急性髓系白血病和抗细胞因子治疗

近年研究表明急性髓系白血病(AML)祖细胞同正常造血祖细胞相似,对造血生长因子发生反应,对自身分泌的、以直接或间接方式刺激细胞增殖的细胞因子也发生反应;针对这些细胞因子的抗细胞因子措施能抑制AML祖细胞的增殖。提示某些细胞因子 “过剩”在AML发病中的可能作用及抗细胞因子治疗在AML的可能应用。     

体外纯化培养外周血来源的树突状细胞的研究

目的建立来源于外周血的树突状细胞(DCs)的纯化培养方法并观察DCs的形态及功能。方法以Fi-coll密度梯度离心法从正常人外周血中分离出外周血单个核细胞(PBMNC)后,用体外培养的手段,采用培养黏附法或经免疫磁珠筛选法,获得单核细胞;分别加入不同浓度的细胞因子(重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子重组人白介素4重组人肿瘤坏死因子α)诱导培养,培养12 d诱导出DCs;用光镜和电镜观察培养的DCs,用流式细胞仪检测DCs表面的细胞表型(CD80、CD83、CD86、CD1α、HLA-DR),MTT法检测DC对T细胞的刺激增殖效应。结果在体外诱导出外周血来源的成熟DCs,电镜和光镜分析表明具有DCs的典型形态,所培养的细胞表面高表达CD80、CD83、CD86、CD1α、HLA-DR,并具有刺激异基因淋巴细胞增殖的能力。结论应用外周血来源的单个核细胞,采用培养黏附法或免疫磁珠分选法分选出的单核细胞,细胞因子培养12 d可得到成熟正常的DCs。     

细胞因子体外诱导慢性髓细胞性白血病树突状细胞分化的研究

本研究探讨干扰素（IFN）治疗慢性粒细胞性白血病（CML）的可能新机制，为临床治疗CML提供新的思路。用Ficoll密度离心法分离骨髓单个核细胞（BMMNC），用不同细胞因子组合体外诱导培养树突状细胞（DC），在倒置显微镜及光镜下观察DC形态，应用流式细胞术检测其表面标志（CD1a，CD83，CD86，HIA-ABC，HIA-DR，CD54）。MTT法检测其混合淋巴细胞反应（MLR）能力。结果表明：经不同细胞因子组合所诱导出的DC，其特征性表面分子表达率均高于培养前的DC（P〈0．01）；IFN-α＋GM-CSF组DC表达HLA—ABC、HLA-DR明显高于IL-4＋GM-CSF培养组（P〈0．05）；而IFN-α＋GM-CSF4-IL-4组DC的CD86表达率及MLR水平均高于其它细胞因子组合组（P〈0．05）。干扰素耐药组DC表面分子表达率及MLR水平较新诊断组和干扰素治疗有效组均明显减低（P〈0．05），但A、B、C各组的CD86表达率及MLR水平在IFN-α＋GM-CSF4-IL-4因子组合条件下无明显差异。结论：CML骨髓单个核细胞在含有IFN-α的细胞因子组合条件下可分化为具有形态和免疫表型特征的DC，且表达较高的Ⅰ类和Ⅱ类分子、共刺激分子、黏附分子及MLR，表明干扰素治疗CML的机理可能与DC有关，这一结果提示通过增强内源性DC功能可能提高CML临床疗效。     

人外周血树突状细胞的体外诱导培养

目的研究rhGM-CSF和rhIL-4培养体系对树突状细胞(Dendritie Cell,DC)的诱导培养.方法分离正常人或多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中单个核细胞,体外培养树突状细胞.观察培养的DC的形态变化,并应用流式细胞仪分析DC表面的免疫分子的表达.结果100ng/ml rhGM-CSF和500U/ml rhIL-4能使正常人或多发性骨髓瘤患者外周血中单个核细胞分化发育为高表达CD80、CD86、HLAⅠ类和HLAⅡ类抗原的DC.结论rhGM-CSF和rhIL-4能使树突状细胞定向分化成为抗原提呈细胞,为DC疫苗治疗肿瘤感染性疾病奠定了基础.     

人外周血树突状细胞的体外诱导培养

目的研究rhGM-CSF和rhIL-4培养体系对树突状细胞(DendriticCell,DC)的诱导培养。方法分离正常人或多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中单个核细胞,体外培养树突状细胞。观察培养的DC的形态变化,并应用流式细胞仪分析DC表面的免疫分子的表达。结果100ng/mlrhGM-CSF和500U/mlrhIL-4能使正常人或多发性骨髓瘤患者外周血中单个核细胞分化发育为高表达CD80、CD86、HLAⅠ类和HLAⅡ类抗原的DC。结论rhGM-CSF和rhIL-4能使树突状细胞定向分化成为抗原提呈细胞,为DC疫苗治疗肿瘤感染性疾病奠定了基础。     

急性髓系白血病患者体内solGM-Rα的表达研究

为了研究GM-CSF可溶性α受体solGM-Rα在急性髓系白血病患者体内的表达,探讨其与AML患者临床特征的相关性及临床意义,以酶联免疫吸附试验ELISA法检测66例初治AML患者血浆标本solGM-Rα的含量,并与AML患者MIC检测结果及临床资料相结合,进行综合分析。结果表明:AML患者血浆solGM-Rα浓度明显高于正常对照,在M3型最低(3897.75±2651.43pg/ml),而在M5型最高(9990.92±6325.43pg/ml)(P<0.05)。solGM-Rα增高者多见于MIC的M5型,后者常伴有外周血白细胞增多、骨髓粒系原始细胞增多及CD34、CD95和CD116抗原高表达等特性。结论:solGM-Rα升高可能提示预后不良,GM-CSF及其受体系统介导的靶向杀伤值得进一步研究。     

GM-CSF基因修饰、抗原预激的树突状细胞体内诱导白血病细胞分化的实验研究

目的：探讨树突状细胞在肿瘤免疫治疗过程中的作用及机制。方法：以小鼠ＦＢＬ３红白血病细胞皮下接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立荷瘤模型，采用流式细胞仪分析和透射电镜等技术，观察了粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因修饰的抗原预激的树突状细胞体内治疗作用。结果：采用ＧＭＣＳＦ基因修饰的抗原预激的树突状细胞治疗，可以明显抑制白血病细胞生长；白血病细胞表达ＣＤ１４水平增加，同时ＭＨＣⅡ、Ｂ７１、Ｂ７２、ＶＣＡＭ１表达水平亦显著升高；组织学观察显示瘤组织内具有不同分化阶段的单核细胞，电镜下可见白血病细胞体积减小、细胞器较成熟、胞浆中出现较多的溶酶体、核／浆比值减小及白血病细胞的凋亡。肿瘤内部及外周血中，ＣＤ８＋细胞百分率亦较各对照组明显升高。结论：采用ＧＭＣＳＦ基因修饰的抗原预激的树突状细胞治疗，可以体内诱导白血病细胞向成熟单核细胞方向分化     

急性髓细胞白血病树突状细胞的体外定向诱导及鉴定

目的 :从急性髓细胞白血病 (AML)外周血细胞诱导产生树突状细胞。方法 :将AML外周血细胞做原代培养 ,培养过程中加入GM -CSF、IL - 4和TNF -α等三种细胞因子诱导细胞向DC分化 ,并运用形态和免疫表型特点鉴定细胞。结果 :通过形态和免疫表型鉴定均证实 ,培养后多数细胞均符合DC特点 ,培养后细胞CD83和CD86共同表达的阳性率为 5 2 7% ,CD1a和HLA -DR共同表达阳性率为 17 1% ,外周血 1× 10 6个MNC经培养后可产生约 (6～ 11)× 10 4个DC。结论 :体外培养的AML患者外周血单个核细胞可诱导分化出大量DC     

急性髓系白血病患者树突状细胞诱导抗自身白血病T细胞免疫的实验研究

目的　探讨自体白血病细胞裂解物 (ACL)冲击的完全缓解期的急性髓系白血病 (AML CR)患者骨髓细胞衍生的树突状细胞 (DC)体外能否刺激自体T细胞产生特异性抗AML细胞的细胞毒活性。方法　应用羊红细胞玫瑰花结程序从AML CR患者的骨髓中分离出去T细胞的骨髓单个核细胞 (TD BMNC) ,并培养在含联合细胞因子 (GM CSF、IL 4、SCF或TNF α)的条件下以产生DC ,并在培养的第 5天用ACL进行冲击。培养 7d后收获细胞 ,用流式细胞仪测定其成熟DC表型。同时 ,这些细胞与经抗CD3抗体激活过的自体T细胞在低浓度IL 2条件下共培养 7d ,以产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用乳酸脱氢酶释放实验测定溶细胞活性。结果　 1 2例AML CR患者培养的骨髓单个核细胞均分化为成熟DC。其中 6例完成CTL活性实验。当效∶靶 =2 0∶1时 ,ACL冲击的DC致敏的自体T细胞与单纯IL 2或IL 2加无抗原冲击的DC组比较对自体AML细胞有明显的杀伤活性 ,而对K562细胞均无明显影响 (P <0 .0 1 )。结论　用AML CR患者白细胞裂解物冲击的骨髓细胞衍生的DC体外致敏自体T细胞可以产生AML细胞相关抗原特异性的CTL。     

慢性髓系白血病细胞来源的树突状细胞

慢性髓系白血病（ＣＭＬ）细胞起源于ＣＭＬ多能造血干细胞,树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ,ＤＣ）是功能强大的抗原提呈细胞。ＣＭＬ细胞在ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＴＮＦ－α等细胞因子的共同作用下,在体外可以诱导生成ＣＭＬ－ＤＣ,在自体或异体条件下均能刺激Ｔ细胞的显增殖,发挥特异性的抗ＣＭＬ细胞毒效应。     

非血缘异基因外周血造血干细胞移植治疗急性粒细胞白血病一例

目的：开展非血缘关系供者外周血造血干细胞移植（ＰＢＳＣＴ）对血液恶性肿瘤进行根治性治疗，并观察其长期造血重建和移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）及一些移植并发症。方法：选择ＨＬＡ相配非血缘关系的２６岁男性健康供者的外周血干细胞移植给１例急性粒细胞白血病第１次复发缓解后的１１岁男性患儿。预处理方案为分次全身６０Ｃｏ照射（８Ｇｙ）加环磷酰胺（１２０ｍｇ／ｋｇ）和足叶乙甙（３０ｍｇ／ｋｇ）。移植物抗宿主病预防用环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）联合氨甲喋呤（ＭＴＸ）。移植单个核细胞为８．３×１０８／ｋｇ，ＣＤ３４＋细胞为１．０７９×１０８／ｋｇ，ＣＦＵ－ＧＭ为１．０９×１０６／ｋｇ。结果：＋１０天中性粒细胞达１．３０×１０９／Ｌ，＋１８天骨髓显示造血重建，＋２３天ＤＮＡＤ１Ｓ８０显示移植物植入成功，＋１２０天受者血型由ＡＢ型转为供者血型Ａ型。＋１１天出现Ⅰ度急性ＧＶＨＤ，＋１４３天出现慢性ＧＶＨＤ，分别用甲基泼尼龙和泼尼松控制。随访３００余天，患者情况正常。结论：非血缘ＰＢＳＣＴ可以维持长期造血     

老年人急性髓细胞白血病的治疗进展

老年人急性髓细胞白血病(AML)患者接受治疗后,通常耐受性差,预后不佳.对于一般状况较好、无严重脏器合并症的老年人AML患者,标准剂量诱导化疗的疗效优于小剂量化疗及支持治疗;对于接受支持治疗的患者,小剂量化疗的疗效优于强化治疗方案;而无合并症、一般状况较好的老年人AML患者,可行非清髓性预处理异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)及微移植等治疗.此外,新型药物的问世使老年人AML患者的预后得到改善.笔者拟就老年人AML的治疗进展进行综述.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与AML1-ETO阳性急性髓细胞白血病的研究进展

第8号与第21号染色体发生易位,t(8;21) (q22;q22)可使位于第21号染色体的急性髓细胞白血病(AML)1基因与位于第8号染色体的ETO基因融合,形成AML1-ETO融合基因.AML1-ETO能够募集mSin3/N-CoR/ SMART/HDAC共抑制复合物至AML1靶基因的启动子区,使白细胞介素(IL)-3、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等与造血干细胞分化有关的基因及抑癌基因失活,进而导致白血病发生.组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)通过组蛋白乙酰化、染色质重塑,可使AML1-ETO目的基因恢复表达、降解AML1-ETO融合蛋白等发挥抗白血病作用,同时选择性作用于AML1-ETO阳性细胞.目前,HDACI与DNA去甲基化药物、糖皮质激素类药物、热休克蛋白(HSP)-90抑制剂及三氧化二砷(ATO)联合应用治疗AML1-ETO阳性AML还在探索阶段.笔者拟就HDACI对AML1-ETO融合蛋白及其目的基因的作用,以及HDACI联合用药在AML1-ETO阳性AML治疗方面的作用机制进行综述.     

染色质组装因子1,b亚单位在急性髓系白血病细胞中的表达研究

目的 探讨染色质组装因子1,b亚单位（chromatin assembly factor 1,subunit b,CAF1b）在急性髓系白血病（AML）中的表达情况及其特异性.方法 建立流式细胞术检测胞内蛋白的方法,测定AML细胞株KG1a及正常人、特发性血小板减少性紫癜（ITP）、AML、急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性粒细胞白血病慢性期（CML-CP）、多发性骨髓瘤（MM）患者的骨髓单个核细胞中CAF1b的表达情况,利用WinMDI 2.9软件分析流式数据,并行统计分析,比较之间的差异.结果 AML患者骨髓单个核细胞和KG1a细胞CAF1b的表达率分别为（21.40±2.91）％、（27.87±1.48）％,均明显高于正常人、ITP、ALL、CML-CP、MM患者（P均＜0.05）.结论 CAF1b在AML有核细胞中表达特异性增高,提示其可能为AML特异性肿瘤抗原.     

四例伴t(3;3)的急性髓系白血病的临床和实验室分析

目的　探讨伴t(3;3)的急性髓系白血病 (AML)的临床和实验室特征。方法　骨髓细胞直接法和 2 4h短期培养法制备染色体 ,用R显带技术进行细胞遗传学分析。结果　 4例患者的染色体核型分析结果均有t(3;3)的异常 ,临床和血液学改变符合AML诊断。 4例化疗后均未获得完全缓解 ,中位生存期为 4 .5个月。结论　t(3;3)是一种少见的核型异常 ,多存在于髓系白血病 ,其临床预后差。     

急性微分化型髓细胞白血病转换为急性混合表型白血病一例诊断分析

目的 分析1例急性微分化型髓细胞白血病转换为不另作特定分类急性混合表型白血病的诊断过程,并探索其与其他急性微分化型髓细胞白血病和急性混合表型白血病病例的异同.方法 采用细胞涂片染色或化学染色方法对1例原发急性微分化型髓细胞白血病转换为不另作特定分类急性混合表型白血病病例进行细胞形态学分析;采用流式细胞术进行免疫表型分析;采用染色体G显带技术进行核型分析;应用RT-PCR技术进行融合基因的检测.并与2例急性微分化型髓细胞白血病和1例急性混合表型白血病进行实验室诊断结果比较,了解这一罕见的急性白血病发生转化的特征.结果 转换前急性微分化型髓细胞白血病在形态上表现为骨髓原始细胞占0.82,可见明显核仁,无Auer小体;免疫表型为造血相关抗原CD38和HLA-DR阳性,部分髓系抗原(CD13、CD56和CD11b)阳性,淋系抗原CD7阳性;其他髓系抗原(MPO、CD33和CD15)阴性,B系抗原(CD79a、CD19和CD22)阴性,T系抗原(胞内CD3、CD4和CD8)阴性.而转换后不另作特定分类急性混合表型白血病在形态上表现为骨髓原始细胞极度增生,占0.42,嗜酸粒细胞增多,嗜碱粒细胞可见;免疫表型为造血相关抗原CD38和HLA-DR阳性,髓系抗原(MPO和CD13)阳性,B系抗原(CD19和CD79a)阳性,T系抗原(胞内CD3)阳性,淋系抗原CD7阳性.对照组白血病具有典型的形态学和免疫表型特点,均未见异常染色体核型和融合基因.结论 该病例诊断复杂,临床少见,综合分析急性微分化型髓细胞白血病和不另作特定分类急性混合表型白血病的实验室特征对确诊十分重要,而免疫表型的变化是关键.

Abstract：

Objective To analyze the diagnostic process of a rare case of acute myeloid leukemia with minimal differentiation undergoing a lineage switch to mixed phenotype acute leukemia, NOS-rare types,and to investigate its difference from other acute myeloid leukemia and mixed phenotype acute leukemia. Methods Following tests were performed on the patient with switched mixed phenotype acute leukemia and three control leukemia patients ( including two acute myeloid leukemia with minimal differentiation and one mixed phenotype acute leukemia ). Cell morphology was analyzed by bone marrow smear and related cell chemical staining. Immunophenotyping of bone marrow was performed by flow cytometry ( FCM ). G-banding technique was used for karyotype analysis and RT-PCR was used for fusion gene detection. All the laboratory data of the switched patient were compared to that of three control patients in order to reveal the characteristics of such a rare phenotype switch in acute leukemia. Results Before switching, the morphology of acute myeloid leukemia with minimal differentiation demonstrated 0.82 blasts occurring in bone marrow, distinct nucleoli and absence of Auer rods. Blast cells expressed hematopoieticassociated antigens ( CD38, HLA-DR ), myeloid antigens ( CD13, CD56, CD11b ) and CD7. And these blasts were negative for MPO, CD33, CD15, CD79, CD19, CD22, cytoplasmic CD3, CD4 and CD8. After switching, 0. 42 blasts were found in bone marrow, showed eosinophilia and presence of basophile. Blast cells expressed hematopoietic-associated antigens ( CD38, HLA-DR ), myeloid antigens ( MPO, CD13 ),lymphoid antigens ( CD19, CD79a ,cytoplasmic CD3, and CD7 ). The control group showed typical morphology and immunophenotyping. No abnormal karyotype and fusion gene were detected. Conclusions It is a rare and complicated case that acute myeloid leukemia with minimal differentiation switched to mixed phenotype acute leukemia, NOS-rare types. The laboratory features, especially the change of immunophenotyping play an important role in the diagnosis.     

原发性急性髓系白血病预后相关因素分析

目的:探讨原发性急性髓系白血病(AML)患者预后的影响因素,为改善患者预后,延长生存期提供临床依据。方法:回顾性分析2006年6月至2010年12月在我院就诊的原发性急性髓系白血病(除外AML-M3)109例,采用Kaplan-Meier生存分析法分析患者性别、年龄、初诊时外周血白细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数、骨髓涂片原始细胞百分数、细胞遗传学、首次诱导是否缓解与总生存时间(OS)及无复发生存期(RFS)的关系,log-rank检验对其可能的预后影响因素进行单因素分析,多元比例危险率COX回归模型进行多因素分析。结果:患者完全缓解(CR)率为56.88%,中位OS为9.5个月,中位RFS为5.5个月。年龄大于60岁、细胞遗传学高危组和首次诱导化疗未获得CR的患者OS及RFS较短(P<0.05),为预后不利因素,且对预后具有独立影响。结论:根据急性髓系白血病预后相关因素可对其进行预后判断,从而为个体化分层治疗提供临床依据,对延长患者总生存时间及无病生存期具有重要意义。     

实时定量RT-PCR方法监测急性髓系白血病患者造血干细胞移植后AML1-ETO融合基因mRNA水平的临床意义

目的 评价实时定量RT-PCR(Q-PCR)方法监测AML1-ETO(+)急性髓系白血病(AML)患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后AML1-ETO mRNA水平的表达及其临床意义.方法 采用基于TagMan探针的Q-PCR技术检测17例AML1-ETO(+)AML患者allo-HSCT后不同时间骨髓标本AML1-ETO mRNA的表达.AML1-ETO mRNA水平以内参基因abl进行归一化.采用荧光原位杂交(FISH)法评估HSCT后是否达到细胞遗传学完全缓解(CCyR).结果 Q-PCR实验可重复敏感度为5个拷贝.在16例CCyR患者中,1例死于移植物抗宿主病(GVHD),1例死于感染,其余14例中位随访时间为268(70～811)d,HSCT后1个月(+1月)AML1-ETO中位水平0(0～0.740),+2月为0.026(0～2.900),+3月为0.039(0～3.300).移植时间超过12个月的5例患者中,中位随访685(385～811)d,4例仍呈AML1-ETO阳性,中位值0.078(0.003～0.120).1例复发患者+1月为0,+2月为9.800,+3月为5.600,+110 d血液学复发,AML1-ETO mRNA为390.000,+382 d死亡.结论 1年内AML1-ETO持续低水平阳性不一定预示复发;对AML1-ETO(+)AML患者HSCT后定期动态监测AML1-ETO水平十分必要.