穹隆-海马伞切断对大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶表达的影响

①目的　观察穹隆 海马伞切断对大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶 (ChAT)表达的影响 ,探讨与学习、记忆相关的机制。②方法　成年健康雌性Wistar大鼠 ,随机分为穹隆 海马伞切断模型组和假手术组 ,各 5只。在脑立体定位仪上切断双侧穹窿 海马伞 ,建立动物模型。假手术组除不切断海马伞外 ,其余步骤同模型组。ChAT免疫细胞化学染色。观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位ChAT阳性细胞表达变化。③结果　假手术组大脑各观察区有基础水平的ChAT表达。模型组大脑海马CA1区皮质、大脑皮质区、杏仁复合体区以及Meynert核区ChAT阳性细胞数明显减少 ,与假手术组比较差异有显著性 (t =7.713～17.16 6 ,P <0 .0 1)。④结论　穹隆 海马伞切断大鼠脑内多部位ChAT表达减少可能是学习、记忆障碍原因之一。     

穹隆-海马伞切断及去势大鼠脑内β淀粉样肽1-40表达的变化

①目的　观察穹隆 海马伞切断及去势大鼠脑内不同部位 β淀粉样肽 1 4 0 (Aβ1 40 )表达的变化 ,了解与阿尔茨海默病 (AD)相关的发病机制。②方法　将大鼠分为穹隆 海马伞切断及去势模型组 (模型组 )和假手术组 ,假手术组除不切断海马伞和去除卵巢外 ,其余步骤同模型组。常规处死大鼠取脑组织行Aβ1 40 免疫细胞化学染色 ,观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位Aβ1 40 阳性细胞表达变化。③结果　假手术组大脑各观察区有少量的Aβ1 40 表达。与假手术组比较 ,模型组大脑海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区Aβ1 40 阳性细胞数明显增多 (t=3.96 9～ 6 .6 77,P <0 .0 1)。④结论　穹隆 海马伞切断加去势可致大鼠脑内多部位Aβ1 40 表达增多 ,此可能与老年性痴呆病理改变有关。     

卵巢切除大鼠不同脑区酪氨酸激酶A表达的变化

目的 观察卵巢切除大鼠脑内不同部位酪氨酸激酶A（TrkA）表达的变化。方法 按Singh方法建立大鼠卵巢切除模型（OVX组），免疫细胞化学染色，观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位TrkA阳性细胞表达的变化。结果 对照组大鼠各观察区有大量TrkA表达，与对照组比较，OVX组大脑海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区TrkA阳性细胞数明显减少（t=5．90～8．57，P〈0．01），Meynert核区无显著性差异（t=1．65，P〉0．05）。结论 大鼠体内雌激素下降可致脑内多部位TrkA表达减少，雌激素与生长因子受体系统可能存在相互影响的关系。     

穹窿-海马伞切断与卵巢切除对大鼠不同脑区酪氨酸激酶A表达的影响

目的观察穹窿海马伞切断与卵巢切除对大鼠脑内酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)表达的影响。方法实验于2003年03月至2003年12月在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。成年健康雌性Wistar大鼠28只,按2×2方差分析的方法设计,随机分为穹窿-海马伞切断(FF)组、卵巢切除(OVX)组、穹窿-海马伞切断加卵巢切除(OF)组、对照组,每组7只。穹窿海马伞切断参照Klein等的方法,双侧卵巢切除参照Singh等的方法进行。对照组除不切断卵巢和穹窿-海马伞外,其余步骤同模型组。免疫细胞化学染色法观察皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位TrkA阳性细胞表达变化。数据分析按2×2方差分析的方法进行统计学比较。结果双侧卵巢切除和双侧穹窿海马伞切断存在显著的主效应和交互效应(P<0.01)。OVX组、FF组和OF组大鼠大脑皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区TrkA表达的阳性细胞数明显减少,与对照组比较差异均有显著性[如皮质区分别为:(16.63±6.12),(18.91±6.27),(23.34±6.92)vs(54.77±11.84),P<0.01]。其中OF组大鼠海马CA1区TrkA表达的阳性细胞数较FF组和OVX组明显减少,差异有显著性[(7.97±2.00)vs(15.17±5.23),(24.09±3.79),F=11,577,98.982,P<0.01]。结论穹窿-海马伞切断和/或卵巢切除存在显著的主效应和交互效应,可致大鼠脑内多部位TrkA表达减少,可能与阿尔茨海默病的病理过程有关。     

卵巢切除大鼠脑内雌激素受体α表达的变化

目的 观察卵巢切除大鼠脑内不同部位雌激素受体α（ERα）表达变化。方法 根用Singh等方法制作大鼠卵巢切除模型（模型组），免疫组织化学染色观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区等部位ERα阳性细胞表达变化，并与手术对照组（对照组，不切除卵巢）比较。结果 对照组大脑各观察区有大量的ERα表达。与对照组比较，模型组大脑海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区ERα阳性细胞数显著减少（t=2．68～5，68，P〈0．01）。结论 卵巢切除可致大鼠脑内多部位ERα表达减少，这种病理变化可能与轻度认知障碍的发生有关。     

穹窿-海马伞切断与卵巢切除对大鼠不同脑区酪氨酸激酶A表达的影响

目的 观察穹窿海马伞切断与卵巢切除对大鼠脑内酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)表达的影响.方法 实验于2003年03月至2003年12月在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成.成年健康雌性Wistar大鼠28只,按2×2方差分析的方法设计,随机分为穹窿-海马伞切断(FF)组、卵巢切除(OVX)组、穹窿-海马伞切断加卵巢切除(OF)组、对照组,每组7只.穹窿海马伞切断参照Klein等的方法,双侧卵巢切除参照Singh等的方法进行.对照组除不切断卵巢和穹窿-海马伞外,其余步骤同模型组.免疫细胞化学染色法观察皮质区、海马CAl区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位TrkA阳性细胞表达变化.数据分析按2×2方差分析的方法进行统计学比较.结果 双侧卵巢切除和双侧穹窿海马伞切断存在显著的主效应和交互效应(P＜0.01).OVX组、FF组和OF组大鼠大脑皮质区、海马CAl区、杏仁复合体区TrkA表达的阳性细胞数明显减少,与对照组比较差异均有显著性[如皮质区分别为:(16.63±6.12),(18.91±6.27),(23.34±6.92)vs(54.77±11.84),P＜0.01].其中OF组大鼠海马CAl区 FrkA表达的阳性细胞数较FF组和OVX组明显减少,差异有显著性[(7.97±2.00)vs(15.17±5.23),(24.09±3.79),F=1l,577,98.982,P＜0.01].结论 穹窿-海马伞切断和/或卵巢切除存在显著的主效应和交互效应,可致大鼠脑内多部位TrkA表达减少,可能与阿尔茨海默病的病理过程有关.     

卵巢切除大鼠不同脑区胆碱乙酰化转移酶阳性细胞表达的变化

目的 观察卵巢切除大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶（CHAT）阳性细胞表达的变化，了解ChAT改变与轻度认知障碍（MCI）相关的可能机制。方法 成年健康雌性Wistar大鼠14只，应用SINGH法建立大鼠卵巢切除模型（模型组），对照组除不切除卵巢外，其余步骤同模型组。常规处死大鼠，取脑组织行ChAT免疫细胞化学染色，观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位ChAT阳性细胞表达变化。结果 模型组与对照组比较脑内海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区、Meynert核区ChAT阳性细胞数明显减少（t=5．15～16．48，P〈0．01）。结论 雌激素下降可致大鼠脑内多部位ChAT阳性细胞表达减少，这种病理变化可能与MCI发病有关。     

卵巢切除大鼠不同脑区nAchR的表达

①目的观察双侧卵巢切除（OXV）大鼠脑内不同部位烟碱型乙酰胆碱受体（nAchR）表达的变化,探讨其与认知功能障碍的关系。②方法健康雌性Wistar大鼠10只,随机分为两组,OXV组行双侧卵巢切除术,对照组为假手术对照组。术后1个月处死动物,应用免疫组织化学技术观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区的nAchR阳性细胞的表达。③结果与对照组比较,OXV组大鼠脑内海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、Meynert核区nAchR阳性细胞表达数量显著减少,差异有显著意义（t=6．971～8．364,P〈0．01）。④结论大鼠卵巢切除后脑内不同区域的nAchR表达减少,此改变可能与年龄相关性认知功能障碍发病有关。     

中药复方962胶囊对老年大鼠海马神经生长因子及其受体表达的影响

目的 我们以往的实验证明：中药复方962胶囊（含何首乌、石菖蒲等六味中药）能显改善老年大鼠学习记忆功能。本研究观察962胶囊对自然衰老大鼠模型海马区神经生长因子（NGF）及其受体TrkA表达的影响,探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。方法 雌性Wistar大鼠,老年为TrkA表达的影响,探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。方法 雌性Wistar大鼠,老年为22月龄,青年为5月龄。962胶囊高剂量1.8g/kg,962胶囊低剂量0.9g/kg,每日灌胃给药一次,连续灌胃2个月,ABC法行NGF和TrkA免疫组化染色。VISILOG5.0图像分析系统对组织切片进行分析。海马CAI区锥体细胞层连续摄取3个视野,这3个视野包括了整个CAI区,记数3个视野内总阳性细胞数量、阳性细胞总面积（象素单位）及阳性细胞灰度积分值（灰度单位）。海马CA2区连续摄取2个视野,海马CA3区连续摄取2个视野,海马CA4区摄取齿状回包含的1个视野,包括了完整的CA2、CA3、CA4区;结果（1）老年大鼠海马CA1、CA2、CA3、CA4区NGF和TrkA阳性细胞数,阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值较青年对照组明显减少,以CA2、CA3区的减少最严重。（2）962胶囊能提高老年大鼠海马CA1、CA2、CA3、CA4区NGF和TrkA阳性细胞数量,阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值,962胶囊高剂量组基本恢复青年对照组水平。结论 老年大鼠神经生长因子（NGF）及其受体TrkA在海马区表达明显减少,可能与其学习记忆能力下降有关;962胶囊能够明显促进老年大鼠海马区NGF及受体TrkA表达,可能是改善其学习记忆功能的药理学基础。增强内源性神经营养物质的表达对老年性痴呆的治疗有重要意义。     

参乌胶囊对拟亨廷顿病大鼠行为及脑内神经营养因子的影响

目的　观察拟亨廷顿病模型大鼠学习记忆改变情况 ,脑黑质、海马部位脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的改变情况及参乌胶囊对其的干预作用。方法　用线粒体呼吸链复合体Ⅱ /Ⅲ抑制剂——— 3-硝基丙酸 (3 nitropropionicacid ,3 NPA) 2 0mg/kg对SD大鼠隔日腹腔注射连续造模 2 0d ,建立HD大鼠模型。造模的同时 ,用药组大鼠给予参乌胶囊连续灌胃 2 5d。阳性对照药组自造模当日起给予氟哌啶醇。应用Morris水迷宫及避暗实验检测大鼠学习记忆能力。应用免疫组织化学染色法检测大鼠海马CA1及CA4区BDNF、GDNF的细胞数量及细胞面积。结果　Morris水迷宫实验中 ,模型大鼠的游出时间及游出距离较对照组明显延长 ,参乌胶囊用药组可以显著缩短大鼠的游出时间及距离。避暗实验中 ,参乌胶囊用药组大鼠较模型大鼠进入暗箱的潜伏期分别显著性延长 5 6 6 9s和 5 4 2 4s。在海马CA1及CA4区 ,模型组动物BDNF、GDNF阳性细胞的表达明显较正常对照组细胞数减少 ,阳性细胞总面积减少。而 96 2中剂量组对于此区BDNF、GDNF阳性细胞的表达明显具增强作用 (P <0 0 1)。结论　参乌胶囊可以明显增强动物学习记忆能力 ,增强 3 NPA模型大鼠海马处BDNF及GDNF的表达。     

卵巢切除大鼠脑内APP β位点裂解酶表达的变化

目的 观察卵巢切除大鼠脑内不同部位淀粉样蛋白前体蛋白（APP）β位点裂解酶（BACE）表达的变化，探讨雌激素缺乏与APP代谢系统可能存在的内在联系。方法 成年健康雌性Wistar大鼠14只，随机分为卵巢切除组（模型组）和对照组，每组7只。BACE免疫荧光标记细胞化学染色，激光共聚焦显微镜下观察海马CA1区、皮质区BACE阳性细胞的表达情况。结果 对照组BACE阳性细胞表达极少，模型组皮质区、海马CA1区BACE阳性细胞数较对照组显著增多（t=5．59、6．27，P〈0．01）。结论 卵巢切除大鼠脑内BACE表达增多，推测雌激素与BACE存在相互作用的关系。     

大鼠脊髓全横断后TrkA和NGF在运动皮质的免疫组化研究

目的 探讨脊髓全横断后神经营养因子及相应受体在运动皮质内的分布规律，为临床应用神经生长因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法 用免疫组化方法和图像分析技术检测脊髓全横断后不同时相运动皮质内，神经生长因子(NGF)及其高亲和性受体TrkA的表达和分布。结果 各组运动皮质中TrkA和NGF阳性神经元主要分布在第5层；脊髓全横断3d后，运动皮质内TrkA表达上调，损伤后7d到达高峰，21d回到正常水平；NGF表达在损伤后7d上调，峰值出现在损伤后7d，21d回到正常水平。结论 NGF表达增高迟于TrkA，提示在损伤早期给予外源性NGF可能有利于受损的皮质脊髓束神经元的存活与再生．     

RT-PCR/Southern杂交法检测穹窿海马伞切割大鼠海马Brn-4 mRNA的表达变化

目的:探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4 mRNA表达的差异。方法:42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割穹窿海马伞后1、3、7、14、21及28d组。取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用RT-PCR/Southern杂交方法分析穹窿海马伞切割后海马内Brn-4 mRNA的表达变化。结果:海马内Brn-4 mRNA的表达量在切割后第3d开始升高,14d达到最高水平,随后下降,28d左右恢复至正常水平。结论:切割穹窿海马伞后海马内Brn-4mRNA表达明显上调,可能与促进海马内移植的或自体的神经干细胞向神经元分化有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对海马伞切断大鼠海马神经细胞增殖的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生成因子(bFGF)对海马伞切断造成的阿尔茨海默氏病(AD)模型大鼠海马齿状回神经细胞增殖的影响。方法 AD处理组及AD对照组大鼠单侧海马伞切断制造阿尔茨海默病模型；正常对照组注射生理盐水。AD处理组造模后每天侧脑室注射bFGF共7天；AD对照组及正常对照组同时间注射生理盐水。BrdU标记增殖细胞。TUNEL方法标记DNA片段，原位检测凋亡细胞。计数海马齿状回各区域BrdU阳性细胞与凋亡细胞数。结果 AD处理组大鼠与AD对照组大鼠相比，海马齿状回BrdU阳性细胞增加明显(P＜0．01)，而凋亡细胞差异不显著(P＞0．05)。AD对照组大鼠与正常对照组大鼠相比，海马齿状回BrdU阳性细胞数及凋亡细胞数差异均不显著(P＞0．05)。结论 bFGF可促进AD模型大鼠海马神经细胞的增殖。是治疗AD等神经缺损性疾病有希望的一种神经生长因子。     

实时聚合酶链反应检测切割穹窿海马伞大鼠海马内磷脂酰乙醇胺结合蛋白mRNA的表达变化

目的探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）mRNA的表达差异。方法42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割穹隆海马伞后1、3、7、14、21及28d组,每组6只。提取各组大鼠的海马组织总RNA,应用实时PCR技术观察切割穹窿海马伞后海马中PEBPmRNA的表达变化。结果PEBPmRNA在切割后3d表达开始上升,7d达最高水平,随后缓慢下降,21d时降至正常。结论切割穹窿海马伞后海马中PEBP的高表达可能与诱导神经干细胞向胆碱能神经元分化的海马神经再生有关。     

RT-PCR检测穹窿海马伞切割后大鼠海马内Lhx8 mRNA的表达变化

目的:探讨切割穹隆海马伞大鼠海马与正常海马内Lhx8 mRNA表达的差异。方法:36只SD大鼠随机分成6组,每组6只。1组为正常对照组,其余5组分别为切割穹窿海马伞后3、7、14、21和28 d组。取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用半定量RT-PCR法分析穹隆海马伞切割后海马内Lhx8 mRNA的表达变化。结果:海马内Lhx8 mRNA的表达量在切割后第3 d开始升高,7 d时达到最高水平,以后逐渐下降,于28 d时恢复至正常水平。结论:切割穹窿海马伞后海马中Lhx8 mRNA表达的增高可能与神经干细胞向胆碱能神经元分化的再生机制有关。