乳腺癌组织中Id1基因mRNA的表达及其与临床病理的关系

Id1基因;乳腺癌;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应     

甲状腺乳头状癌组织中TSHR基因启动子甲基化及其临床意义

摘 要：［目的］ 探讨甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer,PTC）组织中TSHR基因启动子区甲基化程度及其临床意义。［方法］采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation-Specific Polymerase chain reaction,MSP）法检测100例PTC组织及其癌旁组织中TSHR基因启动子甲基化状态,并结合患者的临床病理特征和随访信息分析TSHR与PTC进展及预后的关系。［结果］ 100例PTC组织中TSHR基因启动子甲基化率为77%,明显高于癌旁组织的7%（P=0.002）。TSHR基因甲基化程度与患者初诊年龄、原发灶大小、数量、腺外侵犯、淋巴转移、TNM分期呈正相关（P<0.05）;而与患者性别、T分期无关（P>0.05）。单因素生存分析显示TSHR基因甲基化预示更短的无病生存时间,而多因素生存分析显示TSHR基因甲基化不是PTC患者无病生存的独立影响因素。［结论］ TSHR基因启动子区甲基化是PTC组织中频发的分子事件,与肿瘤的进展相关并提示PTC患者的不良预后。     

WT1基因在乳腺癌组织中表达的研究

目的探讨乳腺癌组织中WT1基因表达水平及其临床意义。方法采用实时定量RT—PCR方法,检测110例乳腺肿瘤及其邻近正常乳腺组织中的WT1基因及内参照GAPDH的表达水平,以WT1N=（WT1拷贝数／GAPDH拷贝数）×10^4计算WT1表达水平,并计算同一患者肿瘤组织与正常组织中WT1。比值,定义为T／NWT1比值,分析WT1基因表达（T／NWT1）水平与临床病理参数的关系。结果102例乳腺癌组织中WT1N明显高于其周围邻近正常乳腺组织中的表达（P〈0．01）,而8例乳腺良性肿瘤组织与其相应的正常乳腺组织中WT1N表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。乳腺癌组织中WT1N及其T／NWT1比值明显高于乳腺良性肿瘤组织（P〈0．01）,且T／NWT1比值与有无淋巴结转移、乳腺癌病理类型、雌激素受体（ER）状态及孕激素受体（PR）状态无相关性。WT1基因表达水平与IL-8基因表达水平具有很好的相关性（r=0．723,P〈0．01）。结论乳腺癌组织高表达WT1,乳腺癌组织中WT1表达水平可作为评价疾病进展及判断预后的指标。     

新基因HERV-H-X的env区分析及其在结肠癌组织中的表达

背景与目的:我们在结肠癌组织中发现了一个新的基因HERV-H-X.本研究的目的是分析HERV-H-X env区的缺失情况,研究其与其他HERV-H env开放阅读框(open reading frames,ORF)的表达关系以及其在结肠癌与正常组织中的表达差异情况.方法:对HERV-H-X与含完整的env ORF的HERV-H/env62、HERV-H/env60以及HERV-H/env59进行多序列比对,分析HERV-H-Xenv区的缺失情况.对HERV-H-X设计特异的引物,对HERV-H/env62、env60以及env59的env ORF设计共同的引物,分别在8对结肠癌与相应癌旁正常组织中进行RT-PCR,比较它们的表达情况.对HERV-H-X进行实时荧光定量PCR,研究其在17对结肠癌与相应正常组织中的表达水平.结果:HERV-H-X env区缺失的序列正好相应于HERV-H/env62、env60以及env59的env ORF区.RT-PCR结果显示HERV-H-X特异地在结肠的癌组织中表达,而HERV-H env的ORF在结肠的癌组织与正常组织中都有表达.定量PCR结果显示HERV-H-X在结肠癌组织的平均表达水平是相应正常组织的24.9倍,经F检验证实差异有统计学意义(P＜0.01).结论:HERV-H-X的表达与结肠癌特异相关,但由于缺失env的ORF,其在结肠癌的高表达与env基因无关.     

MKK4基因在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶激酶4 (mitogen-activated protein kinase kinase 4,MKK4)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测42例喉鳞癌、20例喉乳头状瘤及20例声带息肉组织中MKK4 mRNA和蛋白的表达,分析其与喉鳞癌临床病理参数之间的关系.结果:MKK4 mRNA和蛋白表达的阳性率在喉鳞癌、喉乳头状瘤及声带息肉组织中逐渐降低,且差异有统计学意义(P＜0.05).MKK4 mRNA和蛋白的表达随喉鳞癌的浸润深度增加而上升(P＜0.05),在有淋巴结转移组中的表达高于无淋巴结转移组(P＜0.05),在临床Ⅲ～Ⅳ期患者中的表达高于临床Ⅰ～Ⅱ期的患者(P＜0.05).MKK4的表达与患者的年龄、性别、肿瘤发生部位及组织学分级无相关性(P＞0.05).结论:MKK4 mRNA和蛋白在喉鳞癌组织中的表达上调可能与喉鳞癌的发生及浸润转移有关,MKK4可能成为一个潜在的判断喉鳞癌发生与转移的观测指标.     

乳腺癌中VEGF基因mRNA的表达及其与临床病理因素的关系

目的探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）mRNA表达情况及其与临床病理因素及其他分子指标的关系。方法应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测48例乳腺癌组织,20例乳腺纤维腺瘤组织VEGF mRNA的表达,并以免疫组化SABC法检测VEGF蛋白在乳腺癌、乳腺纤维腺瘤组织中的表达,分析其与乳腺癌中HER-2,ER,PR蛋白表达的关系。结果经实时荧光定量RT-PCR法检测,VEGF121mRNA、VEGF165mRNA在乳腺癌组织,乳腺纤维腺瘤组织中的2-ΔCt值分别为：0.5733±0.1764、0.310±0.098,0.2961±0.0845、0.2657±0.0342。乳腺癌组织的VEGF mRNA阳性表达率均显著高于乳腺纤维腺瘤组织（P〈0.05）,但与患者的年龄、淋巴结转移、肿块大小、组织学分级、pTNM分期等临床病理因素无关（P〉0.05）。HER-2在乳腺癌和纤维腺瘤中表达分别为18.8%0、%,差异具有显著性（P〈0.05）。Spearman等级相关分析表明VEGF与HER-2,ER,PR表达不相关（P〉0.05）。HER-2与雌激素受体、孕激素受体的表达呈负相关（γ=-0.335,P=0.005;γ=-0.300,P=0.012）。结论 VEGF在乳腺癌中高表达,但与ER,PR表达不相关。HER-2可作为判断乳腺癌预后的1个重要参考指标。     

散发性结直肠癌组织中ezrin mRNA的表达及临床意义

目的研究散发性结直肠癌（SCRC）组织中ezrin mRNA的表达，探讨其在SCRC发生发展中的作用以及与ezrin蛋白表达部位、临床病理参数之间的关系。方法运用TaqMan实时逆转录-聚合酶链反应（real—time RT—PCR）技术检测132例SCRC患者的肿瘤组织及43例患者的癌旁正常组织中ezrinmRNA的表达；免疫组化法检测相应组织中ezrin蛋白的表达。结果SCRC组织中ezrinmRNA含量和ezrin蛋白表达阳性率均显著高于癌旁正常组织（P〈0．05）；转移组ezrinmRNA含量和ezrin蛋白表达阳性率均高于未转移组（P〈0．05）。转移组胞膜为主型ezrin蛋白表达阳性率（31．1％）显著高于未转移组（6．9％，P=0．0006）；转移组胞浆为主型ezrin蛋白表达阳性率（55．4％）与未转移组（63．8％）的差异无统计学意义（P〉0．05）；胞膜为主型组ezrinmRNA含量与胞浆为主型组的差异无统计学意义（P〉0．05）。年龄〈50岁组ezrinmRNA含量高于年龄≥50岁组（P=0．016）；右半结肠组胞膜为主型ezrin蛋白表达阳性率显著高于左半结肠和直肠（P=0．0003），左半结肠组胞浆为主型ezrin蛋白表达阳性率显著高于右半结肠和直肠（P=0．004）。ezrinmRNA、ezrin蛋自在SCRC中的表达与性别、肿瘤大小、侵袭程度、分化程度均无关（P〉0．05）。结论ezrinmRNA和ezrin蛋白表达的增高与SCRC的发生发展密切相关；ezrin蛋白表达从胞浆到胞膜的移位在肿瘤转移中可能起着重要作用；ezrinmRNA含量可能与患者年龄相关，ezrin表达部位可能与SCRC发生部位相关。ezrinmRNA、ezrin蛋白水平及表达部位可能成为临床判断SCRC预后的重要参考指标。     

卵巢癌组织中KLK9基因的表达及其临床意义

目的：探讨KLK9基因mRNA及其蛋白在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用半定量RT-PCR和免疫组化SP法检测55例卵巢癌组织KLK9 mRNA及蛋白的表达。结果：KLK9蛋白表达位于细胞质，KLK9 mRNA及其蛋白表达水平与临床分期有关；早期卵巢癌(Ⅰ、Ⅱ期)KLK9 mRNA及蛋白表达水平明显高于晚期(Ⅲ、Ⅳ期)，X^2值分别为7．33及8．69，P值分别为0．006及0．0032。但KLK9 mRNA及其蛋白表达水平与病理分级及组织学类型无关。结论：KLK9基因表达可能与卵巢癌的恶性度有关，可作为一项检测卵巢癌预后的指标。     

大肠癌组织A3AR蛋白表达及A3AR mRNA基因扩增临床意义的探讨

目的:检测大肠癌组织中A3AR蛋白表达和A3AR mRNA基因扩增,并探讨其与临床病理特征的关系.方法:分别用免疫组化和实时荧光定量PCR方法检测31例大肠癌组织和10例癌旁正常组织中A3AR蛋白表达及其A3AR mRNA扩增.结果:大肠癌及癌旁正常组织中A3AR的阳性率分别为61.29%(19/31)和10.00%(1/10).差异有统计学意义,P<0.05.大肠癌及癌旁正常组织中A3AR mRNA扩增分别是0.0348±0.0195和0.0214±0.0145,两组差异有统计学意义,P<0.05.两组的表达均与大肠癌的临床分期和淋巴结转移密切相关.结论:大肠癌组织A3AR在蛋白和基因水平均升高,与临床分期和淋巴结转移相关,提示可能参与了大肠癌的侵袭和转移.     

甲状腺癌组织LSD1表达临床意义分析

目的:探讨LSD1与甲状腺癌发生发展的关系.方法:免疫组化SP法测定LSD1在甲状腺癌组织中的表达、分布及与临床参数的关系.结果:在甲状腺组织中LSD1阳性表达位于核内.甲状腺癌组织中LSD1的阳性表达率为94.7％,癌旁组织为34.8％,两者比较,U=-5.575,P=0.000;甲状腺腺瘤表达率为73.3％,与癌组织比较,U=-3.190,P=0.001;而甲状腺腺瘤则高于癌旁组织,U=-2.286,P=0.022.LSD1的表达在淋巴结转移组(94.1％)与非淋巴结转移组(95.0％)比较差异无统计学意义,U=-0.364,P=0.716;且LSD1的表达在不同性别、发病年龄及临床分期等方面差异均无统计学意义,P值均＞0.05.结论:LSD1是甲状腺肿瘤发生、发展的早期标志,其表达的增加可作为判断甲状腺肿瘤发生及恶性转化的重要临床参考指标.     

大肠癌组织Lumican基因及蛋白的表达及临床意义

目的：检测人大肠癌组织中Lumican基因及蛋白的表达,探讨其与大肠癌患者临床病理指标及预后之间的关系。方法：收集外科手术切除并经病理证实的27例新鲜大肠癌组织标本,以同一患者远离肿瘤的正常大肠组织为对照,采用实时荧光定量PCR法检测Lumican基因表达,剩余组织采用石蜡包埋用于免疫组化检测Lumican蛋白。另从我院病理科收集同期37例大肠癌组织蜡块,采用免疫组化SP法共检测64例大肠癌组织、27例正常大肠黏膜组织中Lumican蛋白表达。结果：27例新鲜大肠癌组织及对应正常大肠组织中Lumican的表达有显著差异性（ P〈0.001）,Lumican mRNA在大肠癌组织表达明显增高[以正常组织为1,癌组织Lumican基因表达上调（5.35±0.66）倍]。64例大肠癌组织Lumican蛋白阳性表达率为73.44%（47/64）,显著高于远离肿瘤的正常组织表达率0%（0/27）（P〈0.05）。Lumican表达与肿瘤的病理分级、Dukes分期、淋巴结是否转移有关（P〈0.001）,而与患者性别、年龄、病变部位无关（P〉0.05）。27例大肠癌标本Lu-mican蛋白量与mRNA相对表达量呈正相关（r=0.123）,但无统计学意义（P〉0.05）。结论：人大肠癌组织Lumican mRNA及蛋白均表达升高,Lumican高表达与大肠癌的临床病理特征及侵袭、转移特性密切相关,在大肠癌发生、发展过程可能起着重要作用。Lumican可作为判断大肠癌生物学行为的重要指标之一。     

人甲状腺癌组织Bcl-xL基因表达及其临床意义的研究

目的:检测凋亡抑制基因Bcl-xL在人甲状腺癌组织中的基因表达水平,探讨Bcl-xL在人甲状腺癌的发生和发展中的可能作用.方法:采用RT-PCR方法检测38例甲状腺癌组织、相应的38例癌旁(距离癌组织5cm以外)组织和12例甲状腺良性肿瘤组织中Bcl-xL mRNA的表达水平,并用Western印迹技术检测Bcl-xL蛋白在这3种组织中的表达情况.结果:Bcl-xL mRNA在甲状腺癌组织中的表达率(76.3%)和表达水平(0.70±0.15)都明显高于癌旁组织(18.4%,0.20±0.05)和甲状腺良性肿瘤组织(33.3%,0.19±0.04),甲状腺癌组织与癌旁组织或甲状腺良性肿瘤组织之间的差异有统计学意义,P<0.01,但后两者之间的差异无统计学意义,P>0.05.同时,Bcl-xL mRNA表达与性别、年龄、病理类型及淋巴结转移与否无关,P>0.05; Western印迹结果和RT-PCR结果基本一致.结论:Bcl-xL基因可能在人甲状腺癌的发生和发展中起着重要作用.     

Kiss-1基因在乳腺肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的探讨Kiss-1 mRNA在乳腺肿瘤组织和正常腺体组织中的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT．PCR）法检测70例乳腺癌、40例乳腺纤维腺瘤及肿瘤旁正常腺体中Kiss-1 mRNA的表达,采用配对t检验、成组t检验及方差分析比较各组间Kiss-1 mRNA的相对表达水平。结果Kiss-1 mRNA在乳腺癌组织及纤维腺瘤组织中的表达量分别为（0．952±0．576）、（0．587±0．496）,均高于正常腺体组织（t=7．917,P=0．00;t=2．656,P=0．011）,乳腺癌组织中的表达量高于纤维腺瘤组织（t=3．365,P=0．001）。有淋巴结转移的乳腺癌组织中Kiss-1 mRNA表达量为（0．662±0．530）,低于无淋巴结转移乳腺癌组织（1．124±0．537）（t=3．495,P=0．001）。结论Kiss-1 mRNA在乳腺肿瘤组织中相对高表达,可能成为潜在的乳腺肿瘤标志物;Kiss-1 mRNA低表达可能与乳腺癌淋巴结转移相关。     

CSN6基因在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探索组成型光形态发生因子9信号复合体亚基6(CSN6)在肝细胞癌中的表达及其在患者临床病理因素和预后方面的意义。方法 利用公共数据库人类蛋白质图谱数据库和StarBase数据库分析CSN6在肝细胞癌和正常肝脏组织中的蛋白和mRNA的表达情况。利用TCGA数据库分析CSN6在不同肿瘤分期和分级的肝细胞癌患者中的表达差异。利用免疫组化方法检测106例肝细胞癌患者组织中CSN6的蛋白表达,分析其与多项临床病理因素和总生存期的关系。结果 与正常肝脏组织相比,CSN6在肝细胞癌组织中的表达升高。CSN6在高病理分级(G3和G4)以及高分期(Ⅱ期和Ⅲ期)的患者中的表达更高;CSN6高表达的肝细胞癌患者的总生存期更短。CSN6在肝细胞癌中的表达与肿瘤分化程度和乙肝病毒感染具有相关性,并且是影响患者总生存期的独立预测因素。结论 肝细胞癌中CSN6的表达显著升高,肝细胞癌患者组织中CSN6表达升高提示患者预后不良,其表达升高与肝细胞癌的恶性进展相关,有潜力成为一个新的预测预后的标志物以及治疗靶点。     

TNFSFl3在乳腺癌组织中的表达与临床意义

目的检测人肿瘤坏死因子配体超家族成员13（TNFSFl3）在乳腺癌组织中的表达,并评估其作为乳腺癌患者潜在的预后生物标志物的可能性。方法采用Westernblot和qRT-PCR两种方法检测TNFSF13在乳腺癌组织中的表达情况。结果TNFSFl3在乳腺癌组织中高表达,并且TNFSFl3mRNA的高表达与肿瘤分化程度和pN分期密切相关（P=0．003,P=0．022）。此外,Kaplan-Meier分析显示TNFSFl3高表达的患者,生存时间显著较短（P=0．04,log-rank检验）。Cox风险比例模型多因素分析结果表明,TNFSFl3的高表达是乳腺癌患者一个独立的预后因素（P=0．03）。结论TNFSFl3有望成为乳腺癌患者预后判断及强化治疗的一个重要的新靶标。     

肝细胞癌组织Smad4基因表达及其临床意义的研究

目的:拟通过检测Smad4基因在肝细胞癌(HCC)中的表达,初步探讨TGFβ-Smad信号通路中Co-Smad(Smad4)与肝细胞癌的发生和发展之间的可能关系.方法:采用免疫组化ABC法及原位杂交法(ISH)检测41例肝细胞癌组织切片中癌与癌旁Smad 4蛋白和mRNA的表达,5例外伤性肝破裂手术切除标本作为正常对照.比较HCC组与对照组及HCC与癌旁Smad 4蛋白和mRNA表达的差异,并进行统计分析.结果:正常对照组Smad 4蛋白和mRNA均呈阳性表达;HCC组织Smad4蛋白阳性率为48.8%(20/41),癌旁组织中为78.0%(32/41),两者比较差异有统计学意义,P<0.01;HCC组织Smad4 mRNA阳性卒为51.2%(21/41),癌旁组织中为73.1%(30/41),两者比较差异有统计学意义,P<0.05;与正常肝组织比较,HCC组织中Smad4蛋白和mRNA阳性表达均显著降低,P<0.05;HCC组织Smad4 mRNA阳性表达在病理分级Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义,P<0.05.结论:Smad 4基因表达缺失可能在肝细胞癌的发生和发展中发挥作用.     

肺癌组织中Cyr61基因表达及临床意义

目的:研究人肺癌组织中Cyr61基因表达的临床意义。方法:采用实时荧光定量-PCR技术和免疫组织化学染色法对60名肺癌患者的肺癌组织和癌旁肺组织的Cyr61 mRNA和蛋白表达水平进行测量。结果:80%(48/60)肺癌患者的癌组织中Cyr61表达水平低于其配对的癌旁肺组织中的水平,与免疫组织化学染色法测定的结果相一致。统计分析显示,两组间差异有统计学意义(2.742±4.165vs4.933±3.349,t=-5.112,P=0.000)。肿瘤恶性程度分级、淋巴结转移、病理学类型、吸烟状况及家族史等临床参数均可影响癌组织中的Cyr61的表达水平(P<0.05)。结论:Cyr61对肺癌的进展起重要作用,因此Cyr61表达的蛋白产物可作为临床诊断的重要指标。     

胰腺癌组织中CDC25B表达及临床意义的初步探讨

目的研究CDC25B基因在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌发病机制中的作用。方法利用实时荧光定量-PCR技术检测24例胰腺癌组织和4例正常胰腺组织中CDC25B基因的表达,PCR产物的定量方法采用比较Ct法,应用western blot检测其蛋白的表达水平。用Kaplan-Meier生存率曲线分析CDC25BmRNA与预后的关系。结果实时荧光定量-PCR发现CDC25B基因平均模板量在正常胰腺组织中为0.000635±0.000210,胰腺癌组织中为0.001988±0.000650;与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中CDC25B mRNA表达上调3.13倍(P<0.05),CDC25B mRNA升高5倍以上者生存时间缩短。胰腺癌组织中CDC25B蛋白也过度表达,正常胰腺组织CDC25B蛋白表达为1.22±0.33,胰腺癌组织为5.56±1.57,上调4.56倍(P<0.01)。结论CDC25B在胰腺癌组织中表达明显上调,CDC25B mRNA升高者预后差。     

卵巢上皮性肿瘤组织Nectin-4表达临床意义的探讨

目的:探讨卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中Nectin-4 mRNA和蛋白的表达及其与临床病理参数之间的关系。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,检测30例卵巢癌、25例卵巢上皮性肿瘤和30例正常卵巢组织中Nectin-4 mRNA的表达情况;采用免疫组织化学法检测Nectin-4蛋白的表达情况,并分析其与卵巢癌临床病理参数的关系。结果:卵巢癌组Nectin-4 mRNA表达水平为0.71±0.12,卵巢良性肿瘤组为0.32±0.09,正常卵巢组为0.30±0.09,卵巢癌组的mRNA表达量显著高于后两组,差异有统计学意义,P<0.01。卵巢癌组Nectin-4蛋白表达水平为3.35±0.52,卵巢良性上皮性肿瘤组1.36±0.41,正常卵巢组1.15±0.44,卵巢癌组织的Nectin-4蛋白表达量明显高于卵巢良性上皮性肿瘤和正常卵巢组织,差异有统计学意义,P<0.01。卵巢癌组织中Nectin-4 mRNA和蛋白表达水平,在不同年龄、不同病理类型间比较,差异均无统计学意义,P>0.05;而在不同病理分化程度、手术分期及有无淋巴结转移间比较,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:Nectin-4 mRNA和蛋白在卵巢癌组织中均呈高表达,而在卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中仅有微量表达。在卵巢癌组织中,其表达程度与病理分化程度、手术病理分期及淋巴结转移有密切关系。