浊漳河水体中有机污染物的遗传毒性研究

目的： 评价浊漳河水体有机污染物对人外周血淋巴细胞的遗传毒性。方法：采用单细胞凝胶电泳试验(彗星试验)对浊漳河水体3个不同样点的有机提取物所致的人外周血淋巴细胞的DNA损伤进行研究。结果：在一定剂量范围内,各水样有机提取物均能引起人外周血淋巴细胞不同程度的DNA损伤,并随剂量的增高而加重,与阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01);以每管100 ml剂量组进行多重比较表明,各采样点水样对人血淋巴细胞DNA损伤程度从大到小依次为暴马、黄碾、石梁。结论：浊漳河水体有机污染物对人外周血淋巴细胞DNA有断裂损伤作用,彗星试验技术的应用有助于水环境监测以及水中有机提取物遗传毒性的研究。     

BRCA1基因甲基化及甲硫氨酸合成酶与乳腺癌发病的关系

背景与目的:启动子异常甲基化是肿瘤发生的早期事件,肿瘤组织中存在的DNA甲基化异常可以概括为广泛低甲基化伴局部高甲基化.甲硫氨酸合成酶(methionine synthase,MS)是参与甲基供体生成的关键酶,为DNA的甲基化提供甲基.本研究探讨抑癌基因BRCA1 mRNA在乳腺癌组织中的表达及启动子区甲基化状态,及MS基因mRNA表达与BRCA1基因甲基化的关系.方法:应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(methylationspecific PCR,MSP)技术检测乳腺癌组织、相应癌旁组织(距癌>3 cm)和乳腺良性病变组织中BRCA1 mRNA的表达及其启动子甲基化状态,并检测MS mRNA的表达水平.结果:乳腺癌组织、癌旁组织及良性病变组织BRCA1mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织中BRCA1基因启动子区甲基化检出率明显高于癌旁组织和良性病变组织(χ2=7.631,P<0.05),BRCA1基因启动子区甲基化与散发性乳腺癌组织学分级、雌激素受体(estrogen receptor,ER)相关(P<0.05).乳腺癌组织MS基因表达量明显低于乳腺良性病变及乳腺癌旁组织(P<0.05).MS mRNA的表达与BRCA1基因甲基化的发生有相关性(r=0.419,P<0.05).结论:BRCA1甲基化能够增加乳腺癌的患病风险,MS基因可能通过影响部分肿瘤相关基因发生甲基化而调控其表达.     

乳腺癌外周血乳腺上皮小黏蛋白和CA153联合检测的临床价值

目的探讨乳腺上皮小黏蛋白(SBEM)和糖类抗原153(CA153)联合检测在乳腺癌微转移中的临床价值。方法选取2014年1月至2016年6月间上海市徐汇区大华医院收治的60例乳腺癌患者的血标本为观察组,选取20例乳腺纤维腺瘤患者、10例其他系统恶性肿瘤患者和10例健康志愿者的血标本为对照组。分别采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术和化学发光法检测两组血标本中的SBEM mRNA及CA153的表达水平,并分析其在乳腺癌微转移中的诊断价值。结果RT-PCR检测显示观察组血标本中SBEM mRNA阳性表达率为48.3%(29/60),而对照组血标本的中SBEM mRNA阳性表达率为0.0%(0/40);CA153敏感度为31.7%(19/60),特异度为92.5%(37/40),两者联合检测敏感度为63.3%(38/60)。乳腺癌患者外周血SBEM mRNA表达与患者有无淋巴结转移和TNM分期差异有统计学意义(P<0.05),同时SBEM mRNA的表达与CA153的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血SBEM mRNA和CA153联合检测提高了检测敏感度,有助于判断乳腺癌微转移。     

胃癌组织runt相关转录因子3基因表达与其甲基化状态的关系

目的 探讨胃癌组织中DNA甲基化调控机制对runt 相关转录因子3(Runx3)基因表达的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测70例胃癌组织及其配对的正常胃黏膜组织中Runx3 mRNA表达,Westen blot法检测Runx3蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)法检测Runx3基因启动子的甲基化状态;应用RT-PCR法检测 DNA甲基转移酶1(Dnmt1)mRNA表达,分析Runx3基因甲基化与Dnmt1 mRNA表达之间的相关性. 结果胃癌组织中Runx3 mRNA表达(0.5740±0.3580)明显低于其配对的正常胃黏膜组织(1.7250±0.4080, P<0.05),胃癌组织Runx3蛋白表达亦明显低于其配对的正常胃黏膜组织(P<0.05).在Runx3 mRNA表达下调的56例胃癌组织中,有28例(50.0%)呈启动子高甲基化状态.胃癌组织中,Runx3甲基化阳性者的Dnmt1 mRNA表达量明显高于Runx3甲基化阴性者(P<0.05),Runx3基因启动子甲基化与Dnmt1转录表达呈正相关(r＝0.64,P<0.05).结论 Runx3基因启动子高甲基化是其基因表达下调的原因之一,可能参与胃癌的发生发展;Dnmt1高表达可能影响Runx3启动子区域甲基化改变.     

KAI1基因异常表达与甲状腺乳头状癌发生、发展的关系

目的:探讨KAI1基因表达与甲状腺乳头状癌发生、发展的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(EnvisionTM)法,检测59例甲状腺良、恶性病变组织标本中KAI1 mRNA和蛋白的表达,并与临床病理资料进行比较分析。结果:甲状腺乳头状癌中KAI1 mRAN表达水平为3.59±1.57,蛋白表达阳性24例(66.67%),两者均高于甲状腺腺瘤(P<0.01,P<0.05)、结节性甲状腺肿(P<0.01,P<0.01)和正常甲状腺组织(P<0.01,P<0.01);KAI1 mRNA和蛋白表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移、患者肿瘤大小相关(P<0.05);KAI1 mRNA和蛋白的表达呈显著正相关(r=0.486,P<0.01)。结论:KAI1 mRNA和蛋白异常表达与甲状腺乳头状癌的发生、发展有关,可为肿瘤淋巴结转移、预后的判断提供依据。     

H1299细胞中P1k3对p73转录活性的影响

背景与目的:研究表明蛋白激酶P1k3可以增加肿瘤抑制因子p53的转录活性,但对p73转录活性的影响尚不清楚,因此本实验旨在研究蛋白激酶P1k3对p73转录活性的影响.方法:选用p53缺失型人类肺癌细胞系H1299,采用荧光素酶报告剂分析、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及克隆形成实验的方法研究蛋白激酶P1k3及激酶活性缺失的P1k3(K52R)对p73转录活性的影响.结果:荧光素酶报告剂分析结果显示,单独转染p73基因可以增加p21~(WAF1)和Bax启动子介导的荧光素酶的表达(P<0.05);共转染p73基因和P1k3基因,p21~(WAF1)和Bax启动子介导的荧光素酶的表达与单独转染p73基因组相比显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性;而激酶活性缺失的Plk3(K52R)对p21~(WAF1)和Bax启动子介导的荧光素酶的表达没有显著影响(P>0.05).RT-PCR检测结果也显示,p73诱导p2~(WAF1)和Bax的mRNA表达(P<0.05),P1k3降低了p73诱导的p21~(WAF1)和Bax的mRNA表达水平(P<0.05);而激酶活性缺失的P1k3(K52R)对p73诱导的p21~(WAF1)和Bax的mRNA表达水平无显著影响(P>0.05).克隆形成实验结果显示,p73抑制了H1299细胞克隆的形成(P<0.05),P1k3降低了p73对H1299细胞克隆形成的抑制(P<0.05),而激酶活性缺失的P1k3(K52R)对p73抑制H1299细胞克隆形成无显著影响(P>0.05).结论:P1k3可以抑制p73的转录活性,而激酶活性缺失的P1k3(K52R)对p73的转录活性无明显影响.     

P185蛋白表达与血清CA153联合监测在乳腺癌治疗中的意义

目的 探讨乳腺癌组织中P185蛋白表达与血清糖蛋白抗原153(CA153)的相关性及联合监测的临床意义.方法 通过免疫组化法和放射免疫法监测2005年6月至2007年5月间110例乳腺癌P185表达情况及血清CA153的水平,分析P185蛋白、CA153与乳腺癌临床特征之间的关系.结果 乳腺癌患者治疗前血清CA153的水平明显高于治疗后的水平(P<0.01),乳腺癌Ⅲ、Ⅳ期患者的血清CA153的水平明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者的水平(P<0.01),P185蛋白高表达患者的血清CA153水平高于低表达患者(P<0.05).结论 联合监测P185蛋白与血清CA153可以用于乳腺癌的预后判断,指导辅助治疗方案的制定.     

稀土元素镨对蚕豆的遗传毒性和细胞毒性研究

背景与目的:研究稀土元素镨对蚕豆的遗传毒性和细胞毒性。材料与方法:蚕豆初生幼苗浸入7个PrCl3浓度(1,2,4,8,16,32,64μg/ml)系列溶液,25℃恒温培养6h,之后双蒸水中修复培养24h,切取根尖。进行蚕豆根尖细胞微核试验,计数有丝分裂指数、染色体畸变率。结果:PrCl3浓度在≥8μg/ml时可损伤蚕豆根尖细胞,影响根尖的生长;在1～32μg/ml浓度范围内根尖细胞微核率呈剂量_效应关系(r=0.948,P<0.05);在2～64μg/ml浓度范围内有丝分裂指数呈剂量_效应关系(r=-0.789,P<0.05);在1～8μg/ml浓度范围内染色体畸变率呈剂量_效应关系(r=0.992,P<0.05)。结论:稀土元素镨对蚕豆根尖细胞具有一定的遗传毒性和细胞毒性。     

运用彗星试验检测醋酸铅对小鼠离体、在体生殖细胞的DNA损伤作用

背景与目的探讨一定剂量的醋酸铅对离体、在体小鼠雄性生殖细胞的DNA损伤作用。材料与方法以50、100、500、1000μmol/L醋酸铅处理离体小鼠睾丸生殖细胞,阴性对照加PBS;用12.5、25、50mg/kg浓度醋酸铅腹腔连续注射5d,第6d处死取小鼠睾丸生殖细胞,应用彗星试验检测醋酸铅对细胞DNA的损伤率和细胞DNA迁移距离的影响。结果4种浓度醋酸铅均可致小鼠离体睾丸细胞DNA损伤,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),且与剂量相关(分级计数r=0.5114,尾距r=0.407)。3种浓度醋酸铅组可致小鼠体内睾丸细胞产生DNA损伤,与阴性对照组比较差异有统计学意义且呈剂量相关(分级计数r=0.4801,尾距r=0.5314)。结论醋酸铅可致小鼠睾丸生殖细胞的DNA损伤,对小鼠生殖细胞可能有遗传毒性。     

胃癌细胞中COX-2通过NF-κB/Snail调控E-cadherin表达的机制

目的 探讨COX-2调控E-cadherin表达的相关信号通路及分子机制,揭示COX-2与胃癌侵袭转移的关系及作用机制.方法 采用不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞来昔布干预人胃癌细胞株SGC-7901不同时间后,应用实时荧光定量RT-PCR法和Western blot法检测SGC-7901细胞中COX-2、NF-κB、Snail及E-cadherin mRNA和蛋白的表达情况.结果 随着塞来昔布作用剂量的增大和干预时间的延长,COX-2、NF-κB和Snail mRNA及蛋白的表达量均显著下降(P＜0.05),呈剂量和时间依赖性降低;E-cadherin mRNA及蛋白的表达量上升(P＜0.05),呈剂量和时间依赖性升高.采用Spearman相关分析,显示COX-2与NF-κB及COX-2与Snail蛋白表达呈正相关性(r =0.881,P＜0.01;r =0.839,P＜0.01);COX-2与E-cadherin蛋白表达呈负相关性(r=-0.814,P＜0.01).结论 COX-2可能通过NF-κB/Snail信号通路调控E-cadherin的表达,进而参与胃癌的浸润转移过程.     

维生素C对水中有机物致小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的抑制作用

背景与目的:探讨维生素C水溶液对水中有机物致外周血液淋巴细胞DNA的损伤是否具有抑制作用.材料与方法:固相萃取水中有机物,用不同浓度维生素C水溶液(50、100、200 mg/kg)与有机物以不同方式处理(同时灌胃、维生素C预处理、维生素C后处理),分别给小鼠灌胃3 d后,取外周血淋巴细胞进行单细胞凝胶电泳实验,检测细胞DNA的损伤情况.结果:维生素C(100mg/kg、200 mg/kg)能不同程度地抑制小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤;中、高剂量水中有机物(每kg体重灌胃量相当于16、80 L水样中的有机提取物)对小鼠外周血DNA有明显的损伤作用,其尾DNA含量、尾矩、椭圆矩、尾面积均高于对照组,且差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);维生素C具有抑制水中有机物所致小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的作用,其中维生素C 100 mg/kg、200mg/kg组尾DNA含量、尾矩、椭圆矩、尾面积均高于对照组,且差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:维生素C能够降低自发的细胞DNA损伤并对水中有机物致小鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤具有抑制作用.     

Gadd45 and Gadd153 messenger RNA levels are increased during hypoxia and after exposure of cells to agents which elevate the levels of the glucose-regulated proteins.

We have investigated overlapping activation pathways for two families of stress genes that are expressed in cells exposed to hypoxia. The growth arrest and DNA damage (gadd) genes are induced by DNA damage and irradiation, and their expression is associated with growth arrest. The glucose-regulated proteins (GRPs) are induced by chemical agents that disrupt protein trafficking in the endoplasmic reticulum such as tunicamycin and A23187 and by hypoxia. Here, we demonstrate that the treatment of NIH-3T3 cells with chemical inducers of GRPs results in increased levels of gadd45 and gadd153 mRNA as well as GRP78 mRNA. In addition, hypoxia was also able to increase gadd45, gadd153, and GRP78 mRNA. Therefore the GRP and gadd genes can be activated by similar stimuli (e.g., hypoxia and chemical inducers). However, the mechanisms leading to increased levels of GRP78 and gadd gene mRNA are different and may involve distinct protein kinases. Increased expression of GRPs after treatment with chemical inducers is sensitive to cycloheximide and the protein kinase inhibitors genistein, 2-aminopurine, and H7, whereas the increase in gadd gene mRNA could be blocked by the protein kinase inhibitors H7 and 2-aminopurine but not by genistein or cycloheximide. GRP78 induction occurs by a pathway that requires protein synthesis and is sensitive to genistein, H7, and 2-aminopurine, whereas gadd gene induction is independent of protein synthesis and is inhibited by H7 and 2-aminopurine only.     

乳头溢液中CA153检测在乳腺癌诊断中的意义

目的:检测乳头溢液与血清CA153水平,探讨乳头溢液中CA153在乳腺癌诊断中的意义.方法:应用电化学发光法(Elecsvs)对150例患者乳头溢液与血清CA153水平检测,并进行对照分析.结果:CA153水平均值在乳腺良性病变组中明显高于正常对照组(P＜0.05),乳腺癌组显著高于正常对照组和良性病变组(P＜0.01).乳腺癌组乳头溢液CA153阳性检出率显著高于血清CA153阳性检出率,且P＜0.01.结论:CA153检测无损伤、诊断符合率较高,具有一定的临床应用价值.     

GSTPl基因启动子甲基化与前列腺癌的相关性研究

背景与目的：谷胱甘S-转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)保护细胞避免DNA损伤和癌细胞形成,抑制GSTP1活性可以导致DNA损伤的敏感性增强和癌变发生的概率增加。该研究旨在研究前列腺癌组织中GSTPl基因甲基化与前列腺癌临床病理特征的关系。方法：收集2015年4月—2016年12月在海南省中医院和海口市人民医院住院的46例前列腺癌患者的前列腺癌组织及对应的包埋癌旁组织,应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测GSTPl mRNA水平,通过甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测GSTP1基因启动子区域CpG岛的甲基化表达水平,然后与性别、年龄及肿瘤TNM分期等临床数据进行关联分析。结果：与癌旁组织比较,前列腺癌组织中GSTP1 mRNA表达水平降低(P<0.01),并且GSTP1 mRNA降低与GSTPl基因甲基化呈负相关(P<0.05);前列腺癌和癌旁组织中甲基化阳性率分别为66.0%和23.5%,差异有统计学意义(P<0.05);GSTP1基因的启动子甲基化频率与肿瘤分期显著相关(r＝073,P<0.05),而与其他临床特征无明显相关性(P>0.05)。结论：GSTP1基因启动子甲基化可能造成GSTP1基因低表达,与前列腺癌发病明显相关,有望成为检测及诊断前列腺癌的新方法。     

基于双荧光素酶报告基因的DNA损伤与修复检测系统的建立与应用

目的： 建立一种能够同时对环境致癌物所致HepG2细胞DNA损伤和细胞对损伤DNA的修复能力进行快速检测的系统。方法：5 μmol/L氯化镉体外损伤质粒pTK-RL,质粒pgadd153-luc和体外受损的质粒pTK-RL共转染到HepG2细胞中,以16种已知致癌物或3种无遗传毒性的非致癌物刺激细胞,利用双荧光素酶检测方法同时检测DNA损伤和细胞的修复能力;双荧光素酶检测系统检测居民区、垃圾焚烧厂和农田3个不同污染区土壤中非挥发性有机提取物对DNA的损伤作用和细胞对该损伤的修复能力;彗星实验检测DNA的损伤。结果：双荧光素酶报告基因检测系统均可检出已知环境致癌物对DNA损伤与修复能力的影响,非致癌物均未检测到DNA损伤作用和对细胞DNA修复能力的影响;3个不同污染区土壤中非挥发性有机提取物均可诱导DNA损伤并抑制细胞对DNA损伤的修复能力,强度为居民区>垃圾焚烧厂>农田土壤。结论：在本研究条件下建立了可同时检测环境致癌物DNA损伤与细胞修复能力的双荧光素酶报告基因检测系统并可用于环境污染区检测。     

Expression of GADD153 in tumor cells and stromal cells from xenografted tumors in nude mice treated with cisplatin: correlations with cisplatin-DNA adducts

Purpose: Cisplatin is a commonly used antineoplastic agent that acts by forming adducts with DNA, and causing a response to the cellular injury. One of the components of this cellular injury response is the activation of the “growth arrest and DNA damage gene”GADD153. The level of GADD153 induction in tumor cells has been associated with the degree of cytotoxicity. The pupose of this study was to determine whether cisplatin activates GADD153 also in nontumor cells and how GADD153 protein levels correlate with cisplatin-DNA adducts in different cell types. Methods: Nude mice with xenografted squamous cell carcinoma were treated with cisplatin 10 mg/kg. Tumors were removed at 0 h (untreated controls), 24 h, and 48 h and immunohistochemically stained for GADD153 protein and cisplatin-DNA adducts. The staining reaction was quantitated in tumor cells and nonmalignant stromal cells separately, using computerized image analysis. Results: The GADD153 level was 4.5 times higher in tumor cells than in stromal cells in untreated mice. At 24 h after cisplatin treatment the GADD153 level had increased by 50% and 72% in tumor cells and stromal cells, respectively. Analysis of the cisplatin-DNA adducts showed a reversed pattern, with six-fold higher levels in stromal cells than in tumor cells at 24 h after treatment. By combining these data, we estimated that approximately 25-fold more GADD153 per cisplatin-DNA adduct was induced in tumor cells than in stromal cells. Conclusion: Our data suggest that different cell types may respond differently to DNA damage caused by cisplatin. Received: 5 March 1998 / Accepted: 21 July 1998