家蝇免疫血淋巴的抑菌作用及其免疫活性的研究

目的研究家蝇幼虫免疫血淋巴抑菌作用及其机制并探讨其免疫调节功能。方法分未经诱导、针刺诱导、蘸菌液诱导三组提取家蝇幼虫免疫血淋巴,分别针对多个标准菌株做抑菌实验,并设立空白对照和药物对照,观察抑菌效果。淋巴细胞转化实验研究家蝇血淋巴的免疫调节作用。结果三种处理方法所提取的家蝇幼虫血淋巴对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、肺炎克氏菌、铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等革兰氏阳性菌、阴性菌及单细胞真菌白色念珠菌均有强的抑菌作用,其中带菌诱导的血淋巴抑菌效果较好,并且抑菌活力具有一定的热稳定性。血淋巴对人淋巴细胞的激活作用明显,淋巴细胞的转化率与对照组比较差异有显著性。结论本研究进一步验证了家蝇血淋巴的抑菌活性和免疫功能,为家蝇血淋巴的抗菌机制及免疫调节作用的深入研究和应用提供资料。     

两种提取家蝇幼虫血淋巴方法的比较

目的:对剪头法和瞬时破壁法提取的家蝇幼虫血淋巴粗提液进行蛋白浓度和SDS-PAGE分析比较.方法:分别采用剪头法和瞬时破壁法提取家蝇幼虫血淋巴粗提液,同时设立未诱导组和热诱导组,测定各组的蛋白浓度进行比较分析,并对各组血淋巴粗提液进行SDS-PAGE的分析比较.结果:剪头法热诱导组的血淋巴粗提液蛋白浓度高于未诱导组,瞬时破壁法提取的血淋巴粗提液蛋白浓度高于剪头法;经SDS-PAGE分析,瞬时破壁法提取的血淋巴粗提液蛋白条带明显多于剪头法.结论:瞬时破壁法提取家蝇幼虫血淋巴简便易行,所提取的血淋巴蛋白成分多于剪头法.     

不同诱导源诱导家蝇抗菌物质的动力学研究

目的 比较不同诱导源诱导家蝇血淋巴中产生抗菌物质的动力学变化及抗菌活动。方法 采用抑菌圈法。以＾６０Ｃｏγ射线，活的大肠杆菌及热灭活的金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和生物盐水为诱导源，均能诱导出家蝇血淋巴中的抗菌物质。结果 不同诱导源诱导家蝇产生抗菌物质的活性大小不同，达到最大活性的时间不同，抗菌特性亦有差异。经热灭活细菌诱导的抗菌物质抗菌活性大，抗菌种类多。同时，未经诱导的家蝇血淋巴也有抗菌活性。结论     

不同诱导源诱导家蝇抗菌物质的动力学研究

目的　比较不同诱导源诱导家蝇血淋巴中产生抗菌物质的动力学变化及抗菌活性。方法　采用抑菌圈法。以６０Ｃｏγ射线,活的大肠杆菌及热灭活的金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和生理盐水为诱导源,均能诱导出家蝇血淋巴中的抗菌物质。结果　不同诱导源诱导家蝇产生抗菌物质的活性大小不同,达到最大活性的时间不同,抗菌特性亦有差异。经热灭活细菌诱导的抗菌物质抗菌活性大,抗菌种类多。同时,未经诱导的家蝇血淋巴也有抗菌活性。结论　抗菌物质具有潜在的应用价值。     

诱导家蝇幼虫产生抗菌物质的实验研究

目的对家蝇体内的抗菌物质进行研究。方法通过喂菌及超声诱导家蝇幼虫产生抗菌物质,采用比浊法对家蝇体内抗菌物质的活性进行测定。结果家蝇经诱导后产生的抗菌物质具有较好的杀菌效果,但对不同细菌所产生的杀菌效果有一定差别。结论研究结果可为进一步纯化和分析家蝇体内的抗菌蛋白奠定了基础。     

感染大肠杆菌后家蝇幼虫血淋巴细胞的观察

目的 探讨家蝇三龄幼虫被大肠杆菌感染后的细胞免疫反应.方法 观察家蝇三龄幼虫感染大肠杆菌后4、8、16及24 h血淋巴细胞总数(THC)及各类血细胞数量(DHC)的变化.观察大肠杆菌感染后家蝇幼虫血细胞形态的变化.结果 ①与对照组比较,感染4、8、16、24 h组THC均有显著增加(P<0.01);感染后各时间组的浆血胞和粒血胞数均显著升高(P<0.01);感染后16、24 h组的珠血胞数显著升高(P<0.01);各时间组的原血胞和类绛血胞数量无明显变化(P>0.05).②感染后4、8、16 h组的浆血胞和粒血胞的比例明显增加(P<0.01),感染后各时间组的珠血胞的比例均明显减少(P<0.01),各时间组原血胞和类绛血胞的比例均无明显变化(P>0.05).③感染大肠杆菌后,浆血胞发生空泡、细胞变形等变化.结论 家蝇幼虫感染大肠杆菌后在体内诱发的细胞免疫反应表现为血淋巴细胞数量、分类及形态出现变化,其中浆血胞和粒血胞两类细胞是免疫反应的主要参与者,珠血胞也可能参与细胞免疫反应.     

滞育家蝇幼虫糖的变化

目的观察家蝇幼虫滞育前后血淋巴中总糖、海藻糖、糖原的变化,探讨家蝇幼虫滞育发生的生化机制。方法低温诱导家蝇幼虫滞育,用蒽酮比色法测定滞育10d、15d、20d组及非滞育组血淋巴总糖、海藻糖、糖原的含量。结果滞育组与非滞育组比较,(1)家蝇幼虫血淋巴总糖含量滞育10d组显著升高,15d组、20d组则降低。(2)血淋巴海藻糖含量滞育10d组、20d组明显升高,15d组差异无显著性。(3)血淋巴糖原含量滞育10d组、15d组降低,20d组则升高。结论家蝇滞育幼虫的糖醇积累型属于海藻糖积累型。     

针刺诱导家蝇幼虫抗菌物质的动态观察

目的观察家蝇幼虫经针刺损伤并感染金黄色葡萄球菌后,家蝇幼虫抗菌物质的动态表达效果。方法室内饲养的家蝇3龄幼虫,经针刺损伤感染金黄色葡萄球菌后,分别于第0、12、24、36、48、60小时记录幼虫存活率,并提取其血淋巴,以溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌作指示菌,采用平板法做抑菌试验,37℃恒温24 h观察抑菌圈,并以抑菌圈直径表示抗菌活力的大小,取诱导后高峰时间产生的抗菌物质进行抑菌实验,探讨家蝇抗菌物质诱导产生的规律。结果针刺损伤感染金黄色葡萄球菌后,家蝇幼虫存活率逐渐降低,提取的血淋巴对溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活力峰均出现在诱导后48 h。结论针刺损伤感染金黄色葡萄球菌处理法可诱导家蝇产生抗菌物质,在诱导后48 h收集血淋巴最为适宜。     

猪粪饲养家蝇幼虫的营养成分研究

目的 :分析猪粪饲养家蝇 (Muscadomestica)幼虫的营养成分。方法 :引种野生家蝇 ,用猪粪饲养幼虫 ,收获 3期老熟幼虫 ,测定粗蛋白、粗脂肪、氨基酸和脂肪酸构成及微量元素含量 ,用粮食与农业组织 世界卫生组织 (FAO WHO)提出的参考蛋白模式评价 ,并与麦麸饲养的幼虫及鱼粉比较。结果 :每公斤猪粪平均可产(0 13± 0 0 4)～ (0 2 0± 0 12 )kg鲜蛆 ,鲜蛆烘干比为 1∶0 31± 0 12 ,粗蛋白 42 36 %～ 5 2 33 % ,必须氨基酸含量占总氨基酸的 45 10 % (E % ) ,必须氨基酸与非必需氨基酸总量的比值 (E/N)为 0 82 ,E % /T为 3 0 1,脂肪酸含量为 13 73 %～ 16 83 % ,油酸、亚油酸及亚麻酸等必需脂肪酸分别为 36 99% ,7 6 1%和 0 35 % ,Fe 2 91 5mg/kg ,Cu 87 5 5mg/kg ,Zn 2 46 8mg/kg ,Mn 2 49 45mg/kg ,比麦麸饲养幼虫更接近参考蛋白模式 ,营养价值优于鱼粉。结论 :猪粪饲养的家蝇幼虫比麦麸饲养的幼虫更接近参考蛋白模式 ,营养价值优于鱼粉     

家蝇三龄幼虫血细胞形态的观察

目的通过姬氏染色法以便观察家蝇三龄幼虫的各种血细胞形态。方法取家蝇三龄幼虫血淋巴制作血涂片,姬氏染液染色,油镜观察。结果染色效果良好,家蝇三龄幼虫的各种血细胞结构清晰。可分为原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞5种。其中浆血胞可分为大核浆血胞和小核浆血胞两种。结论家蝇三龄幼虫血细胞分为5种。     

斯氏按蚊血淋巴在约氏疟原虫卵囊黑化时差异表达蛋白的SDS-PAGE分析

目的　初步了解约氏疟原虫感染后的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水后不同时间的血淋巴蛋白差异表达。方法　挤压法分别收集两组雌斯氏按蚊成蚊 1～ 5d的血淋巴 ,经SDS PAGE ,考马斯亮蓝和银染显色 ,Bio Rad10 0 0凝胶图像分析系统进行扫描和差异蛋白条带的自动化分析。结果　用药第 2天少数蚊卵囊开始部分黑化 ,第 5～9天黑化蚊及其黑化卵囊逐渐增多。用药后第 3天处理组蚊血淋巴蛋白条带数明显多于对照组 ,两组间存在较多差异蛋白带 ,主要集中在 ( 2 0～ 40 )× 10 3、( 60～ 80 )× 10 3和 13 0× 10 3处。银染比考马斯亮蓝染色出现的蛋白条带数多。结论　约氏疟原虫感染的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹糖水后其血淋巴蛋白表达有差异 ,其差异蛋白很可能就是黑化相关蛋白     

诱导前后美洲大蠊血淋巴抗菌活性的研究

目的 研究美洲大蠊经大肠杆菌诱导后其血淋巴抗菌活性的变化.方法 将100只同龄期美洲大蠊成虫随机分为诱导组和未诱导组,诱导组虫体从腹部注射灭活的大肠杆菌菌悬液5 μL (3×1012个/L),未诱导组不做任何处理.24 h后分别采集两组美洲大蠊的血淋巴,并采用Hultmark比浊法测定各自血淋巴的抗菌活力,连续测定6 d,比较两组差异.结果 诱导组美洲大蠊血淋巴的抗菌活性明显强于未诱导组,且在第3天达到峰值. 结论美洲大蠊经大肠杆菌诱导后血淋巴的抗菌活性明显增强.     

松香基脲类衍生物的合成及其抗菌活性研究

目的：设计合成了一系列松香基脲类衍生物,初步研究了其抗菌活性。方法：以脱氢松香酸为起始原料,酰氯化后,经Curtius重排得到松香基异氰酸酯,然后与芳香胺反应得到松香基脲。结果：得到5个松香基脲类化合物,经IR、1H-NMR、元素分析等确证其结构。结论：初步药理实验表明,合成产物对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌具有良好的抗菌活性。     

丝光绿蝇抗菌物质诱导初步研究

目的丝光绿蝇抗菌物质的诱导初步研究。方法丝光绿蝇三龄幼虫,采用超声波处理后２４ｈ提取其血淋巴,采用大肠杆菌作指示菌,作抑菌试验,以抑菌圈直径表示活力大小。结果丝光绿蝇三龄幼虫每１６０只约提取血淋巴０．５ｍｌ,超声波诱导后２４ｈ取血淋巴,对大肠杆菌有抑菌活力。结论超声波诱导丝光绿蝇后,其体内产生了抗菌物质。     

蚊虫血淋巴收集方法的探索

介绍一种较为理想的蚊虫血淋巴收集方法。将蚊虫低温麻醉(-20℃×5～6min),在冰台上把三对腿在转节与股节之间拉断,以单管法或双管法2000r/min×10min常温下普通离心机离心。离心后用微量进样器收集并定量。重复离心可稍增加收集的血淋巴量。该方法操作简便、效率较高、且收集到的血淋巴较为纯净,优于其它方法。     

东北鹤虱中一个具有抗菌活性的新喹酮类生物碱

目的 对东北鹤虱的化学成分进行分离和结构鉴定并进行抗菌活性测定。方法 通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等分离方法从东北鹤虱的BuOH提取物中分离得到一个新喹酮类化合物，以有机波谱方法(^1H-NMR、^13C-NMR、2D-NMR、HR-MS，UV和IR等)进行结构鉴定，并以纸片琼脂扩散法进行抗菌活性测定。结果 从东北鹤虱中分离出一个新喹酮类生物碱，鉴定为8-甲氧基-4-喹酮-2-羧酸，并对铜绿假单胞菌、肠致病性大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及表皮葡萄球菌具有抗菌活性。结论 该化合物为一新化合物，并具有抗菌活性。     

法罗培南对临床分离194株致病菌的体外抗菌活性研究

目的：研究法罗培南的体外抗菌活性。方法：采用琼脂平板稀释法,测定法罗培南与头孢哌酮／舒巴坦、头孢噻肟对194株临床分离菌株的最低抑菌浓度（MIC）,并统计MIC50。MIC90及敏感率。结果：法罗培南对所有194株细菌,MIC50≤1μg／ml,MIC90≤4μg／ml,敏感率均在90％以上。对产β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌,法罗培南的MIC90与头孢哌酮／舒巴坦的MIC90相近,是头孢噻肟的MIC90的1／32;对变形杆菌、卡他莫拉菌和肺炎链球菌,三者MIC90相近;对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和粪肠球菌,法罗培南的MIC90明显低于头孢哌酮／舒巴坦或头孢噻肟的MIC90。结论：法罗培南对临床分离致病菌具有较强的抗菌活性,对产酶株也同样具有较高的抗菌活性。法罗培南有望成为国内临床上推广使用的抗生素。     

了哥王水煎液的抑菌作用研究

目的 观察了哥王水煎液对4种细菌的抑菌效果.方法 采用琼脂扩散法观察抑菌圈大小,用倍比稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)与最低杀菌浓度(MBC).结果 了哥王水煎液对大肠杆菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC25923,藤黄八叠球菌CMCC(B)28001,枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501均有抑菌效果,其MIC和MBC:大肠杆菌为156mg/ml和312mg/ml;枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均为78mg/ml和156mg/ml;藤黄八叠球菌为39mg/ml和78mg/ml.结论 了哥王水煎液对4种供试菌均有抑菌效果,且具有浓度依赖性.其抑菌强度由强到弱依次为:藤黄八叠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌.     

复方一枝蒿-壳聚糖纳米药物的制备及其体外抗菌作用的研究

目的:制备复方一枝蒿-壳聚糖纳米药物并研究其体外抗菌作用.方法: 通过乳化交联法合成复方一枝蒿-壳聚糖纳米药物.分别用激光粒度分析仪(Malvern Zetasizer 1000-HAS)和原子力显微镜(AFM)检测该种纳米药物的粒径分布以及表面电位.通过体外抗菌实验检测此种纳米药物的体外抗菌能力,并与传统复方一支蒿颗粒的抗菌能力作比较.结果: 该种纳米药物粒径分布均一,为(137.00±14.28) nm;表面携带正电荷,Zeta电位值为(16.90±1.32)mV.其对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、乙型溶血性链球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为1:32,1:32,1:16 和 1:2,最小杀菌浓度分别为1:16,1:16,1:8和1:2.与传统复方一支蒿颗粒相比,该纳米药物对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌及乙型溶血性链球菌的抗菌能力均有所改进(P<0.05).结论:复方一枝蒿-壳聚糖纳米药物对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、乙型溶血性链球菌均具有明显的体外抗菌作用,为我国传统中药新剂型的开发奠定了实验学基础.