DNA物理图谱绘制中某些问题的探讨

绘制DNA物理图谱,对于DNA的分子克隆,基因定位,核酸序列的测定及进化比较等方面的研究都有一定意义。本文初步探讨了DNA物理图谱绘制中的某些问题:酶的选择,双酶解的组合方案,双酶解的局限性,以及部分降解最多区带公式。     

新型TaqMan-MB荧光探针测定古DNA模板含量

目的:设计荧光检测探针,对古DNA样本中的线粒体DNA片段进行定量分析,并对其检测效果进行评价。方法:利用分子信标的茎环结构和TaqMan的降解作用设计一种新型的TaqMan-Molecular Beacon荧光检测探针,与实时PCR仪联用,对古DNA模板进行定量检测。结果: 5个古代样本中3个测得拷贝数,1个无法观察到原始模板量,1个样本无原始模板。结论: TaqMan-MB荧光探针集中了分子信标和TaqMan的技术优势,对古DNA模板具有很好的定量检测效果。     

长爪沙鼠线粒体DNA限制性物理图谱的研究

长爪沙鼠线粒体DNA经限翩性内切酶BamHⅠ、BglⅡ．EcoRⅠ和PstⅡ水解后分别产生1个、6个、6个和3个片段，其中少量动物经BglⅡ或EcoRⅠ酶切后各水解为4个片段．对上述片段的分子量进行了测定，长爪沙鼠线粒体DNA分子量为16．05kb。以BamHⅠ单一酶切点作零点，PstⅠ酶切片段c→a为顺时针方向，根据双酶解产物和不完全酶解产物分析定位，得到了4种内切酶水解产生的15个片段组成的物理图谱。     

古代人类牙齿DNA的提取和扩增条件研究

目的 以河南洛阳二里头遗址出土的距今3000多年的夏代人牙齿为标本，从口腔医学的角度分析牙齿DNA提取的污染控制，并进行PCR扩增条件的比较研究。方法 对古代人类牙齿样本进行去污处理，放入液氮研磨机中打磨成牙粉，使用GENECLEAN Kit for Ancient DNA试剂盒从牙粉中提取DNA分子；利用不同条件的5种PCR反应体系扩增古DNA。结果 从牙齿样本中抽提出古代DNA片段A；在PCR扩增中，加入适量的小牛血清蛋白BSA有助于消除古代样本中PCR抑制物的作用；适合的Mg^2＋浓度则有助于增加DNA聚合酶的活性，减少非特异性扩增。结论 古DNA试剂盒是一种有效的古DNA抽提方法；小牛血清蛋白BSA和Mg^2＋浓度对PCR反应存在影响。     

DNA拓扑异构酶的研究进展

DNA拓扑酶广泛存在于生物体细胞核内,能调节核酸空间结构动态变化,是控制核酸生理功能的关键酶。其参与DNA的重组、修复、转录及复制过程。本文就拓扑异构酶的结构,功能,生物学特性进行综述。1DNA拓扑异构现象在生物体的整个生命过程中,细胞遗传物质DNA起着十分重要的作用,DNA分子中核苷酸的排列顺序构成DNA的一级结构;双螺旋结构构成其二级结构;真核生物DNA分子很大,     

可降解胶原蛋白-几丁聚糖三维骨架构建的实验研究

目的　研究以胶原蛋白几丁聚糖构建应用于血管组织工程学研究的可降解三维支架。方法　以不同配比Ⅰ型胶原蛋白和几丁聚糖为生物材料,体外预构具有三维结构的支架,观察各自的空间立体结构;通过动物皮下埋植降解和体外胰蛋白酶、溶菌酶和胶原酶溶液直接酶解,观察不同配比材料的降解特性及生物相容性。结果　构建的三维支架孔径均匀,生物相容性好。不同材料配比直接影响支架形态,几丁聚糖可以影响胶原酶对支架的降解,同时几丁聚糖掺入增加后也可减少体内降解。结论　构建的胶原蛋白几丁聚糖三维支架具有结构均匀、生物相容性好的特点,可以应用于血管组织工程研究。     

脱氧核酶及其基因治疗应用进展

脱氧核酶是利用体外分子进化技术合成的一种具有催化功能的单链DNA片段，由一个碱基环和两条单链侧臂构成。具有高效的催化活性和结构识别能力。1987年Cech等首次发现了RNA具有酶的催化效应。称为核酶（ribozymes），这一发现突破了“酶都是蛋白质”的传统概念。1994年Breaker等发现单链DNA分子同样具有酶活性，这些具有催化功能的DNA分子称为脱氧核酶（DNAzyme），又称酶性DNA。脱氧核酶的发现进一步延伸了酶的概念，是当今分子生物学及基因治疗研究的热点之一，正广泛应用于病毒感染性疾病、肿瘤、某些遗传病等基因治疗方面的研究。本文就脱氧核酶的种类、结构、特性及其在基因治疗应用方面的进展做一综述。     

03型假结核菌毒力质粒的限制性内切酶分析

应用计算机程序计算PstI和Sma1对03型假结核杆菌毒力质粒酶解电泳可见片段的分子量。BamHI、SalI、Xba1单酶和SalI-Xba1双酶酶解该毒力质粒,其指纹图谱与美国YPIII株假结核杆菌的毒力质粒的物理图谱比较推测两者DNA序列基本一致。双酶切结果提示:假结核菌毒力质粒的外膜蛋白I基因应位于SalI-Xda1双酶切的第二片段上。本研究为今后分子克隆毒力质粒的PI基因研究提供了重要数据。     

DNA物理图谱的计算机绘制法

根据DNA的部分酶解片段分子量大小,编制了一个计算机程序以分析片段的顺序。实验获得三种DNA的部分降解片段,用计算机分析酶解片段顺序与文献报道一致。     

河北汉族人群线粒体DNA HV1、HV2区重叠片段遗传多态性分析

人类线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA)是位于细胞核外的唯一遗传物质 ,具有呈母系遗传、没有重组、每个细胞内的拷贝数多、不易降解和突变率高等特点 ,所以mtDNA被广泛应用于人类进化、法医学的研究中 ;尤其对于法医案例中的一些特殊检材 :微量、降解和无核的检材 (如骨骼、牙齿、指甲、毛干、腐败检材等 )具有实际应用价值。线粒体DNA非编码区因其高度多态性成为法医学研究的热点 ,近年来世界上很多国家和地区对HV1、HV2区多态性进行了研究 ,积累了丰富的数据资料。我国地域辽阔 ,民族众多 ,目前各民族的线粒体DNA多态性数据…     

酒精保存加高压蒸气灭菌骨移植修复下颌骨缺损的实验研究

目的　探讨酒精保存加高压蒸气灭菌骨修复骨缺损的能力及其作为自体骨移植替代材料的合理性、可行性。方法　在 2 8只成年家兔右侧下颌骨下缘制备长 10mm、深 5mm的骨缺损模型 ,其中实验组 (16只 )植入酒精保存加高压蒸气灭菌骨 ,另外 12只不植入任何物质 ,作为对照组。分别于术后 2、4、8、12周取材、制片 ,在普通光镜下进行观察。结果　实验组术后 4周可见缺损区有大量新骨形成 ,骨质增生活跃 ;8周时移植骨大部分被新生骨替代 ;12周时骨缺损基本修复 ,而对照组无 1例达骨性连接。结论　经酒精保存加高压蒸气灭菌后的同种异体骨移植后有较好的生物相容性 ,可以引导骨生长 ,能作为自体骨移植的一种替代材料     

骨组织工程中纳米羟基磷灰石的仿生合成研究进展

纳米羟基磷灰石(nano-hydroxyapatite,nHAp)是人体骨、牙无机组成的主要成分,具有优异的生物相容性、生物活性和生物亲和性,可诱导骨组织再生,已广泛应用于骨缺损修复与替代等骨组织工程领域.由于其组成中含有能通过人体正常的新陈代谢途径进行置换的钙、磷等元素,植入体内后可部分或全部被人体组织吸收和取代,能...     

用磁性纳米粒辅助微波诱变新方法改造无活性放线菌代谢功能的研究

目的 探索用Fe₃O₄磁性纳米粒辅助微波诱变来改造无活性放线菌代谢功能的新方法并筛选获得抗肿瘤活性突变株。方法 以海洋来源无活性放线菌野生株HLF-43（1000 μg/ml样品对K562细胞的抑制率为3.9%）为原始菌,对其孢子悬液在Fe₃O₄磁性纳米粒子存在下进行微波辐照诱变,再经抗性筛选获得新霉素抗性突变株,并经对原始菌及其突变株的发酵培养与抗肿瘤活性筛选获得活性突变株。采用MTT法用K562细胞测试抗肿瘤活性。结果 初步建立了改造放线菌代谢功能的Fe₃O₄磁性纳米粒辅助微波诱变新方法,并利用该方法由无活性原始株HLF-43筛选获得了新霉素抗性突变株共80株,其中28株发酵样品对K562细胞有抑制活性,100 μg/ml浓度下的抑制率大于20%。活性突变株获取率达35%（28/80）,所获活性突变株的遗传性状也较稳定。结论 与不加Fe₃O₄磁性纳米粒子的微波辐照结合新霉素抗性筛选实验相比,该方法更有利于筛选获得高浓度新霉素抗性突变株,同时活性突变株获得率也有大幅度提高,活性突变株的遗传性状也获改进。     

内蒙古朱开沟遗址古代居民线粒体DNA分析

目的：探讨内蒙古朱开沟古代居民的遗传关系。方法：对9例保存较好的个体牙齿的线粒体基因组的高可变一区进行扩增和测序，与内蒙古饮牛沟古代人群及现代亚洲人群对比进行系统发育分析，并推测单倍型类群归属。结果：获得7例朱开沟遗址古代居民线粒体基因组高可变一区364 bp的序列, 共检测出15个突变位点，界定7种单倍型，并归属到单倍型类群。结论：朱开沟古代居民在母系遗传上与其后的饮牛沟墓地古代居民及现代内蒙古地区人群关系密切，内蒙古中南部地区人群母系遗传结构具有连续性。     

遗传因素对同卵双生子颅颌面部软硬组织形态的影响研究

目的通过投影测量和模型测量的方法，比较同卵双生子间颅骨、颌骨、牙齿、软组织的形态学差异，初步探索遗传因素和环境因素对同卵双生子颅颌面部软硬组织形态发育的影响。方法正畸治疗前，对12对同卵双生子同期拍摄X线头颅定位侧位片，并取记存模型，采用计算机头影测量软件和数显游标卡尺分别对颅颌面部软硬组织及牙齿进行测量分析。综合Downs、Steiner等分析法对12对同卵双生子的35个骨骼和牙齿参数进行测量；同时按照Holdaway等分析法对6个软组织参数进行测量分析。结果①双生子中颅骨及上下颌骨间形态位置关系无显著差异；②双生子牙-牙槽骨测量参数中，U1-SN和U1-NA间距及上颌前牙不齐指数和上颌牙列拥挤度有显著性差异。结论①遗传因素对颅骨和上下颌骨及上、下颌牙弓的形态起到决定性作用；②环境因素对上颌切牙的唇倾度有显著的影响作用，对下颌前牙的唇倾度影响不大。     

《素问》的人体观

《素问》主张人体是由有形的“形”（即肉体）和无形的“神”（即能量体）所结合的,因此后世若单纯用“形”的现代解剖学角度来检视,便会产生很多争议。至于形体的解剖,《素问》虽然没有提出全面性或至少在器官系统上完整性的解剖文献,但它明确的告知,中国古人确曾“论理人形”和运用度量衡进行过形体的测量,书中有许多关于脏腑和其他组织的片段解剖细节可当作佐证。由于《素问》不是描述经脉循行路线的专书,所以其中解剖方位术语的应用比较简略,无法由此看出所采用的解剖姿势。但是也叙述了不少表面解剖部位,所以已成俱备表面解剖部位的体系。     

Studie über eine alte Leiche von der Zeit der Streitenden Reiche aus dem Grab Nr. 1 am Guo-Jia-Gang in Stadt Jingmen der Provinz Hubei

An ancient femal corpse excavated from the robbed tomb No. 1 at Guo-Jia-Gang in Jingmen city of Hubei Province was studied. It was confirmed that the corpse was buried more than 2 300 years ago, namely at the middle stage of the Warring States period and is the earliest one of the ancient coffin corpses unearthed in China sofar. It is of the same type as the ancient corpses of Weatern Han Dynasty excavated from tomb No. 1 at Ma-Wang-Dui in Changsha City and from the tomb No. 168 at Phoenix Hill in Jinagling City respectively. The collagenous fibers of connective tissue from all parts in the corpse were well preserved, showing fine ultrastructure with clear periodical cross banding, and a lot of bacterial spores were found between them. In addition, a large number of eggs ofclonorchis sinensis andtrichuris trichiura were found in the content of the bowel. The level and the cause of good preservation were discussed and it was believed that the good preservation may resulte from the combined effect of the internal and external environmental factors around the corpse.     

Establishing a temporal bone laboratory: considerations for ENT specialist training

Cadaveric temporal bone dissection in a temporal bone laboratory is a vital component in training safe, competent otorhinolaryngologists. Recent controversies pertaining to organ retention have resulted in a more limited supply of temporal bones. Consequently, current trainees are dissecting far fewer bones than their consultants. We discuss the establishment of a temporal bone laboratory in the Department of Anatomy in the University College Cork, from the timely preparation and preservation of the tissue to its disposal. Comparisons are drawn between our experience and that of the United States training schemes. The temporal bone laboratory in Cork is the only one in existence in Ireland. The exposure and experience obtained by registrars rotating through Cork, has resulted in noticeable improvements in their operative abilities. The temporal bone laboratory remains a core component to training. It is hoped that this article may facilitate other units overcoming obstacles to establish a temporal bone laboratory.     

快速原子力显微镜技术在细胞生物学中的应用新进展

快速原子力显微镜在不损失高分辨率的情况下,其扫描速度与检测精度达到了完美结合,在细胞和分子水平上实现了对 生物体系动态过程的实时表征。这种超高时间分辨率和空间分辨率的结合,以及与其它先进技术的联用,为细胞生物学等生命 科学领域的研究展现了诱人的前景。本文对快速原子力显微镜在细胞生物学领域的新进展进行了综述,包括环境因素对DNA 构象的影响、DNA与蛋白质结合的过程、膜蛋白结构域的变化、肌球蛋白的运动、活细胞表面结构的变化等。     

Mastoid development in ancient and modern populations. A longitudinal radiological study

The effect of otitis media on the human mastoid process in a common milieu over a millennium was evaluated by comparing two present and four ancient populations. Temporal bone pneumatization patterns indicate that otitis media and mastoiditis existed in antiquity, and there were more altered pneumatization patterns in skulls from the era following European contact than from eras before European contact. Pneumatization patterns were similar in ancient skulls and in a preponderantly white male population mostly born before antibacterial availability. Both ancient and modern pre-antibacterial era temporal bones show more effect of otitis media during childhood than is found in present day schoolchildren. Reasons for differences are explored. It is inferred that upper respiratory tract infections were prevalent in the Upper Missouri River Basin during the past millennium. Furthermore, microbiological agents with virulence similar to today's flora were prevalent in this region more than 1,000 years ago.