体内表达细菌毒力基因分析

面对复杂的宿主环境,细菌在本内是通过调节表达不同的毒力基因建立并延续其感染过程的。目前已建立起多法去分析鉴定体内特异表达的细菌毒力基因。其中体内表达技术的应用为鉴定细菌毒力基因以及提示细菌致病机理开避了的途径。本文对此作一综述。     

体内表达细菌毒力基因分析

面对复杂的宿主环境,细菌在体内是通过调节表达不同的毒为基因建立并延续其感染过程的。目前已建立起多种方法去分析鉴定体内特异表达的细菌毒力基因。其中体内表达技术的应用力为鉴定细菌毒为基因以及揭示细菌致病机理开辟了有力的途径。本文对此作一综述。     

鉴定细菌致病基因方法的新进展

研究微生物和宿主之间的相互作用，鉴定病原微生物的致病基困，对于阐明病原微生物的致病机理，发展新一代疫苗和抗菌药物有非常重要的意义。本文综述了鉴定细菌致病基因的四种方法的原理、特点及意义，并重点介绍了1993年新发展的体内表达技术，即IVET技术。IVET技术是细菌学研究上的一次革命。该方法克服了以前鉴定细菌致病基因方法的缺点，不依赖在体外模拟有关的环境变化，而以动物作为一种选择培养基，筛选出被宿主特异性诱导表达的致病基因。IVET技术的应用必将进一步推动对病原菌和宿主相互关系的研究。     

鉴定细菌致病基因方法的新进展

研究微生物和宿主之间的相互作用，鉴定病在微生物致病基因，对于阐明病原微生物的致病机理，发展新一代疫苗和抗菌药物有非常重要的意义。本文综述了鉴定细菌致病基因的四种方法的原理，特点及意义，并重点介绍了１９９３年新发展的体内表达技术，即ＩＶＥＴ技术。ＩＶＥＴ技术是这研究上的一次革命。该方法克服了以前鉴定细菌致病方法的缺点，不领事在体外模拟有关的环境变化，而以动物作为一种选择培养基，筛同被宿主特异性诱导表     

环境因素诱导细菌致病基因的表达及其调节

研究细菌致病基因的表达及其调节特性 ,有助于定义潜在的毒力因子 ,鉴定新的致病基因和毒力因子。本文综述了特定的宿主产物、温度、Fe离子浓度、渗透压等环境信号诱导细菌致病基因表达的机理 ,以及两成分调节系统和DNA超螺旋的改变对细菌致病基因表达的调节。     

化脓性链球菌毒力基因检测及模式分类分析

目的调查60株化脓性链球菌毒力基因存在状况及毒力基因携带模式。方法 60株化脓性链球菌分离自2014年1月至2017年10月南京医科大学附属淮安第一医院与南京中医药大学附属医院急性扁桃体炎患者的病灶部位拭子标本。采用PCR及序列分析的方法分析侵袭性酶毒力基因(hyl A、spe B、endo S)、超抗原毒力基因(sme Z)、免疫逃逸毒力基因(sic)及黏附素毒力基因(prt F1)等6种毒力基因,并基于阳性检出模式进行毒力基因分类。结果侵袭性酶spe B、endo S基因和超抗原sme Z基因检出率均达100%,hyl A检出率为50%,sic检出率为23.3%,prt F1未检出。根据毒力基因检测结果,60株化脓性链球菌可分为4种类型,检出hyl A、spe B、endo S、sme Z等4种毒力基因有29株(48.3%),检出spe B、endo S、sme Z等3种毒力基因17株(28.3%),检出spe B、endo S、sme Z、sic等4种毒力基因13株(21.7%),检出hyl A、spe B、endo S、sme Z、sic等5种毒力基因1株(1.7%)。结论临床分离化脓性链球菌侵袭性酶spe B、endo S基因和超抗原sme Z基因检出率均达100%,推测其可能是化脓性链球菌感染导致感染灶局部炎症和坏死的原因之一。     

何谓毒力岛及细菌的致病性?

毒力岛或称致病岛（pathogenicity islands，PAI）是近年来在医学微生物学领域对细菌致病机理研究中出现的一个新概念。各种病原菌的毒力因子都有一个原核基因组的特殊编码区，这个区域命名为毒力岛。毒力岛最初是在人致病性大肠埃希菌中发现的，与细菌的致病性密切相关。毒力岛的形成是细菌通过基因组水平转移，从一种病原菌转移到另一种细菌中，细菌的遗传物质亦随之从这种基因组转移到另一种细菌，并构成新的基因岛（genomic island）或毒力岛，使细菌在短期内发生质和量的变化，产生许多新的变种，这种演变是细菌进化的关键。毒力岛的功能是直接或间接地增强了细菌的适应性，使细菌和宿主之间相互影响，有助于细菌生态学的适应性和致病性，并推进了细菌的演变。所以毒力岛又称其为适应岛（fitness islands）、生态岛（ecological islands）或共生岛（symbiosis islands），是细菌演变和致病性的关键。     

广州市第一人民医院新生儿病区金黄色葡萄球菌毒力基因分布分析

目的　了解广州市第一人民医院新生儿病区的金黄色葡萄球菌毒力基因的分布情况,揭示其分子流行特征, 为进一步建立有效防控措施奠定基础。方法　选取2018 年6 月~2019 年4 月新生儿病区分离出金黄色葡萄球菌22 株, PCR 方法检测金黄色葡萄球菌纤维蛋白原结合蛋白（clfa）、胶原蛋白结合蛋白（cna）、纤连蛋白连接蛋白A（fnbpA）、 溶血素A,B（hlaA, hlaB）基因、金黄色葡萄球菌A 蛋白（spa）基因、mecA 基因、表皮剥脱素（eta）基因和中毒性 休克综合征毒素（tsst-1）基因。使用四格表资料和R×C 表的χ2 检验进行统计学分析。结果　22 株金黄色葡萄球菌中, 有6 株未检测到所选择的9 个基因。9 个毒力基因中hlaB,eta 和tsst-1 基因检出率低于10% （分别为9.09%,9.09% 和4.55%）,随后依次为fnbpA 基因（13.64%）,mecA 基因（27.27%）和cna 基因（45.45%）。clfa,hlaA 和spa 基 因检出率最高（分别为68.18%,63.64% 和59.09%）不同基因检出率差异具有统计学意义（χ2=240.21,P =0.000）。 clfa+hlaA+spa+cna 毒力基因模式检出率最高,占25%,差异具有统计学意义（χ2=69.607,P =0.000）。结论　广州市第 一人民医院新生儿病区金黄色葡萄球菌大都携带多个毒力基因,毒力基因检出率较低。     

医院分离高毒力肺炎克雷伯菌的毒力基因检测及耐药性分析

目的 研究医院分离高毒力肺炎克雷伯菌（Hvkp）的毒力基因及耐药性,为感染防控提供依据。方法采用基因检测和药敏试验方法,对某医院临床分离的肺炎克雷伯菌的毒力基因和耐药性情况进行检测与评价。结果 共检测肺炎克雷伯菌196株,有62株可判定为Hvkp,检出率为31.6%。62株Hvkp中毒力基因peg589、iroB、p-rmpA、p-rmpA2和irp2的检出率分别为88.7%、93.5%、96.7%、88.7%和66.1%,血清荚膜型K1和K2的检出率均为30.6%。Hvkp菌株对绝大多数临床常用抗菌药物的耐药率均低于10%,而经典的肺炎克雷伯菌株对绝大多数临床常用抗菌药物的耐药率均在15%以上。结论 临床分离的肺炎克雷伯菌中Hvkp构成比很高,其对常用抗菌药物的耐药率普遍低于经典菌株,提示应重视监测Hvkp菌株的耐药性,防止其在临床播散。     

376株肺炎克雷伯菌的毒力基因分析

目的 了解肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)的毒力基因及其高毒株分布状况,并评估用单个基因检测以预测高毒型KP(hypervirulent,HvKP)的性能.方法 搜集2016年1月-2018年12月临床分离的376株KP,采用聚合酶链反应法检测KP的12个毒力相关基因(entB、irp2...     

环境因素诱导细菌致病基因的表达及其调节

研究细菌致病基因的表达及其调节特性,有助于定义潜在的毒力因子,鉴定新的致病基因和毒力因子。本文综述了特定的宿主产物、温度、Fe离子浓度、渗透压等环境信号诱导细菌致病基因表达的机理,以及两成分调节系统和DNA超螺旋的改变对细菌致病基因表达的调节。     

山豆根对金黄色葡萄球菌毒力表达的影响

目的 探究山豆根对金黄色葡萄球菌(以下简称为金葡菌)毒力表达的影响,为临床用药进一步提供实验数据,丰富山豆根抗菌药用价值参考资料。方法 分别采用紫外吸光度法、扫描电镜、溶血试验法和Western Blot检测了山豆根作用后金葡菌细胞膜通透性、菌体形态变化,溶血活性和外毒素的表达。结果 亚抑菌浓度的山豆根能破坏细胞膜完整性并引起菌体变化,降低溶血能力和α-溶血素、金葡菌A型肠毒素(SEA)和金葡菌B型肠毒素(SEB)分泌。结论 山豆根对金葡菌毒力有抑制作用。     

鲍曼不动杆菌耐药性与毒力基因阳性模式相关性分析

目的调查鲍曼不动杆菌耐药性及毒力基因阳性情况,分析鲍曼不动杆菌耐药性与毒力基因阳性模式的关系。方法收集67株鲍曼不动杆菌,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对鲍曼不动杆菌进行鉴定,采用比浊法及氧化还原指示剂显色法进行药敏试验。聚类分析了解鲍曼不动杆菌同源性。PCR检测细菌外膜蛋白(ompA)、生物膜形成(adeH、csuA、pgaA)、铁摄取系统(basJ)、磷脂酶D(plcD)、荚膜阳性表型(ptk)和群体感应系统调节(abaI)8种毒力基因,并测序验证。分析鲍曼不动杆菌毒力基因与其耐药性关系。结果毒力基因ompA、adeH、csuA、pgaA、abaI、basJ、ptk和plcD的检出率分别为94%、100%、94%、99%、93%、96%、82%和99%。67株鲍曼不动杆菌中,同时检出3种基因的1株(1.5%)、5种基因的2株(3.0%)、6种基因的2株(3.0%)、7种基因14株(20.9%)和8种基因的48株(71.6%)。8种毒力基因阳性48株,多黏菌素耐药率仅为2.1%,四环素为58.2%,哌拉西林等其余13种的抗菌药物耐药率80%;7种毒力基因阳性14株,对除多黏菌素、四环素以外的抗菌药物耐药率78%。聚类分析结果显示,67株鲍曼不动杆菌共分为A、B 2个基因型,A型41株,B型26株。A型可分为A1(27株)、A2 2个亚型(14株),A1亚型主要来自神经外科(7株)、ICU(5株)和呼吸科(3株)等科室,A2亚型则主要来自呼吸科(3株)、心胸外科(3株)、ICU(2株)、神经外科(2株)等科室。B型可分为B1亚型(19株)、B2亚型(7株),B1亚型主要来自ICU(7株)、神经外科(4株)和呼吸科(3株)等科室,B2亚型主要来自ICU(2株)、呼吸科(3株)等科室。结论我院鲍曼不动杆菌可能存在交叉感染。鲍曼不动杆菌的耐药性与毒力基因阳性模式无相关性。     

医院分离金黄色葡萄球菌的毒力基因和耐药基因的研究

目的研究医院分离金黄色葡萄球菌临床株的毒力基因和耐药基因携带情况,为加强医院感染控制提供科学依据。方法采用分离培养与鉴定方法和多重基因扩增技术对金黄色葡萄球菌临床分离株进行了毒力基因和耐药基因检测,同时进行药敏试验。结果在医院采集的5 088份样品中,分离出25株金黄色葡萄球菌,阳性率为0.49%,其中耐甲氧西林菌株占12%。检测出主要毒力基因SEA-E携带率为52%,检出ETA携带率为12%,PVL、ETB和TSST-1等携带率均比较低。检出耐药基因主要是tetM,携带率为44%,erm携带率为24%。临床分离的金黄色葡萄球菌对常用12种抗菌药物都不同程度耐药,主要耐药基因和相应耐药表型结果基本一致。结论医院分离的金黄色葡萄球菌携带较多的毒力因子和耐药因子,MRSA具备多重耐药性,耐药表型和耐药基因检测结果相一致。     

临床血液和尿液样本分离肠球菌毒力基因分析

目的 分析分离自临床血液样本和尿液样本的肠球菌毒力基因携带情况。方法 收集2017—2019年南京医科大学鼓楼临床医学院分离自临床血液样本和尿液样本的粪肠球菌（93株）和屎肠球菌（103株）。采用聚合酶链反应（PCR）检测肠球菌毒力基因（cylA、esp、asa1、hyl、gelE和agg）,比较不同菌种和不同来源菌株毒力基因表达的差异。结果 93株粪肠球菌主要携带asa1(76.3%)、gelE(71.0%)、cylA(64.5%)、esp(60.2%)和agg(22.6%)基因,未检出hyl基因。103株屎肠球菌主要携带esp(68.9%)和hyl(31.1%)基因,未检出cylA、asa1、gelE和agg基因。血液样本分离粪肠球菌以gelE基因检出率（75.0%）最高;尿液样本分离粪肠球菌以asa1基因检出率（85.7%）最高。尿液样本分离粪肠球菌cylA、asa1基因检出率高于血液样本（P<0.05）;屎肠球菌esp基因检出率高于血液样本（P<0.05）。结论 粪肠球菌比屎肠球菌携带更多种毒力因子,不同样本来源肠球菌毒力基因的分布存在差异。     

铜绿假单胞菌临床感染的耐药性及毒力基因分析

目的了解铜绿假单胞菌在医院感染的临床分布、对抗菌药物的耐药性特点及多药耐药菌株毒力基因的携带与耐药性关系,为合理用药提供依据。方法对该院2016年1月至2017年12月临床分离的铜绿假单胞菌引起的感染分布及药敏结果进行回顾性分析。同时收集43株多药耐药铜绿假单胞菌,运用聚合酶联反应(PCR)法对毒力基因exoS和exoU进行检测,对携带exoS(-)/exoU(+)和exoS(+)/exoU(-)两组菌株的耐药率进行χ2检验。结果共分离出1 000株铜绿假单胞菌,以痰液标本为主,为72.6%;铜绿假单胞菌对阿米卡星敏感度最好,耐药率为9.6%,对头孢他定耐药率最高为42.2%。43株多药耐药菌株中以exoS(+)/exoU(-)基因型为主,有33株,占78.6%,exoS(-)/exoU(+)基因型有6株,占14.3%,exoS(-)/exoU(+)菌株对环丙沙星和左氧氟沙星等抗菌药耐药率均明显高于exoS(+)/exoU(-),耐药率差异有统计学意义(P0.05)。结论铜绿假单胞菌在医院表现出多药耐药,且以exoS为主,虽然携带exoU的菌株所占比例较低,但其耐药率高。     

细菌基因分型技术方法及其评价

细菌的爆发流行是当前医院感染中的常见问题，及时地判定感染的爆发、确定感染源是控制流行和交叉感染的必要手段，现代分子生物学的理论和技术为细菌分型方法提供了可靠的保证。近来各种细菌DNA分型技术已广泛应用于临床中，本文将主要的分子生物学分型技术方法进行了简介并对其应用作一评述。     

2009-2014年浙江省余姚市志贺菌菌型分布及毒力基因分析

目的 了解近年来浙江省余姚市志贺菌菌型变化及毒力基因分布特征。方法 对2009-2014年监测到的82 株志贺菌进行血清分型,采用6对引物IpaH、ial、set1A、set1B、sen、virA分别对志贺菌中毒力相关基因进行检测。结果 2009-2014年共检出收集到志贺菌株82株,以宋内志贺菌(42.5%) 和福氏志贺菌(57.5%)为主。ipaH、ial基因的携带率为100%,set1A、set1B、sen、virA基因的携带率分别为79.3%、76.8%、96.3%和91.4%,set1基因在福氏志贺菌的携带率明显高于宋内志贺菌。结论 余姚市流行的志贺菌优势血清型每年都有变化,毒力相关基因不同菌型之间存在差异。     

临床分离气单胞菌耐药性及毒力基因检测

摘要 目的 〖HT5"SS〗了解医院临床分离气单胞菌的耐药现状及毒力基因分布情况,为临床合理用药和治疗提供依据。方法 采用药敏试验和基因检测技术,对某医院临床分离的气单胞菌耐药性及其毒力基因进行检测与分析。结果 该医院从临床病原学标本中共检出气单胞菌86株,以嗜水气单胞菌和豚鼠气单胞菌为主,构成比分别为41.86%和34.88%。此两种气单胞菌对头孢呋辛和头孢曲松的耐药率均接近甚至超过50%,未发现对呋喃妥因、替加环素和碳青霉烯类耐药菌株。从临床分离的气单胞菌中共检测出5种毒力基因型,有50%的嗜水气单胞菌至少携带一种以上的毒力基因。结论 该医院临床分离的气单胞菌对部分抗生素有较高耐药率,毒力基因型复杂,应重视气单胞菌耐药性监测。