不同剂量蛋白酶体抑制剂对缺血后神经元的作用

目的:探索蛋白酶体抑制剂在不同剂量时对缺血后脑组织的作用及原因.方法:使用大鼠单侧大脑中动脉栓塞模型,50只大鼠随机分成5组,梗塞3小时后注入不同剂量的蛋白酶体抑制剂MG132,定时进行神经功能评分、TIC染色、TUNEL染色、Western blot检测Casepase 8蛋白表达.结果:MG132治疗有效缩小脑梗死体积,1mg/Kg组凋亡细胞数目最少,Casepase 8表达与MG132剂量相关.结论:蛋白酶体抑制剂对缺血区神经元的保护作用局限于低剂量效应,高剂量下对神经元有促凋亡作用.蛋白酶体抑制剂的保护作用可能通过Casepase 8途径起作用.     

蛋白酶体抑制剂MG132对早期糖尿病肾病大鼠肾脏MKP-1表达的影响

目的 观察蛋白酶体抑制剂MG132对早期糖尿病肾病的治疗作用及对大鼠肾脏MKP-1蛋白表达的影响,探讨糖尿病肾病治疗新方法.方法 健康雄性Wistar大鼠30只分为对照组(NC组,n=10);糖尿病模型组20只,用STZ诱导糖尿病大鼠模型后分为糖尿病组(DC组,n=10)和MG132干预组(n=10).MG132干预组给予MG132 0.1 mg/(kg·d)腹腔注射,对照组和糖尿病组每天给予等量生理盐水腹腔注射,喂养至6周和8周时处死大鼠.于6周和8周时收集各组大鼠尿液检测24 h尿微量白蛋白(UAER)、尿蛋白/尿肌酐比值(Up/Ucr).Western blot检测各组大鼠MKP-1蛋白表达水平.结果 (1)各模型组24 h UAER、Up/Ucr较NC组增加(P<0.05),MG132干预组较DC组少(P<0.05);8周与6周比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)与NC比较,DC组和MG132干预组MKP-1蛋白表达量明显降低(P<0.01),其中以DC组降低最为显著,MG132干预组与DC组比较差异有统计学意义(P<0.05);各组8周和6周比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 糖尿病肾病时MKP-1泛素化降解增加;蛋白酶体抑制剂MG132可抑制MKP-1的泛素化降解,MKP-1蛋白量增加,从而抑制MAPK通路的活化,具有潜在治疗糖尿病肾病的作用.     

MG132对移植肝缺血再灌注损伤急性期的保护作用

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠移植肝缺血再灌注损伤急性期的保护作用.方法 建立大鼠自体原位肝移植缺血再灌注损伤模型,经60 min冷缺血和恢复血流灌注90 min后,检测血清ALT、AST浓度和SOD、MDA的活性,并观察大鼠肝脏病理切片.结果 IRI+MG132组大鼠血清AIT、AST水平明显较IRI组大鼠下降(P<0.05),在MG132作用下,大鼠血清SOD活性升高,而MDA产生减少(P<0.05).这些差异也可以从IRI+MG132组相对于IPI组Suzuki评分的改善得到证实.结论 MG132能够通过清除自由基和抑制脂质过氧化,保护大鼠移植肝急性期的缺血再灌注损伤.     

蛋白酶体抑制剂MG132对小鼠一次性被动回避实验记忆形成和提取的作用

目的 探索蛋白酶体抑制剂MG132对小鼠被动回避实验学习记忆的作用.方法 在不同时间点皮下注射MG132 (25mg/kg)测定海马区蛋白酶体系统活性的变化.在一次性被动回避实验训练前或测试前皮下注射蛋白酶体抑制剂MG132 (25 mg/kg),之后测定MG132对记忆形成和记忆提取的影响.采用皮下注射MG132 (12mg/kg)和新奇环境干扰,测定MG132对干扰引起的记忆提取障碍的作用.结果 皮下注MG132(25 mg/kg)0.5～1.5 h后海马蛋白酶体系统被显著抑制.训练前以及测试前皮下注射MG132的记忆时间[分别为:训练前(173.30±47.51)s,测试前(44.10±11.16)s],低于对照组记忆测试结果[分别为:训练前对照组(296.03±3.97)s,测试前对照组(199.23 ±43.01)s],差异有统计学意义(P＜0.05).测试前给予新环境干扰[(184.30±50)s]有降低记忆时间的趋势[对照组(287.37±12.63)s],而加入MG132后记忆测试[(84.70±23.92)s]显著低于对照组[(164.02±35.26)s],差异有统计学意义(P＜0.05).但MG132自身对测试结果无统计学意义[实验组(150.10±35.89)s,对照组(174.19±30.54)s].结论 皮下注射MG132抑制海马区蛋白酶体活性进而阻碍小鼠一次性被动回避记忆形成及提取,并且放大干扰造成的记忆提取障碍.     

FK506对大鼠面神经损伤后面运动神经元凋亡及bcl-2,bax表达的影响

目的 研究FK506对大鼠面神经损伤后运动神经元凋亡及bcl-2和bax表达的影响.方法 将40只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,制作大鼠单侧面神经总干切断模型,实验组每日腹腔注射FK506注射液,对照组给予相同剂量的盐水,在术后各时间点,通过Nissl染色观测面神经核神经元的形态学变化;TUNEL检测细胞凋亡;免疫组化检测bcl-2和bax表达的变化.结果 面神经损伤后,FK506组与盐水组相比较,FK506组运动神经元凋亡明显减少,bcl-2表达增加,bax表达降低.结论 FK506有助于增加面神经损伤后运动神经元bcl-2的表达、降低bax表达,抑制细胞凋亡,为药物在神经损伤疾病的临床应用提供了实验依据.     

蛋白酶体抑制剂MG132抑制体外培养心肌细胞肥大的实验研究

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132对体外培养的大鼠心肌细胞肥大的影响。方法采用[3H]-亮氨酸参入率测定心肌细胞蛋白质合成代谢,采用IPP 6.0图像分析软件分析心肌细胞表面积,以及用RT-PCR检测β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达。结果 MG132预处理逆转了苯肾上腺素诱导的心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率增加(P<0.01)、表面积增大(P<0.01)和β-MHC mRNA表达上调(P<0.05)。结论 MG132能够抑制心肌细胞肥大,具有心肌保护作用。     

MG-132对高氧肺损伤中细胞凋亡的保护作用及对p38信号通路的影响

目的 探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧诱导的大鼠损伤肺组织中细胞凋亡及p38信号通路激活的保护作用.方法 将26只SD大鼠随机分为四组:正常对照组(n=5)、MG-132对照组(n=5)、高氧组(n=8)和MG-132高氧组(n=8).制备高氧肺损伤动物模型,MG-132处理组给予蛋白酶体抑制剂0.5 mg/kg,1次/d,腹腔注射.所有大鼠行肺组织病理学检查;采用TUNEL法检测细胞凋亡;免疫组织化学法检测泛素化蛋白和p38蛋白的表达.结果 高氧暴露的SD大鼠肺组织可见水肿、大量炎症细胞浸润等急性炎症反应.高氧组的凋亡指数、p38MAPK表达均高于正常对照组和MG-132高氧组(P<0.05或P<0.01).结论 高氧可以导致肺组织细胞发生凋亡,可能是通过激活p38MAPK信号通路来调控的.蛋白酶体抑制剂MG-132可以减轻高氧引起的肺损伤,可能对p38MAPK信号通路有抑制作用.     

大鼠面神经损伤后bal2的表达及意义

目的 :探讨ｂａｌ 2在大鼠面神经损伤的表达及神经切断后与神经凋亡样坏死的抑制作用 .方法 :采用原位杂交方法观察ｂａｌ 2在面神经损伤后随时间延长的动态变化并用图像分析测定ｂａｌ 2ｍＲＮＡ的强度 .结果 :面神经损伤后 1ｄ ,面神经运动神经元的ｂａｌ 2强度开始下降 ,1ｗｋ后开始恢复 .1ｍｏ后恢复正常 .结论 :ｂａｌ 2的表达与神经元的存活密切相关 ,对神经损伤后的神结元起保护作用 .大鼠面神经损伤后bal2的表达及意义@聂鑫 @金岩 @王健 @甄志强     

大鼠面神经损伤后面运动神经元存活情况和脑源性神经营养因子代谢改变

目的：研究面神经损伤后，大鼠面运动神经元（facial motoneuron,FNM）存活情况和脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF)代谢改变。方法：制造大鼠右面神经损伤模型，应用Cresyl Violet染色、原位杂交和免疫组化方法，观察计数FMN细胞，检测BDNF mRNA及其蛋白在FMN的表达，并结合计算机图像分析技术测定双侧FMN数目之比及其反应产物的阳性细胞数比和灰度值百分比。结果：BDNF mRNA及其蛋白阳性细胞分布于正常面神经核各亚核，除神经元细胞外其周围胶质细胞也染色，面神经损伤后1d，损伤侧面神经核BDNF mRNA及其蛋白阳性神经元细胞和胶质细胞数量及染色强度均快速增高；面神经损伤后不同时间组FMN细胞存活率与正常组比较差异均无显著性（P＞0.05）。结论：正常FMN可能存在BDNF的自分泌和旁分泌作用，面神经损伤后这种作用迅速增强；面神经外周损伤后，未发现损伤导致的面运动神经元数目发生改变。     

面神经损伤后面运动神经元死亡的时间进程及电镜观察

目的 研究面神经低位切断伤及压榨伤后,大鼠面运动神经元的形态学变化及其死亡的时间进程.方法 手术制作大鼠右侧面神经的低位切断伤、压榨伤模型,左侧为正常对照侧.用甲苯胺蓝染色及透射电镜技术观测面运动神经元死亡情况及其形态学变化.结果 面神经切断伤及压榨伤均可引起面运动神经元死亡且于伤后4同时达到高峰.切断伤组死亡率(51.19±9.57)%,压榨伤组死亡率(27.90±4.68)%;除损伤后第一天外,损伤后各时间点切断伤组神经元死亡数目明显较压榨伤组多(均P＜0.01).电镜观察死亡神经元具有凋亡的形态学特征.结论 面神经切断伤及压榨伤均可引起面运动神经元死亡,死亡数目与损伤形式有关.对重度的神经损伤,临床神经修复应争取在损伤后4周内进行.