藁本内酯对低钾大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

目的 探讨藁本内酯(ligustilide, LIG)对原代培养小脑颗粒神经元细胞(cerebellar granule neurons, CGN）低钾性凋亡的影响。方法 建立低钾诱导体外培养新生大鼠CGN凋亡模型,将CGN分为对照组、模型组、CGP54626+LIG组及LIG组,分别进行给药处理;采用噻唑兰 (MTT) 法检测各组细胞存活率,Western blot检测胰岛素样生长因子1（IGF-1）信号通路中主要效应分子IGF-1R、Akt、ERK1/2、CREB及caspase 3的蛋白表达水平。 结果 LIG（2.5~20 μmol/L） 可浓度依赖性抑制大鼠 CGN的低钾性凋亡、提高其存活率; 20 μmol/L LIG 可显著上调IGF-1R、Akt、ERK1/2 和CREB 的磷酸化水平,下调 cleaved-caspase 3 的表达水平;同时,LIG上述效应均可被γ-氨基丁酸代谢型受体（GABAB）的选择性拮抗剂 CGP54626 所阻断。结论 LIG 对低钾所致大鼠CGN凋亡有保护作用,其机制可能与激活GABAB受体及其下游的 IGF-1 信号通路有关。     

藁本内酯对骨肉瘤细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨藁本内酯对骨肉瘤细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法 DMEM培养基培养骨肉瘤MG-63细胞,采用细胞毒性实验观察藁本内酯对MG-63细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测藁本内酯对骨肉瘤细胞迁移的影响;流式细胞仪检测不同浓度藁本内酯对骨肉瘤细胞周期的影响。明确藁本内酯作用MG-63细胞的浓度,将细胞分为对照组、顺铂（DDP）组,藁本内酯联合顺铂（DDP+LIG）组,顺铂联合自噬抑制剂（DDP+3MA）组。Western blotting检测自噬和凋亡相关蛋白LC3B、Beclin1、Bcl-2、Bax,细胞色素C以及通路蛋白ULK1、ATG3的表达情况。免疫荧光检测各组细胞LC3B蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,20、40、80、160、320、640μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞增殖均被抑制（均P <0.05）;与对照组比较,160μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞迁移能力显著降低（P <0.01）。与对照组比较,40、80、160、320、640μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞G2/M期细胞均显著阻滞（均P <0.05）。与DDP组比...     

穿心莲内酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

实验采用结扎大鼠双侧颈总动脉(30min)后松开(60min)复制脑缺血再灌注损伤模型,通过测定再灌注后海马结构中过氧化物歧化酶(SOD)、Na~ —K~ —ATPase、Ca~(2 )—ATPase、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)活性及MDA含量,以观察穿心莲内对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响,结果:穿心莲内酯能明显提高脑缺血再灌注后海马结构中SOD、GSH—Px、Ca~(2 )—ATPase、Na~ —K~ —ATPase活性及降低脂质过氧化产物MDA含量,提示:穿心莲内酯对脑缺血再灌注损伤具有保护作用.     

银杏内酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察银杏内酯(ginkgolide，GL)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 采用大脑中动脉栓塞法制作大鼠急性脑缺血再灌注损伤的模型。缺血1h后灌胃给药或生理盐水，继续缺血1h后再灌注24h，观察再灌注后大鼠的神经功能损害改变及评分，取大脑测定脑含水量，2％TTC染色以测量脑梗塞体积。结果 大鼠急性脑缺血再灌注后神经功能损害评分在银杏内酯各剂量组评分均明显低于对照组；GL中剂量(49．5mg/kg)和高剂量(148．5mg/kg)组可显著降低缺血再灌注损伤脑组织含水量，减轻缺血侧脑半球水肿程度；GL各剂量组均显著缩小缺血再灌注侧脑组织梗塞体积。结论 GL对脑缺血再灌注引起的脑损伤具有明显的保护作用。     

藁本内酯脂质体制备工艺的研究

目的:研究藁本内酯脂质体最佳制备工艺及处方。方法:采用乙醇注入法制备藁本内酯脂质体,以包封率为评价指标,采用正交设计优化处方和制备工艺,高效液相色谱法测定其包封率。结果 最佳工艺处方为：藁本内酯与卵磷脂的比例为1∶10,卵磷脂与胆固醇的质量比为2∶1,PBS缓冲溶液pH为7.5,制备温度为35 ℃。结论 经优化得到的藁本内 酯脂质体处方合理,工艺可行。     

川芎中藁本内酯对照品的制备

目的研究川芎的对照品藁本内酯的制备。方法从川芎药材提取挥发油,从挥发油中分离、制备对照品,采用紫外光谱、红外光谱、质谱和氢谱对其进行了结构鉴定。结果从川芎成分中筛选出藁本内酯对照品。结论该对照品可作为控制川芎质量的指标成分。     

藁本内酯对照品提取与稳定性的研究

目的:通过提取与分离等实验从中药材藁本中得到藁本内酯的对照品.为其质量标准的建立和稳定性的研究提供依据,并能够掌握该方法.方法:中药材蒿本中含有藁本内酯、正丁烯酞内酯等多种成分,通过硅胶G柱层析分离制得藁本内酯,经GC-14B气相色谱检测纯度,以UV-2401(PC)S考察其质量标准.结果:制得藁本内酯纯度为98%以上,稳定性实验发现藁本内酯于-20℃下在氟仿溶液中稳定,乙醇溶液中不稳定,四氯化碳溶液中末见漂浮物.结论:该试验分离提取的藁本内酯纯度高、杂质少,质量标准符合中国药典限量规定,并对其稳定性提供依据.     

银杏内酯B对大鼠脑缺血-再灌注的保护作用研究

目的 研究银杏内酯B对大鼠脑缺血-再灌注模型的保护作用及其可能机制.方法 通过栓线法建立大鼠大脑缺血3小时再灌注21小时模型,观察银杏内酯B对大鼠神经行为改变、脑梗死范围和缺血侧大脑含水量的改变,同时检测脑组织匀浆中SOD活性、MDA、NO、GSH、GSH-PX及CAT含量的改变.结果 银杏内酯B中剂量,高剂量组能够明显改变模型大鼠神经行为、脑梗死范围和缺血侧大脑含水量,银杏内酯B治疗能够明显升高大鼠大脑组织匀浆SOD活性,降低MDA和NO含量,提高GSH、GSHPX含量及降低CAT活性.结论 银杏内酯B对缺血-再灌注脑损伤具有一定的保护作用,其机制可能是与抗自由基损伤,提高机体清除自由基的能力,自由基产生减少有关.     

丝切蛋白棒状结构致慢性脑低灌注大鼠海马突触丢失

【摘要】 目的 观察丝切蛋白棒状结构在慢性脑低灌注大鼠海马区的表达,探讨其在慢性脑低灌注大鼠突触可塑性中的作用。方法 运用随机数字表法将25只SD健康成年雄性大鼠分成慢性脑低灌注组（15只）和假手术组（10只）。双侧颈总动脉永久性结扎方法制备慢性脑低灌注模型组。假手术组方法同前,但是只分离双侧颈总动脉而不结扎。两组大鼠于造模后第4周做水迷宫测试。水迷宫测试完后第2天处死大鼠并取其海马组织制成冰冻切片。运用免疫荧光双重标记大鼠海马区丝切蛋白和突触素。结果 慢性低灌注组大鼠学习记忆能力较假手术组明显受损（P＜0.05）。慢性低灌注组大鼠海马区丝切蛋白棒状结构形成。慢性低灌注组突触素较假手术组显著减少(P＜0.05)。结论 慢性脑低灌注大鼠海马丝切蛋白棒状结构导致突触丢失,这可能是慢性脑低灌注所致学习记忆受损的主要因素。     

轻度脑低灌对雌性大鼠丘脑内肥大细胞的影响

目的研究轻度脑低灌对雌性大鼠丘脑内肥大细胞的影响。方法结扎大鼠右侧颈总动脉,在不同低灌时间点处死动物,甲苯胺蓝染色,观察两侧丘脑内肥大细胞的形态及数量。结果低灌后4 h右侧丘脑内肥大细胞数量明显下降,而肥大细胞脱颗粒的比例在低灌后半小时明显增加,对侧未见明显改变。结论丘脑内肥大细胞可能通过脱颗粒参与了脑低灌损伤的病理过程。     

远志汤对慢性脑低灌注大鼠认知功能及海马凋亡蛋白的影响

目的 观察远志汤对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马凋亡蛋白的影响。方法 采用永久结扎大鼠双侧颈总动脉法造模。将42只SD大鼠采用数字表法随机分为正常对照组,模型组,假手术组,远志汤高、中、低剂量组[20、10、5 g/（kg·d）]及阳性药物对照组[盐酸多奈哌齐0.52 mg/（kg·d）],每组各6只,分别灌胃给药,1次/d,给药4周。通过Morris水迷宫定位航行实验及空间探索实验,观察远志汤对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力的影响;通过免疫荧光染色法检测远志汤对慢性脑低灌注大鼠海马凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白抗体（Bcl-2 associated X protein,Bax）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）表达的影响。结果 模型组大鼠较对照组和假手术组的逃避潜伏期和搜索距离明显延长（P<0.01）,在原平台所在象限的搜索时间明显缩短（P<0.01）。而远志汤各剂量干预均可明显缩短大鼠的逃避潜伏期和搜索距离（P<0.01）,并延长在原平台所在象限的搜索时间（P<0.01）。模型组大鼠海马Bax和Caspase-3的表达较对照组和假手术组增加,差异有统计学意义（P<0.05）,Bcl-2则显著下降,差异有统计学意义（P<0.01）。而远志汤高、中剂量组干预均可明显减少Bax和Caspase-3的表达（P<0.05）,增加Bcl-2的表达（P<0.05）。结论 远志汤可能通过调节海马凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达以改善慢性脑低灌注大鼠的认知功能。     

一种适用于颅内外血管重建研究的大鼠慢性脑缺血模型

目的：检测结扎大鼠双侧颈内动脉及一侧椎动脉（3-VO）是否可以在保留颈外动脉的同时,造成大鼠慢性脑缺血。方法分别制造假手术对照组、双侧颈总动脉结扎组（2-VO）及3-VO组动物模型;于造模4周后行脑血流量测定;于第8周行Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力;行为学实验结束后处死大鼠,观察大鼠海马CA1区细胞的形态学变化。结果脑血流测定结果显示与假手术[（47±8．797）ml·min^－1·100 g^－1]相比,2-VO[（24．30±8．999）ml·min^－1·100 g^－1]、3-VO[（9．870±2．208）ml·min^－1·100 g^－1]组脑血流量值均降低,差异有统计学意义（P＜0．01）。 Morris水迷宫实验显示,2-VO组[（14．78±7．84） s]、3-VO[（14．86±7．96）s]组第5天潜伏期与假手术组[（8．33±4．88）s]相比,时间较长,差异有统计学意义（P＜0．01）,但2-VO组与3-VO组相比,其潜伏期无明显差异;与假手术组[（37．20±9．21）s,（10．01±2．91）次]相比,2-VO组[（20．13±5．80）s,（6．60±3．19）次]、3-VO组[（20．05±5．76）s,（6．55±2．59）次]目标象限停留时间及穿越平台次数均显著减少,差异有统计学意义（P＜0．01）。2-VO、3-VO模型组海马CA1区有明显病理形态学改变。结论结扎双侧颈内动脉及一侧椎动脉可造成大鼠慢性脑缺血,并造成与2-VO相似的行为学表现。     

丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠脑内Survivin和bFGF表达的影响

目的研究丁基苯酞（NBP）对大鼠慢性脑缺血后大脑皮层和海马中Survivin及bFGF表达的影响。方法用免疫组织化学SP法在光镜下观察各组皮层和海马Survivin、bFGF的表达。结果B组皮质和海马中Survivin及bFGF的表达与A组相比明显增多，差异有统计学意义。C组和B组相比Survivin及bFGF表达明显增多，差异有统计学意义。结论丁基苯酞对慢性脑缺血的保护作用可能通过上调脑组织中的Survivin及bFGF的表达而实现，     

丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力及前脑组织线粒体Na+-K+-ATP酶的影响

目的 探讨丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力以及前脑组织线粒体Na+-K+-ATP酶的影响.方法 将实验用SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=15)、丁基苯酞大剂量治疗组(n=15)和小剂量治疗组(n=15).采用双侧颈总动脉结扎制作慢性脑缺血模型,4周后,分别给模型组、大、小剂量丁基苯酞组大鼠腹腔注射生理盐水、丁基苯酞6 mg/kg和2 mg/kg,2次/d.用药4周后,利用Morris水迷宫试验测试大鼠学习记忆能力,提取前脑组织线粒体,测定线粒体Na+-K+-ATP酶的活性.结果 较假手术组相比,模型组大鼠记忆能力明显下降,逃避潜伏期延长[分别为(10.41±3.81)s和(25.54±9.82)s,P＜0.01]线粒体ATP酶活力下降[分别为(3.73±0.32)μmol·mgprot-1·h-1和(2.81±0.40)μmol·mgprot-1·h-1,P＜0.05],而丁基苯酞大、小剂量组较模型组记忆能力显著增强[分别为(11.72±5.78)s和(12.48±5.45)s,P＜0.01],ATP酶活力明显增加[分别为(3.53±0.37)μmol·mgprot-1·h-1和(3.43±0.43)μmol·mgprot-1·h-1,P＜0.05],不同剂量丁基苯酞组差异无显著性(P＞0.05).结论 丁基苯酞注射液可增强缺血区神经元线粒体Na+-K+-ATP酶活力,改善线粒体能量代谢,提高慢性脑缺血大鼠的学习记忆能力.     

慢性脑低灌注大鼠海马神经元损伤的机制研究

目的 探究慢性脑低灌注大鼠海马神经元损伤的机制.方法 双侧颈总动脉结扎(2VO)制备慢性脑低灌注大鼠模型,2VO术后8周取材,分别进行HE染色、电镜、流式细胞术以及Western Blotting检测.结果 HE结果显示2VO组的海马神经元排列稍紊乱,且数量与假手术对照相比有不同程度减少[CA2区:(34.75±3.40)个,(49.25±9.67)个,P＜0.05;DG区:(73.50±9.26)个,(90.75±4.35)个,P＜0.05];电镜观察发现2VO组大鼠海马区部分神经元胞核中略有固缩,出现异染色质边集,胞浆则出现水肿,以线粒体与内质网尤甚;流式细胞术结果表明2VO组海马神经元早期凋亡率[(9.117±2.540)%]高于假手术对照组[(4.750±3.481)%],差异有统计学意义(P＜0.05);Western Blotting检测发现procaspase-3在2VO组大鼠海马的表达与假手术对照组差异无显著性(P＞0.05).结论 慢性脑低灌注大鼠海马神经元的损伤主要由凋亡造成.

Abstract：

Objective To explore the the cellular damage of hippocampus neuron in a rat model of chronic cerebral hypoperfusion. Methods Rat model of chronic cerebral hypoperfusion was established by permanent bilateral common carotid arteries occlusion (2VO). Eight weeks after the operation,the brains were removed and examined with histological stains, electron microscope, flow cytometer and Western Blotting. Results Compared with the control group,the arrangement of hippocampus neurons in 2VO rats appeared to be more irregular, and the number of the neurons decreased partly ( CA2: ( 34.75 ± 3.40) vs (49.25 ± 9.67 ), P ＜ 0. 05; DG: ( 73.50 ± 9.26)vs ( 90.75 ± 4.35 ), P ＜ 0. 05 ). By electron microscopic study of hippocampus neurons in 2VO rats, the nuclei became smaller and the heterochromatin assembled in the border of the nuclei in some neurons, while cytoplasm swelled,especially in mitochondria and endoplasmic reticulum. The rate of apoptosis of hippocampus neurons in 2VO rats( (9. 117 ±2. 540)% ) ,detected by the flow cytometer,was higher than that of sham group( (4. 750 ±3.481 ) % ) (P ＜ 0. 05 ). The expression of pro-caspase-3 in hippocampus of 2 VO rats was not altered significantly compared with the control group(P ＞ 0. 05 ). Conclusion The cellular damage of hippocampus neuron in 2VO rats was mainly caused by apoptosis.     

慢性脑血流灌注不足认知功能障碍与环胞素A治疗作用的实验研究

目的 探讨慢性脑血流灌注不足认知功能障碍和环胞素Ａ治疗作用。方法 持久性双侧颈总动脉结扎所致慢性脑血流灌注不足的大鼠模型;用电脑控制穿梭箱记录大鼠学习记忆能力;用免疫组化研究脑内血源性白细胞和Ｔ细胞浸润的规律、分布和可能作用及免疫抑制剂环胞素Ａ（ＣｓＡ）的治疗效果。结果 慢性脑血流灌注不足２～４个月大鼠的学习记忆能力明显下降;缺血１个月后皮层、海马和白质有白细胞和Ｔ细胞的浸润,２～４月浸润的白细胞     

慢性脑低灌注对海马区缝隙连接超微结构和缝隙连接蛋白的影响

目的 观察慢性脑低灌注导致的认知功能受损的大鼠海马区缝隙连接超微结构的变化以及缝隙连接蛋白亚单位的表达变化.方法 通过永久性双侧颈总动脉结扎模型(2-VO)诱导大鼠慢性脑低灌注状态.实验动物分为对照组、2-VO 3周组、8周组和12周组.Morris水迷宫检测空间学习和记忆能力,透射电镜观察大鼠的海马CAI区缝隙连接,逆转录-多聚酶联反应和Western印迹技术检测海马中缝隙连接蛋白(Cx)Cx36、Cx32和Cx26的表达.结果 在水迷宫训练期的3～5 d,手术组大鼠找到平台的潜伏期均显著长于对照组.空间探索实验中对照组在目标象限游泳时间显著长于手术组.所有手术组动物的缝隙连接超微结构都发生了变化.与对照组相比,Cx36转录和翻译水平在手术后3周、8周和12周组均显著降低,mBNA表达量分别为1.533±0.138、0.466±0.086、0.495±0.104、0.626±0.089,蛋白表达量分别是0.982±0.089、0.351±0.056、0.557±0.072、0.595±0.039(均P<0.01).与对照组相比,Cx32的转录和翻译水平在术后3周、8周和12周组均显著降低,mRNA表达量分别为1.215±0.128、0.237±0.079、0.471±0.083、0.556±0.105,蛋白表达量分别为1.089±0.050、0.401±0.055、0.712±0.074、0.837±0.048(均P<0.05或P<0.01).Cx26的转录水平在手术组无显著性改变,蛋白水平较对照组上调,蛋白表达量分别为0.435±0.047、0.635±0.047、1.396±0.056、0.797±0.051(均P<0.05或P<0.01).结论 这些实验结果提示缝隙连接的变化参与了慢性脑低灌注导致的认知功能损伤.     

慢性脑缺血对大鼠认知功能障碍及影响机制研究

目的观察慢性脑缺血（CCH）过程中大鼠认知功能的变化、前额叶皮层和海马神经元组织学改变以及胆碱能系统改变,探讨慢性脑缺血致大鼠认知障碍的影响机制。方法选取大鼠分组后,应用Morris水迷宫定位航行实验和空间搜索实验观察各组大鼠学习记忆功能变化;苏木精-伊红染色观察前额叶皮层和海马组织学改变;免疫组织化学方法显示前额叶皮层和海马胆碱乙酰转移酶和烟碱型乙酰胆碱受体α4阳性细胞表达。结果①Morris水迷宫测试：a.定位航行实验：各组大鼠逃避潜伏期随天数增加而缩短,逃避潜伏期有差异性;b空间搜索实验：CCH各组大鼠在中环停留时间随低氧时间延长而减少;②与对照组比较,CCH大鼠前额叶皮层和海马变性坏死神经元增多,随着低氧时间延长而加重;③CCH各组大鼠前额叶皮层和海马ChAT阳性表达随低氧时间延长而下降;④CCH各组大鼠前额叶皮层和海马nAChRα4阳性表达随着低氧时间延长而下降。结论慢性脑缺血大鼠认知功能障碍随低氧时间延长呈加重趋势。慢性脑缺血致大鼠认知功能障碍的机制与大鼠前额叶皮层和海马神经元组织学改变和胆碱能系统改变有关。