体外培养人眼小梁细胞表达转化生长因子-β_2

目的 :了解体外培养人眼小梁细胞是否会表达转化生长因子 β2 (Transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 ) ,以确定TGF β2 的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关。方法 :一步法提取体外培养人眼的小梁细胞RNA ,利用RT PCR检测TGF β2 的mRNA ,用双链测序鉴定PCR产物 ,并用免疫组化SUPERVISION法检测TGF β2 蛋白的表达。结果 :RT PCR扩增得到的单一产物 ,其序列与己知序列完全一致。TGF β2 免疫组化染色呈阳性。结论 :小梁细胞自身产生的TGF β2 ,是小梁网局部微环境和房水中TGF β2 的来源之一 ;TGF β2 不仅通过旁分泌方式 ,也可通过自分泌方式作用于小梁细胞。小梁细胞产生TGF β2 的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关 ,值得进一步研究。     

TGF-β1和TGF-β RⅡ在视网膜母细胞瘤的表达

目的　探讨视网膜母细胞瘤的TGF β1和TGF βRⅡ的表达及其与临床病程和预后的关系。方法　应用免疫组织化学SP法检测TGF β1和TGF βRⅡ在 37例视网膜母细胞瘤瘤组织中的表达 ;用HPIAS 10 0 0彩色病理图像分析系统测量其平均积分吸光度值。结果　在 37例视网膜母细胞瘤组织切片中 ,均可见瘤细胞TGF β1表达强阳性 ,其表达水平明显高于正常视网膜 ,视神经浸润组的瘤组织中TGF β1的表达水平明显高于无视神经浸润组 (P <0 .0 5 ) ,眼外期组TGF β1的表达水平明显高于眼内期组和青光眼期组。TGF βRⅡ在 37例瘤组织中均为阴性。 结论　TGF β1的表达水平增高与临床分期和视神经浸润有关 ;高表达TGF β1可能意味预后不良 ;对TGF β1增殖抑制作用反应的丧失与视网膜母细胞瘤的发病有关     

TGF-β1 AS-ODN对牛眼小梁细胞TGF-β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原表达的影响

目的　观察转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)反义寡核苷酸对牛眼小梁细胞 (bovinetrabecularmeshworkcells,BTMC)表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原的影响。方法　脂质体介导下 ,将 0 .1,0 .5 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸作用于BTMC ,对照组分别加入 1μmol·L-1TGF β1正义寡核苷酸脂质体复合物、2 0g·L-1脂质体、无血清RPMI 16 4 0。然后用半定量RT PCR检测TGF β1反义寡核苷酸对BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原的影响。结果　与无血清RPMI 16 4 0对照组相比 ,0 .1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸即可抑制BTMC表达TGF β1,0 .5 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可完全抑制BTMC表达TGF β1(P <0 .0 5 )。 0 .1,0 .5 μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可浓度依赖性抑制BTMC表达纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可完全抑制BTMC表达纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 (P <0 .0 5 )。 2 0 g·L-1脂质体、1μmol·L-1TGF β1正义寡核苷酸不能抑制BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 (P >0 .0 5 )。结论　进一步证实TGF β1可通过自分泌方式作用BTMC ,促进细胞外基质的合成。通过TGF β1反义寡核苷酸抑制BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 ,     

维拉帕米对牛眼小梁细胞表达转化生长因子-β的影响

目的　研究维拉帕米 (Verapamil)在抑制牛眼小梁细胞 (BTMC)合成细胞外基质 (ECM )的同时 ,对BTMC表达转化生长因子 β1(TGF β1)、TGFβ2 的影响。方法　采用半定量RT PCR和免疫组化结合计算机图像分析技术分别检测等于和低于 0 0 1mg/mLVerapamil对BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA。结果　 0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1mg/mLVerapamil可质量浓度依赖性抑制BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA(P <0 0 5 ) ,且 0 0 1mg/mLVerapamil可完全抑制TGF β1的蛋白合成 ,同样质量浓度的Verapamil对TGF β1的抑制程度要大于TGF β2 (P <0 0 5 )。结论　Verapamil抑制BTMC合成ECM的机制可能为抑制TGF β表达 ,这种抑制是在转录水平上 ,且对TGF β1的抑制可能在其中起主要作用。此外 ,TGF β可通过自分泌方式作用BTMC ,促进ECM的合成 ,进一步为Verapamil在发病学环节上防治原发性开角型青光眼提供实验依据。     

血小板源生长因子和转化生长因子-β1及其受体在视网膜表面膜分布的免疫电镜研究

目的　观察及评估血小板源生长因子 (platelet derivedgrowthfactor,PDGF)和转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor,TGF β1)及其相应受体在视网膜表面膜的分布特征及临床意义。方法对 9例孔源性视网膜脱离患者行玻璃体切除术同时获得 2 5块视网膜表面膜 ,按病程分为早期膜(<2个月 )、中期膜 (2～ 6个月 )和晚期膜 (>6个月 ) ;采用 8种抗体 ,即PDGF、TGF β1、PDGFα和 β受体、TGF βⅠ和Ⅱ型受体、Ⅰ和Ⅲ型胶原 ,按研究目的配对后进行胶体金双重标记。 结果　PDGF和TGF β1标记程度在早、晚期膜强 ,中期膜总体上呈现弱 ;增生性玻璃体视网膜病变 (proliferativevitreoretinopathy,PVR)C2 ～C3 膜标本的 2个生长因子阳性标记程度较PVRD1～D3 膜标本强 ;PDGF和TGF β1与Ⅰ和Ⅲ型胶原的胶体金颗粒常聚在同一部位 ,且标记程度一致。 4个生长因子受体阳性标记的细胞是一类胞浆丰富、带或不带色素颗粒的上皮样细胞 ,且细胞周围多伴有生长因子的阳性标记。结论　PDGF和TGF β1以浓度的变化自始至终参与膜的发生、发展 ;上皮样细胞是一种功能活跃细胞 ,在膜形成中起主要作用     

转化生长因子β2诱导人小梁细胞凋亡的体外研究

目的　观察转化生长因子 β2 (transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 )是否能诱导体外培养人眼小梁细胞 (humantrabecularmeshworkcells,HTMC)发生凋亡。方法　将体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞分为对照组和实验组 ,实验各组分别经 0 .32、1.0 0、3.2μg·L-1TGF β2 作用 4 8h后 ,分别用透射电镜、TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡的诱导情况。结果　透射电镜观察发现凋亡细胞典型的形态学变化———核染色质凝集边集 ,凋亡小体形成等。TUNEL法检出发生DNA片段化的HTMC。经流式细胞术定量分析 ,不同浓度TGF β2 处理的HTMC凋亡细胞百分数分别为 ( 2 .79± 0 .4 4 ) %、( 4 .4 3±1.17) %、( 9.6 0± 2 .0 5 ) % ,其中 1、3.2 μg·L-1TGF β2 处理组与对照组 ( 1.4 1± 0 .34) %相比分别有显著差异和极显著差异。结论　TGF β2 能诱导体外培养HTMC发生凋亡 ,推测其可能参与了原发性开角型青光眼患者和正常人衰老过程中HTMC数目的减少。     

转化生长因子-β与眼表瘢痕形成

转化生长因子 β(TGF β)是一种多功能的细胞因子 ,在结膜和角膜中均有分布 ,参与眼表损伤后的瘢痕形成。本文综述TGF β的分子结构、受体和信号传导通路及其生物学功能 ,着重介绍TGF β在结膜和角膜损伤愈合、瘢痕形成中的作用 ,以及羊膜移植对TGF β的瘢痕形成的抑制作用     

兔转化生长因子-β2基因的克隆及其表达的检测

目的　克隆兔转化生长因子 β2 (TGF β2 )基因 ,并获得其在兔重要脏器及角膜中的表达。方法　利用不同物种的相似序列设计相关引物 ,制备兔肝组织的RNA并逆转录 ,RT PCR技术获得TGF β2 基因蛋白编码区序列后克隆 ,RT PCR半定量及荧光定量PCR检测TGF β2 在兔重要脏器及角膜中的表达。结果　成功地克隆了兔TGF β2 的蛋白编码区序列 ,测序证实和人、大鼠及小鼠具有高度的同源性 ,含有TGF β2 的保守结构域 ,TGF β2 基因在兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺和角膜组织中均有不同程度表达。结论　利用同源序列克隆进化上保守的基因是简捷快速的方法。获得兔TGF β2 的基因有助于进一步研究其在机体重要脏器纤维化、肿瘤以及角膜疾病中的作用     

曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子-β2表达的抑制作用

目的　观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子 β2 (TGF β2 )表达的影响。方法　体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞经 0 0 (对照组 )、12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理 4 8h后 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞TGF β2 表达的影响 ,以人甘油醛 3 磷酸酯脱氢酶 (G3PDH)作为内参照。结果　 12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理组TGF β2 /G3PDH象素值比值分别为 1 85± 0 35 ,1 6 6± 0 4 2 ,1 16± 0 2 4 ,与对照组比值 3 82± 0 5 6比较 ,差异有非常显著意义 (q′ =10 77,11 80 ,14 5 4 ;P <0 0 1) ;同时 ,TGF β2 /G3PDH比值随曲尼司特浓度增加而变小 ,呈现明显的量效关系。结论　曲尼司特能明显抑制小梁细胞TGF β2 的表达。可从发病学途径探讨曲尼司特对原发性开角型青光眼的治疗机制。     

视网膜色素上皮-脉络膜在近视发病中的作用

目的 :探讨人眼视网膜色素上皮细胞 (RPE)、黑素细胞、成纤维细胞与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、β转化生长因子 (TGF β)和肝细胞生长因子 (HGF)的关系。 方法 :①用不含血清的培养液培养三种细胞 48h ,收集培养液 ,用酶标免疫吸附法测量生长因子含量 ;②将各种生长因子加入含有三种不同细胞的培养液中 ,五天后行细胞计数。结果 :在RPE和成纤维细胞培养液中能测出HGF、bFGF和TGF ,而在黑素细胞培养液中则不能测出。bFGF能刺激上述三种细胞的生长 ,HGF能刺激RPE与黑素细胞的生长 ,而TGF β能抑制三种细胞的生长。结论 :RPE、成纤维细胞和黑素细胞具有上述生长因子受体 ,其中RPE和成纤维细胞还能产生上述生长因子。视网膜产生的各种与近视有关的信使不能透过RPE—脉络膜 ,所以不能直接作用于巩膜。RPE、成纤维细胞和黑素细胞通过产生、抑制和应答各种生长因子、神经递质及激素 ,在近视发生中产生作用     

实时荧光聚合酶链反应定量检测准分子激光原位角膜磨镶术后兔角膜转化生长因子β2的表达

目的 :定量检测转化生长因子 β2 (TGF β2 )在LASIK术后不同时段角膜中的表达水平 ,探讨TGF β2与准分子激光原位角膜磨镶术 (LASIK)术后早期伤口的愈合关系。方法 :取 2 0只新西兰白兔 ,左眼按近视 4D行LASIK术 ,右眼作对照组。分别于术后即刻、4h、4 8h、1w、2w取角膜 ,用荧光半定量PCR方法检测兔中央手术区及周边非手术区角膜TGF β2的表达。 结果 :LASIK术后不同时段术眼中央手术区与周边非手术区角膜TGF β2的mRNA水平差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,左眼手术区与右眼相应对照区角膜TGF β2的表达差异同样无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :LASIK术后反应轻微 ,组织损伤小 ,角膜TGF β2的表达与术前相比无明显变化。     

基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶2组织抑制因子及转化生长因子β_1在糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞的表达及意义

目的　探讨基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )、金属蛋白酶 2组织抑制因子 (tissueinhibitorofmetalloproteinase 2 ,TIMP 2 )及转化生长因子 β1(transforminggrowthfoctorbeta ,TGF β1)在糖尿病性白内障患者的晶状体上皮细胞中的表达及意义。方法　应用免疫组化技术检测 2 3例糖尿病性白内障患者和 7例正常人的晶状体上皮细胞中MMP 2、TIMP 2及TGF β1的表达 ,并进行比较。结果　糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中MMP 2和TGF β1的阳性表达率与正常人比较 ,差异均有非常显著意义 (χ2 =2 4 5 48,16 78;P <0 0 1) ,而糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中TIMP 2的阳性表达率与正常人比较 ,差异无显著意义 (χ2 =0 6 2 1,P >0 0 5 )。经Spearman等级相关分析 ,晶状体上皮细胞中 ,MMP 2和TGF β1的阳性表达率存在正相关 (r =0 5 16 ,P <0 0 1) ;MMP 2和TGF β1与TIMP 2阳性表达率间均无相关 (r =- 0 0 45 ,0 0 42 ;P >0 0 5 )。结论TGF β1介导的MMP 2和TIMP 2表达失衡在糖尿病性白内障患者晶状体前、后囊膜下纤维化的发生和发展过程中起重要作用。     

转化生长因子β及其在青光眼术后滤过泡瘢痕化中作用的研究进展

转化生长因子β(Transforming growth factor β,TGFβ)在青光眼滤过泡瘢痕化形成的病理过程中具有重要作用。本文就目前有关TGFβ的生物学特性、TGFβ在青光眼滤过泡瘢痕形成中的作用、可能的作用机理以及TGFβ拮抗剂在防治青光眼滤过泡瘢痕化中应用等方面的研究作一介绍。     

PRK术后泪液中EGF、TGF-β1、IL-1α含量的变化

目的 :探讨表皮生长因子 (EGF)、转化型生长因子 β1(TGF β1)、白细胞介素 1α(IL 1α)三种与角膜关系密切的细胞因子于PRK手术前后在泪液中的含量 ,并寻求其术后短期内的变化规律。方法 :于PRK术前及术后 1d ,2d ,10d及 1个月在患者下睑结膜囊内抽取泪液标本。采用双抗体夹心ABCELISA法进行检测。结果 :在PRK术前至术后 1个月的随访期间 ,EGF和IL 1α无明显变化 (P >0 .0 5 )。术后第1天泪液中TGF β1含量较术前降低 (P <0 .0 5 )。结论 :PRK手术前后EGF和IL 1α无明显变化 ,可能是该种细胞因子对维持细胞稳态起作用 ,或是通过其他细胞因子发挥作用。而TGF β1在术后 1d含量较术前下降 ,致使其对EGF的抑制作用相对减低 ,给细胞增殖移行提供机会 ,尽快恢复其屏障功能 ,之后TGF β1又恢复至术前水平 ,与其他因子形成新的动态平衡 ,共同调节术后角膜创面的修复愈合。     

白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠角膜移植片和房水中炎性细胞因子的影响

目的　探讨炎性细胞因子在角膜移植免疫排斥反应中的作用及白细胞介素受体拮抗剂(IL 1ra)的治疗效果。方法　角膜移植大鼠随机分为 5组 ,每组 1 0只 ,采用免疫组化方法和酶链免疫吸附试验 ,检测各组大鼠角膜和角膜移植排斥反应术前、急性排斥反应期及术后 2周植片中白细胞介素 1受体 1 (IL 1RⅠ )和转化生长因子 β1 (TGF β1 )表达情况及房水中白细胞介素 1 β(IL 1 β)含量变化。结果　正常大鼠角膜中未检测出IL 1RⅠ表达 ,TGF β1 主要位于角膜上皮细胞基底层 ;在角膜移植术后的植片上皮细胞层、基质层和内皮细胞层中均可检测到IL 1RⅠ和TGF β1 表达 ,其表达量按阴性对照组、50 μgIL 1ra组、1 0 0 μgIL 1ra组、2 0 0 μgIL 1ra组和地塞米松组依次递减 ,在急性排斥期 ,2 0 0 μgIL 1ra组表达IL 1RⅠ和TGF β1 的程度低于 50 μgIL 1ra组 ,差异有显著意义(P <0 0 1 ) ;阴性对照组IL 1RⅠ和TGF β1 表达量显著高于实验各组 (P <0 0 1 ) ;正常大鼠房水中检测出IL 1 β含量为 (96 0± 1 1 3)ng L ,角膜移植术后房水中IL 1 β含量上升 ,于急性排斥期达到高峰 ,阴性对照组为 (552 2± 68 3)ng L ,明显高于其他各实验组 (P <0 0 1 ) ;在各实验组中 ,排斥前和急性排斥期之间差异无显著意义 (P >0 0 5     

转化生长因子β及其在青光眼术后滤过泡瘢痕化中作用的研究进展

转化生长因子β(Transforming growth factor β，TGFβ)在青光眼滤过泡瘢痕化形成的病理过程中具有重要作用。本就目前有关TGFβ的生物学特性、TGFβ在青光眼滤过泡瘢痕形成中的作用、可能的作用机理以及TGFβ拮抗剂在防治青光眼滤过泡瘢痕化中应用等方面的研究作一介绍。     

TGF-β1在鸡形觉剥夺性近视眼中的表达及作用

目的　建立鸡的形觉剥夺性近视眼(FDM)模型,研究视网膜和脉络膜TGF -β1及其mRNA在FDM发展中的表达变化,探讨TGF- β1在FDM中的作用。 方法　取当日出生的来亨鸡 40只,随机遮盖一眼,另眼作对照。实验中测量双眼的屈光度与轴长,RT -PCR检测TGF-β1mRNA的表达,免疫组织化学分析TGF β1的活性。 结果　形觉剥夺可以导致眼球轴性延长,近视屈光度增加。去遮盖后双眼轴长差异减小,近视度下降。形觉剥夺降低视网膜TGF- β1和TGF -β1mRNA的表达,去遮盖后逐渐恢复。 结论　视网膜TGF- β1的变化可能与FDM的形成有关,TGF- β1可能参与眼球生长调控。     

TGF-β1 对角膜上皮移植后CD4+、CD8+、CD25+、CD71+的影响

目的 :角膜移植排斥反应是角膜移植失败的主要原因。方法 :为有效控制角膜移植术后排斥反应的发生 ,提高角膜移植成功率 ,我们观察了TGF β1对BALB/c小鼠角膜上皮移植术后外周血淋巴细胞亚群CD 4 、CD 8、CD 2 5、和CD 71活化的影响。研究中采用CD 4 、CD 8、CD 2 5、CD 71、免疫荧光标记及流式细胞仪检测技术 ,对BALB/c小鼠角膜上皮移植术后 12d的外周血中CD 4 、CD 8、CD 2 5、CD 71的表达进行分析。结果 :BALB/c小鼠角膜上皮移植术后 12d的外周血中CD 4 CD 2 5、CD 8CD 2 5、CD 4 CD 71、及CD 8CD 71双阳性的T淋巴细胞均有显著升高 ;术后经TGF β1治疗后 ,上述细胞的数量明显受到抑制。结论 :TGF β1可抑制特异性抗原介导的 ,以及非特异性炎症诱导的移植排斥反应     

Smad 7抑制TGF-β2的抗角膜内皮细胞增殖效应并加速内皮损伤

随着内眼手术的大量开展 ,角膜内皮的损伤逐渐增多 ,但由于角膜内皮细胞的不可再生性 ,给临床治疗带来许多困难。探索影响内皮修复的因素 ,将成为眼科界的一个课题。研究表明 ,房水中存在着大量的转化生长因子 β2 (TGF β2 ) ,它能上调角膜内皮细胞p2 7kip1 (一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 )的表达 ,而 p2 7kip1的表达抑制角膜内皮细胞的分裂 ,所以TGF β2对角膜内皮细胞增生修复起抑制作用。Smad是一个新的蛋白家族 ,角膜内皮细胞可以表达Smad2、Smad3、Smad4和Smad7。本实验利用Smad7阻断TGF β2在细胞内的信号传导 ,从而拮抗…     

近视眼角膜上皮细胞EGFR、TGF-βRⅠ及IL-1RⅠ的表达

目的 :检测近视患眼角膜上皮细胞表皮生长因子受体 (EGFR)、转化生长因子 βⅠ型受体 (TGF -βRⅠ )和白细胞介素 1Ⅰ型受体 (IL -1RⅠ )的表达。方法 :将PRK术中获取的角膜上皮细胞制成细胞涂片 ,ABC法检测。结果 :EGFR、TGF -βRⅠ和IL -1RⅠ在全部标本表达 ,强度依次为EGFR >IL -1RⅠ >TGF -βRⅠ。结论 :近视患眼角膜上皮细胞表达此三种受体 ,推测PRK术后此三种受体参与角膜创面修复。