中枢烟碱样乙酰胆碱受体的分子药理学研究进展

烟碱样乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）是第一个被分离纯化的、具有五聚体的跨膜受体。但由于中枢ｎＡＣｈＲ的多样性和药理学反应的复杂性，至今尚未清楚其在中枢的结构和功能。随着生物基因工程的发展，中枢ｎＡＣｈＲ的研究也发生了突破性进展。仅不到５年的时间，就确定了ｎＡＣｈＲ的基因序列及其结构特点；并从鸡、大鼠、小鼠和人的脑组织中至少提取和克隆了１２个中枢ｎＡＣｈＲ的亚单位，建立了ｎＡＣｈＲ的基因库。随后在体外，     

烟碱乙酰胆碱受体结构的研究进展

烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）是离子通道型受体,属于Cys-loop受体的超级家族,通过配体门控离子通道介导许多生理活动,是治疗精神类疾病的重要靶点。nAChR包括肌肉型和神经型两种。nAChR是由五个亚基组成的具有中心孔道的五聚体,本文简要介绍了近年来烟碱乙酰胆碱受体结构的研究进展。     

海马神经元α7型烟碱样乙酰胆碱受体的失敏特征

目的研究大鼠海马神经元α7型烟碱样乙酰胆碱受体(α7-nAChR)的失敏特征。方法在培养大鼠海马神经元上,以胆碱作为工具药,采用膜片钳全细胞记录方式研究胆碱诱发α7型烟碱样乙酰胆碱受体失敏的电生理学特征。结果在培养大鼠海马神经元上,喷射胆碱可诱发出一内向电流,能被α7-nAChR选择性拮抗剂methyllycaconitine(10 nmol.L-1)和α-bungarotoxin(100 nmol.L-1)明显阻断;延长高浓度胆碱(10 mmol.L-1)的给药时间不影响α7-nAChR的失敏和失敏态的恢复,但可以延长其处于完全失敏态的时间;灌流低浓度胆碱(50、100μmol.L-1)可以使α7-nAChR缓慢失敏,失敏程度与胆碱浓度有关。结论高浓度胆碱诱发α7-nAChR的快速失敏及恢复与给药时间无关,低浓度胆碱诱发受体的缓慢失敏及恢复与浓度有关。     

α3β4乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞上的表达

建立以哺乳动物α3β4乙酰胆碱受体(nAChR)为分子靶标的药物筛选模型。将大鼠乙酰胆碱受体的α3与β4亚基基因分别进行体外转录,获得α3与β4亚基基因的cRNA,按1∶1的比例将适量α3与β4的cRNA混合后,显微注射到新鲜分离的非洲爪蟾卵母细胞中,在ND96溶液中、17℃下培养24 h后,通过双电极电压钳技术(TEVC)检测受体α3β4 nAChR的乙酰胆碱(Ach)门控电流。同时注入α3、β4 cRNA的非洲爪蟾卵母细胞孵育24h后,可记录到明显的Ach门控内向电流,未注射或只注射ddH2O的对照组细胞则没有任何电流产生。α3β4乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞膜上成功表达,以此为药物作用靶点,可用于大量生物毒素等物质的活性筛选实验模型。     

以最小反应模型分析HI-----6抗骨骼肌烟碱受体的作用

以最小反应模型分析ＨＩ６抗骨骼肌烟碱受体的作用陈厚昌，白敦衍１，蒋毅萍（第一军医大学药理教研室，１计算机教研室，广州５１０５１５，中国）关键词ＨＩ６；骨骼肌；胆碱能受体；信使ＲＮＡ；非洲爪蟾；卵母细胞目的：研究１（２ｈｙｄｒｏｘｙｉｍｉｎｏｍ...     

山莨菪碱对乙酰胆碱受体通道的阻断作用

在非洲有爪蟾蜍胚胎神经和肌肉培养细胞上，用斑片钳技术研究了盐酸山莨菪碱（Ani)对乙酰胆碱（ACh)受体通道的作用，发现它在微终板电流和单通道水平上都有明显的可逆性阻断作用，完全阻断神经肌肉接点传递的剂量为60umol.L^-1，而阿托品和东莨菪碱所需剂量分别为和0．5mmol.L^-1，表明Ani有较强的抗Ｎ型ＡＣh的作用。     

丙泊酚对胎儿型-和a7-烟碱型乙酰胆碱受体的作用

目的 通过重组受体,观察丙泊酚对胎儿型乙酰胆碱受体和神经型α7乙酰胆碱受体的作用。方法 通过脂质体转染法在HEK293细胞表达胎儿型和α7乙酰胆碱受体。分别研究不同浓度丙泊酚对两种受体亚型的作用。结果 临床相关浓度丙泊酚对100μmol/l乙酰胆碱激发胎儿型和α7乙酰胆碱受体的电流均有抑制作用。不同浓度丙泊酚对胎儿型和α7乙酰胆碱受体电流抑制大小无统计学差异（P>0.05）。相同浓度丙泊酚对胎儿型乙酰胆碱受体抑制大于对α7乙酰胆碱受体的抑制（P<0.05）。结论 从乙酰胆碱受体水平研丙泊酚的作用,结果证明丙泊酚对γ-nAChR和a7-nAChR都有抑制作用,抑制程度与丙泊酚的浓度无关。     

毒蕈碱样乙酰胆碱受体功能的分子基础

毒蕈碱样乙酰胆碱受体功能的分子基础高占国刘传缋（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）中国图书分类号Ｒ９６６毒蕈碱样乙酰胆碱受体（Ｍ受体）属于与Ｇ蛋白相偶联的受体超大家族，它参与呼吸、循环、运动、体温调节和学习记忆等重要生理功能。受体药理学...     

失敏态烟碱样受体

烟碱样受体属于配体门控性离子通道受体 ,参与调节体内许多生理过程。激动剂反复作用可以诱导N受体失敏 ,许多因素参与调节烟碱样受体的失敏 ,如受体亚单位、信号转导系统、细胞微环境的变化等都会影响受体的失敏过程。失敏态N受体并非处于无功能状态 ,它们可能参与调节递质的释放、调节突触可塑性等过程     

酒与烟碱乙酰胆碱受体

1 前言 酒与烟草是目前世界上使用最为广泛的两种成瘾性物质.大量的流行病学调查研究发现两者有极大的相关性[1].吸烟者的酒依赖几率是非吸烟者的10倍,有酒依赖史的吸烟者更容易出现尼古丁依赖[2].     

青蒿素对克隆的内向整流钾通道的抑制作用

采用双电极电压钳技术观测了青蒿素对表达于非洲蛙卵的克隆内向整流钾通道(K_ir2.1)的影响. 当蛙卵注射K_ir2.1 cRNA后灌注不同浓度青蒿素时, 青蒿素呈浓度依赖关系降低K_ir2.1钾通道在非洲蛙卵细胞膜的功能表达. 青蒿素阻断K_ir2.1钾通道亦呈电压依赖性. 当指令电压为-140, -130和-120 mV时, 5和50 μmol·L^-1的青蒿素可使K_ir2.1钾通道的内向电流分别下降14.2%, 34.5%; 12.0%, 24.6%; 4.3%, 19.1%. 当指令电压为-50, -40和-30 mV时, 5和50 μmol·L^-1的青蒿素则使K_ir2.1钾通道的外向电流分别增加22.2%, 72.2%; 28.0%, 80.0%; 24.1%, 69.0%. 青蒿素对K_ir2.1通道的阻断作用在用正常灌注液冲洗后可恢复. 青蒿素的抗心律失常作用与它阻断K_ir2.1通道电流有关.     

新型抗胆碱药物盐酸戊乙奎醚及其4种光学异构体对N受体离子通道的作用

在非洲爪蟾培养的胚胎神经元和骨骼肌细胞上, 本文采用细胞膜片钳技术, 研究新型抗胆碱能药物盐酸戊乙奎醚(PHC)及其4种光学异构体对骨骼肌细胞N受体离子通道的作用. 结果表明PHC可阻断神经肌肉接头乙酰胆碱传递; 其4种光学异构体与之相比在对抗强度上无明显差别. PHC优先阻断开放时间长、电流强度大的N受体通道. 此外, PHC及其4种光学异构体对钠和钾离子通道也具有一定强度的阻断作用.     

新型抗胆碱药物盐酸戊乙奎醚及其4种光学异构体对N受体离子通道的作用

在非洲爪蟾培养的胚胎神经元和骨骼肌细胞上，本文采用细胞膜片钳技术，研究新型抗胆碱能药物盐酸戊乙奎醚（ＰＨＣ）及其４种光学异构体对骨骼肌细胞Ｎ受体离子通道的作用．结果表明ＰＨＣ可阻断神经肌肉接头乙酰胆碱传递；其４种光学异构体与之相比在对抗强度上无明显差别．ＰＨＣ优先阻断开放时间长、电流强度大的Ｎ受体通道．此外，ＰＨＣ及其４种光学异构体对钠和钾离子通道也具有一定强度的阻断作用     

自由基对爪蟾卵母细胞表达的大白鼠脑皮层谷氨酸受体和5－羟色胺受体的作用

采用爪蟾卵母细胞和黄嘌呤氧化酶一次黄嘌呤反应系统研究了自由基对大白鼠脑皮层谷氨酸受体和５－羟色胺受体的作用。自由基抑制谷氨酸和５－羟色胺引起的去极化反应，但不影响膜的被动电学参数。自由基对受体的作用表现为去极化幅度下降及半衰退时间缩短；去极化的潜伏期和上升时间延长（Ｐ＜０．００１或Ｐ＜００１），说明白由基作用于移植到卵母细胞膜上的受体，抑制了谷氨酸和５－羟色胺引起的去极化反应。提示在本实验条件下，神经递质受体自由基作用的敏感性高于卵母细胞的质膜。此标本适于研究自由基对神经递质受体的作用。     

Physostigmine blocked nicotinic acetylcholine receptors in rat sympathetic ganglion neurons

目的：研究毒扁豆碱阻断交感节神经元烟碱受体的作用机理．方法：以培养的新生大鼠颈上交感节神经元为标本，使用全细胞膜片箝技术，观察毒扁豆碱对交感节烟碱受体选择性激动剂ＤＭＰＰ诱发电流的影响．结果：毒扁豆碱（５－２０μｍｏｌ·Ｌ－１）以浓度依赖性方式抑制ＤＭＰＰ诱发电流，促进诱发电流的衰减，其抑制作用没有电压依赖性，毒扁豆碱２００μｍｏｌ·Ｌ－１不能激活烟碱受体．结论：与骨骼肌烟碱受体相比，交感神经元烟碱受体表现出不同的药理学特性．毒扁豆碱通过作用于变构位点抑制交感神经元烟碱受体，不影响其开放的离子通道和激动剂结合位点．     

小鼠精母细胞钙通道特性及硝苯地平的作用

目的　为了建立一个合理、客观评价药物或毒物对生殖系统影响的细胞模型 ,研究了机械分离、未经酶消化的小鼠精母细胞Ca2 + 通道特性及硝苯地平对其的作用。方法　采用全细胞膜片钳技术。结果阻断K+ 电流后 ,当钳制电位 -90mV、指令电压 -80～ +1 0mV、步阶电压 1 0mV时 ,记录到Ca2 +电流 ,二价无机阳离子对Ca2 + 电流的抑制作用Ni2 +>Cd2 + ,而L型Ca2 + 通道激动剂BayK8644对电流无任何影响。分析小鼠精母细胞上记录的Ca2 + 电流为T型Ca2 + 通道开放产生。L型Ca2 + 通道阻断剂硝苯地平对精母细胞Ca2 + 电流有明显的抑制作用 ,半数最大抑制浓度为 0 .3 9μmol·L-1,而且细胞外液冲洗恢复缓慢 ,这支持了二氢吡啶类药物可用于男性避孕。结论　机械分离、未经酶消化的小鼠精母细胞模型适合进行药理学和毒理学研究     

Structure-activity and interaction effects of 14 different pyrethroids on voltage-gated chloride ion channels.

We have proposed that since the type II pyrethroids deltamethrin and cypermethrin, but not the type I pyrethroid cismethrin act on chloride channels, this could contribute to the bimodal nature of pyrethroid poisoning syndromes. We now examine a wider range of pyrethroid structures on the activity of these calcium-independent voltage-gated maxi-chloride channels. Excised inside-out membrane patches from differentiated mouse neuroblastoma cells were used, and mean channel open probabilities calculated. For single dosing at 10 microM, bioallethrin, beta-cyfluthrin, cypermethrin, deltamethrin, and fenpropathrin were all found to significantly decrease open channel probability (p < 0.05). Bifenthrin, bioresmethrin, cispermethrin, cisresmethrin, cyfluthrin isomers 2 and 4, lambda-cyhalothrin, esfenvalerate, and tefluthrin, did not significantly alter open channel probability (p > 0.05). Since the type II pyrethroids, esfenvalerate, and lambda-cyhalothrin were ineffective, we must conclude that actions at the chloride ion channel target cannot in themselves account for the differences between the two types of poisoning syndrome. Sequential dosing with type II pyrethroids caused no further chloride ion channel closure. The type I pyrethroid cisresmethrin did however prevent a subsequent effect by the mixed type pyrethroid fenpropathrin. In contrast, the type I pyrethroid cispermethrin did not prevent a subsequent effect due to the type II pyrethroid deltamethrin. The difference in effect may be the result of differences in potency, as deltamethrin had a greater effect than fenpropathrin. It therefore appears clear that in some combinations the type I and type II pyrethroids can compete and may bind to the same chloride channel target site.     

神经元N受体α4β2亚型在激动剂作用下功能失敏后再激活及宾赛克嗪的拮抗作用

目的:研究神经元N受体α4β2亚型在激动剂持续作用下,功能失敏后再激活,以及宾赛克嗪的拮抗作用。方法:在转染后稳定表达神经元N受体α4β2亚型的SH-EP1细胞株上,以烟碱为工具药,通过喷射给药,采用膜片钳全细胞记录技术进行研究。结果:快速给予1mmol/L浓度的烟碱,可诱发一内向电流,该电流快速激活达到峰值后,在激动剂持续作用下迅速失敏至基线附近。当激动剂去除后可再次记录到一内向电流,该电流可被新型胆碱受体拮抗剂宾赛克嗪所阻断。结论:SH-EP1细胞株转染表达的神经元N受体α4β2亚型在高浓度激动剂持续作用下发生功能失敏,当激动剂去除后可再度激活,此再激活过程可被新型胆碱受体拮抗剂宾赛克嗪所拮抗。     

Dual effects of tetrandrine on calcium-activated potassium channels in pulmonary artery smooth muscle cells

目的：研究粉防己碱（Ｔｅｔ）对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活钾（ＫＣａ）通道的影响．方法：内面朝外膜片箝单通道记录法．结果：Ｔｅｔ７５和１５μｍｏｌ·Ｌ－１使ＫＣａ的开放概率由０２５１±００１２增加到０３４０±００１３和０４１５±００１１（Ｐ＜００１）．关闭时间由（６１±１５）ｍｓ缩短到（３３±１０）和（２８±１１）ｍｓ（Ｐ＜００１）．Ｔｅｔ３０μｍｏｌ·Ｌ－１使开放概率和开放时间分别降低到（０１１４±０００８）和（１４７±００９）ｍｓ（Ｐ＜０．０１）．结论：Ｔｅｔ对大鼠肺动脉平滑肌细胞ＫＣａ通道有双重作用．