睫状神经营养因子对大鼠脊髓损伤后GFAP表达的影响

目的 研究磊鼠脊髓损伤后睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）是否能够影响胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达和脊髓损伤后大鼠功能的恢复情况。方法 将动物分为脊髓 务＋ＣＮＴＦ注射组（Ａ组）、脊髓损伤＋灭活的ＣＮＴＦ注射组（Ｂ组）。手术后１、３、７、１４、２８ｄ应用原位杂交和免疫细胞化学方法观察ＧＦＡＰ的表达,彩和计算机图像分析蜓一量分析,并用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况。结果 大鼠脊髓 务后ＧＦＡ     

睫状神经营养因子对脊髓神经元的保护作用

目的：研究脊髓操作后脊髓神经元内酶学的变化,并探索睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对神经元的保护作用,方法：用Ａｌｌｅｎ改良法打击摸型致ＳＤ大鼠Ｔ８脊髓操作分别于术前及术后３,７,１０ｄ测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的含量。结果：ＡＣｈＥ于术后持续下降;ＡＣＰ在术后第３天开始上升,第７天至最高,以后逐渐下降;用ＣＮＴＦ处理的大鼠上述两种酶变化的幅度较小,且整个过程也比较平     

睫状神经营养因子对大鼠创伤性脊髓水肿的影响

目的 :观察睫状神经营养因子 (CNTF)对大鼠创伤性脊髓水肿的影响及其可能的作用机制。　方法 :采用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤 ,分别于术前及术后 3天用干湿法测定脊髓组织水含量、用原子吸收分光光度计测定脊髓组织中Ca2 的含量。　结果 :脊髓损伤后局部组织含水量、Ca2 含量均显著增加 (P <0 .0 1) ,用CNTF治疗后水含量、Ca2 含量有明显下降 (P <0 .0 1) ,但和正常组相比仍有明显差异。　结论 :CNTF可能是通过阻止Ca2 内流、稳定细胞内外Ca2 平衡而起到减轻创伤性脊髓水肿的作用。     

大鼠嗅鞘细胞移植对脊髓横断损伤的修复作用

目的观察嗅鞘细胞（OECs）移植后在体内的存活情况和对脊髓横断伤的修复作用。方法4月龄SD大鼠,体质量250g左右。显露T9段脊髓,完全横行切断脊髓。A组（20只）在损伤远近端注射由成年SD大鼠嗅球分离、培养、纯化的OECs,B组（20只）在相同位置注射DMEM培养液,C组（10只）单纯做T9节段的椎板减压。术后观察动物脊髓功能恢复情况,每2周测定1次后肢运动功能（BBB评分法）,共12周。术后3个月取损伤段及其临近脊髓标本,做HE染色、嗜银染色、抗NF和p75免疫组化染色。利用p75免疫组化染色来观察OECs在体内存活情况。结果手术后4周开始有运动功能恢复,在各个时间段BBB运动功能得分A组均显著高于B组（均P〈0.001）。A、B组都有神经纤维进入损伤区,在损伤近端,神经纤维数量A组显著多于B组（P〈0.001）,但都显著少于相应节段的C组（P〈0.001）。经过p75免疫组化的OECs存在于脊髓损伤段周围,最远可到距离损伤区边缘1.0cm处。脊髓损伤再生神经纤维的数量与运动功能恢复成正相关（P〈0.01）。结论OECs移植具有明显促进脊髓横断伤神经纤维再生和功能恢复的作用。     

睫状神经营养因子对损伤脊髓神经元酶学的影响

目的：研究脊髓损伤后脊髓神经元的酶学变化,并探索睫状神经营养因子（CNTF）对脊髓神经元的保护作用。方法：用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤,分别于术术前术后第3、7、14天测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（AChE)和酸性磷酸酶（ACP）的含量。结果：AChE于手术持续下降,ACP在术后3天开始上升,第7天升至最高,以后逐渐下降,经CNTF治疗后上述峡谷种酶变化的幅度较小,且整个过程比较平衡,结论：CNTF对脊髓损伤的神经元具有一定的保护作用。     

人睫状神经营养因子结构和功能的研究

制备高活性的重组人睫状神经营养因子，并研究其生物学功能。方法：应用大肠杆菌表达ｈＣＮＴＦ，用片段插入和法研究其结构与功能关系；切断大鼠骨神经，局部及皮下给予ＣＮＴＦ，应用辣根过氧化物酶逆行追踪技术显示再生轴突通过修复部位的胞体。结果；ｈＣＮＴＦ分子中α－螺旋结构的维持对其生物活性十分重要Ｃ端松散地其生物活性贡献不大，Ｄ螺旋中后段可能与生物活性有密切关系；     

睫状神经营养因子对脊髓神经元离子内环境的影响

目的 :研究脊髓损伤前后脊髓组织内离子含量的变化 ,探索睫状神经营养因子 (CNTF)对损伤脊髓神经元保护作用的可能机制。　方法 :采用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤 ,分别于术前及术后 3天用原子吸收分光光度计测定脊髓组织中Na 、K 、Ca2 、Mg2 的含量。　结果 :脊髓损伤后局部组织Na 、Ca2 含量均显著增加 ,K 、Mg2 含量均降低 (P <0 .0 1)。用CNTF治疗后Na 、Ca2 含量明显下降 ,同时 ,K 、Mg2 含量明显回升(P <0 .0 1) ,但与正常组相比 ,仍有明显差异。　结论 :CNTF可能是通过调节损伤细胞内外离子水平、稳定细胞内外离子平衡而起到保护损伤的脊髓神经元的作用     

神经干细胞与嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与嗅鞘细胞（OECs）移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响．方法SD大鼠行T11脊髓全横断术后，随机分为NSCs移植组、OECs移植组、联合移植组和对照组．术后将取自绿色荧光蛋白（GFP）转基因胚胎小鼠海马和新生小鼠嗅球的、经培养鉴定后的NSCs和OECs，以明胶海绵做载体分别或联合移植到各移植组动物脊髓损伤处，对照组不移植细胞，用BBB评分法评价1～8周大鼠后肢运动功能恢复的程度．8周后移植各组动物行左心室主动脉内4％多聚甲醛灌注，取横断处上下各约1mL脊髓，连续冰冻切片（片厚20tam），置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞，确定NSCs及OECs的存活情况．结果NSCs及OECs细胞在移植脊髓损伤后能存活，并向周围迁移；术后3和4周末，NSCs组、OECs组和联合移植组大鼠运动功能均较对照组有明显改善（P〈0．05）；且3周时，联合移植组和OECs组比NSCs组后肢运动功能变化显著（P〈0．05）；而联合移植组和OECs组比较后肢运动功能未见显著差别（P〉0．05）．绪论NSCs、OECs和联合移植在早期均可促进脊髓全横断大鼠运动功能恢复；OECs组、联合移植组效果均优于NSCs组；联合移植对大鼠运动功能恢复在早期没有显现最佳作用．     

嗅鞘细胞移植后脊髓挫伤大鼠几种神经营养因子的表达变化

创伤是现代医学的一个重要领域。由于社会经济的发展，机动车数量的急剧增加，使得创伤也相应的增多，由此被称为“发达社会疾病”。     

嗅鞘细胞移植后脊髓挫伤大鼠几种神经营养因子的表达变化

目的探讨嗅鞘细胞移植脊髓挫伤大鼠后,在其神经损伤及修复过程中三种神经营养因子（脑源性神经营养因子、神经生长因子、睫状神经营养因子）的表达变化及意义。方法体外分离培养大鼠嗅球嗅鞘细胞。40只健康SD大鼠,雌雄不拘,在移植前一星期使用NYU-撞击机,利用10g-25mm的致伤力,制作T10脊髓挫伤模型。40只脊髓挫伤大鼠随机分为OECs移植组和对照组（注射无血清培养液组）,又根据取材时间不同分为术后1天、7天、14天、21天组。动物处死前进行BBB评分评估后肢运动功能的变化。取手术部位头端和尾端0.5cm脊髓,采用免疫组织细胞化学染色检测技术检测三种神经营养因子（BDNF、CNTF、NGF）在各组脊髓中的表达变化。结果行为学评分随着损伤时间的推移呈小幅度增加,但后肢无运动功能恢复;免疫组织化学检测显示,嗅鞘细胞移植能部分改善大鼠脊髓灰质神经细胞的凋亡程度,延缓白质神经纤维的减少,促进髓鞘的修复与再生。与对照组比较,嗅鞘细胞移植治疗后脊髓组织中三种神经营养因子表达明显增加（P〈0.05）。结论嗅鞘移植能够部分改善脊髓损伤后脊髓组织的病理形态,促进脊髓组织中多种神经营养因子的表达。     

嗅鞘细胞抑制脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的实验研究

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)移植的治疗作用及其对影响硫酸软骨素蛋白聚糖类分子(CSPGs)表达的影响。方法:将培养的OECs移植于脊髓半横断的Wistar大鼠,移植术后对模型进行数个时间点的BBB运动功能评分,损伤即移植术后4周,对实验组和对照组动物取材,进行免疫组织化学和Western blotting检测。结果:移植后4周,实验组动物的BBB评分高于对照组动物。免疫组织化学和Western blotting检测发现,实验组动物损伤处CSPGs物质表达低于对照组动物。结论:OECs促进脊髓损伤动物运动功能恢复的作用可能与抑制CSPGs分子表达有关。     

Brain-derived neurotrophical factor after olfactory ensheathing cells transplantation in spinal cord injury of rats

<正>Objective To observe the expression of brain - derived neurotrophical factor ( BDNF) in injury spinal cord after transplantation olfactory ensheathing cells ( OECs) , and to investigate the mechanism of OECs repairing spinal cord injury. Methods OECs from GFP transgenic rats were separated and cultured for transplantation. Spinal cord injury rats were separated two groups by random     

嗅粘膜源性嗅鞘细胞移植联合NGF对脊髓损伤的修复

目的：探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells, OECs）移植联合神经生长因子(nerve growth factor, NGF)修复脊髓急性损伤的可行性和疗效,并观察二者的协同作用。方法：自成年Wistar大鼠嗅粘膜取材,采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制纯化相结合的方法培养纯化嗅鞘细胞。建立大鼠脊髓半切模型,并随机分成对照组（A组）,OECs组（B组）和OECs＋NGF组（C组）,在不同时段进行肢体活动的BBB评分。8周后取脊髓标本进行组织学检查,评价对脊髓损伤的修复作用。结果：B组和C组2周后BBB评分高于A组（P＜0.05）,C组自4周后明显优于A组和B组（P＜0.01）。组织学检查表明,C组可明显促进轴突再生。结论:OECs联合NGF具有良好的脊髓损伤修复作用,且二者具有明显的协同作用。     

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

目的：研究嗅鞘细胞（OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因了（GDNF）对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法；建立成年SD大鼠脊髓T8半横断损伤模型，将体外培养纯化的OECs植入脊髓损伤处，同时局部应用GDNF，采用斜板试验和BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况，并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价OECs和GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果：（1）OECs和GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用；可促进脊髓下行传导束再生，肢体运动功能恢复，（2）OECs和GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强，高于GDNF或OECs单用组。结论：联合应用GDNF和OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

嗅神经鞘细胞移植联合应用GDNF促进大鼠脊髓损伤后功能恢复

目的 嗅神经鞘细胞（OECs）移植联合应用胶质源性神经营养因子（GDNF）恢复大鼠脊髓损伤的功能。方法 将成年大鼠分为脊髓半切洞损伤组（A组），脊髓半切洞损伤＋嗅神经鞘细胞移植组（B）和脊髓半切洞＋嗅神经鞘细胞移植＋胶质源性神经营养因子（C组）。手术后应用联合行为评分（CBS），感觉诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查，测定脊髓功能恢复情况。结果 3组CBS得分A组＞B组＞C组，SEP和MEP潜峰时，均A组＞B组＞C组，统计分析均差异显著性（P＜0．05）。结论 移植嗅神经鞘细胞＋胶质源性神经营养因子能促进损伤脊髓功能的恢复。     

嗅鞘细胞移植促进急性脊髓损伤的修复作用

目的研究嗅鞘细胞(OEG)移植后在体内存活情况以及对大鼠脊髓损伤长期的修复作用.方法用新生Wistar大鼠嗅球做OEG培养,大量增殖并标记.80只大鼠,随机分为4组,每组20只.A、B、C组以250 mm·g打击T13脊髓致运动诱发电位和体感诱发电位完全消失,A组在打击区中央用尖刀横行切断脊髓;D组仅做与A、B组相同节段的椎板减压,不挫伤脊髓.A、B组在脊髓远近断端距离挫伤区边缘1 mm的脊髓中线上,深度分别为1.75、1.5、1.0、0.5 mm处,各注入200 000个OEG;C组用同样的方法注射等量的DMEM培养液;D组不做处理.术后观察脊髓功能恢复情况(BBB运动功能评分法)和体重变化.术后24周取脊髓标本,做HE染色、嗜银染色、抗神经原纤维(NF)免疫组化染色、荧光显微镜下观察Hoechst标记的OEG在体内存活情况.结果手术后4周,A、B、C组开始有运动功能恢复,术后4～24周BBB运动功能评分A、B组均高于C组(P＜0.01),16周以后BBB评分变化较小.HE染色A、B两组脊髓损伤区结构紊乱,纤维走行方向扭曲不一致,细胞数目较多,C组大鼠脊髓损伤段常有明显空洞存在,纤维含量少且扭曲.嗜银染色和免疫组化抗NF染色显示无论在损伤区还是损伤头、尾端,A、B组神经纤维数量多于C组,但都少于相同节段的D组(P＜0.01).荧光显微镜下观察到Hoechst标记的OEG大量存在于脊髓损伤段周围.术后各组大鼠均出现体重减轻.术后2周,D组大鼠体重恢复至术前重量,此后逐渐增加.术后4周,A、B、C组大鼠体重降至最低,与D组(Sham组)比较差异有显著性(P＜0.01);此后,A、B组大鼠体重逐渐增加,而C组大鼠体重增加不明显;A、B组大鼠体重与C组比较差异有显著性(P＜0.05).结论OEG移植具有一定促进脊髓损伤神经纤维再生和功能恢复的作用.     

嗅鞘细胞移植在修复脊髓损伤中的实验研究及临床应用

脊髓损伤(spinal cord injuries,SCI)是一种严重威胁人类健康的疾病,可致损伤平面以下的运动、感觉及植物神经功能障碍,其修复一直是神经科学研究领域的一大难题.关于细胞移植治疗脊髓损伤的研究近年来开展得尤有成效,进行细胞移植的候选胶质细胞包括嗅鞘细胞(Olfactory Ensheathing Cell,OECs)、少突胶质前体细胞和许旺细胞.     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的进展

脊髓损伤的治疗一直是医学界的难题.脊髓损伤后神经元无法依靠自身再生修复,轴突再生困难,同时神经胶质瘢痕阻碍再生轴突的通过,因此脊髓损伤后减少神经细胞坏死,促进轴突再生,减少胶质瘢痕的形成是临床治疗的关键.许多研究发现嗅鞘细胞是神经系统中具有促进神经轴突再生,引导轴突正确生长的独特细胞,为脊髓损伤的修复带来了希望,但临床结果很不理想,为了提高其修复神经和正确引导轴突生长的能力,目前许多研究将基因工程技术和组织工程技术应用于其种植过程中,取得了一定的成果.     

腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复

目的观察腺病毒(Adts)介导碱性成纤维细胞生长因子2(FGF-2)直接体内转基因对大鼠脊髓损伤的治疗作用。方法将SD大鼠在T10水平制备脊髓损伤模型,随机分为体内转基因治疗组和损伤对照组,用携带FGF-2和绿色荧光蛋白(GFP)的Adts行直接体内转基因治疗;荧光显微镜观察体内转基因表达,后肢运动功能评分(BBB评分)检测大鼠运动功能恢复情况,EC染色观察损伤后脊髓灰质和白质残存组织的体积变化。结果 BBB评分检测到体内转基因治疗组大鼠后肢运动功能有明显恢复,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);体内转基因治疗组脊髓灰质残存组织的体积明显增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论由Adts介导FGF-2的直接体内转基因治疗能够明显促进损伤脊髓的功能恢复。     

Influence of patients’ age on functional recovery after transplantation of olfactory ensheathing cells into injured spinal cord injury

Objective To evaluate the restoration of function after spinal cord injury (SCI) in patients of different ages who have underwent intraspinal transplantation of olfactory ensheathing cells (OECs). Methods One hundred and seventy-one SCI patients were included in this study. Of them, 139 were male and 32 were female, with age ranging from 2 to 64 years (mean, 34.9 years). In all SCI patients the lesions were injected at the time of operation with OECs. According to their ages, the patients were divided into 5 groups: ≤20 years group (n=9), 21-30 years group (n=54), 31-40 years group (n=60), 41-50 years group (n=34) and&gt;51 years group (n=14). The spinal cord function was assessed based on the American Spinal Injury Association (ASIA) Classification System before and 2-8 weeks after OECs transplantation. One-way ANOVA and q test were used for statistical analysis, and the data were expressed as mean±SD. Results After surgery, the motor scores increased by 5.2±4.8, 8.6±8.0, 8.3±8.8, 5.7±7.3 and 8.2±7.6 in 5 age groups respectively (F=1.009, P=0.404); light touch scores increased by 13.9±8.1, 15.5±14.3, 12.0±14.4, 14.1±18.5 and 24.8±25.3 respectively (F=1.837, P=0.124); and pin prick scores increased by 11.1±7.9, 17.2±14.3, 13.2±11.8, 13.6±13.9 and 25.4±24.3 respectively (F=2.651, P=0.035). Restoration of pin prick in &gt;51 years group was better than other age groups except 21-30 years group. Conclusion OECs transplantation can improve the neurological function of spinal cord of SCI patients regardless of their ages. Further research into the long-term outcomes of the treatment will be required.