参麦注射液对牛内皮细胞增殖抑制作用的实验研究

目的：观察参麦注射液（简称参麦）对内皮细胞增殖的影响。方法：采用MTT法，检测参麦对牛主动脉内皮细胞、牛主动脉平滑肌细胞、人胃腺癌细胞系SGC－7901细胞及人肝癌细胞系SMMC－7721细胞增殖的影响，并检测参麦对肿瘤条件培养液促进的牛内皮细胞增殖的原因。结果：参麦能明显抑制牛血清促进的牛内皮细胞增殖，同牛平滑肌细胞和肿瘤细胞相比，具有显著差异；对肿瘤条件培养液诱导的牛内皮细胞增殖抑制显著，在实验浓度范围（40ul-180ul/ml）内，其抑制作用呈明显量效关系。结论：参麦能特异性抑制内皮细胞增殖，提示参麦可能具有抗血管生成的作用。     

Genistein对鼻咽癌细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨酪氨酸蛋白激酶（TPK）抑制剂Genistein对鼻咽癌细胞增殖的抑制作用。方法：以不同浓度的Genistein作用于鼻咽癌细胞，采用MTT法检测细胞的增殖程度，倒置显微镜下观察肿瘤细胞的形态学变化。结果：Genistein引起鼻咽癌细胞增殖比明显下降，其程度随Genistein浓度增高而增强；Genistein促进鼻咽癌细胞形态发生改变并导致细胞死亡。结论：Genistein对鼻咽癌细胞的增殖有抑制作用，并破坏肿瘤细胞的结构而使其死亡。     

补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响,探讨补中益气汤治疗肿瘤的机制。方法：以补中益气汤给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。MTT法检测含药血清对肺癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定肺癌细胞细胞凋亡。结果：补中益气汤不同浓度含药血清组与空白对照组比较均可明显抑制肺癌细胞体外增殖,差异有统计学意义（ P<0.05）;补中益气汤不同浓度含药血清组Lewis肺癌细胞凋亡率与空白对照组比较,明显升高,且随着含药血清浓度的增加,细胞凋亡率明显上升,具有浓度依赖性。结论：补中益气汤含药血清对肺癌细胞体外增殖有明显的抑制作用,且可促进肿瘤细胞凋亡。     

灯盏花素对平滑肌细胞增殖的抵制作用研究

目的：通过观察灯盏花素对体外培养的人胎儿脐动脉平滑肌细胞（Human umbilical artery smooth muscle cells）增殖的影响及球囊损伤动物模型血管内膜增殖的抵制作用，以探讨灯盏花素在再狭窄及埃及粥样硬化防治中的作用。方法：MTT法观察灯盏花素对人脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用；血清生化指标检测评估灯盏花素组对血脂、肝、肾功能及脂质氧化水平等的影响；组织形态学观察球囊损伤后血管增殖。结果：MTT结果显示灯盏花素组细胞活性比率显著降低（P〈0.05）；血清生化指标测定结果各组间无显著性差异；组织形态学结果显示低灯盏花素组和高灯盏花素组管腔面积均显著增加（P〈0.01）,内膜面积显著减少（P〈0.01）高、低剂量组之间无显著差异（P〉0.05）。结论：灯盏花素能抑制培养的人脐动脉平滑肌细胞的增殖；灯盏花素对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用。     

不同浓度兔自体血清对脂肪源性干细胞增殖能力的影响

目的：观察不同浓度兔自体血清对脂肪源性干细胞（adipose-derived stem cells,ADSC）增殖活力的影响,并筛选出最佳血清培养浓度。方法：以大鼠为实验动物,首先制备自体血清,分离获取ADSC;然后选DMEM为基础培养基,采用不同体积分数（分别为5%、10%、20%）自体血清及10%体积分数胎牛血清培养基分别对ADSC进行培养;通过显微镜下细胞形态学观察、活细胞计数及MTT等方法对细胞进行检测,并对检测数据做统计学分析。结果：不同浓度自体血清培养培养条件下ADSC形态正常。与10%胎牛血清组进行比较,5%自体血清组ADSC增殖较慢（P〈0.01）,10%、15%自体血清组增殖较好,但组间无统计学差异（P〉0.05）。结论：兔自体血清培养ADSC是可行的,10%浓度自体血清是最佳培养浓度。     

晚期糖基化终产物对大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的：研究晚期糖基化终产物（Advanced Glycation end Products,AGEs）对体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells,VSMCs）增殖的影响。方法：组织贴块法培养大鼠VSMCs,给予不同浓度AGE-牛血清白蛋白（AGE-BSA）连续处理VSMCs 168 h（7 d）,每24 h采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,计算细胞增殖促进率。结果：80 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养72、961、20 h,10、20、40 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养96、120、1441、68 h均可显著促进细胞增殖（P〈0.05） 40 mg/L终浓度的AGE-BSA在培养96 h时细胞增殖促进率最大（72.1%）。结论：AGEs具有促进VSMCs增殖作用,这一作用在一定范围内具有剂量依赖性。     

皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5在肿瘤细胞株中的表达

目的：探讨皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5（cTAGE5）在肿瘤细胞株中的表达及其在肿瘤发生发展中的生物学作用。方法细胞免疫荧光化学检测cTAGE5来源于人的肿瘤细胞株的表达。取阳性表达cTAGE5的人卵巢透明细胞癌ES-2细胞,分为正常对照组、脂质体对照组、siRNA转染组、表柔比星（终浓度1×10－6 mol／L）对照组,平板克隆形成试验和MTT法观察cTAGE5对细胞生长增殖能力的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果cTAGE5 在乳腺癌、肺癌、卵巢癌均有表达,而在胃癌和肝癌肿瘤细胞中表达不明显。与正常对照组比较,siRNA转染组的肿瘤细胞增殖生长抑制（P ＜0．01）,细胞迁移能力降低（P ＜0．01）,表柔比星对照组也显示肿瘤细胞增殖抑制（P ＜0．01）,细胞迁移能力降低（P ＜0．01）。结论 cTAGE5 在不同组织来源的肿瘤细胞株表达存在差异,siRNA 干扰cTAGE5 表达可有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移能力。     

不同药物调控一氧化氮产生对Lewis肺癌细胞增殖的影响

目的：研究L-精氨酸、硝酸甘油、氨基胍在不同浓度情况下对Lewis肺癌（LLC）细胞增殖的调控作用。方法：细胞形态学观察，四甲基偶氮唑（MTT）法检测LLC细胞增殖活性，检测培养液中亚硝酸盐浓度的变化。结果：L-精氨酸、硝酸甘油、氨基胍三种药物随浓度降低对LLC细胞增殖抑制减弱，L-精氨酸和氨基胍组中细胞培养液中NO2^-水平逐步升高，但硝酸甘油组中NO2^-水平与药物浓度正相关；L-精氨酸和氨基胍在一定浓度出现拮抗作用，而硝酸甘油和氨基胍基本为协同作用。结论：NO双向调节细胞生长，肿瘤细胞自身生成NO水平与增殖能力有关。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞全外增殖和杀瘤活性比较

目的：比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞（MtbAK）、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性。方法：分别和结核杆菌抗原（Mtb-Ag）、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞（PBMC）,在含rIL-2的RPMI1640培养液中诱导扩增MtbAK、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδT细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性。结果：与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性。结论：MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗。     

抗角蛋白自身抗体对无血清培养黑素细胞及角质形成细胞增殖的影响

目的：建立一种无血清传代培养黑素细胞的方法,并观察抗角蛋白自身抗体（AKauto Ab）对无血清培养黑素细胞及角质形成细胞增殖的影响。方法：应用角质形成细胞无血清培养基（KC－SFM）添加牛垂体浸出液（BPE）和TPA传代培养黑素细胞,应用KC－SFM添加FGF和BPE传代培养角质形成细胞,培养均质3代时于培养基中加入不同浓度的AK auto Ab,用MTT法观察AK auto Ab对两种细胞增殖的影响。结果：应用无血清培养基成功地传代培养了黑素细胞,MTT法结果显示AK auto Ab各浓度组对培养黑素细胞的增殖无明显影响,但对角质形成细胞的增殖有显抑制作用并有浓度依赖性。结论：建立了一种无血清培养黑素细胞的方法,AKauto Ab对黑素细胞的增殖无抑制作用而对角质形成细胞有特异性抑制作用。     

双调控溶瘤腺病毒对膀胱肿瘤EJ细胞的杀伤作用

目的：构建由人端粒酶启动子（hTERT）和缺氧诱导因子启动子（HIF）双向调控的携带SEA基因的选择性增殖腺病毒,体外试验其对肿瘤的杀伤功能。方法：将hTERT和HIF分别酶切、连接在缺陷型腺病毒的穿梭质粒的E1A和E1B序列前,调控E1A和E1B蛋白的表达,共同转染人胚肾293细胞进行同源重组,获得双调控选择性复制性腺病毒,进行PCR鉴定。获取病毒转染膀胱肿瘤细胞EJ,MTT检测细胞存活和生长情况。结果：淋巴细胞与肿瘤细胞共培养12、24、48h,实验组肿瘤细胞明显少于对照组;MTT检测实验组在12、24、48h活细胞数低于对照组。结论：成功构建了携带SEA基因的选择性腺病毒,且其可表达目的基因,对膀胱肿瘤细胞有一定的杀伤作用。     

蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤保护机制

目的：探讨蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）损伤保护的作用机制。方法：在Aβ25—35诱导PC12细胞损伤模型的基础上加入蜜环茵多糖含药血清,采用比色法检测含药血清对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤培养液中乳酸脱氢酶的活力、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活力的影响。结果：不同浓度的含药血清对Aβ25—35损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,含药血清浓度在5％时达最大值（P〈0．05或P〈0．01）;5％浓度的含药血清可明显降低模型细胞培养液中LDH活力、MDA含量,提高SOD活力。结论：蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35损伤的PC12细胞有保护作用．机制可能与提高细胞抗氧化能力有关。     

中药复方更年春含药血清及其主要单体对β淀粉样蛋白所致细胞损伤的保护作用

目的：观察中药复方更年春含药血清及其主要单体成分对β淀粉样蛋白（amyloid β—protein,Aβ）所致肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞损伤的保护作用。方法：采用Aβ25-35作用PC12细胞构建阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）细胞模型,相差显微镜观察细胞形态改变。运用中药血清药理学方法制备大鼠更年春含药血清,以四甲基偶氮唑盐法观察更年春含药血清及其主要单体芍药苷、黄连素、知母皂苷AⅢ、淫羊藿苷对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗Aβ损伤的作用,采用流式细胞仪观察更年春复方含药血清及复方主要单体对Aβ诱导的PC12细胞凋亡的影响。结果：PC12细胞在Aβ25-35作用后,有活力细胞数目减少,细胞间连接较松,胞浆较暗淡,细胞碎片较多,贴壁细胞欠透明,部分发生皱缩,胞浆中有较多颗粒。Aβ25-35剂量、时间依赖性地抑制PC12细胞的活力。更年春含药血清可以增强PC12细胞活力,不同浓度更年春含药血清培养细胞24、48、72h后,其增强PC12细胞活力均在20％浓度作用最强。更年春复方含药血清及复方主要单体之一的黄连素及主要单体混合液（包括芍药苷、黄连素、知母皂苷A-Ⅲ、淫羊藿苷）均有拮抗Aβ对PC12细胞损伤的作用,且均能抑制Aβ诱导的PC12细胞早期凋亡,其中更年春含药血清作用最强,中药单体混合液作用其次,而单体黄连素作用最弱。结论：更年春对AD细胞模型有保护作用,其含药血清作用强于主要中药单体及主要单体的混合液。     

3’-大豆苷元磺酸钠对去血清所致海马神经元损伤的保护作用

目的：探讨3’-大豆苷元磺酸钠（3’daidzein suffocatessodium,3’-DSS）对去血清所致海马神经元损伤的保护作用。方法：取新生SD大鼠（0～24h）海马区制成单细胞悬液进行体外培养,待细胞发育成熟后,用去血清的培养基制作海马神经元损伤模型,造模同时给予3’-大豆苷元磺酸钠（3．0、10．0、30．0μmol·L^-1）处理,继续培养24h,采用MTT法检测细胞活性;并观察细胞形态的改变;取培养上清液,测定去血清海马神经元中乳酸脱氢酶（1actate dehydrogenase,LDH）活性。结果：形态学观察模型组海马神经元细胞膜边界相对模糊,细胞皱缩,神经突触回缩,少量细胞贴壁不牢;其上清液中去血清海马神经元中LDH活性升高;MTT法检测结果显示去血清海马神经元活性降低。给予3’-大豆苷元磺酸钠处理后,镜下观察可见细胞膜边界清楚,胞体饱满,神经突触回缩不明显,细胞贴壁良好;去血清海马神经元细胞活性升高,去血清海马神经元LDH活性降低。结论：3’-大豆苷元磺酸钠对去血清所致海马神经元损伤具有显著的保护作用。     

黄斑颗粒含药血清预处理对人RPE细胞缺氧损伤的保护作用

目的:观察中药黄斑颗粒含药血清预处理后对人视网膜色素上皮(hRPE)细胞缺氧损伤的保护作用。方法:制备不同剂量中药黄斑颗粒含药血清,用含药血清预处理hRPE细胞,分不同时间段建立化学缺氧损伤模型,培养24h后,用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果:黄斑颗粒含药血清组细胞活力较空白血清组与模型组细胞活力显著提高,其中高剂量含药血清组细胞活力高于低剂量含药血清组,但仍低于正常对照组,有显著性差异;各含药血清组细胞活力抑制率均明显降低,其中高剂量组低于低剂量组。此外,含药血清能促进缺氧条件下RPE细胞由G0/G1期进入S期,促进RPE细胞的增殖。结论:中药黄斑颗粒含药血清预处理对人视网膜色素上皮细胞缺氧损伤具有一定的保护作用。     

原人参三醇组皂苷和人参皂苷-Re对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：探讨原人参三醇组皂苷（protopanaxatriol group，PPT）和人参皂苷-Re对1-甲基-4-苯基-吡啶阳离子（1-methyl-4-phenylpyridiniumion，MPP＋）诱导的人多巴胺能神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法：用不同浓度的PPT和人参皂苷-Re预处理细胞，以及不同体积分数的PPT和人参皂苷-Re含药血清预处理细胞，采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）法检测细胞活力，计算细胞存活率，比较各组间的差异。结果：5μmol·L^-1和10μmol·L^-1的PPT和人参皂苷-Re均可以显著增加细胞存活率（与模型组比较，P〈0．05），体积分数10％的PPT和人参皂苷-Re含药血清能显著增加细胞存活率（与模型组比较，P〈0．001）。结论：PPT和人参皂苷-Re对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤有显著的保护作用，具有潜在的抗帕金森病作用。     

黄芪多糖针对人胃癌细胞SGC-7901体外实验抑制作用

目的：体外研究不同浓度的黄芪多糖对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法：体外培养人胃癌细胞SGC-7901,采用MTT比色法检测不同浓度（6ug/mL、12．5ug/mL、25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL）的黄芪多糖提取液对其增殖的抑制作用,并用酶联检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。结果：在细胞抑制实验中,加药12h后,浓度高于25ug/mL的黄芪多糖均能表现出对人胃癌细胞SGC-7901的增殖的抑制作用,同时MTT实验结果表明,在药物浓度12．5ug/mL时,人胃癌细胞SGC-7901的增殖因药物浓度低,有上升趋势。随着黄芪多糖的药物浓度增加,在药物浓度50ug/mL～100ug/mL时有明显抑制人胃癌细胞SGC-7901生长的趋势,并呈浓度依赖性。结论：黄芪多糖在体外实验对人胃癌细胞SGC-7901的增值有较强的肿瘤抑制作用。     

姜黄素对人结肠癌细胞SW480增殖周期及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法和生长曲线测定不同浓度姜黄素在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响，同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果姜黄素可在G0／G1期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖，使S期细胞比率降低；在一定范围内，姜黄素的浓度越高、作用时间越长，对肿瘤细胞生长的抑制作用越强，凋亡率也越高。结论姜黄素能抑制人结肠癌细胞SW480细胞生长，并诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。     

益气养阴方抗血管生成作用的实验研究

目的：探讨益气养阴方抗鸡胚绒毛尿囊膜（Chick chorioa—llantoic membrane,CAM）血管及肿瘤细胞诱导CAM血管生成的效应。方法：制备CAM模型及接种肿瘤细胞的CAM模型,采用血清药理学方法制备含药血清。观察含药血清对CAM血管和肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与生理盐水血清组对照。结果：益气养阴方含药血清可抑制CAM血管及肿瘤细胞诱导的CAM血管生成,各剂量含药血清组血管数目（高剂量组：9．662±0．599,中剂量组：9．682±0．818,低剂量组：10．242±0．640）与血管面积（高剂量组：8878．500±1870．115,中刺量组：9369．750±3206．427,低剂量组：11226．875±2665．071,mm^2）均较对照血清纽（10．511±0．990,12759．375±4379．058,mm^2）明显减少,与生理盐水对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：益气养阴方对血管生成有明显抑制作用。     

改良贴壁组织块法与改良Ⅰ型胶原酶消法对成骨细胞增殖效果的比较研究

目的 比较改良贴壁组织块法与改良Ⅰ型胶原酶消法对SD大鼠颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞的增殖效果.方法 取10只出生1 -3dSD乳鼠颞下颌关节髁突软骨下骨,将骨片平分成2份,分别采用改良贴壁组织块法和改良Ⅰ型胶原酶消法培养颞下颌关节髁突成骨细胞,并标记为Ⅰ组和Ⅱ组,通过细胞形态学观察、HE染色、ALP染色鉴定成骨细胞.取第4代成骨细胞进行细胞计数、MTT生长曲线及流式细胞仪周期分析,比较2种原代培养方法对成骨细胞增殖能力的异同.结果 （1）Ⅰ组和Ⅱ组培养的细胞经鉴定均为成骨细胞; （2） Ⅱ组成骨细胞总量约为Ⅰ组细胞总量的1.5倍; （3） Ⅱ组成骨细胞MTT生长曲线较Ⅰ组细胞提前2d进入对数生长期及达到生长高峰; （4）2组细胞在达到第4代时,细胞周期含量差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 改良贴壁组织块法和改良Ⅰ型胶原酶消化法均适用于颞下颌关节软骨下骨成骨细胞的培养,但改良Ⅰ型胶原酶消化法可以更快速有效地获得大量成骨细胞.