重组白细胞介素2纯化方法的建立

目的：本文建立了重组人白细胞介素2（rIL－2）的纯化方法。方法依次利用 CM Sepharose FF 捕获、SOURCE 30 RPC纯化、CM Sepha－rose FF浓缩和凝胶过滤法分离重组白细胞介素2。结果通过SDS－PAGE电泳和HPLC－PRC检测,表明纯化后的rIL－2纯度较高。结论建立了rIL－2的纯化方法,该纯化方法简单,稳定,纯化效果好,可为rIL－2的生产工艺提供技术支持和依据。     

白细胞介素—2基因在质粒pMAL—cR1中的克隆及其蛋白的表达与纯化

利用非抗体亲和层析，对白细胞介素－２基因在质粒ｐＭＡＬ－ｃＲ１中形成的克隆子表达的融合蛋白，进行分离纯化；并经特异性酶ｆａｃｔｏｒＸａ酶切，分离，得到纯度高达９８％的白细胞介素－２蛋白，收率为６９．７％，其比活为１０＾５Ｕ／ｍｇ。     

白细胞介素2及其受体单克隆抗体的应用

白细胞介素２（ＩＬ－２）有其受体（ＩＬ－２Ｒ）在机体免疫应答中起重要作用，抗ＩＬ－２单克隆抗体（ＭｃＡｂ）及抗ＩＬ－２ＲＭｃＡｂ已在实验室及临床研究中得到广泛应用，利用抗ＩＬ－２ＭｃＡｂ作亲和层析提纯ＩＬ－２操作简便，纯度高且保持较高的生物学活性；酶免疫法测定了ＩＬ－２敏感度高，稳定性强，而且有希望试制成试剂盒，抗ＩＬ－２ＭｃＡｂ还可用于移植物排斥反应的监测及一些疾病的治疗。抗ＩＬ－２ＲＭｃＡｂ是     

人类白细胞介素—2的纯化

采用硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤三步法纯化人美外周血制备的白细胞介素－2的粗制品，并比较国内外纯化制品的比活性和回收率。     

白细胞介素-2及其相关药物的应用研究进展

综述白细胞介素-2及抗白细胞介素-2受体单克隆抗体的应用研究进展。白细胞介素-2是一种在机体的免疫调节中发挥着重要而复杂作用的细胞因子,既可促进淋巴细胞增殖,增强免疫功能,又能限制T细胞反应而增强机体的免疫耐受,故可用于治疗肿瘤和感染性疾病及自身免疫性疾病。     

纯化人白细胞介素—2对人和小鼠淋巴细胞的调节作用

本文研究了纯化白细胞介素-2对人和小鼠淋巴细胞的调节作用。发现纯化IL-2能提高人和小鼠的淋巴细胞转化水平,对肿瘤患者和荷瘤小鼠淋转水平的提高尤为显著,分别增加35.5%(P<0.05)和75%(P<0.01)。并且纯化IL-2能诱导产生LAK 细胞,其杀伤活性在E:T=25:1时为12.9%,E:T=50:1时为25.3%。     

CD_3单克隆抗体加白细胞介素2活化的杀伤T细胞系治肿瘤的安全性

目的 :探讨CD3单克隆抗体 (CD3McAb)与小剂量白细胞介素 2 (IL 2 )活化的杀伤T细胞系治疗肿瘤病人的安全性。方法 :从健康人外周血、脐血、人胎胸腺或病人自体血分离淋巴细胞 ,经诱导、激活传代后获淋巴因子活化的杀伤细胞 (LAK)和CD3AK细胞系 ,先分别试用 10例病人 ,(1～ 5 )×10 8,iv ,每个疗程 5次 ,显示安全有效后增加病例 ,LAK细胞组 5 0例 ,CD3AK细胞组 4 0例。结果 :效应细胞生长形态良好 ,多数能长出细胞集落。生长曲线表明CD3AK细胞比LAK细胞增殖快 ,生长时间长 ;CB CD3AK和PBL CD3AK细胞对数生长期为d 9～ 18,能从 10 6 扩增到 10 8,而其他细胞对数生长期为d 6～ 15 ,扩增到 10 7,110例病人经iv 5 48次治疗 ,不良反应主要为发热和寒颤 ,偶有恶心、呕吐 ,眩晕 ,皮疹 ;HFT LAK发生率为 11% ,其他约 5 % ,CD3AK平均不良反应发生率为 3.6 %。结论 :CD3McAb与小剂量IL 2活化的杀伤T细胞系可以安全地用于治疗肿瘤。     

重组人白细胞介素12的纯化与鉴定

目的探索重组人白细胞介素12(rhIL-12)的纯化与鉴定方法。方法采用Millipore超滤浓缩系统对含rhIL-12的无血清培养上清进行浓缩,用阴离子交换色谱柱,阳离子交换色谱柱和尺寸排阻色谱柱纯化出rhIL-12;并对rhIL-12的纯度、活性及氨基酸序列进行检测。结果纯化后产物经Western blot鉴定(P35、P40)为rhIL-12,毛细管电泳法测得其纯度在98%以上;生物学活性达8.0×106IU/mg,且氨基酸序列与已报道的序列相一致。结论建立了获得高纯度、高生物活性的rhIL-12的纯化与鉴定方法。     

乌苯美司对体外人白细胞介素—2生成及受体表达的促进作用

乌苯美司（乌比美克）１０￣１００μｇ／ｍｌ能促进人外周血淋巴细胞分泌ＩＬ－２；而０．０１￣０．１μｇ／ｍｌ则能增强人外周血淋巴细胞表达ＩＬ－２受体以及对ＩＬ－２发生反应的能力；在０．０１￣１００μｇ／ｍｌ范围内，乌苯美司对人血清中ＩＬ－２抑制物活性无明显影响。     

心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究

目的构建H-FABP高效原核表达载体,并实现H-FABP的高效原核表达、纯化及多克隆抗体的制备。方法通过RT-PCR扩增人H-FABP的基因序列,将目的基因克隆入质粒pET28a构建原核表达重组质粒pET28a-H-FABP。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导H-FABP的表达,采用Q Sepharose F.F.阴离子层析柱等方法建立H-FABP的纯化工艺。用免疫胶体金法和Western blot鉴定纯化后重组蛋白免疫特异性,用重组表达蛋白制备兔抗H-FABP多克隆抗体。结果成功构建人H-FABP重组蛋白原核表达载体,重组蛋白以包涵体形式表达,其相对分子质量为15kD,与预期一致。亲和层析纯化产物的SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明获得纯度>95%的目的重组蛋白。制备的抗H-FABP多克隆抗体的抗血清ELISA效价可达1∶512000。结论本研究在原核系统中成功表达了H-FABP重组蛋白,并制备多克隆抗体,为H-FABP的结构和功能研究及开发临床诊断试剂盒打下了基础。     

蛋白A亲和层析法纯化抗乙肝核心抗原单克隆抗体

建立从小鼠腹水中纯化抗乙肝核心抗原(HBcAg)单克隆抗体的一步层析法。将含抗HBcAg单克隆抗体的腹水经离心、过滤和缓冲溶液变换预处理后,采用HiTrap rProtein A FF亲和层析柱纯化,并探讨了上样缓冲液的pH值和NaCl浓度,洗脱液的种类、pH值以及体积流量对抗体纯度及回收率的影响,纯化后的单克隆抗体的生物学活性用间接ELISA法测定。结果显示,以pH7.0,20mmol/LPB+3.0mol/LNaCl为上样缓冲液,0.1mol/LGly-HCl为洗脱液,体积流量为5.0ml/min时,抗HBcAg单抗的纯度大于95%,回收率达75%,纯化后的单克隆抗体的生物学活性没有下降。本研究建立了蛋白A亲和层析法纯化抗HBcAg单克隆抗体的方法,其操作简便、快速而且效果良好。     

亲和层析介质性能分析及其在单抗纯化中的应用

对6种商品化蛋白A亲和层析介质进行了性能分析,包括动态载量、洗脱条件等,并对含有单抗药物Mab-HS006的实际料液进行了捕获分离,对宿主细胞蛋白及蛋白A的残留进行了分析。结果表明,Prosep Ultra Plus和Mabselect SuRe亲和介质的载量最高,而Protein A Sepharose CL-4B和r-Protein A Sepharose的洗脱条件最温和。一步层析捕获分离Mab-HS006单抗的结果表明,各种介质的纯度均可达90%以上,Prosep Ultra Plus的宿主细胞蛋白残留最高,Mabselect SuRe蛋白A的脱落最低。     

单克隆抗体药物进展

单克隆抗体药物特异性高、结构与性质均一稳定,其制备技术日益完善,临床应用越来越广泛,已有18种产品上市并用于人类疾病的诊断和治疗,100多种单克隆抗体药物进入临床研究阶段;单克隆抗体药物研究在生物技术药物中占有突出位置。文章综述了其国内外研究开发情况。     

单克隆抗体纯化研究进展

综述了单克隆抗体的纯化技术,讨论了各单元操作的关键问题和解决方法,并重点介绍了模拟移动床色谱、双水相萃取、膜色谱等操作简单、能连续生产、低成本的纯化技术。     

L-天门冬酰胺酶II的表达与纯化

依据发表的大肠杆菌天门冬酰胺酶II基因序列,合成引物,利用PCR技术获得天门冬酰胺酶II的结构基因,插入高效表达载体pBV220,并转化大肠杆菌菌株DH5α,获得高效表达天门冬酰胺酶II的基因工程菌株。通过对包涵体的提取与纯化,结合离子交换层析获得天门冬酰胺酶II的蛋白质纯品。检测结果表明得到的天门冬酰胺酶II具有较高的比活性,与商品化的同类产品比活相近。     

人结缔组织生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

用纯化的人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)免疫BalB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备CTGF单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),获得2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系7C7和8A11。两株细胞染色体众数分别为95条和91条;单抗亚类鉴定结果显示2株单抗均为IgG1型;间接ELISA法测定7C7和8A11腹水效价分别为:1.3×105和8.1×104;相对亲和力:7C7>8A11。CTGF单克隆抗体的制备为相关实验研究和临床诊断提供了条件。     

用于治疗葡萄膜炎的单克隆抗体

单克隆抗体在自身免疫性疾病的治疗中有着重要的作用,它通过封闭与病程有关的淋巴细胞、细胞因子和细胞因子受体起到治疗作用,简述几类以葡萄膜炎疾病相关因子为靶点的单克隆抗体及其在治疗葡萄膜炎等自身免疫疾病方面的应用。并对单克隆抗体治疗中可能的并发症进行了探讨。     

单株抗人肝脏微粒体蛋白及细胞色素P450单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗正常人肝脏微粒体(HLM)及细胞色素P450蛋白的单克隆抗体.方法:采用人肝脏微粒体蛋白作为免疫原免疫Balb/C小鼠,按常规方法融合、克隆,经间接ELISA法筛选抗体阳性杂交瘤细胞株,通过单抗亚类、Western blot对抗体进行初步鉴定.结果:成功地制备了一株抗肝微粒体蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为MAb 10C7.用鼠单抗亚类快速鉴定纸条鉴定10C7为IgG2b.Western blot分析显示,MAb 10C7可特异识别相对分子量为46kD的人肝脏微粒体蛋白.结论:MAb 10C7抗正常人肝脏微粒或细胞色素P450蛋白的特异性强,对相关蛋白质的功能研究有较好的应用前景.     

治疗性单克隆抗体类制品质量控制标准的思考

治疗性单克隆抗体制品在肿瘤、自身免疫、器官移植和感染性疾病的治疗中均取得了显著疗效,其品种和市场份额逐年显著提高。随着新的治疗性单克隆抗体制品的研发和上市,不同产品的质量控制研究,特别是新技术在质量控制中的应用被提到新的高度。由于治疗性单克隆抗体制品结构和生产的复杂性,使得质量控制的复杂程度也相应提高。本文结合治疗性单克隆抗体质量控制的工作经验和国际上的最新进展,对治疗性单克隆抗体质量控制项目设定、标准和方法进展进行论述。