其它钙通道内流引起，并且大部分胞外Ca^2＋的内流依赖细胞内Ca^2＋释放的启动.     

溶血性磷脂酰胆碱和血管内皮对5-羟色胺收缩离体兔动脉环的影响

在离体兔胸主动脉环模型上观察溶血性磷脂酰胆碱(LPC)促血管收缩作用的机理以及血管内皮对LPC促血管收缩作用的影响. 10 μmol·L^-1 LPC预温育30 min可显著增强兔胸主动脉环对5-羟色胺(5-HT)的收缩反应, 使0.1 μmol·L^-1 5-HT诱导的峰值张力增加到约2.5倍, EC₅₀降低, 收缩曲线左移. 而蛋白激酶C(PKC)抑制剂显形孢菌素(staurosporine, 100 nmol·L^-1)能抑制LPC的促血管收缩作用, EC₅₀恢复; 去除血管内皮或加入100 μmol·L^-1左旋单甲基精氨酸(L- NMMA)预处理均可显著增强LPC的促血管收缩作用, L-NMMA的作用更强(P<0.001). 结果提示,LPC可能通过PKC途径促进5-HT介导的血管收缩, 血管内皮可能在其中起调控作用.     

粉防己碱对大鼠缺血心脏左室发展压,顺应性及（+）［3H］伊拉地平结合位点的影响

目的 研究粉防己碱（Tet）对大鼠缺血再灌注心脏的左室发展压、左室顺应性和对二氢吡啶拮抗剂(+)［³H］伊拉地平结合位点的影响。以硝苯地平（Nif）作为已知药对照。方法 建立离体大鼠心脏缺血(30 min)再灌注(15 min)模型。大鼠预先ip Tet 30 mg·kg^-1, 每日2次，连续3 d，然后离体心脏给予Tet 0.18 mmol·L^-1灌流, 缺血前灌流5 min，缺血后再灌流15 min。通过连 接于压力传感器的乳胶气囊测定左室发展压（LVDP）和左室顺应性；放射配基结合法测定心脏细胞膜上的(+)［³H］伊拉地平结合位点。结果 与正常对照组相比，缺血再灌注使LVDP降低(42±6)%, 而经Tet处理的心脏只降低(8.6±0.2)%；缺血再灌注后左室顺应性显著受损, 左室舒张末压-容积曲线左移，Tet处理的心脏顺应性改变很小, 接近正常组。Scatchard作图分析, 正常组大鼠心脏细胞膜与(+)［³H］伊拉地平有高度结合位点，K_D为(0.16±0.03)nmol·L^-1，B_max为(0.93±0.30)nmol·g^-1蛋白, 缺血再灌组心脏结合位点的密度减少〔B_max为(0.48±0.14)nmol·g^-1蛋白〕, Tet组的B_max较缺血再灌组明显升高〔(0.68±0.12)nmol·g^-1蛋白〕。各组的K_D值均无明显差别。结论 Tet与Nif相似, 保护离体大鼠心脏的收缩功能和左室顺应性, 减轻缺血所致的二氢吡啶结合位点密度降低。这些效应伴随能量需求的下降因而阻止胞内钙超载, 改善缺血。     

6-［4-(4′-吡啶)氨基苯］-4，5-二氢-3(2H)哒嗪酮对大鼠胸主动脉环收缩功能的影响

目的 研究新型钙增敏强心剂6-［4-(4′-吡啶)氨基苯］-4，5-二氢-3(2H)哒嗪酮(MCI-154)的扩血管作用机制。方法 采用生物张力换能器及生理记录仪测定大鼠离体胸主动脉环和蜕膜胸主动脉环的收缩张力。结果 MCI-154可浓度依赖性抑制1 nmol·L^-1~10 μmol·L^-1去甲肾上腺素（pD₂′为4.21±0.23）和80 mmol·L^-1 KCl（IC₅₀为7 μmol·L^-1）引起的血管环收缩，提示其可通过抑制血管平滑肌细胞膜上受体操纵性和电压依赖性钙通道而减少胞外钙内流。在无Ca²⁺ K-H液中，MCI-154预处理可浓度依赖性降低3 μmol·L^-1苯肾上腺素（IC₅₀为5 μmol·L^-1）及20 mmol·L^-1 咖啡因（IC₅₀为16 μmol·L^-1）引起的血管环收缩张力，提示其可抑制血管平滑肌细胞胞内钙释放。在1 μmol·L^-1 Ca²⁺溶液中，MCI-154可显著降低蜕膜血管环收缩张力（IC₅₀为10 μmol·L^-1)，提示其可降低血管平滑肌对Ca²⁺的敏感性。结论 MCI-154可通过抑制血管平滑肌胞外钙内流、胞内钙释放和降低其对Ca²⁺敏感性来降低血管平滑肌收缩张力，体外具有扩血管效应。     

由BL21DE3pET28C-rPAL-1-cDNA高效表达具有酶活性的苯丙氨酸脱氨酶

为了开辟苯丙酮尿症治疗新途径, 本实验室构建了插入水稻苯丙氨酸脱氨酶(PAL) cDNA的重组表达质粒,并用它转化大肠杆菌BL21DE3获得工程菌BL21DE3^{pET28C-rPAL-1-cDNA}. 经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导后, 通过SDS-PAGE及微型蛋白双向电泳, 证明表达的目的蛋白的分子量为78.6 ku, 主要存在于破碎菌体的沉积物中(以包涵体形式存在). 按Zucker法测定PAL酶活性,并进行酶动力学实验. 测得表达蛋白的酶比活性为462 nmol·g^-1·min^-1, K_m, v_max分别为0.50 mmol·L^-1和3.05 nmol·min^-1. 结果证明所建立BL21DE3^{pET28C-rPAL-1-cDNA}大肠杆菌菌株能高效表达有活性的PAL.     

γ-氨基丁酸能去抑制对脊髓细胞外信号调节激酶2的激动作用

目的 探讨脊髓γ-氨基丁酸(GABA)能去抑制对细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响及其与痛行为改变的关系。方法 正常小鼠鞘内注射(ith)比扣扣灵碱(荷包牡丹碱, bicuculline)50 ng·g^-1(5 μl)模拟GABA能去抑制,左后足底sc给予弗氏完全佐剂制备炎性疼痛模型,小鼠ith给予GABA_A受体激动剂地西泮0.5 μg·g^-1(5 μl)或ERK1/2抑制剂PD-98059 0.25 μg·g^-1(5 μl)后,测定ERK1/2活性和小鼠缩足阈值。结果 与正常对照组的缩足阈值(1.24±0.07)g相比, 正常小鼠ith给予比扣扣灵碱50 ng·g^-1的缩足阈值显著降低((0.42±0.17)g,P<0.05),给予PD-98059 0.25 μg·g^-1后缩足阈值显著升高((1.29±0.37)g,P<0.05)。与炎性疼痛模型组的缩足阈值(0.28±0.06)g相比,炎症小鼠ith给予地西泮0.5 μg·g^-1的缩足阈值显著升高((0.99±0.12)g,P<0.05),且给予PD-98059 0.25 μg·g^-1后缩足阈值也显著升高((0.97±0.17)g,P<0.05)。Western免疫印迹结果显示,与正常对照组相比,比扣扣灵碱显著提高ERK2的磷酸化水平((152±24)%,P<0.05)。并且弗氏完全佐剂也可提高小鼠脊髓ERK2的磷酸化水平((163±42)%,P<0.05),ith给予地西泮0.5 μg·g^-1,则显著降低CFA诱发的小鼠脊髓ERK2的磷酸化水平((91±34)%,P<0.05),同时地西泮和PD-98059有效缓解炎性疼痛症状。结论 GABA能去抑制对脊髓背角ERK2有激活作用,并与炎性疼痛的形成有关。     

M受体阻断剂对粉防己碱心肌负性肌力作用的调节及其离子机理

研究M受体阻断剂对粉防己碱(Tet)负性肌力作用的影响并探讨其机理. 记录Tet对豚鼠离体左心房收缩力,兔心房肌细胞动作电位及豚鼠单个心室肌细胞Ca²⁺,K^＋通道电流的作用及M受体阻断剂的影响.M受体阻断剂阿托品(0.03 μmol·L^-1)及M₂受体亚型阻断剂AF-DX 116(1.0 μmol·L^-1)能使Tet负性肌力作用的量效曲线平行右移, EC₅₀(μmol·L^-1)由28.9±0.9分别增至125±21和127±13;Tet(1-100 μmol·L^-1)浓度依赖性缩短兔心房肌细胞动作电位时程APD₂₀,APD₅₀, 此作用被阿托品(0.03 μmol·L^-1)部分拮抗,而Tet延长APD₉₀的作用不受阿托品的影响.阿托品(1 μmol·L^-1)部分拮抗Tet(30 μmol·L^-1)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流的阻滞作用,而不影响其抑制内向整流钾电流(I_K1)的作用. 1 μmol·L^-1乙酰胆碱则能逆转Tet对I_K1的抑制. M受体阻断剂对Tet阻滞钙通道作用的影响可能是其拮抗Tet负性肌力作用的主要离子机理.     

速激肽受体拮抗剂对白三烯C4诱导豚鼠气道收缩和微血管渗漏的作用

本实验探讨了内源性速激肽是否参与白三烯C₄(LTC₄)的气道效应. LTC₄(0.5 μg·kg^-1, iv)可增高豚鼠肺内压(IPP)和气道内依文思蓝渗出。速激肽NK-1受体拮抗剂CP-96345｛(2S, 3S)-顺式-2-( 二苯甲基)-N-［(2-甲氧苯)-甲基］-1-杂氮双环［2.2.2］辛烷-3-胺｝ 1 mg·kg^-1，iv，可减弱LTC₄诱导的依文思蓝渗出；NK-2受体拮抗剂SR-48968｛(S)-N-甲基-N-［4-(4-乙酰氨基-4-苯基哌啶)-2-(3,4-二氯苯基)丁基］苯甲酰胺｝，1 mg·kg^-1， iv，可抑制IPP的增高. 白三烯拮抗剂ONO-1078 (0.03 mg·kg^-1, iv)可阻断这两种反应. 结果说明内源性速激肽增强 LTC₄的气道作用，其中NK-1受体介导微血管渗漏，NK-2受体介导支气管收缩.