脐血源性间充质干细胞向神经样细胞诱导分化的研究

目的探讨来源于人脐带血来源的间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化成神经样细胞的可行性。方法取第5代的脐血间充质干细胞,用不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)和睫状神经营养因子(CNTF)单独或联合诱导脐源血间充质干细胞向神经样细胞分化。倒置相差显微镜观察细胞形态变化,于实验第1、3、6天分别进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色并计数分化为神经元样细胞及神经胶质细胞的比例。结果与对照组相比,BDNF和CNTF能显著提高人脐血源MSCs分化为神经元的比例。其中20 ng/mL的BDNF联合20 ng/mL CNTF诱导人脐血源MSCs分化为神经样细胞的比例最高。结论人脐血MSCs经BDNF和CNTF体外诱导,能够分化为神经样细胞。     

骨形成蛋白4诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力

目的骨形成蛋白 4( bone morphogenetic protein 4,BMP4)体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力. 方法采用 BMP4体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞,免疫组化鉴定神经丝蛋白( NF)、胶质纤维酸性蛋白( GFAP)的表达. 结果成年大鼠骨髓间充质干细胞受 BMP4诱导后出现神经元样细胞 ,细胞免疫组化显示诱导出的神经元样细胞 NF表达阳性,诱导后 5 h, 12 h, 1 d, 3 d, 5 d和 7 d的 NF神经样细胞阳性率分别为 (40± 7)%, (71± 6)%, (58± 3)%, (53± 6)% , (37± 5)%, (13± 2)% ,诱导后 12 h,NF神经元样细胞阳性表达到高峰 ,与诱导后 5 h比较,差别有显著性 (t=1.380～ 2.621,P< 0.05). 结论 BMP4可以在体外诱导成年大鼠骨髓间充质分化为神经元.     

血清对骨髓基质干细胞分化的影响

目的　探讨血清对骨髓基质干细胞 (MSCs)向神经元样细胞分化的影响。方法　采用percoll液分离大鼠MSCs,体外扩增 ,单独应用BHA或BHA加血清定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。结果　BHA诱导 1 5h后加入血清 ,细胞的形态不再分化为神经元 ,而是逐渐变回原来的MSCs样形态 ,加入血清后 2d所有细胞均恢复MSCs形态。结论　血清可阻碍BHA使MSCs定向分化为神经元     

成人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为神经元样细胞的研究

目的研究人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）向神经细胞分化的可能性。方法利用Per-coil梯度分离及贴壁筛选法分离培养和扩增MSCs；利用bFGF、化学诱导剂DMSO和BHA联合诱导MSCs向神经元转化，观察分化过程中细胞形态的变化，利用免疫细胞化学和RT-PCR方法检测神经元特异性标志物的表达情况。结果经Perecoll梯度分离及贴壁筛选法获得了纯度较高的人MSCs，诱导分化后的细胞呈现双极、多极和锥形的典型神经元细胞的形态，并且分别从mRNA和蛋白水平上证明诱导分化后的细胞表达神经元标记物NSE和NF，不表达神经胶质细胞标记物GFAP。结论人MSCs可以在体外诱导分化为神经元样细胞，这种潜能使其有可能成为神经系统疾病细胞移植治疗的种子细胞。     

人骨髓间质干细胞定向分化为神经元样细胞的实验

目的:体外定向诱导人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞并观察其传导功能。方法:实验于2003-06/2004-02在中南大学湘雅医院完成。采用淋巴细胞分离液(1.007g/L)梯度离心分离人骨髓间质干细胞,体外进行培养扩增,丁化羟基苯甲醚和二甲基亚砜诱导人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法鉴定神经元特异性标志物,神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白,突触素蛋白,胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白。结果:加入诱导剂3h后,大多数细胞转变为类似于神经元的形态,有长的突起,相互之间连接呈网状,并表达神经元特异性烯醇化酶,阳性率为(75.0±6.5)%、神经丝蛋白阳性率为(68.0±4.2)%及胶质纤维酸性蛋白阳性率为(25.0±6.4)%,但胶质纤维酸性蛋白表达明显较前两者弱(P<0.05)。神经元细胞胞体表达突触素蛋白,突起未见表达。结论:人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞;神经元样细胞其突起不具备传导功能。     

大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向诱导分化及免疫组化鉴定

目的建立体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,体外诱导其向神经元样细胞方向分化。方法应用细胞培养技术从大鼠股骨、胫骨中分离、纯化骨髓间充质干细胞并在体外进行培养,以形态学方法鉴定间充质干细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态特征,利用含10 ng/ml bFGF的LG-DMEM及含200μmol/L BHA、2%DMSO的无血清DMEM诱导其向神经元样细胞分化,并通过免疫组化方法鉴定。结果经原代及传代培养的骨髓间充质干细胞呈梭形,类似于成纤维细胞;成神经元诱导24 h后,多数MSCs变为典型的神经元样细胞,胞体向胞核收缩并有较多的长突起,免疫组化显示神经元特异性标志NSE、神经巢蛋白Nestin染色阳性。结论体外成功的进行了MSCs原代及传代培养,细胞生长稳定、增殖迅速并可多次传代,经诱导后具有向神经元样细胞分化潜能。     

脐血源性间充质干细胞向神经样细胞诱导分化的研究

目的探讨来源于人脐带血来源的间充质干细胞（MSCs）体外诱导分化成神经样细胞的可行性。方法取第5代的脐血间充质干细胞，用不同浓度的脑源性神经营养因子（BDNF）和睫状神经营养因子（CNTF）单独或联合诱导脐源血间充质干细胞向神经样细胞分化。倒置相差显微镜观察细胞形态变化，于实验第1、3、6天分别进行神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫细胞化学染色并计数分化为神经元样细胞及神经胶质细胞的比例。结果与对照组相比，BDNF和CNTF能显著提高人脐血源MSCs分化为神经元的比例。其中20ng／mL的BDNF联合20ng／mL CNTF诱导人脐血源MSCs分化为神经样细胞的比例最高。结论人脐血MSCs经BDNF和CNTF体外诱导，能够分化为神经样细胞。     

人骨髓间质干细胞定向分化为神经元样细胞的实验

目的：体外定向诱导人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞并观察其传导功能。方法：实验于2003-06／2004-02在中南大学湘雅医院完成。采用淋巴细胞分离液（1．007g／L）梯度离心分离人骨髓间质干细胞，体外进行培养扩增，丁化羟基苯甲醚和二甲基亚砜诱导人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞，免疫细胞化学方法鉴定神经元特异性标志物，神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白，突触素蛋白．胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白： 结果：加入诱导剂3h后，大多数细胞转变为类似于神经元的形态，有长的突起，相互之间连接呈网状，并表达神经元特异性烯醇化酶，阳性率为（75．0&;#177;6．5）％、神经丝蛋白阳性率为（68．0&;#177;4．2）％及胶质纤维酸性蛋白阳性率为（25．0&;#177;6．4）％，但胶质纤维酸性蛋白表达明显较前两者弱（P〈0．05）。神经元细胞胞体表达突触素蛋白，突起未见表达。 结论：人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞；神经元样细胞其突起不具备传导功能。     

神经节苷脂体外诱导骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞

目的探讨神经节苷脂体外诱导骨髓基质干细胞（BMSC）向神经元样细胞分化的可能性。方法分离培养人BMSC，采用含神经节苷脂的无血清培养基诱导BMSC的分化，免疫细胞化学方法鉴定诱导分化后细胞表面神经细胞标志物神经元特异性烯醇化酶（NSE）和神经丝蛋白（NF）的表达。结果神经节苷脂诱导培养6h后，细胞表现为典型神经细胞样形态，神经元特异性标志物NSE和NF呈阳性表达。结论神经节苷脂可在体外诱导人BMSC分化为神经元样细胞。     

骨形成蛋白4诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力

目的：骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein4，BMP4)体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力。方法：采用BMP4体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞，免疫组化鉴定神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果：成年大鼠骨髓间充质干细胞受BMP4诱导后出现神经元样细胞，细胞免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NF表达阳性，诱导后5h，12h，1d，3d，5d和7d的NF神经样细胞阳性率分别为(40&;#177;7)％，(71&;#177;6)％，(58&;#177;3)％，(53&;#177;6)％，(37&;#177;5)％，(13&;#177;2)％，诱导后12h，NF神经元样细胞阳性表达到高峰，与诱导后5h比较，差别有显著性(t=1．380～2．621，P&;lt;0．05)。结论：BMP4可以在体外诱导成年大鼠骨髓间充质分化为神经元。     

严重颅脑损伤脑组织匀浆诱导人脐血MSCs成神经分化的实验研究

目的 探讨严重颅脑损伤时的脑组织匀浆对人脐血间充质干细胞(MSCs)成神经分化的诱导能力.方法 制作小鼠严重颅脑损伤模型,取伤后24 h和正常小鼠脑组织匀浆,对体外培养的第2代MSCs进行诱导.诱导3 d后以荧光免疫细胞组化技术检测细胞内NF和NeuN的表达.结果 成功培养出人脐血MSCs,成神经诱导后,严重损伤性脑组织匀浆诱导组NF和NeuN阳性率分别为(47.31±8.14)%和(58.91±8.12)%,高于正常脑组织匀浆诱导组阳性率(P<0.05).结论 脑组织匀浆可诱导人脐血MSCs向神经元样细胞分化,表达神经细胞特异标志分子NF和NeuN,严重损伤性脑组织匀浆的诱导效果高于正常脑组织匀浆.     

人脐带间充质干细胞分化为神经细胞的形态学改变

目的研究人脐带华尔通胶来源的间充质干细胞(MSCs)分化为神经细胞的形态学特征,为神经细胞移植探索细胞来源。方法用复方丹参注射液诱导人脐带来源的MSCs向神经细胞分化,用光学和电子显微镜对分化和未分化的细胞进行观察;了解细胞分化同形态学改变的关系。结果丹参可诱导人脐带MSCs向神经样细胞分化,光镜下细胞变短,体积变小,细胞形成双极或多极的细胞体,细胞呈星型,部分细胞的胞质收缩形成细胞的突起;扫描电镜下观察,复方丹参注射液诱导后,细胞胞体形成多样的神经样轴突,细胞之间形成网络样的连接;透射电镜下,丹参诱导后,细胞内结构、细胞器发生明显变化,细胞成熟,胞质内可见大量的线粒体,粗面内质网和游离的核糖体等,诱导后的细胞可见尼氏体样结构——大量排列的粗面内质网和广泛分布的游离核糖体和发达的线粒体;诱导后的细胞也表达神经细胞的标记。结论复方丹参注射液不仅诱导人脐带来源的MSCs发生神经样细胞的形态学改变,同时伴发有细胞分化的过程和神经细胞杯记表达,证明人脐带来源的MSCs具有分化为神经细胞的能力。     

鼠脑C6胶质瘤细胞上清液诱导人骨髓间充质千细胞向神经元样细胞的分化

目的:观察人骨髓间充质干细胞经鼠脑C6胶质瘤细胞上清液诱导后向神经元样细胞方向的分化情况.方法:取肝素抗凝人骨髓血,Percoll梯度法体外分离培养骨髓间充质干细胞,胰酶消化后传代扩增.取第4～6代骨髓间充质干细胞,当细胞达90%融合时,按2×103/孔接种于24孔板内,第2天分为两组,诱导组用含有50%C6胶质瘤细胞上清液的完全培养基(含体积分数为0.1胎牛血清的L-DMEM培养基)诱导,每隔2 d换液1次;对照组单纯加入完全培养基进行培养.诱导后3 d,两组细胞采用S-P法进行免疫细胞化学染色,检测神经元特异性标志物的表达.结果:诱导24 h后,诱导组多数骨髓间充质干细胞表现出典型的神经元样外观,对照组细胞形态无明显变化.诱导3 d后,诱导组神经元烯醇化酶阳性细胞率显著高于对照组(P<0.01);诱导组神经丝蛋白阳性细胞率为(44.2±2.4)%,对照组为阴性:两组胶质纤维酸性蛋白均呈阴性表达.结论:鼠脑C6胶质瘤细胞上清液可成功诱导入骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化.     

甲钴胺体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化

背景：目前骨髓间充质干细胞移植到脊髓损伤动物体内后对脊髓损伤的恢复效果非常有限。甲钴胺是治疗神经系统疾病及损伤的常见药物,其对骨髓间充质干细胞的影响尚不清楚。目的：探讨甲钴胺体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性,观察分化后的细胞增殖和生长情况。方法：取大鼠胫腓骨骨髓,采用密度梯度离心贴壁细胞培养法分离、培养骨髓间充质干细胞,取第四五代骨髓间充质干细胞,分别以25,50,100mg/L的甲钴胺进行诱导分化24,48和72h。倒置相差显微镜下连续观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞活性,RT-PCR和Western blot法检测特异性标志物Nestin和NSE的表达。结果与结论：甲钴胺诱导骨髓间充质干细胞后大部分细胞变成神经元样细胞。与对照组比较,甲钴胺诱导后细胞活性无明显变化。不同剂量甲钴胺诱导48h后,Nestin和NSE在mRNA和蛋白水平表达均上调,其中100mg/L组表达上调最明显;100mg/L甲钴胺诱导24,48和72h后,Nestin和NSE在mRNA和蛋白水平表达均上调,其中72h表达上调最明显。说明甲钴胺可定向诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,100mg/L为甲钴胺的较佳诱导浓度。     

小鼠MSCs分离体外扩增及向神经样细胞诱导分化的研究

目的：研究小鼠骨髓问充质干细胞(mMSCs)的分离、体外扩增及向神经样细胞分化的潜能。方法：取8—9周小鼠骨髓悬浮至全培养基中，接种于纤连蛋白覆盖的培养器皿中，纯化并扩增mMSCs；检测第9—10代细胞的生长状态、细胞周期、表型，并进行光镜形态学观察；用二甲基亚砜和丁羟茴醚诱导细胞分化，免疫荧光法检测其诱导分化前后神经细胞和神经干细胞的特异性标记蛋白的表达。结果：mMSCs为贴壁细胞，表现为成纤维细胞样，具有梭形、多角形等形态，传至15代仍可维持其形态特征；83％的细胞处于GO／G1期；mMSCs不表达CD45而表达CD44、CD13，与人MSCs表型一致；诱导分化后，大部分细胞变成双极、多极和锥形，并相互交织成网状结构，呈现神经细胞和神经干细胞表型。结论：mMSCs可被成功分离及体外扩增培养，并具有同人类MSCs相同的形态、表型、生长特征和向神经样细胞分化的潜力，是研究细胞及基因治疗小鼠病理模型的良好工具细胞。     

不同尿酸浓度对人骨髓间充质干细胞成神经分化的影响

背景：尿酸作为一种内源性的抗氧化剂,其抗氧化、抗 DNA 损害作用及发挥神经元保护作用近年受到关注。 目的：观察不同浓度尿酸对骨髓间充质干细胞成神经分化的影响。方法：体外分离、纯化、培养骨髓间充质干细胞,观察细胞形态,取扩增3代的骨髓间充质干细胞,分别用含0（对照组）、0.2,0.4,0.8 mmol/L浓度尿酸的预诱导液诱导24 h,再用含0（对照组）、0.2,0.4,0.8 mmol/L浓度尿酸的诱导液诱导1 h后行尼氏体染色,2 h后,用免疫组织化学法检测细胞内巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达。 结果与结论：骨髓间充质干细胞经诱导后,细胞胞体收缩,形成突起并形成连接。细胞胞质中存在蓝色颗粒状的尼氏体,含不同浓度尿酸的诱导组神经元特异性烯醇化酶阳性率均较对照组明显升高（P ＜0.05）,而且随着尿酸浓度增加,神经元特异性烯醇化酶阳性表达率逐渐增加（P ＜0.05）。含不同浓度尿酸的诱导组巢蛋白阳性表达率较对照组降低（P＜0.05）,诱导4 h后,细胞脱落明显。在体外一定时间内,尿酸能够促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化,且具有一定的浓度依赖性。     

MT 及bFGF体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向神经细胞方向分化的研究

目的：探讨体外诱导大鼠骨髓基质干细胞（MSCs）向神经元样细胞分化的最宜条件，为细胞移植提供寿命相对较长种子细胞。方法：采用细胞培养技术分离培养和纯化大鼠MSCs，以褪黑素（MT）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）为诱导剂定向诱导大鼠MSCs向神经元细胞分化。以免疫荧光法测定分化细胞神经特异性烯醇化酶（NSE）、星形胶质细胞特异性标志（GFAP）的表达。结果：MT、bFGF诱导分化3d部分细胞胞体收缩成三角形，有些成为简单的双极或多极细胞。诱导72h细胞开始表达NSE，9-14d阳性细胞增多，其中MT＋bFGF组变化显著，细胞不表达GFAP。结论：MT和bFGF可以诱导大鼠MSCs向神经元细胞分化，并存活14d以上稳定表达神经元细胞的特异性标记NSE。