幽门螺杆菌iceA1基因地域分布特征

iceA基因是近年来发现的一种幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)毒力相关基因.H.pylori与胃黏膜上皮接触后可引起iceA1基因表达上调,该基因与nlaIIIR基因(位于乳糖奈瑟氏菌)具有相似性,其编码的蛋白质产物具有NlaIIIR样限制性核酸内切酶活性.研究表明,iceA1阳性...     

幽门螺杆菌iceA基因型与胃黏膜病变的相关性

目的:研究幽门螺杆菌(H pylori)iccA基因型与胃黏膜病变的相关性.方法:用PCR方法检测552例慢性胃炎患者胃黏膜活检标本中H pylori的iceA基因在慢性炎症、活动性炎症、腺体萎缩和肠上皮化生中的存在情况.结果:在552例样本中,iceA1和iceA2亚型菌株单独检出率分别为67.2%,21.7%,iceA1和iceA2亚型均阳性的检出率7.6%,iceA1和iceA2亚型均阴性的比率3.4%.在H pylori感染的慢性炎症、活动性炎症、腺体萎缩、肠上皮化生的重度炎症iceA1的阳性率明显高于中度炎症.两者比较差异有统计学意义(83.1% vs 10.8%,85.5% vs 10.5%,75.6% vs13.0%,75.6% vs 13.0%,均,P<0.05).腺体萎缩和肠上皮化生iceA1的阳性率明显高于其他组(P<0.05).感染iceA1亚型菌株与未感染ieeA1亚型的胃黏膜病变程度差异有显著性(P<0.05).结论:iCeA1是河南地区的优势基因亚型,iceA1阳性率随炎症程度加重逐渐升高.iceA1亚型菌株与重度炎症特别是腺体萎缩和肠上皮化生关系密切.     

胃癌,消化性溃疡患者幽门螺杆菌和iceA基因的研究

目的研究幽门螺杆菌（Ｈｐ）的ｉｃｅＡ基因与胃癌、消化性溃疡病的关系。从１２１例患不同胃十二指肠疾病的患者胃活检组织中分离培养Ｈｐ,ＰＣＲ扩增检测Ｈｐ的ｃａｇＡ和ｉｃｅＡ基因。结果胃癌、消化性溃疡及功能性消化不良患者Ｈｐ的ｃａｇＡ基因的阳性率分别为：９１２％、８７１％和８９７％（Ｐ＞０．０５）;而ｉｃｅＡ１基因的阳性率分别为：６８０％、７１０％和６９２％（Ｐ＞０．０５）。结论我们的研究表明Ｈｐ的ｃａｇＡ和ｉｃｅＡ１基因与胃癌及消化性溃疡的发生不相关。     

幽门螺杆菌iceA、cagA相关性研究

目的研究幽门螺杆菌(Helicobecterpylori)cagA、iceA与胃十二指肠疾病的关系及二者的相关性。方法从138例胃黏膜活检组织中分离培养H·pylori,PCR扩增检测cagA、iceA,并测序。结果cagA /iceA1 /iceA2 在消化性溃疡中的阳性率明显高于慢性胃炎和胃癌。cagA、iceA1同时阳性为55·4%(62/112),cagA阴性iceA1阳性为11·5%(3/26),存在统计学差异。cagA、iceA2同时阳性为51·8%(58/112),cagA阴性iceA2阳性为30·8%(8/26),存在统计学差异。结论cagA /iceA1 /iceA2 菌株可能与消化性溃疡的发生、发展相关,cagA和iceA1可能存在协同作用,和iceA2关系不大。     

幽门螺杆菌基因hpaA克隆、融合表达和鉴定

目的克隆幽门螺杆菌粘附素基因hpaA,构建幽门螺杆菌hpaA基因与麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体,并进行诱导表达,鉴定融合蛋白免疫原性,为幽门螺杆菌疫苗研究提供依据。方法利用PCR技术从H.pylori郑州分离株MEL-HP27染色体DNA上扩增出hpaA基因,序列分析后,将其克隆到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌(E.coliTB1),用IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,Western blot鉴定其免疫原性。结果用PCR方法扩增的hpaA基因长度为783bp,编码260个氨基酸,经酶切鉴定和测序,插入到克隆载体的基因片段与预期目的DNA片段相一致;SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为29kDa,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的26%。结论本研究成功构建了hpaA基因与麦芽糖结合蛋白基因融合原核表达系统,为幽门螺杆菌基因工程组分疫苗的研究奠定基础。     

淮南地区幽门螺杆菌iceA1、babA2基因分布及其细胞免疫功能研究

目的研究淮南地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori,Hp)iceA1、babA2基因分布特征及其细胞免疫功能。方法对244例有消化道症状者行胃镜检查,并在胃窦部取活检粘膜作Hp的分离培养,利用聚合酶链反应技术(PCR)测定分离培养出的Hp菌株的iceA1、babA2基因,并采用生物素-链霉亲和素(biotin-sreptavidin,BSA)系统检测患者外周血T细胞亚型,ELISA法检测其细胞因子。结果244例中,检出Hp菌株185例,其中慢性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡及十二指肠球部溃疡阳性率分别为70.65%(65/92)、74.14%(43/58)、85.25%(52/61)及75.76%(25/33);基因测定结果显示,185株分离株中,79.46%(147/185)含iceA1基因,75.14%(139/185)含babA2基因;其中慢性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡及十二指肠球部溃疡iceA1、babA2基因检出率分别为66.15%(43/65)、56.92%(37/65);79.07%(34/43)、74.42%(32/43);90.38%(47/52)、88.46%(46/52);92.00%(23/25)、96.00%(24/25);差异均具显著性(P<0.01)。细胞免疫功能检测,iceA1+、babA2+患者的CD+3、CD+4、CD+4/CD+8、IL-2下降,IL-6、IL-8水平升高,差异有显著性(P<0.001)。结论淮南地区Hp感染多为iceA1+、babA2+菌株,iceA1+、babA2+Hp菌株为高毒力菌株,是致消化性溃疡的重要因素;iceA1+、BabA2+菌株可使患者细胞免疫功能下降,引起患者以Th1为主的浸润反应。     

淮南地区幽门螺杆菌iceA1、babA2基因分布及其细胞免疫功能研究

目的研究淮南地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori,Hp)iceA1、babA2基因分布特征及其细胞免疫功能。方法对244例有消化道症状者行胃镜检查,并在胃窦部取活检粘膜作Hp的分离培养,利用聚合酶链反应技术(PCR)测定分离培养出的Hp菌株的iceA1、babA2基因,并采用生物素-链霉亲和素(biotin-sreptavidin,BSA)系统检测患者外周血T细胞亚型,ELISA法检测其细胞因子。结果244例中,检出Hp菌株185例,其中慢性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡及十二指肠球部溃疡阳性率分别为70.65%(65/92)、74.14%(43/58)、85.25%(52/61)及75.76%(25/33);基因测定结果显示,185株分离株中,79.46%(147/185)含iceA1基因,75.14%(139/185)含babA2基因;其中慢性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡及十二指肠球部溃疡iceA1、babA2基因检出率分别为66.15%(43/65)、56.92%(37/65);79.07%(34/43)、74.42%(32/43);90.38%(47/52)、88.46%(46/52);92.00%(23/25)、96.00%(24/25);差异均具显著性(P<0.01)。细胞免疫功能检测,iceA1 、babA2 患者的CD 3、CD 4、CD 4/CD 8、IL-2下降,IL-6、IL-8水平升高,差异有显著性(P<0.001)。结论淮南地区Hp感染多为iceA1 、babA2 菌株,iceA1 、babA2 Hp菌株为高毒力菌株,是致消化性溃疡的重要因素;iceA1 、BabA2 菌株可使患者细胞免疫功能下降,引起患者以Th1为主的浸润反应。     

幽门螺杆菌过氧化氢酶基因的克隆、高效表达及活性评价

目的：构建高效表达幽门螺杆菌（Hp）过氧化氢酶重组蛋白的候选菌株并测定其活性。方法：用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增过氧化氢酶基因，将其定向插入表达pET-22b(＋），并在BL21（DE3）大肠杆菌中表达，进一步利用贝尔斯－西策尔斯法测定其活性。结果：DNA序列分析表明，所克隆的过氧化氢酶基因序列与基因库公布的一致。在37℃诱导表达3h后，过氧化氢酶重组蛋白表达量占苗体总蛋白的24．4％，并显示了良好的活性。结论：本研究获得了表达高活性Hp过氧化氢酶的克隆，为深入研究其相关功能奠定了良好基因。     

儿童幽门螺杆菌iceA1、babA2基因分布及其细胞免疫功能研究

目的探讨儿童幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)iceA1、babA2基因分布特征及其细胞免疫功能。方法对152例有消化道症状患儿行胃镜检查,并在胃窦部取粘膜作Hp的分离培养,利用聚合酶链反应技术(PCR)测定分离培养出的Hp菌株的iceA1、babA2基因,并采用生物素-链霉亲和素(biotin-sreptavidin,BSA)系统检测患者外周血T细胞亚型,ELISA法检测其细胞因子。结果152例中,检出Hp菌株98例,其中iceA1阳性菌株65例,轻度胃炎、中至重度胃炎iceA1阳性率分别为43.59%(17/39)、79.25%(42/53),差异有统计学意义(P<0.01);babA2阳性菌株71例,轻度胃炎、中重度胃炎babA2阳性率分别为48.72%(19/39)、86.79%(46/53),差异有统计学意义(P<0.05);6例活动性胃炎均为iceA1、babA2阳性;iceA1 、babA2 患儿的CD3 、CD4 、CD4 /CD8 和IL-2下降,IL-6、IL-8水平升高(P均<0.001)。结论儿童Hp感染多为iceA1 、babA2 菌株。iceA1 、babA2 Hp菌株为高毒力菌株,易引起较严重的慢性胃炎,使患者细胞免疫功能下降,引起以Th1细胞为主的炎症浸润反应。     

Clinical significance of Helicobacter pylori cagA and iceA genotype status

AIM:To study the presence of Helicobacter pylori(H.pylori) virulence factors and clinical outcome in H.pylori infected patients.METHODS:A prospective analysis of ninety nine H.pylori-positive patients who underwent endoscopy in our Endoscopy suite were included in this study.DNA was isolated from antral biopsy samples and the presence of cagA,iceA,and iceA2 genotypes were determined by polymerase chain reaction and a reverse hybridization technique.Screening for H.pylori infection was performed in all patie...     

幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌(简称Hp)HspA-UreB融合蛋白,并探索其免疫反应性,为Hp基因工程疫苗的研制奠定基础。方法用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA和ureB基因,分别克隆入pNEB193中。测序后,回收两种基因片段,并以hspA-ureB的顺序连接插入原核表达载体pMAL-C2x进行融合表达。采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定。结果特异PCR法和酶切鉴定证实融合基因hspA-ureB克隆入表达载体中;重组质粒转化大肠杆菌TB1后,经IPTG诱导3h,SDS-PAGE电泳显示在119kDa处出现一条特异蛋白带,即麦芽糖结合蛋白(MBP)与HspA-UreB的融合表达形式,约占细菌总体蛋白含量的31%;该融合蛋白与Hp免疫小鼠血清和Hp阳性病人血清的Westernblot分析结果显示,在119kDa处出现特异杂交带。结论成功地在大肠杆菌中实现了Hp融合蛋白HspA-UreB的高效表达,并证实其具有良好的免疫反应性。     

幽门螺杆菌脂蛋白基因的重组表达和免疫活性鉴定

目的制备幽门螺杆菌(Hp)Lpp20重组蛋白(rLpp20),鉴定其免疫活性,为Hp疫苗和免疫诊断研究提供候选抗原。方法采用基因克隆技术将Hplpp20基因克隆到表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化E.coliTB1。采用IPTG诱导lpp20基因与麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)基因融合表达,用多糖树脂亲和层析方法纯化表达的融合蛋白(MBP-rLpp20)。将MAP-rLpp20用蛋白因子FactorXa酶切,得到不带MBP的rLpp20。分别用MAP-rLpp20、rLpp20和Hp全菌抗原免疫小鼠,用Western blot检测MBP-rLpp20和rLpp20的抗原活性。结果表达的MBP-rLpp20的相对分子质量为60×103,表达量占菌体总蛋白的34.1%,占可溶性蛋白的14.2%。经酶切和纯化得到的rLpp20的相对分子质量为15×103。纯化制备的MBP-Lpp20和rLpp20的纯度分别为90.4%和91.2%,且与相应免疫小鼠血清及Hp全菌抗原免疫小鼠血清均能发生阳性反应。结论该研究成功制备了纯度较高的MAP-Lpp20和rLpp20蛋白;这两种重组蛋白均具有免疫活性,对Hp疫苗和免疫诊断研究具有应用价值。     

Expression of Helicobacter pylori AlpA protein and its immunogenicity

AIM: To construct a recombinant strain which expresses adhesin AlpA of Helicobacter pylori (H pylori) and to study the immunogenicity of adhesin AlpA. METHODS: Gene Ab, which was amplified from H pylori chromosomal DNA by PCR technique, was sequenced and the biological information was analyzed, and inserted into the Nco I and Not I restriction fragments of the expression vector pET-22b(+) using T4 DNA ligase. The resulting plasmid pET-AlpA was transformed into competent E.coli BL21(DE3) cells using ampicillin resistance for selection. Recombinant strains were incubated in 5 mL LB with 100 μg/mL ampicillin overnight at 37 ℃. Sonication of BL21(DE3)pET-22b(+)/AlpA was analyzed by Western blot to detect AlpA immunogenicity. RESULTS: The gene encoding AlpA protein was amplified by PCR with chromosomal DNA of H pylori Sydney strain (SS1) as templates. It revealed that AlpA DNA fragment amplified by PCR had approximately 1 500 nucleotides, compatible with the previous reports. The recombinant plasmid pET-22b(+)/AB was successfully constructed. DNA sequencing showed one open reading frame with the length of 588 bp. It encoded seven conservative regions that showed good antigenicity and hydrophobicity by Parker and Welling method. Furthermore, INTERNET EXPASY, NNPREDICT and ISREC predicted that it was a porin-like structure consisting of β-pleated sheets that were embedded in the outer membrane. BLAST analyzed 836 767 protein sequences and found that the similar sequences were all belonging to H pylori OMP sequences. SDS-PAGE and scan analysis showed that the molecular weight of AB was 22.5 ku and recombinant protein amounted to 29% of the total bacterial protein, among which dissolved expression amounted to 21.9% of sonicated supernatant. The rAB purity amounted to 96% through affinity chromatography. Western blot analysis of rAB confirmed that it could be specially recognized by serum form rabbit immunized with AlpA and H pylori infected. CONCLUSION: Adhesin AlpA recombinant protein may be a potential vaccine for control and treatment of H pylori infection.     

上海地区幽门螺杆菌菌株iceA、babA2基因型与临床的关系

目的检测上海地区幽门螺杆菌(Hp)感染患者中Hp菌株iceA、babA2的分布特征，探讨与Hp临床感染结局相关的菌株基因型。方法141株Hp菌株分离自43例慢性胃炎(CG)、47例十二指肠球部溃疡(DU)、30例胃溃疡(GU)和21例非贲门部胃癌患者的胃镜活检标本。采用PCR方法检测Hp菌株的iceA、babA2、cagA和vacA基因型。结果141株Hp菌株中，iceA1、iceA2和babA2的总检出率分别为74．5％(105／141)、15．6％(22／141)和63．8％(90／141)，其中2例(1．4％)为iceA1、iceA2均阳性，16例(11．3％)为iceA1、iceA2均阴性。DU组的babA2检出率显著高于GU组(74．5％比50．0％。P=0．028)，DU组的cagA^ ／babA2^ 检出率亦显著高于GU组(70．2％比46．7％，P=0．039)。其余疾病组之间的babA2检出率差异无显著性。未发现不同临床疾病与iceA基因型的相关性。结论上海地区Hp感染者的菌株基因型主要是iceA1^ ／babA2^ ，babA2在DU和GU的发病机制中起不同作用。未发现iceA亚型与Hp临床感染结局有相关性。     

西安地区幽门螺杆菌cagA, iceA基因与其所致疾病的相关性

目的: 研究幽门螺杆菌( H pylori) cagA、iceA基因及其不同组合对H pylori感染结局的影响, 探讨西安地区H pylori的优势致病基因型.方法: 用快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)筛选出H pylori阳性胃黏膜标本101例,细菌基因组DNA提取试剂盒提取DNA, 用聚合酶链反应(PCR)扩增尿素酶C( ureC)基因的方法筛选出H pylori阳性标本91例. 经PCR及琼脂糖凝胶电泳对cagA, iceA的基因亚型进行检测, 用χ2检验以及Fisher精确检验分析各基因及其不同组合与疾病的相关性.结果: cagA基因的阳性率为79.1%, iceA的总检出率为75.82%, 其中iceA1为50.5%, iceA2为38.5%, cagA+/ iceA1+的检出率高于其他组,单一基因及其不同组合在各疾病组中分布没有显著差异. iceA与cagA存在相关性. iceA2分别发现有229、334、439、549 bp以及229bp+334 bp的基因片段.结论: cagA+/ iceA1+是西安地区H pylori的优势致病基因型, cagA、iceA1、iceA2各单一基因以及其不同组合与感染的临床结局无关. iceA与cagA基因可能存在协同作用, 该地区iceA2基因有较大的变异性.