神经干细胞治疗胶质瘤的实验研究进展

神经胶质瘤是医学治疗的难点之一,手术切除肿瘤容易复发,放疗和化疗对术后残存的肿瘤细胞虽有一定的清除作用,但疗效均不理想。而神经干细胞（neuralstemcells,NSCs）移植已经应用于神经系统多种疾病的治疗,NSCs的出现也为神经胶质瘤带来了新的希望,本文就NSCs在神经胶质瘤治疗方面的研究现状作一综述。     

树突状细胞瘤苗诱导的抗神经胶质瘤作用体外实验研究

目的 :研究负载自体神经胶质瘤抗原的树突状细胞 (DCs)瘤苗在体外诱导的特异性细胞毒性淋巴细胞 (CTL)对神经胶质瘤细胞的杀伤效应。方法 :以组合酶消化法从新鲜神经胶质瘤手术标本中获取神经胶质瘤细胞 ,冻融制备神经胶质瘤抗原。GM -CSF、IL -4体外诱导外周血单个核细胞 (PBMC)获得DCs并负载神经胶质瘤抗原 ,继而以其刺激自体T淋巴细胞制备神经胶质瘤抗原特异性CTL ;用CytoTox96TM检测CTL对患自身神经胶质瘤细胞体外杀伤效应。结果 :负载神经胶质瘤抗原DCs诱导的特异性CTL对患者自身神经胶质瘤细胞的杀伤率达88 17 % ,显著高于LAK细胞的杀伤率 (P<0 05)。且其对同种不同分化类型的神经胶质瘤细胞株 (P<0 01)。结论 :负载神经胶质瘤抗原的DCs体外可诱导出高效而特异的抗神经胶质瘤效应 ,提示以DCs为中心的肿瘤生物治疗作用可望提高神经胶质瘤综合治疗水平     

胶质瘤干细胞的研究进展

神经胶质瘤是中枢神经系统肿瘤中最常见的、发病率最高的原发性恶性肿瘤,严重威胁人类健康。随着研究的不断深入,人们对胶质瘤也有了更深刻的认识。本文对胶质瘤干细胞理论的研究进展及其对临床实际工作的重要指导意义进行综述。     

TRAIL基因修饰间充质干细胞对神经胶质瘤细胞杀伤作用研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡配体（TRAIL）基因修饰间充质干细胞（TRAIL-MSCs）对神经胶质瘤细胞的杀伤作用。方法 复苏冻存的脐带间充质干细胞（UC-MSCs）种子库细胞,通过慢病毒转染的方法制备TRAIL-MSCs。ELISA法检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs细胞上清中TRAIL的含量;采用CCK-8试剂盒法检测重组TRAIL蛋白（rTRAIL,0、25、50、100、200、400 ng/mL）对U87MG、U251细胞的增殖抑制情况;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测U87MG、U251细胞中死亡受体DR4、DR5 mRNA表达水平,比较2种细胞对TRAIL的敏感性;将U87MG、U251细胞分别分为对照组、UC-MSCs培养上清（阴性对照）组、TRAIL-MSCs培养上清（含TRAIL约100 ng/mL）组和rTRAIL（100 ng/mL）组,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测DR4、DR5 mRNA表达水平。结果 TRAIL-MSCs培养上清中TRAIL表达量显著高于UC-MSCs（P<0.01）;rTRAIL对U87MG细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为162 ng/mL,而对U251细胞的IC₅₀大于800 ng/mL,U87MG对TRAIL的敏感性更高,差异显著（P<0.01）;U87MG细胞DR4、DR5 mRNA相对表达量均显著高于U251细胞（P<0.01）;与对照组比较,TRAIL-MSCs培养上清、rTRAIL对U87MG、U251细胞均有显著增殖抑制及促进凋亡的作用（P<0.05、0.01） ,TRAIL-MSCs培养上清作用效果显著优于rTRAIL（P<0.01）;与U251相比,U87MG对TRAIL-MSCs培养上清的敏感性更强;TRAIL-MSCs培养上清处理的U87MG细胞DR4、DR5 mRNA表达量显著降低（P<0.01）。结论 TRAIL-MSCs对神经胶质瘤细胞有显著增殖抑制和杀伤作用,其功能可能与其受体DR4及DR5有关。     

cyclin D3调控LN308胶质瘤细胞迁移研究

目的探讨细胞周期蛋白D3(CCND3)在LN308胶质瘤细胞中的作用。方法根据NCBI GenBank中cyclin D3序列设计双链siRNA,利用western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND3对LN308胶质瘤细胞周期进程的影响;通过transwell检测CCND3对LN308细胞迁移的影响。结果经western blotting检测,成功抑制了CCND3的表达。并且发现与对照组相比较,抑制CCND3表达对LN308细胞周期无影响,但是可以显著抑制LN308细胞的迁移。结论 LN308细胞中CCND3并不发挥调控细胞周期的功能,而是影响细胞的迁移,促进肿瘤的发展。本研究为临床上靶向治疗胶质瘤提供了理论基础。     

神经干细胞研究及其移植应用前景

医学上传统的概念是神经细胞难以再生,神经干细胞(neural stem cells, NSCs)的发现为神经细胞移植治疗打开了一个全新的视野.目前,NSCs在中枢神经系统(CNS)损伤后修复、退行性病变、先天性疾病等治疗中的机制及意义日益成为人们研究的焦点.据此,就NSCs的主要研究方法和移植应用进行综述.     

神经干细胞研究及其移植应用前景

医学上传统的概念是神经细胞难以再生,神经干细胞(neuralstemcells ,NSCs)的发现为神经细胞移植治疗打开了一个全新的视野。目前,NSCs在中枢神经系统(CNS)损伤后修复、退行性病变、先天性疾病等治疗中的机制及意义日益成为人们研究的焦点。据此,就NSCs的主要研究方法和移植应用     

神经干细胞及临床应用展望

1　背景知识在实验培养中能无限增殖并能向不同方向或谱系分化的细胞统称干细胞。成体的血液系统、皮肤和黏膜早已发现有干细胞的存在 ,这些干细胞在一生中维持着血细胞、皮肤和黏膜上皮的更新。至于神经系统 ,人们过去认为 :在胚胎初始发育过程中 ,存在着大量的神经干细胞 ,其迁移定位后 ,部分干细胞最终分化成各种类型的神经细胞 ,到胚胎晚期 ,神经干细胞逐渐减少 ,以至出生后完全消失 ,即认为在成体神经系统不存在干细胞 ,神经系统一旦发育成熟 ,细胞即不能再生。这也导致了临床上对正常神经细胞数量减少之类的疾病产生“治疗无望”的看…     

神经胶质瘤患者细胞免疫的近代实验研究

本文检测了40例脑胶质瘤患者淋巴细胞亚群、NK细胞杀伤活性、淋巴细胞增殖率以及免疫抑制活性的变化,与正常对照组(40例)相比较,该四项免疫学指标均有显著性差异(均P<0.001),并阐述了患者细胞免疫功能低下可能与患者血清免疫抑制因子有关。     

HEF1对神经胶质瘤细胞U251的增殖﹑凋亡、侵袭和迁移的研究

目的：探讨HEF1对神经胶质瘤细胞U251增殖、凋亡、侵袭和迁移影响情况。方法通过RT-PCR、Western Blot检测脑组织正常标本与胶质瘤细胞U251中HEF1的表达水平,化学合成HEF1基因小干扰RNA（siRNA）下调其基因表达,检测siRNA对U251细胞的生物学行为的影响。MTT法、Transwell、Hochest染色分别检测细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡。结果HEF1基因在正常脑组织标本中的表达水平明显低于胶质瘤细胞。与对照组相比,干扰HEF1的表达,神经胶质瘤细胞U251增殖、侵袭和迁移能力受到显著抑制,细胞凋亡明显增强。结论HEF1促进神经胶质瘤恶性增殖及侵袭,抑制细胞凋亡,有可能成为分子治疗有效靶点。     

骨髓基质细胞和神经干细胞体外共培养的实验研究

目的:研究神经干细胞(NSCs)和骨髓基质细胞(MSCs)共培养时对各自分化的影响。方法:将2种细胞按接种数目分为5组,A组为NSCs∶MSCs=105∶0;B组为NSCs∶MSCs=105∶104;C组为NSCs∶MSCs=105∶105;D组为NSCs∶MSCs=104∶105;E组为NSCs∶MSCs=0∶105。培养7d后分别进行5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)、半乳糖神经酰胺(GalC)免疫细胞化学双染色。结果:随着MSCs比例的提高,各组BrdU和NSE或MAP2的双阳性细胞表达差异有统计学意义(P<0.05),且B、C及D组分别与A组比较差异亦有统计学意义(均P<0.01);随NSCs比例的增高,B、C、D组NSE、MAP2和GFAP双阳性MSCs表达逐渐增高(均P<0.01)。结论:MSCs可以促进NSCs分化为神经元,而且在NSCs诱导下部分MSCs可以转化为神经元和星形细胞。     

托吡酯促进体外培养神经干细胞增殖的实验研究

目的:研究托吡酯对体外培养神经干细胞的促增殖作用。方法:取新生小鼠大脑进行神经干细胞原代培养,托吡酯按0.4、2、10μmol.L-13个量级(或3种浓度)加入神经干细胞培养基中,同时设立溶媒对照组和阳性对照组,通过神经球生成数目及MTT法定量比较,分析不同浓度托吡酯对神经干细胞分裂增殖的影响。结果:2、10μmol.L-1托吡酯组神经球数目分别为20.67±4.04和49.68±3.79;MTT比色结果分别为0.3546±0.0705和0.5018±0.0369,明显高于溶媒对照组(7.34±2.31、0.2880±0.0093,P<0.01)。结论:托吡酯具有促进神经干细胞增殖的作用。     

姜黄素对胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨姜黄素对胶质瘤细胞系U87细胞增殖及迁移能力的影响。方法应用CCK-8比色法检测经正常培养液及含不同浓度（25、50、100μmol/L）姜黄素的培养液培养24、48、72 h后的U87细胞的存活率;应用细胞划痕实验检测100μmol/L姜黄素对U87细胞迁移能力的影响;将20只SD大鼠制备成胶质瘤模型,随机分成对照组及实验1、2、3组,每组5只,模型制备后第7天对照组给予生理盐水灌胃,实验1、2、3组分别给予姜黄素100、200、300 mg/kg灌胃,1/d,连续14 d,第15天用microPET-CT对载瘤大鼠肿瘤体积进行测定。结果 U87细胞存活率随着培养液中姜黄素浓度的升高和培养时间的延长而降低（ P〈0．05）;给予100μmol/L姜黄素的培养液培养24和48 h后U87细胞迁移度均低于空白对照组（P〈0．05）;实验2、3组肿瘤体积均小于实验1组和对照组（P〈0．05）。结论姜黄素可抑制胶质瘤U87细胞的增殖及迁移。     

Feridex标记胎盘来源的间充质干细胞分化为神经干细胞的实验研究

目的分离胎盘组织来源的间充质干细胞并诱导分化为神经干细胞,以期找到能成功标记神经干细胞的方法。方法将胎盘组织剪碎后消化、培养,加入神经干细胞诱导因子10ng/mL表皮生长因子（EGF）＋10ng/mL重组人碱性成纤维生长因子（bFGF）＋DMEM/F12,并分别添加相应浓度的血清,预诱导3d后加入DMEM/F12＋0.1μmol/L全反式维甲酸（RA）,10ng/mL胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）＋10ng/mL脑源性神经营养因子（BDNF）进行正式诱导7d。结果诱导10d后用Feridex标记诱导后的细胞,普鲁士蓝染色显示90%以上的干细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒,Nestin染色显示阳性。结论胎盘来源的间充质干细胞能成功诱导为神经干细胞,且Feridex可成功标记诱导后的细胞。     

腺苷促进体外培养神经干细胞增殖作用研究

目的研究腺苷促进体外培养神经干细胞（NSCs）增殖作用。方法取新生小鼠大脑进行神经干细胞原代培养,观察神经球生成情况,特异性蛋白质免疫细胞化学染色和BrdU标记鉴定并判断其增殖能力;将腺苷按0.4,2.0,10.0 μmol&#8226;L 13个浓度加入神经干细胞培养基,同时设立溶媒对照组和阳性对照组,通过观察神经球形态、神经球生成数目及 MTT法定量比较,分析不同浓度腺苷对神经干细胞分裂增殖的影响。结果培养物中有大量神经球生成,神经干细胞特异性蛋白质免疫细胞化学染色呈阳性,BrdU标记亦呈阳性反应,所培养的细胞为神经干细胞,具有增殖能力;腺苷中、高浓度组神经球数目、MTT比色结果明显高于溶媒对照组。结论腺苷具有促进NSCs增殖作用。     

An Aminopropyl Carbazole Derivative Induces Neurogenesis by Increasing Final Cell Division in Neural Stem Cells

P7C3 and its derivatives, 1-(3,6-dibromo-9H-carbazol-9-yl)-3-(p-tolylamino)propan-2-ol (1) and N-(3-(3,6-dibromo-9H-carbazol-9-yl)-2-hydroxypropyl)-N-(3-methoxyphenyl)-4-methylbenzenesulfonamide (2), were previously reported to increase neurogenesis in rat neural stem cells (NSCs). Although P7C3 is known to increase neurogenesis by protecting newborn neurons, it is not known whether its derivatives also have protective effects to increase neurogenesis. In the current study, we examined how 1 induces neurogenesis. The treatment of 1 in NSCs increased numbers of cells in the absence of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor 2 (FGF2), while not affecting those in the presence of growth factors. Compound 1 did not induce astrocytogenesis during NSC differentiation. 5-Bromo-2′-deoxyuridine (BrdU) pulsing experiments showed that 1 significantly enhanced BrdU-positive neurons. Taken together, our data suggest that 1 promotes neurogenesis by the induction of final cell division during NSC differentiation.     

大鼠神经干细胞和雪旺细胞体外共培养生长特性

目的：探讨雪旺细胞（SC）对神经干细胞（NSC）的生物作用，为临床移植神经细胞提供依据和方法。方法：将神经干细胞分别在有雪旺细胞骨架、分泌物及活雪旺细胞饲养层的不同环境中培养，同时设立各自对照组，观察神经干细胞迁徙、贴壁能力、分化、细胞代谢、轴突生长、免疫组化神经丝染色情况。结果：与雪旺细胞有关的实验组神经干细胞大量分化为具有细长突起的细胞，神经丝（NF）标记阳性细胞多，突起长（特别是经胎牛血清培养过的雪旺细胞实验组），细胞贴壁力强，细胞生长代谢旺盛，突起粗壮并且生长速度快。结论：雪旺细胞能促进神经干细胞分化，并促进其生长。     

依达拉奉对谷氨酸所致神经干细胞损害的保护作用

目的探讨依达拉奉对谷氨酸所致神经干细胞损害的保护作用及机制。方法取大鼠13.5 d胚胎皮质,提取神经干细胞,分为谷氨酸处理组(500μmol/L)、依达拉奉干预组(500μmol/L谷氨酸+500 ng/mL依达拉奉)和正常对照组。谷氨酸及依达拉奉处理24 h后,应用光学显微镜高倍下观察各组细胞的形态和数量;并对各组细胞作DAPI及TUNEL染色,计数阳性细胞。结果与正常对照组比较,谷氨酸处理组细胞的数量减少(P<0.05);依达拉奉组细胞的数量较谷氨酸组明显增多(P<0.05)。谷氨酸处理组的TUNEL阳性细胞明显多于正常对照组(P<0.05),依达拉奉组的TUNEL阳性细胞明显少于谷氨酸组(P<0.05)。结论依达拉奉通过拮抗谷氨酸诱导的细胞凋亡对谷氨酸所致的神经干细胞损害起到保护作用。     

神经干细胞移植治疗小脑性共济失调的疗效评定

目的探讨神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）移植对小脑性共济失调的治疗作用。方法对216例小脑性共济失调患者进行NSCs腰椎脊髓蛛网膜下腔注射,分别于治疗前及治疗后180d对患者日常生活自理能力进行评分。结果采用NSCs移植治疗前和治疗后180d的生活自理能力评分分别为（52.25±9.12）、（73.50±11.35）,有显著差异（P〈0.05）。结论 NSCs移植治疗能改善小脑性共济失调患者的日常生活自理能力,提高生存质量。     

神经干细胞移植治疗脊髓损伤临床疗效观察

目的探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的临床疗效。方法对9例脊髓损伤患者进行脊髓探查加损伤局部神经干细胞移植术,术前及术后半年应用ASIA评分系统进行神经功能评定。结果患者在皮肤感觉、运动、二便、排汗等方面均有一定程度的改善;术后ASIA评分与术前比较,两者间有显著差异。结论神经干细胞移植可以改善脊髓损伤患者的感觉、运动、二便及排汗等多方面的神经功能,提高患者生活质量。