β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PTEN／Akt表达的影响

目的 探讨β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）／丝苏氨酸蛋白激酶（Akt）表达的影响。方法 采用不同浓度β-咔啉类生物碱（0、10、20、40 μg／ml）处理SGC-7901细胞后,应用活细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测β-咔啉类生物碱处理24、48 h后的SGC-7901细胞增殖抑制情况,Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察β-咔啉类生物碱处理48 h后的细胞凋亡情况,荧光定量聚合酶链反应和Western blotting分别检测β-咔啉类生物碱（0、10、20、30、40 μg／ml）处理48 h后细胞中PTEN、Akt mRNA和蛋白水平。结果 β-咔啉类生物碱均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,抑制率呈浓度依赖性（P＜0.05）;β-咔啉类生物碱可诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,且伴有凋亡特有的DNA梯形条带;与0 μg／ml相比,其余浓度β-咔啉类生物碱处理48 h后的PTEN mRNA和蛋白表达增加,而Akt mRNA和蛋白表达减少,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 β-咔啉类生物碱可抑制人胃癌SGC 7901细胞增殖并诱导凋亡,可能与影响PTEN及Akt表达有关。     

miR-147对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:比较胶质瘤患者胶质瘤组织和瘤旁组织中miR-147表达水平的差异性,进一步分析miR-147与胶质瘤细胞生物学活性的相关性。方法:通过实时荧光定量PCR检测65例胶质瘤患者瘤组织和瘤旁组织中miR-147的表达水平;采用Lipofectamine 2000转染法转染胶质瘤细胞,分为miR-147 mimics组和NC组,检测两组转染效率;进一步通过CCK-8实验、流式细胞实验和Transwell实验比较两组细胞生物活性。结果:胶质瘤组织中miR-147表达水平显著低于瘤旁组织;与NC组比较,miR-147 mimics组细胞不论是增殖能力还是侵袭能力都明显降低,但是,miR-147 mimics组的细胞凋亡率升高。结论:胶质瘤组织中存在miR-147低表达的现象。miR-147在胶质瘤细胞中表达升高能够抑制细胞的增殖能力、降低其侵袭能力,并促使更多的细胞发生晚期凋亡。miR-147可能在胶质瘤中扮演着抑癌基因的重要角色。     

第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因对人卵巢癌A2780细胞侵袭和迁移能力的影响及相关机制

目的 探讨第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(PTEN)对人卵巢癌A2780细胞侵袭和迁移能力的影响及相关机制.方法 将携带外源性人PTEN基因的野生型质粒(WT-PTEN)和磷酸酶域突变型质粒(C124A-PTEN)转入人卵巢癌细胞株A2780中,利用Transwell小室法和划痕愈合实验检测转染前后细胞侵袭和迁移能力的变化,应用Western blot检测各组细胞PTEN及其下游相关蛋白表达的变化.以空载体质粒和未转染细胞作为对照.结果 细胞侵袭实验显示,WT-PTEN/A2780、C124A-PTEN/A2780、GFP/A2780和A2780细胞穿透Matrigel胶的细胞数,分别为(24.3±2.5)个、(43.7±3.8)个、(44.7±2.1)个和(45.0±3.0)个,WT-PTEN/A2780细胞的穿膜数明显少于其他各组(P＜0.05).划痕愈合实验显示,WT-PTEN/A2780、C124A-PTEN/A2780、GFP/A2780和A2780细胞的迁移距离分别为(54.1±3.7)μm、(78.7±3.4)μm、(78.1±3.1)μm和(76.8±3.5)μm,WT-PTEN/A2780细胞的迁移速度明显慢于C124A-PTEN/A2780、GFP/A2780和A2780细胞(P＜0.05).WT-PTEN/A2780细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达明显低于C124A-PTEN/A2780、GFP/A2780和A2780细胞(P＜0.05).结论 野生型PTEN可有效抑制A2780细胞的侵袭和迁移,该抑制作用与A2780细胞中MMP-9表达下调有关.

Abstract：

Objectiye To evaluate the effects of PTEN on invasive and migration ability of human ovarian cancer cell line A2780 and related mechanisms. Methods The plasmid including WT-PTEN and mutant PTEN were transferred into A2780 cells. The invasive and migration ability were measured before and after transfection by transwell chamber and wound-healing assays. The expression of PTEN protein and related proteins in the cells were detected by Western blot analysis. Empty plasmid-transfected A2780 and normal A2780 cells were used as control (the different four groups were named as WT-PTEN/A2780,C124A-PTEN/A2780, GFP/A2780 and A2780 ). Results The number of penetrating cells was significantly less in WT-PTEN/A2780 cells(24.3 ± 2.5 ) than those in C124A-PTEN/A2780, GFP/A2780 and A2780 cells (43.7 ± 3.8, 44.7 ± 2. 1 and 45.0 ± 3.0 ) ( P ＜ 0.05 ). The migration distance was markedly shorter in WT-PTEN/A2780 cells (54.1 ± 3.7) than those in C124A-PTEN/A2780, GFP/A2780 and A2780 cells (78.7 ± 3.4, 78.1 ± 3.1 and 76.8 ± 3.5 ) ( P ＜ 0. 05 ). Conclusions Transfection with PTEN may suppress the invasive and migration ability of ovarian cancer cell line A2780 depending on its phosphatase activity, and the suppressive effect may be due to the down-regulation of MMP-9 in the cancer cells.     

PTEN与胃癌

胃癌的发生发展是一个多因素、多基因、多阶段、多途径有序的过程.人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)是迄今为止发现的第一个具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因,调控着细胞周期和多种信号途径,在胃癌的发生发展中起重要作用.关于PTEN的进一步研究将为胃癌诊断、治疗及判断预后提供新的思路.     

Egr-1和PTEN蛋白的表达在食管上皮增生和癌变过程中的意义

背景与目的： 研究食管粘膜上皮癌变过程早期生长反应基因(Early growth response gene-1, Egr-1 gene)和与张力蛋白及辅助蛋白同源、第10号染色体丢失的磷酸酶基因 (phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)蛋白的表达,并探讨其与食管癌发生的关系。 材料与方法： 应用免疫组化EnVision二步法,对86例食管癌切除新鲜标本的上切缘正常粘膜、癌旁粘膜上皮和原位癌进行Egr-1和PTEN蛋白表达的检测。 结果： Egr-1和PTEN在正常、增生和恶变的食管粘膜上皮细胞均有表达,两者在食管癌变过程显示不同的分布模式,即Egr-1蛋白表达逐渐升高,而PTEN蛋白表达则逐渐下降。结论： Egr-1和PTEN蛋白表达的改变与食管粘膜上皮的恶性转化密切相关,Egr-1表达上调和PTEN表达缺失可能是一个有用的生物学标志和食管癌病人早期诊断的指标。     

槐定碱对神经胶质瘤U87细胞增殖、侵袭及相关信号通路的影响

目的:探讨槐定碱对神经胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的抑制作用以及U87细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ(DNA TOP Ⅰ)、EGFR-酪氨酸激酶(EGFR-TK)、基质金属蛋白酶2(MMP2)和氨肽酶N(APN)活性的影响.方法:将不同浓度槐定碱加入到神经胶质瘤U87细胞株中,利用MTT法测定槐定碱对U87细胞和人脑正常星型胶质HEB细胞生长的抑制作用,酶标仪法检测槐定碱对细胞凋亡蛋白caspase-3活性,采用Transwell小室法分析U87细胞的侵袭能力;采用非放射性NF-κB EMSA试剂盒测定U87细胞中NF-κB表达.结果:随着槐定碱浓度的增加(5、10、25、50、100μmol/L),神经胶质瘤U87细胞生长抑制率不断的增加,但HEB细胞的生长并未受到明显的抑制[(11.23±1.18)％ vs (2.43 ±0.29)％、(22.48±3.21)％ vs (3.65±0.42)％、(43.21 ±4.09)％ vs (4.03±0.55)％、(57.31±5.09)％vs (5.21 ±0.43)％、(77.98±6.98)％ vs (7.22±0.78)％,均P＜O.05];与空白组比较,槐定碱存在下的U87细胞侵袭能力明显降低[(87.43±7.33)％、(65.12±6.16)％、(50.63±4.56)％、(35.32±4.04)％、(23.46±2.32)％ vs(120.32 ±9.32),均P＜0.05].槐定碱对DNA TOP Ⅰ、EGFR-TK、APN和MMP-2的半抑制率IC50分别为(22.43 ±2.21)、(31.25 ±3.09)、(6.32±0.32)和(8.23±0.63) μmol/L,但U87细胞中凋亡蛋白caspase-3活性呈增强趋势;槐定碱能够下调NF-κB信号的表达.结论:低毒性的槐定碱可能通过降低DNA TOP Ⅰ、EGFR-TK、APN和MMP-2活性,并下凋NF-κB信号通路和激活凋亡caspase-3酶联反应的方式,对神经胶质瘤U87细胞的侵袭、增殖和信号通路产生抑制作用.     

甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α和PTEN的表达及诊断价值

目的 探讨甲状腺乳头状癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)的表达及其在临床诊断中的价值.方法 采用免疫组化S-P法检测100例甲状腺乳头状癌和50例癌旁正常甲状腺组织中HIF-1α和PTEN的表达,并对两者在甲状腺乳头状癌诊断及预后评估中的价值进行分析.结果 甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α的阳性率为69.0%,高于癌旁正常甲状腺组织的12.0%,差异有统计学意义(P<0.05).甲状腺乳头状癌组织中PTEN的阳性率为46.0%,低于癌旁正常甲状腺组织的94.0%,差异有统计学意义(P<0.05).甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α和PTEN的表达与其临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05).甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α和PTEN的表达呈负相关(r=-0.596,P<0.05).结论 甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α和PTEN的表达出现异常,两者联合检测有助于甲状腺乳头状癌的临床确诊和预后评估.     

磷酸化Akt和PTEN在非小细胞肺癌组织中的表达及其相关性

目的:探讨磷酸化Akt(p-Akt)与PTEN表达在非小细胞肺癌(NSCLC)侵袭、转移中的作用及其相关关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测20例正常肺组织和102例非小细胞肺癌癌组织中p-Akt和PTEN蛋白的表达。结果:正常肺组织p-Akt为阴性表达,而PTEN为阳性表达;非小细胞肺癌癌组织中p-Akt表达的阳性率为41.2%(42/102),PTEN失表达率为46.1%(47/102)。p-Akt阳性表达和PTEN的失表达与肿瘤组织分化程度、临床分期以及有无淋巴结和远处转移相关。p-Akt和PTEN表达呈显著负相关(Phi r=-0.425,P<0.001)。结论:p-Akt过表达伴随着PTEN表达缺失,两者与NSCLC侵袭、转移有关。     

联合PTEN、Gleason评分与PSA在预测前列腺癌进展中的价值

目的研究第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、Gleason评分、前列腺特异性抗原(PSA)在预测前列腺癌进展中的价值。方法应用S-P法测定29例前列腺癌(Pca)与20例前列腺增生(BPH)组织切片中PTEN蛋白的表达,回顾性研究上述Pca、BPH患者Gleason评分及PSA资料。结果BPH与Pca两组中PTEN总体表达有差异性(P<0.05),两组PSA值总体差异性显著(P<0.05)。PTEN与临床资料关系中,术前PSA<4ng/ml与>10ng/ml两组间PTEN表达有差异(P<0.05),余无差异性。Gleason评分2～4分与5～7分两组PTEN表达无差异(P>0.05),两组与8～10分组PTEN表达比较差异均有显著性(P<0.01);高分化与低分化组PTEN表达有显著差异(P<0.01);临床A、B期与C、D期PTEN表达差异性显著(P<0.01)。结论联合PTEN、Gleason评分及PSA对诊断并预测Pca进展有一定的临床意义。     

Cyclin D1、PTEN蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的 探讨细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白（PTEN）在甲状腺乳头状癌（PTC）组织中的表达情况及临床意义。方法 收集2013年3月至2014年12月手术切除的PTC组织和配对癌旁组织各70例。采用免疫组化En Vision两步法检测上述组织中Cyclin D1、PTEN的表达情况;分析Cyclin D1、PTEN蛋白表达与PTC临床病理特征的关系以及两种蛋白表达的相关性。结果在70例PTC组织中,Cyclin D1蛋白的阳性表达率为77.1％（54／70）,高于癌旁组织的12.9％（9／70）,差异有统计学意义（P＜0.001）;PTEN蛋白的阳性表达率为21.4％（15／70）,低于癌旁组织的81.4％（57／70）,差异有统计学意义（P＜0.001）。Cyclin D1表达与淋巴结转移、临床分期有关（P＜0.05）,而与年龄、性别、肿瘤大小无关（P＞0.05）。PTEN表达与性别、淋巴结转移、临床分期有关（P＜0.05）,而与年龄、肿瘤大小无关（P＞0.05）。Cyclin D1与PTEN蛋白表达无明显相关性（r=0.105,P=0.386）。结论 PTC组织中Cyclin D1高表达,而PTEN低表达,且两者均与淋巴结转移和临床分期有关,提示两者在PTC的发生、发展中发挥一定的作用。     

PTEN和FasL蛋白在小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的　探讨PTEN(phosphataseandtensinhomologydeletedonchromosometen)抑癌蛋白、FasL(Fasligand)蛋白在小细胞肺癌 (SCLC)中的表达及两者的相互关系。 方法　应用免疫组织化学法检测 42例SCLC组织及 16例肺良性病变组织PTEN蛋白、FasL蛋白的表达。结果　 42例SCLC组织PTEN蛋白的表达缺失率 73 .8%显著高于 16例肺良性病变组织缺失率 0 % (P <0 .0 1)。PTEN的缺失率与临床TNM分期有密切关系 (P <0 .0 1) ,但与性别、年龄、细胞学亚型无明显关系 (P >0 .0 5 )。 42例SCLC组织中FasL阳性表达率 ( 5 0 .0 % )显著高于 16例肺良性病变组织 ( 12 .5 % ) (P <0 .0 5 )。PTEN表达缺失的SCLC组织FasL蛋白表达水平显著高于PTEN阳性的SCLC组织 (P <0 .0 1)。结论　PTEN的缺失与部分SCLC的发生发展有关 ;SCLC组织存在FasL表达上调 ;PTEN抑癌蛋白丢失可能与FasL表达上调有关。     

肝细胞癌中PTEN、Cx43及VEGF蛋白的表达

背景与目的:肿瘤抑制基因PTEN、间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)及血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达在肿瘤发生和进展中发挥重要的作用。本研究目的是观察肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中PTEN、Cx43及VEGF蛋白的表达及其关系,探讨它们在HCC发生和发展中的作用。方法:免疫组化链酶素抗生物素-过氧化物酶(SP)法研究47例HCC组织中PTEN、Cx43及VEGF的表达情况。结果:PTEN、Cx43、VEGF在HCC组织中总的阳性率分别为76.6%、42.6%、70.2%。随着肿瘤病程进展,PTEN和Cx43阳性率降低(P均<0.05),而VEGF阳性率显著增高(P=0.001)。与肝内血管癌栓组相比,PTEN在无肝内血管癌栓组的阳性率显著增高(P=0.006)。肝硬化组Cx43阳性率明显低于无肝硬化组(χ2=4.7135,P=0.03)。PTEN阳性率在肿瘤大小、癌组织分化程度及肝硬化背景组无显著性差异。Cx43阳性率在肿瘤大小、癌组织分化程度及肝内血管瘤栓组无显著性差异。VEGF阳性率在肿瘤大小、癌组织分化程度、肝硬化及肝内血管癌栓组无显著性差异。相关分析表明:PTEN阳性率与Cx43阳性率正相关(CramersV=0.3949,P=0.023);PTEN阳性率与VEGF阳性率负相关(CramersV=0.3937,P=0.024);Cx43阳性率与VEGF阳性率无明显相关(CramersV=0.3072,P=0.06     

PTEN和p53蛋白在肝癌组织中的表达及意义

背景与目的：抑癌基因PTEN于1997年首次被报道之后即成为研究热点。国外曾有研究小组检测人类肝癌中PTEN基因突变情况,但对有关PTEN蛋白在肝癌中的表达情况了解甚少;p53基因突变是肝癌发生的机制之一,但对于p53基因突变与肝癌某些生物学行为的相关性,不同研究的结果不一。我们拟通过检测PTEN、p53蛋白在肝癌中的表达来了解PTEN、p53与肝癌发生和进展的关系。方法：本研究共取62例石蜡包埋的肝癌标本,所有组织切片均含肝癌组织及癌旁组织。采用免疫组化SP法检测PTEN及突变的p53蛋白的表达情况。结果：62例标本中癌旁肝组织均呈现明确的PTEN阳性染色（胞浆）,只有29例（46.8％）标本中肝癌组织呈阳性染色,PTEN在有包膜或无侵袭性肝癌中的表达明显高于无包膜或有侵袭性的肝癌。所有标本癌旁肝组织均未见p53阳性染色,21例肝癌组织p53染色呈阳性（胞核）。P53蛋白的表达与肝癌侵袭性或分化程度无关。结论：PTEN的失表达及p53基因突变可能在肝癌发生中发挥作用,PTEN失表达还可能与肝癌的恶性进展有关。     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU87增殖及侵袭活性的影响

背景与目的:PTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验研究外源性PTEN转染后,人膀胱癌细胞系BIU87增殖和侵袭活性的改变。方法:将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测PTEN基因转染前、后BIU87细胞增殖和侵袭活性的变化。结果:pBp-PTEN的酶切鉴定证实含有目的基因PTEN;pBp-PTEN-BIU87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-PTEN-BIU87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(P<0.05),以正常BIU87细胞为对照,PTEN基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%。细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-PTEN-BIU8为39.3±7.7,BIU87和pBp-BIU87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-PTEN-BIU87细胞明显少于两对照组(P<0.05)。结论:抑癌基因PTEN转染能降低膀胱癌细胞的增殖和侵袭活性。     

喉鳞状细胞癌中p73、PTEN基因的表达及其临床意义

背景与目的:目前尚缺乏有效评价喉鳞癌预后的理想指标。本研究旨在探讨喉鳞状细胞癌(laryngealsquamouscellcarcinoma,LSCC)中p73、PTEN(phosphatesandtensionhomologdeletedonchromosometen,PTEN)基因的表达与患者临床、病理参数和预后的关系。方法:采用免疫组化SABC技术检测65例喉鳞癌组织及23例癌旁组织中p73、PTEN基因的表达情况。结果:P73、PTEN蛋白在65例喉鳞癌组织及23例癌旁组织中的表达存在显著性差异(P<0.05),P73蛋白阳性率分别为58.5%(38/65)与17.4%(4/23),PTEN蛋白阳性率分别为49.2%(32/65)与95.7%(22/23)。65例喉鳞癌组织中,P73蛋白在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、远处转移及复发患者中的表达水平较Ⅰ～Ⅱ期、无转移及初发患者高(P<0.05);PTEN蛋白的表达在TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化癌和无颈淋巴结转移及远处转移患者中的表田慎之,等.喉鳞状细胞癌中p7达水平较Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有转移患者高(P<0.05)。术后生存5年以上者的PTEN蛋白阳性率(66.7%)较生存时间不超过5年者(27.3%)高(P<0.05)。喉鳞癌组织中p73、PTEN基因的表达未见显著性相关(P>0.05)。结论:PTEN蛋白的表达对预测喉鳞癌的预后有一定参考价值。     

Glioma cell VEGFR-2 confers resistance to chemotherapeutic and antiangiogenic treatments in PTEN-deficient glioblastoma

Loss of the tumor suppressor phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 (PTEN) is a prerequisite for tumor cell-specific expression of vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR)-2 in glioblastoma defining a subgroup prone to develop evasive resistance towards antiangiogenic treatments. Immunohistochemical analysis of human tumor tissues showed VEGFR-2 expression in glioma cells in 19% of specimens examined, mainly in the infiltration zone. Glioma cell VEGFR-2 positivity was restricted to PTEN-deficient tumor specimens. PTEN overexpression reduced VEGFR-2 expression in vitro, as well as knock-down of raptor or rictor. Genetic interference with VEGFR-2 revealed proproliferative, antiinvasive and chemoprotective functions for VEGFR-2 in glioma cells. VEGFR-2-dependent cellular effects were concomitant with activation of ''kappa-light-chain-enhancer’ of activated B-cells, protein kinase B, and N-myc downstream regulated gene 1. Two-photon in vivo microscopy revealed that expression of VEGFR-2 in glioma cells hampers antiangiogenesis. Bevacizumab induces a proinvasive response in VEGFR-2-positive glioma cells. Patients with PTEN-negative glioblastomas had a shorter survival after initiation of bevacizumab therapy compared with PTEN-positive glioblastomas. Conclusively, expression of VEGFR-2 in glioma cells indicates an aggressive glioblastoma subgroup developing early resistance to temozolomide or bevacizumab. Loss of PTEN may serve as a biomarker identifying those tumors upfront by routine neuropathological methods.