脓毒症时机体免疫机制变化及意义

脓毒症是感染引起的全身炎症反应综合征,发生机制涉及炎症、感染、免疫、凝血及组织损伤等,其中免疫功能紊乱导致的促炎反应/抗炎反应动态失衡是其发展的重要原因之一.本文扼要介绍Toll样受体、中性粒细胞、树突状细胞和调节性T细胞等因素在免疫反应中的作用机制,以及在脓毒症发病中的变化与意义.     

卡介苗对哮喘患儿细胞免疫调节的研究进展

卡介苗使树突细胞正调节CD40、CD80、Ⅱ类分子等表面分子的表达,并使活化的T细胞分泌γ干扰素;使辅助T细胞Th1产生增多而Th2分泌减少,诱导Th1型免疫反应,抑制Th2型免疫应答,纠正Th1/Th2的失衡;显著抑制γδT细胞活性,使γ干扰素增高,而白细胞介素-4下降;能上调CD4+ CD25+ 调节性T细胞的表面Toll样受体表达,促进其增殖,发挥其调抑功能;促使T细胞活化抑制和凋亡,发挥负向免疫调节作用;抑制GATA-3表达,减少Th2型细胞因子生成;抑制哮喘状态下巨噬细胞集落刺激因子的表达,调节气道巨噬细胞的功能,促使巨噬细胞产生的Th1类细胞因子增多,提高Th1免疫应答,纠正Th1/Th2的失衡.卡介苗可以通过多种机制干预哮喘的发病,为哮喘的治疗提供新的思路.     

Th17细胞与CD4~+CD25~+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的 探讨Th17细胞与CD4+CD25+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜(HSP)免疫发病机制中的作用.方法 过敏性紫癜急性期患儿48例,采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的比例,采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+ T细胞IL-17A、IL-17F、转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-6、TGF-β等mRNA表达;同期40例同龄健康儿童作为对照.结果 过敏性紫癜急性期患儿CD4+T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01).Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6 mRNA表达明显增高(P<0.01).CD4+CD25+调节性T细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01).结论 Th17等促炎性T细胞高表达和CD4+CD25+调节性T细胞数量减少导致的免疫抑制效应不足,是导致过敏性紫癜免疫失衡的重要原因,IL-6高表达与此密切相关.     

微小RNA在脓毒症发病机制的作用研究进展

微小RNA (MicroRNAs)为一类非编码小RNA,通过结合目标mRNA,抑制相关蛋白的合成参与基因调控.研究发现微小RNA参与脓毒症免疫调控.miR-152、miR-148通过下调钙调蛋白及抗原特异性CD4+T淋巴细胞增殖抑制抗原提呈作用.miR-29家族调节胸腺细胞退化.miR17-miR92参与调节B细胞分化与凋亡.miR-146、miR-155、miR-101和miR-132等通过直接或间接下调炎症因子释放抑制免疫反应.miR-124抑制糖皮质激素受体α mRNA,是脓毒症糖皮质激素抵抗的环节之一.因此,明确微小RNA在脓毒症中的作用机制对脓毒症诊断及治疗有重要意义.     

哮喘发病中Toll样受体的作用

Toll样受体可识别多种病原微生物及其产物,并且是联系天然免疫与获得性免疫的重要分子,结合脂多糖等配体后,通过激活天然免疫,产生γ干扰素等辅助T细胞(Th)1型细胞因子;诱导幼稚树突细胞发育成熟,并呈递抗原,促进Th1型免疫反应,抑制Th2型免疫反应;树突细胞上的Toll样受体与病原菌的病原相关分子模式结合,可能通过抑制性共刺激分子或分泌白介素-10、转化生长因子-β等调节性因子,促进Th0向具有调节功能的调节性T细胞转化.从而调节哮喘的Th1/Th2失衡.     

CD4+CD25+调节性T细胞在免疫性血小板减少性紫癜发病机制中的作用

免疫性血小板减少性紫癜是一种以血小板破坏增加和(或)血小板生成异常为特点自身免疫性疾病,以皮肤、黏膜或内脏出血为主要表现.该病发病机制复杂,目前尚未明确.CD4+ CD25+调节性T细胞为抑制细胞,是具有独特免疫调节功能的成熟CD4+T细胞亚群,在小鼠和健康人体中约占外周血CD4+T细胞的5％ ～10％,占人体外周血单个核细胞的1％ ～2％,其通过多种途径对免疫反应发挥抑制效应,能维持内环境的稳定.CD4+ CD25+调节性T细胞功能紊乱或数目异常是导致自身免疫性疾病的重要因素之一,在免疫性血小板减少性紫癜的发生、发展中发挥重要的作用.该文对CD4+ CD25+调节性T细胞的特征和作用及其在免疫性血小板减少性紫癜发病中的作用的研究进展作一综述.     

Toll样受体在类风湿性关节炎中的作用

Toll样受体(TLR)是Ⅰ型跨膜受体,在天然免疫和获得性免疫反应中发挥重要作用,近年来被认为是天然免疫系统中的关键受体.TLR通过识别外源性、内源性配体激活天然免疫;同时诱导产生的多种细胞因子是影响初始T细胞分化的关键因素,TLR异常活化可引起Th1、Th2、Th17、Treg细胞功能失衡,从而导致自身免疫性疾病发生.     

Th17/Treg平衡在炎症性肠病中的意义

炎症性肠病为一类慢性非特异性肠道炎性疾病,肠道黏膜免疫系统异常反应在炎症性肠病发病机制中发挥重要作用.辅助性T细胞17(Thelper 17 cell,Th17)可介导慢性炎症和自身免疫性疾病的发生,调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)有抑制自身免疫的功能,Th17/Treg细胞平衡是维持肠道免疫稳态的重要因素.抗原提呈细胞、微生物、一些关键分子、天然化合物可以调节Th17/Treg平衡,从而为治疗炎症性肠病提供新的方法.     

血管活性肠肽在Toll样受体表达调控中的作用

随着Toll样受体(TLR)及其信号传导途径研究的日趋深入,人们对脓毒症的发病机制和治疗方案有了新的认识,如研发TLR及其下游信号分子的拟似剂和拮抗剂来调节炎症因子的生成量等.但炎症时各促炎因子相互作用形成一个复杂网络,阻断单一促炎因子疗效并不显著.而血管活性肠肽(VIP)作为一种神经免疫活性肽,可通过影响细胞因子的产生、调节炎症反应、影响胸腺细胞的分化、调节辅助T细胞应答来参与免疫自稳调节,并可抑制T细胞的凋亡及T细胞介导的细胞毒作用以发挥抗炎效用.由此看来,VIP和TLR在脓毒症中均扮演着特定的角色.该文就目前VIP及TLR的相关性研究作一综述.     

哮喘患儿CD4+T细胞增殖及活化诱导凋亡机制研究

目的 通过体外细胞增殖及活化诱导细胞凋亡试验探讨小儿哮喘免疫炎症及Th细胞过度活化的相关机制.方法 哮喘组患儿21例,年龄(9.6±23)岁;正常对照组20例,年龄(9.7±1.9)岁.流式液相多重蛋白定量技术检测Th1/Th2/Th17细胞因子;磁珠分离CD4+T细胞,PHA结合anti-CD3体外刺激后分析其增殖能力及活化后凋亡情况;最后以相对定量PCR测定凋亡及增殖相关蛋白Fas、FasL、Bcl-2的mRNA表达情况.结果 哮喘组患儿血清细胞因子水平较正常对照组显著增高[IL-4:(2451±1.052)ng/Lvs(1.796±0.615)ng/L,P=0.018;IL-10:(1.920±0.813)ng/Lvs(1.390±0.162)ng/L,P=0.006;TNF:(5.112±5.842)ng/Lvs(1.506±0.551)ng/L,P=0.009];哮喘组CD4+T细胞增殖能力显著强于正常对照组[OD450:(0.498±0.052)vs(0.274±-0.032),P＜0.001],而活化诱导后细胞凋亡率则显著低于正常对照组[(35.62±0.05)％vs(65.28±3.85)％,P＜0.001];哮喘组患儿CD4+T细胞Fas mRNA表达较正常对照组显著降低,而Bcl-2表达则显著高于正常对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.001),FasL表达差异无统计学意义(p＞0.05).结论 哮喘患儿CD4+T细胞Fas表达降低及Bcl-2表达升高在一定程度上抑制了Th细胞活化后凋亡并且促进其增殖,而凋亡抑制及细胞增殖可能导致了哮喘患儿Th细胞过度活化和炎性浸润加剧.     

Increase of cord blood cytokine-producing T cells in intrauterine infection

BACKGROUND: Although infection is a frequent and important cause of morbidity and mortality in the neonatal period, evaluation of the immune system in cases of intrauterine infection is not easy. The subsets of T helper (Th) 1, which produce mainly interferon gamma (IFN-gamma), and Th2, which produce interleukin (IL) -4, have been implicated in the regulation of many immune responses. In this study, we investigated Th1 and Th2 subsets in the cord blood (CB) to evaluate the role of CB T cells in the intrauterine infections. METHODS: We used an intracellular cytokine-staining technique with determination by flow cytometry to study IFN-gamma-producing T cells and IL-4-producing T cells in the CB of six neonates with perinatal intrauterine infection and 17 uninfected neonates. RESULTS: The CB from neonates with intrauterine infections had more IFN-gamma-producing CD3+T cells than that from uninfected neonates. The percentage of CB IFN-gamma-producing CD3+T cells in the infected neonates correlated with the duration of membrane rupture before the onset of labor, but not with the level of C-reactive protein. The infected neonate born after the longest duration of membrane rupture showed an increased percentage of IL-4-producing CD3+T cells. CONCLUSIONS: Our results suggest that the increase of CB IFN-gamma and IL-4- producing T cells is part of the immune system directed against perinatal intrauterine infections.     

Rapid T-cell receptor CD4+ repertoire reconstitution and immune recovery in unrelated umbilical cord blood transplanted pediatric leukemia patients

Umbilical cord blood transplantation has been successfully employed for treatment of many immune and hematologic disorders. The aim of this study was to evaluate the quality of immune reconstitution after umbilical cord blood transplantation in 6 leukemia children. T-cell receptor Vbeta third complementary region spectratyping was used for monitoring the contribution of the thymic pathway in patients' immune reconstitution. Absolute numbers of lymphocyte subsets (T, B, and natural killer), and lymphoproliferative in vitro response to mitogens, recovered within 12 months after transplantation. Furthermore, an overall diversification of T-cell receptor complexity in the repopulating T cells, with a polyclonal Gaussian profiles in most (74%) of total families was observed. Noteworthy, we showed a wider and more rapid reconstitution of T-cell receptor CD4+ T cell families compared with T-cell receptor CD8+ T ones still exhibiting some perturbations at 24 months. These data show that umbilical cord blood transplantation allows immune reconstitution already within 12 months with generation of newly diversified CD4+ T lymphocyte subsets.     

调节性T细胞在小鼠巨细胞病毒感染胚胎成纤维细胞机制中的免疫调控作用

目的 体外研究调节性T细胞（Treg）在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）感染小鼠巨细胞病毒（MCMV）机制中的免疫调节作用。方法 采用尼龙毛柱和MACS Treg磁珠法获得纯化的Treg和去除Treg的T细胞（TdepTreg），建立TdepTreg和添加Treg的T细胞与感染MCMV的MEF（MEFMCMV）体外共培养细胞模型。用蚀斑法检测共培养细胞上清中感染性病毒量；流式细胞术检测共培养体系中Tc1(CD3+CD8+IFN-γ+)，Tc2（CD3+CD8+IL4+），Th1（CD3+CD8-IFN-γ+），Th2（CD3+CD8-IL-4+）细胞比率变化；双抗体夹心ELISA法检测共培养细胞上清中转化生长因子-β（TGF-β）和IL-10蛋白表达水平。结果 TdepTreg与MEFMCMV共培养3 d后上清中感染性病毒量较感染对照组显著降低，同时效应性T细胞各亚群比率较非感染对照组显著增加。向TdepTreg-MEFMCMV体系中添加Treg可增加共培养体系中感染性病毒量，同时Tc1、Tc2和Th1细胞比率显著减少，且均与Treg比率存在剂量相关性；而Th2比率仅在Treg比率增至20%时显著低于感染对照组。添加Treg的共培养体系中IL-10和TGF-β蛋白表达水平随Treg比率增加而增高，与Treg存在正性相关。结论 Treg可通过IL-10、TGF-β等途径抑制效应性T细胞的免疫保护作用，并且由于Treg抑制作用的不均衡性，导致Th1/Th2和Tc1/Tc2平衡失调，创造了一个利于CMV增殖的免疫环境。     

肠道病毒71型感染患儿免疫功能探讨

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)感染患儿免疫功能变化与病情程度的关系.方法 患儿46例,健康同龄儿童12例,根据病情由轻到重将患儿分为4组:手足口病组11例、中枢神经系统病变组20例、中枢神经系统病变伴自主神经功能失调组10例、神经源性肺水肿组(pulmonaryedema,PE组)5例.进行下述检测:CD14~+单核细胞人类白细胞DR抗原(HLA-DR)表达率、淋巴细胞免疫分型、CD4~+CD25~+Foxp3~(high)调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)及TH17细胞比例;白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、转录生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17A(IL-17A)血浓度;CD~4T细胞Foxp3、ROR-γt基因表达;血清免疫球蛋白及补体等.结果 (1)前炎症细胞因子TNF-α及IL-1β在轻症患儿中增高,随病情加重而下降,PE组明显降低(P<0.05);抗炎细胞因子IL-10及IL-10/TNF-α比值随病情加重增高,PE组增高明显(P<0.05).(2)HLA-DR、CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、NK细胞随病情加重呈现逐步下降趋势,PE组下降最为明显(P<0.05).各组间B淋巴细胞及抗体差异无统计学意义.(3)Treg细胞比例、转录因子Foxp3 mRNA及诱导因子TGF-β血浓度随病情加重降低,而TH17细胞比例、IL-17A血浓度、转录因子ROR-γt mRNA及诱导因子IL-6血浓度随病情加重升高.结论 EV71感染患儿机体免疫功能随病情程度而变化,轻症患儿处于全身炎症反应状态,重症或危重症病例处于代偿性抗炎症反应或混合性拮抗反应状态,对EV71感染的免疫调控治疗应强调分阶段、个体化.     

孟鲁司特钠对哮喘小鼠气道重塑及Th17/CD4~+CD25~+Treg表达的影响

目的探讨白三烯受体拮抗剂孟鲁司特钠干预哮喘小鼠后气道重塑及Th17细胞/CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)表达的动态变化及其相关性。方法将Balb/c小鼠随机分成空白组、哮喘组、孟鲁司特钠组,每组经腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝混悬液致敏并雾化吸入2.5%OVA以制备哮喘气道重塑模型,空白组以生理盐水替代;孟鲁司特钠组雾化前给予孟鲁司特钠混悬液灌胃,空白组及哮喘组以生理盐水代替。3组分别在雾化2周、4周及8周后的24 h内随机处死8只小鼠。肺组织病理切片观察气道重塑程度;流式细胞技术检测脾组织中Th17、CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分比。结果各时间点哮喘组和孟鲁司特钠组支气管总管壁厚度、平滑肌厚度均高于空白组(P0.05),干预8周时孟鲁司特钠组较哮喘组上述变化明显减轻(P0.05)。与空白组比较,各时间点哮喘组和孟鲁司特钠组均显示Th17细胞数增加,与气道重塑呈正相关(P0.05);而CD4~+CD25~+Treg细胞数逐渐降低,与气道重塑呈负相关(P0.05)。干预8周时孟鲁司特钠组与哮喘组比较,Th17细胞数显著下降(P0.05);而CD4~+CD25~+Treg细胞数明显增加(P0.05)。结论孟鲁司特钠干预哮喘小鼠后能减轻气道重塑的发生,且随着用药时间延长,改善越明显;机制可能是通过改善哮喘小鼠体内Th17/CD4~+CD25~+Treg的免疫紊乱,抑制气道炎症反应从而减轻或延缓气道重塑来起作用的。     

Age-related immune reconstitution during highly active antiretroviral therapy in human immunodeficiency virus type 1-infected children

OBJECTIVES: To evaluate the immune reconstitution in HIV-1-infected children in whom highly active antiretroviral therapy (HAART) controlled viral replication and to assess the existence of a relation between the magnitude of this restoration and age. METHODS: All HIV-1-infected children in whom a new HAART decreased plasma viral load below 400 copies/ml after 3 months of therapy were prospectively enrolled in a study of their immune reconstitution. Viral load, lymphocyte phenotyping, determination of CD4+ and CD8+ T cell receptor repertoires and proliferative responses to mitogens and recall antigens were assessed every 3 months during 1 year. RESULTS: Nineteen children were evaluated. Naive and memory CD4+ percentages were already significantly increased after 3 months of HAART. In contrast to memory CD4+ percentages, naive CD4+ percentages continued to rise until 12 months. Age at baseline was inversely correlated with the magnitude of the rise in naive CD4+ cells after 3, 6 and 9 months of therapy but not after 12 months. Although memory and activated CD8+ cells were already decreasing after 3 months, abnormalities of the CD8 T cell receptor repertoire and activation of CD8+ cells persisted at 1 year. HAART increased the response to mitogens as early as 3 months after starting therapy. CONCLUSIONS: In children the recovery of naive CD4+ cells occurs more rapidly if treatment is started at a younger age, but after 1 year of viral replication control, patients of all ages have achieved the same level of restoration. Markers of chronic activation in CD8+ cells persist after 1 year of HAART.     

SOCS低甲基化在儿童过敏性紫癜Th17/Treg细胞失衡中的作用研究

目的 通过研究细胞因子信号转导抑制因子（SOCS）低甲基化与过敏性紫癜（HSP）患儿Th17/Treg细胞失衡的关系,探讨HSP的免疫发病机制。方法 选取2014年5月至2015年1月32例急性期HSP住院患儿为研究对象,另选取行健康体检的28例儿童作为健康对照组。采用ELISA法检测血浆IL-6水平;流式细胞术检测外周血CD4⁺IL-17A⁺T细胞（Th17细胞）比例、CD4⁺CD25⁺调节性T细胞（Treg）比例和CD4⁺T细胞磷酸化STAT3（pSTAT3）蛋白平均荧光强度（MFI）;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测CD4⁺T细胞SOCS1、SOCS3基因mRNA表达;高分辨率熔解曲线（HRM）分析法检测外周血单个核细胞SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'端非翻译区（5'-UTR）可能的STAT3结合位点CpG岛甲基化水平。结果 与健康对照组比较,HSP组血浆IL-6浓度、CD4⁺T细胞pSTAT3的MFI显著增加;HSP组Th17细胞比例显著上调,Treg细胞比例显著下调（P < 0.05）。HSP组患儿急性期外周血单个核细胞SOCS1 mRNA和SOCS3 mRNA水平均显著高于健康对照组（P < 0.05）;HSP组SOCS1 mRNA及SOCS3 mRNA表达均与Th17/Treg比值呈负相关（P < 0.05）。HSP组患儿急性期SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR区可能的STAT结合位点CpG岛呈低甲基化,而健康对照组呈完全去甲基化状态。结论 SOCS1、SOCS3基因低甲基化所致其相对表达不足可能是HSP患儿Th17/Treg失衡的因素之一。     

Th17/Treg细胞比例失衡在儿童原发性免疫性血小板减少症中的意义

目的 探讨Th17/Treg 细胞比例失衡在儿童原发性免疫性血小板减少症(ITP)发病及治疗中的意义。方法 选取2015 年5 月至2015 年8 月确诊为ITP 的32 例患儿作为ITP 组,同期选取22 例健康儿童作为健康对照组,采用流式细胞术分别检测初诊ITP 患儿、丙种球蛋白治疗后的ITP 患儿和健康对照组儿童外周血Th17、Treg 细胞的比例。结果 ITP 患儿治疗前外周血Th17 占CD4⁺T 细胞的比例、Th17/Treg 细胞比值均显著高于治疗后及健康对照组儿童(P<0.05),治疗前Treg 细胞占CD4⁺T 细胞的比例显著低于治疗后及健康对照组儿童(P<0.05);32 例ITP 患儿经治疗后,20 例完全反应,4 例有效,8 例无效,完全反应患儿外周血Th17细胞占CD4⁺T 细胞比例、Th17/Treg 细胞比值显著低于无效患儿(P<0.05)。结论 儿童ITP 中存在Th17/Treg细胞比例失衡,丙种球蛋白可通过调节Th17/Treg 细胞比例变化进而改变患儿细胞免疫功能,治疗过程中检测该比值变化可能对疾病的疗效有一定的预测作用。     

辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞偏倚在川崎病发病机制中的作用

目的 探讨辅助性T淋巴细胞17(Th17)和Foxp3+CD4+调节性T淋巴细胞在儿童川崎病(KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿40例,同龄健康对照儿童30例.KD患儿在静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前直接取血备检.流式细胞术检测其外周血Th17细胞及Foxp3+CD4+T淋巴细胞比例;荧光定量PCR检测其CD4+T淋巴细胞转录因子ROR-γt、Foxp3 mRNA表达;ELISA法检测其血浆中IL-17、IL-6、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-23水平.结果 急性期KD患儿外周血Th17细胞明显升高(P<0.01),而Foxp3+CD4+T淋巴细胞明显降低(P<0.01);急性期KD患儿Th17细胞转录因子ROR-γt转录水平明显高于健康对照组(P<0.01),Foxp3+CD4+T淋巴细胞转录因子Foxp3表达明显降低(P<0.01);血清IL-6、IL-23和IL-17水平明显升高(Pa<0.01),而TGF-β水平无明显变化(P>0.05).结论 Th17促炎性T淋巴细胞高表达和Foxp3+CD4+调节性T淋巴细胞数量减少导致免疫抑制效应不足是导致儿童KD免疫失衡的重要原因,体内相关细胞因子的变化是引起上述改变的原因.