白念珠菌总蛋白质组二维电泳条件的建立和优化

目的:建立并优化白念珠菌总蛋白质组分析的二维电泳条件.方法:以白念珠菌国际标准菌株SC5314为材料,制备其总蛋白质组样品.以真菌细胞破碎方法、裂解液成分、上样量、固相pH梯度胶条的选择为侧重点,通过不同条件下电泳图谱的比较建立最佳二维电泳技术条件.结果:成功建立白念珠菌总蛋白质制备方法,优化了白念珠菌蛋白质组分析的二维凝胶电泳技术,获得重复性和分辨率都较理想的白念珠菌总蛋白质二维电泳图谱.结论:优化后的二维电泳条件符合白念珠菌的特点,为白念珠菌蛋白质组分析奠定基础.     

肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳方法的建立和优化

目的建立和优化肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术,获取高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱。方法提取肺癌组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二向,在上述过程中分别对蛋白提取、等电聚焦电泳和凝胶染色进行控制和优化,利用ImageMaster 2Dplatinum 6.0分析软件获得二维凝胶图像。结果实验重复3次,共获15幅二维凝胶图像,平均蛋白质点数为1 137±57;随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅图像中蛋白点进行匹配,匹配率为90.4%。结论优化肺癌组织蛋白质组2-DE技术可获得高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱,为开展肺癌组织蛋白质组学研究打下基础。     

人骨肉瘤蛋白质组双向凝胶电泳图像分析方法的建立与应用

目的： 建立人骨肉瘤蛋白质组双向电泳图像分析方法。方法： 组织标本分为骨肉瘤组和肿瘤旁组。对第一向双向电泳的关键因素与环节进行一系列优化。分离骨肉瘤总蛋白，银染，用ImageMasLer 2D Elite 3.01分析软件分析图谱，使用基质辅助电离解析飞行时间质谱仪主要高丰度部分差异蛋白质进行鉴定。结果：获得分辨率和重复性好的双向电泳图谱。变异系数平均值（%）和变异系数范围（%）：骨肉瘤组为23.00±10.11和3.80～6.89，肿瘤旁组为20.33±9.90和2.70～6.89。同一蛋白质斑点在3次实验中等电点、分子量的相对标准差分别为（8.93±1.17）%、（10.16±2.02）%和（10.87±3.86）%。初步鉴定11个蛋白，其中9个蛋白质只在骨肉瘤中特异高峰度上调表达，分别为转甲状腺素蛋白、磷酸甘油醛异构酶、慢收缩骨骼肌钙蛋白T、心肌钙蛋白、肌动蛋白、肌球蛋白、膜联蛋白-5、 热休克蛋白-1及Fanconi anemia groupD2蛋白；鉴定2个蛋白，锰超氧化物歧化酶、碳酸酐酶蛋白质下调表达。结论：成功构建了用于研究骨肉瘤蛋白质组双向凝胶图谱分析方法，认为初步鉴定的部分差异蛋白可能为骨肉瘤的关联蛋白，其在骨肉瘤发生和进展的病理过程中具有重要作用。     

肝纤维化组织相关功能蛋白质组的差异分析

目的建立肝纤维化组织双向凝胶电泳图谱,初步分析蛋白质组的变化与差异表达。方法利用2-DE分离肝纤维化组织和正常肝组织总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质,并用Western印迹方法对其中3个蛋白质的表达水平变化进行验证。结果比较分析肝纤维化组织和正常肝组织的2-DE图谱,找到差异蛋白点59个,其中在肝纤维化组织表达上调30个,下调29个。并对其中15个表达差异3倍以上的蛋白点进行了肽质量指纹图分析,鉴定出10个与细胞信号转导、细胞增殖、氧化应激有关的蛋白质,14-3-3β、DJ-1及PEBP蛋白的Western印迹验证结果与2-DE的检测结果相一致。结论肝纤维化组织和正常肝组织之间存在一些差异表达的蛋白质,为进一步阐明肝纤维化的发生机制奠定基础。     

扶正化瘀方干预肝硬化大鼠血浆蛋白质组的初步研究

目的利用蛋白质组技术比较CCl4诱导肝硬化大鼠血浆蛋白质变化并研究扶正化瘀方对肝硬化大鼠血浆蛋白质的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予CCl4（CCl4／橄榄油：1体积比=1：1）腹腔注射、CCl4腹腔注射＋扶正化瘀方灌胃、橄榄油腹腔注射,8周后通过Masson三色染色法用图像分析仪自动分析肝脏胶原面积。应用双向凝胶电泳技术经银染显色和PDQuest7．3软件分析凝胶图像,对在三组中表达均有差异的蛋白质点用基质辅助激光解吸电离飞行时间串连质谱进行鉴定。结果扶正化瘀方干预组肝纤维化程度明显轻于模型组,胶原纤维面积在肝内沉积少（8．9％±3．7％ vs 12．4％±4．7％,P〈0．05）。实验去除血浆中的高丰度蛋白质可获得重复性较好的血浆蛋白质图谱。实验共鉴定出10个明显差异表达的蛋白质。在这些蛋白质中,血浆谷胱甘肽过氧化物酶及其前体、前白蛋白、结合珠蛋白、载脂蛋白A-IV前体、补体4,α抑制剂重链4和微管相关调节激酶1在肝硬化大鼠血浆中表达减少,扶正化瘀方干预组表达增加,肝脏再生相关蛋白和波形纤维蛋白在肝硬化大鼠血浆中表达增加,扶正化瘀方干预组表达减少。结论CCl4诱导肝硬化大鼠血浆中与氧化应激、细胞增值和转化相关蛋白质表达明显改变。扶正化瘀方可通过促进蛋白质合成、抗氧化、调控细胞增值和转化等多方面发挥抗纤维化的作用。     

消化性溃疡、胃炎与胃癌患者幽门螺杆菌蛋白质组的差异分析

目的初步确定胃癌和消化性溃疡、胃炎幽门螺杆菌（Hp）的差异蛋白质。方法通过从胃镜活检胃黏膜组织中分离培养Hp,应用裂解液、超声破碎法提取Hp菌体蛋白质后经Bradford法进行菌体蛋白质定量,采用双向电泳方法获得Hp菌体蛋白质图像,运用ImageMaster5．0版图像分析软件找到胃癌与消化性溃疡、胃炎Hp的差异蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOF）和四极杆飞行时间电喷雾串联质谱（Q—TOF）鉴定差异蛋白质。最后,通过WWW．matrixscience、con,从mascot数据库检索差异蛋白质。结果选择胃癌、消化性溃疡和胃炎Hp各3例进行双向电泳,与胃溃疡和胃炎相比,胃癌Hp中有4个蛋白质点高表达,质谱鉴定结果为硫氧还蛋白、腺苷酸激酶、单链DNA结合蛋白和核糖体蛋白,50S,L7／L12,其Mowse分值分别为94、286、139和132,序列覆盖率分别为77％、33％、33％和28％。结论硫氧还蛋白具有抗氧化和抑制细胞凋亡的功能,可能与Hp的致癌作用相关,蛋白质组学研究在Hp与胃癌关系的研究领域有广泛的应用前景。     

HeLa细胞蛋白质组双向电泳技术的建立

目的:建立和优化HeLa细胞蛋白质组分析所需的样品处理方法和双向电泳技术.方法:用三种不同配方的裂解液提取HeLa细胞中的蛋白质,进行双向凝胶电泳,用Amersham ImageMaster VDS-CL型凝胶成像系统获取凝胶图像,以PDQuest(7.4.0)软件进行比较分析.结果:联合使用硫脲和尿素有利于蛋白质的提取,增加碱性蛋白点的检出数量;广谱蛋白酶抑制剂的使用可大大增加双向电泳可检出的蛋白点数,同时使可检出的碱性蛋白点明显增加.结论:本文建立了HeLa细胞双向电泳分析方法,提高了2-DE图谱中蛋白位点的分辨率和重复性,获得了较为理想、清晰的双向电泳图谱,为其蛋白质组学进一步研究奠定了基础.     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术.方法对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化.结果建立了稳定的2-DE技术.结论已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的：建立血清蛋白质组双向凝胶电泳（2-DE）技术。方法：对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化。结果：建立了稳定的2-DE技术。结论：已建立的血清蛋白质2-DE技术，将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。     

结肠癌组织蛋白质组成分的双向凝胶电泳分析

目的 分析结肠癌病人癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质.方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离结肠癌病人配对癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织的总蛋白,银染显色,PDQuest 2DE软件分析差异表达的蛋白质点.结果 获得了重复性较好的双向凝胶电泳银染图谱.图像分析显示,3组胶的平均匹配率分别为:癌组织87.3%、癌旁组织80.3%、正常结肠黏膜组织84.0%.等电聚焦方向上的平均偏差为(1.16±0.29)mm,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向上的平均偏差为(1.00±0.38)mm.差异分析共获得164个差异表达的蛋白质点.结论 双向凝胶电泳分离结肠癌组织的总蛋白可获得重复性较好的结果.获得的差异蛋白质点为寻找结肠癌早期诊断的分子标记物提供了理论依据.     

MMP-2、u—PA在胃癌中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和尿激酶型纤溶酶原激活物（u—PA）在人胃癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S—P法检测60例胃癌和30例正常胃组织MMP-2和u—PA表达情况。结果MMP-2和u—PA在胃癌组织中阳性表达率分别为61．67％、75.00％；在正常胃组织中阳性表达率分别为13．33％、6.67％。MMP-2的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移情况密切相关，而与胃癌分化程度无关；u—PA的表达与胃癌分化、浸润深度、淋巴结转移情况相关，且MMP-2、u—PA在胃癌组织中的表达具有相关性。结论MMP-2和u—PA在胃癌侵袭及转移过程中发挥重要作用，两者呈正相关，可作为判断胃癌预后的分子标志物。     

自分泌运动因子在胃癌中表达及其意义的研究

目的:研究自分泌运动因子(Autotaxin,ATX)在胃癌中的表达及其对肿瘤浸润转移的作用。方法:利用免疫组化技术研究ATX在73例胃癌手术切除标本及50例正常人胃黏膜组织标本之间的差异。结果:ATX在正常胃黏膜组织、胃癌组织、癌旁组织均有表达且有显著差异,癌旁组织与正常组织表达差异不明显。ATX表达与胃癌病人的性别、年龄、位置、大小无关,而与胃癌的组织学类型、分化程度、浸润深度、转移及TNM分期有关。肿瘤组织分化程度差,浸润较深,淋巴结转移,ⅢⅣ肿瘤的AT X表达明显高于组织分化程度较好,浸润较浅,无淋巴结转移,ⅠⅡ期肿瘤。结论:ATX高表达在胃癌浸润转移中有重要意义。     

食管癌、胃癌组织的低密度脂蛋白受体分析

以１２５Ⅰ－ＬＤＬ为配体对食管癌、胃癌及其相应的正常组织进行了ＬＤＬ受体水平的测定，同时分析了各组织中蛋白质、ＤＮＡ的含量，以探讨食管癌和胃癌发生与ＬＤＬ代谢之间的关系。结果显示，癌组织和正常组织的ＬＤＬ受体亲和性差异无显著性，但癌变组织的蛋白质、ＤＮＡ和ＬＤＬ受体水平均明显高于相应正常组织。癌细胞需要大量的胆固醇满足其有丝分裂，细胞通过受体升高机制使ＬＤＬＲ增多，以增加对ＬＤＬ的摄取和利用。     

遗传性非息肉病性结直肠癌家庭肠外肿瘤病变特点分析

目的　通过分析遗传性非息肉病性结直肠癌 (HNPCC)肠外肿瘤的病变特点来探讨其发病规律。方法　采用Amsterdam标准Ⅱ收集HNPCC家系 ,对收集的 9个家系进行病例查阅、随访和回顾。结果　在 9个家系中 ,有 2 1例肠外肿瘤发生 ,4例为同步肿瘤 ,1 7例为异步性肿瘤。常见的为胃癌和子宫内膜癌。结论　大肠外肿瘤是HNPCC家系的重要组成部分 ,我国常见的为胃癌和子宫内膜癌。对其家系成员应定期随访监测     

吗啡成瘾大鼠的前额叶皮质蛋白质组的初步研究

比较吗啡成瘾与正常大鼠前额叶皮质（prefrontal cortex,PFC）蛋白质双向电泳图谱,可找和鉴定吗啡成瘾人鼠PFC中的差异表达蛋白质。方法：以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS—PAGE为第二向,分别对正常对照火鼠和吗啡：成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离,2-DE图谱经ImageMaster2DPlatinumv5．0软件分忻,选取4个簋异蛋白点用荩质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）进行鉴定。结果：通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与吗啡成瘾相关的差异表达蛋白斑点为87个;经质谱鉴定出2个有意义的差异表达的蛋白斑点：核小均一核糖核蛋∪、β—肌动蛋白。结论：吗啡成瘾组与正常对照组大鼠PFC蛋白质组存在差异;初步鉴定出了2种大鼠前额叫‘皮质中与旷5啡成瘾州关的差异蛋白,其表达的变化可能通过多种途经影响PFC神经元功能,为我们研究阿片类物质依赖作用机制提出了新的思路相方向。     

慢性间歇性缺氧大鼠肾脏组织表达蛋白质组的变化

比较慢性间歇性缺氧大鼠与正常大鼠肾脏组织蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定慢性间歇性缺氧大鼠肾脏组织中的差异表达蛋白。方法：以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS—PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和慢性间歇性缺氧大鼠的肾脏组织蛋白质样品进行二维分离,2-DE图谱经ImageMaster 2D Plafinum v5．0软件分析,选取4个差异蛋白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（MALDI—TOF—Ms）进行鉴定。结果：通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与慢性间歇性缺氧相关的差异表达蛋白斑点112个;经质谱鉴定出2个有意义的差异表达的蛋白斑点,慢性间歇性缺氧组表达量下调的差异蛋白质点1个,即线粒体ATP合成酶8亚基;上调的差异蛋白质点1个,即脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶／氧化还原因子一1。结论：初步鉴定了与大鼠肾脏组织慢性间歇性缺氧损伤相关的差异蛋白,其表达的变化可能通过多种途经影响肾脏功能．该结果为慢性间歇性缺氧导致肾功能损害的发病机制研究提出了新的思路。     

胃癌高发区胃癌病因病理发生过程模式初探

本文在胃癌高、低发区进行了流行病学调查及人群胃粘膜病理检查,发现胃癌高发区胃癌的发生与自然环境及居民饮食结构成正相关。并讨论了胃癌病因病理过程摸式及预防要点。     

胃癌患者血浆及癌组织中cAMP含量消长的研究

本文测定切除胃癌20例癌组织cAMP含量明显低于其切断端非癌胃粘膜cAMP含量,差异显著(P>0.05)。健康成人27例血浆中cAMP含量21.84nmol/L,胃癌患者21例血浆cAMP 8.24nmol/L,差异非常显著。(P<0.01),cAMP含量与胃癌恶性程度呈负相关关系。提示胃癌的发生与cAMP降低有内在联系,检测血浆中cAMP含量可估计胃癌的恶性程度和预后。     

胃幽门弯曲菌在胃癌患者胃内的分布

本文采用Warthin-Starry镀银染色、吖啶橙荧光染色、细菌培养等技术对52例胃癌患者胃内幽门弯曲菌的分布进行了检测。结果表明:该菌在胃内的分布是非均一的,胃窦部阳性率高于胃底贲门部,多部位取材有助于提高检菌阳性率;该菌在胃癌患者胃内有较高的分布(65.4％),其中早期胃癌中阳性率较高(80.0％)。癌周取材检菌阳性率(64.0％)高于癌组织(26.9％),提示该菌可能与胃癌的发生有关。