石蜡切片厚度对流式细胞仪检测细胞周期分析的影响

目的 探讨石蜡包埋组织制备单细胞悬液过程中，切片厚度对流式细胞仪检测结果的影响。方法 以小型猪的肠系膜淋巴结为实验对象，将淋巴结分别制成新鲜组织单细胞悬液和石蜡组织块；石蜡组织块切割成不同厚度的薄片，再制成单细胞悬液；流式细胞仪分别检测其DNA含量；采用MultiCycle for Windows分析软件分析它们之间的差异。结果 新鲜组织的G0／G1期、S期、G2／M期细胞所占比例、G0／G1峰的CV值及Debris值与石蜡组织之间存在差异；而不同厚度石蜡切片组织间制备的样本所测结果亦不相同。结论 不同厚度石蜡切片组织制备的细胞悬液，对流式细胞仪检测细胞周期分析的结果有影响；以采用60μm厚的切片组织制备细胞悬液为最佳。     

石蜡包埋皮肤组织DNA提取方法的改进

医学研究中,有时新鲜材料取材困难,故常选择石蜡包埋组织用于回顾性研究。从石蜡包埋组织中提取基因组DNA有一定难度,尤其像皮肤这样纤维成分含量较高的组织DNA提取更加困难。传统的酚氯仿抽提DNA,其弊端是过程长、标本损失量相对     

运用Identifiler试剂盒对硅珠法提取石蜡包埋组织DNA质量的评估

目的:运用硅珠法从石蜡包埋的组织中提出DNA,Identifiler试剂盒评估DNA质量?方法:南京医科大学第一附属医院病理科2009~2011年石蜡包块49例,运用硅珠法提取石蜡包埋组织DNA,通过紫外分光光度计测定DNA纯度和Identifiler试剂盒PCR后3130型毛细管电泳仪分析提取DNA片段的完整性?结果:经紫外分光光度计测定胃癌组织D(260 nm)/D(280 nm)均值为1.84 ± 0.02,肺癌组织为1.85 ± 0.02,甲状腺癌组织为1.82 ± 0.02,3组间比较P > 0.05,因此硅珠法提取石蜡包埋组织DNA不会因组织差异而影响提取效果;Identifiler试剂盒PCR后毛细管电泳显示其提取效果,46例(93%)得出完整的16个基因座STR峰型?结论:硅珠法可应用于多种组织的DNA提取,并保证提取DNA样品的纯度和完整度?     

石蜡包埋组织中DNA甲基化特异性PCR技术

目的 以石蜡包埋组织提取的DNA为模板进行DNA甲基化特异性PCR(MSP)检测,研究其可行性.方法 35例石蜡包埋肺癌组织DNA样品制备和亚硫酸氢盐修饰后进行MSP扩增检测.结果 石蜡包埋组织MSP检出率与文献采用新鲜组织标本报道一致.结论 MSP通过选择合适的实验条件,可适用于石蜡包埋组织DNA甲基化分析.     

石蜡包埋组织的p16基因甲基化特异性PCR技术

目的：以石蜡包埋组织为材料进行DNA甲基化特异性PCR(MSP)检测，研究其可行性。方法：40例食管组织以中性福尔马林固定、包埋、脱蜡、DNA样品制备和亚硫酸盐修饰后进行PCR测定。2例MSP阳性的冰冻甲状腺组织以70％酒精、丙酮和中性福尔马林分别固定及石蜡包埋后，非甲基化引物PCR扩增，比较不同固定剂的MSP效果。结果l石蜡包埋食管组织MSP检出率与文献报道的冰冻组织MSP检出率相同，三种常用方法固定的甲状腺组织均能获得理想的MSP效果。结论：MSP通过选择合适的实验条件，可应用于石蜡包埋组织。     

石蜡包埋组织的p16基因甲基化特异性PCR技术

目的以石蜡包埋组织为材料进行DNA甲基化特异性PCR(MSP)检测,研究其可行性.方法40例食管组织以中性福尔马林固定、包埋、脱蜡、DNA样品制备和亚硫酸盐修饰后进行PCR测定.2例MSP阳性的冰冻甲状腺组织以70%酒精、丙酮和中性福尔马林分别固定及石蜡包埋后,非甲基化引物PCR扩增,比较不同固定剂的MSP效果.结果石蜡包埋食管组织MSP检出率与文献报道的冰冻组织MSP检出率相同,三种常用方法固定的甲状腺组织均能获得理想的MSP效果.结论MSP通过选择合适的实验条件,可应用于石蜡包埋组织.     

石蜡组织存放时间对提取DNA质量的影响

目的探讨储存时间对石蜡包埋组织提取DNA质量的影响。方法采用试剂盒方法,分别提取10例保存1~3a的石蜡组织样品DNA,NanoDrop-2000分光光度仪检测DNA浓度和OD260/OD280比值,质量分数2%琼脂糖进行电泳检测,采用单因素方差分析比较DNA质量。结果琼脂糖凝胶电泳显示:石蜡包埋组织提取DNA降解明显。储存1~3a的石蜡包埋组织提取DNA的浓度有明显差异(P=0.04),储存时间越长,DNA浓度越低,但提取DNA的纯度无明显差异(P>0.05)。结论石蜡包埋组织储存时间越长,提取DNA浓度越低,但纯度无明显差异。     

一种石蜡包埋组织DNA抽提的方法

DNA抽提是分子生物学研究的基础工作，而从石蜡包埋组织中提取基因组DNA有一定的难度，传统的二甲苯脱蜡及苯酚氯仿抽提DNA，其弊端是过程长、得到的DNA量较少，如何避免DNA分子损失，保持DNA相对完整和纯度值得探讨。本实验室经过一段时间摸索，建立了一种简便有效的石蜡包埋组织DNA的抽提方法，具体操作如下。     

广泛标记系统在石蜡包埋膀胱癌组织比较基因组杂交中的应用

目的 探讨广泛标记系统（ULS）在石蜡包埋组织比较基因组杂交（CGH）中的应用价值,研究膀胱癌石蜡包埋组织中染色体基因组非平衡性情况.方法 对比实验：正常膀胱黏膜组织基因组DNA,用DNA酶进行酶切至适当大小的片段作为探针,用广泛标记系统直接标记DNA探针,并按1：1的量与经缺口平移标记的同一个组织的DNA探针进行CGH.提取膀胱移行细胞癌石蜡包埋组织中基因组DNA,经测定浓度、纯度,并经琼脂糖电泳筛选出20例适合于CGH的标本.同法进行ULS标记,并与缺口平移法标记的正常参照DNA进行CGH.结果 对比实验中,同一个正常膀胱黏膜组织应用2种标记方法进行CGH后,荧光强度相同,不需要调整探针的量.在所有膀胱癌组织中均检测到基因组DNA的畸变,其中发生频率较高的染色体增益区段或位点位于1q、3q、5p、8q、17q;缺失区段或位点位于8p、9q、11q、11p、17p.结论 膀胱癌中存在染色体基因组的不平衡.应用石蜡包埋的组织进行间接法CGH时,ULS标记系统是一种非常有价值的标记方法.这为充分利用石蜡档案进行CGH的研究提供了良好的方法.     

膀胱癌的克隆起源分析

目的探究多灶性、复发性、表浅性膀胱移行细胞癌的克隆起源。方法收集经手术切除或膀胱镜活检并经病理证实的20例患者的多灶性膀胱癌、原发癌及其相应的复发癌，病理分级Gl或G2的石蜡组织标本66块。所有标本均以10％福尔马林液固定后石蜡包埋。采用免疫组织化学染色S-P法检测p16、Rb、cyclinD1基因表达。采用二项式分布对结果进行统计学分析。结果16例病人多发、原发和复发膀胱肿瘤p16、Rb、cyclinD1表达完全一致；4例表达不一致。采用二项式分布计算分析认为此16例膀胱移行细胞癌均为单克隆起源，其余4例为多克隆起源。结论多灶性、复发性、表浅性膀胱癌可为单克隆起源，也可为多克隆起源，以单克隆起源为主。     

大肠癌细胞DNA含量与病理形态学及预后的关系

本文应用流式细胞仪检测了181例常规福尔马林固定石蜡包埋的大肠癌组织标本的肿瘤细胞DNA含量。结果表明:大肠癌细胞DNA含量与组织类型及分化程度有关。低分化腺癌、粘液腺癌和管状腺癌异倍体比例明显高于乳头状腺癌;异倍体肿瘤随Dukes分期增高而增加;Cox回归模型分析表明:肿瘤倍性、Dukes分期和肿瘸大小明显影响预后。结果提示大肠癌细胞DNA含量反映了肿瘤的恶性程度,明显影响了患者的预后,可以作为判断患者预后的指标之一。     

石蜡包埋表皮组织中β-连环蛋白基因扩增技术的建立

目的：建立从石蜡包埋表皮组织中提取DNA，进行β-连环蛋白基因3号外显子聚合酶链反应(PCR)扩增的方法。方法：从14例不同重量、不同年代石蜡包埋皮肤鲍温氏病病变组织中提取DNA，再进行β-连环蛋白基因3号外显子PCR扩增。结果：5mg组织提取DNA的PCR扩增未获成功，而用10mg和20mg组织提取的DNA可成功扩增；已包埋10年以上的5例标本仅2例成功扩增，而9例10年以内的标本全部成功。结论：10mg及10mg以上且10年以内的石蜡包埋表皮组织可用于目标基因PCR扩增。     

喉癌组织P27的表达及DNA含量测定

目的：探讨抑癌基因P27的表达和细胞周期DNA含量测定与喉癌的关系。方法：用免疫组织化学S—P法和流式细胞计数法分别对25例喉癌组织、癌旁组织及21例声带息肉组织进行P27和癌前DNA含量检测。结果：P27表达在喉癌和癌旁组织、声带息肉之间有显著性差异，P27蛋白低表达与颈淋巴结转移、患者预后有关(P＜0.05)喉癌的DI值高于正常对照组(P＜0．01)；喉癌组织的S期细胞DNA含量明显高于其它组(P＜0.05)。结论：P27是判断喉癌预后的有用指标，S期细胞DNA含量与癌肿的发展有关。     

蕈样肉芽肿皮损中DNA含量及细胞增殖活性的检测

目的:研究蕈样肉芽肿(MF)皮损中DNA含量、细胞周期分布与分期的关系,以探讨DNA倍体及细胞增殖活性在该病早期诊断、治疗及预后判断方面的作用。方法:应用流式细胞仪检测38例蕈样肉芽肿皮肤损害石蜡包埋组织中的DNA含量及细胞周期分布。结果:38例蕈样肉芽肿皮损石蜡包埋组织中异倍体率、S期细胞比率(SPF)及细胞增殖指数(PI)随病情的进展而增高。红斑期与斑块期、斑块期与肿瘤期的SPF值及红斑期与斑块期PI值之间有统计学差异(P<0.001);斑块期与肿瘤期PI值之间无统计学差异(P>0.05)。结论;蕈样肉芽肿皮损组织中的DNA倍体及细胞增殖活性有可能成为该病临床诊断及预后判断的重要因素。     

简易提取石蜡包埋组织DNA

DNA的提取是 PCR成功与否的关键 ,而 DNA提取最好是用新鲜标本 ,但对回顾性研究只能从石蜡包埋组织中提取。传统的石蜡包埋组织 DNA提取是用二甲苯脱蜡 ,酚 -氯仿反复多次的抽提 ,这样使得 DNA不断破坏 ,大量丢失 ,操作非常繁琐 ,费时费试剂 ,不适宜处理大量标本 ,且试剂对人体有毒害作用 ,而得到的 PCR反应的结果阳性率低 ,污染严重。为此 ,本室将传统的石蜡包埋组织 DNA提取法进行改良 ,介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　本室 1996～ 2 0 0 0年存档的手术切除的甲状腺癌标本 41例。水浴恒温振摇器 (SHA- C型 ,深圳天南海北实…     

食管癌组织角蛋白表达的免疫组化研究

角蛋白是广泛存在于多种上皮及肿瘤细胞内的一种中间丝，它对肿瘤的起源，分化程度的鉴别诊断具有重要价值。我们对56例食管石蜡包埋组织采用免疫组化法进行了角蛋白表达的研究，旨在了解食管癌不同病期、分化程度、淋巴结转移和病变浸润深度与角蛋白表达的关系及对临床预后的判断价值。     

石蜡包埋表皮组织中β-连环蛋白基因扩增技术的建立

目的∶建立从石蜡包埋表皮组织中提取DNA ,进行 β 连环蛋白基因 3号外显子聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。方法∶从 14例不同重量、不同年代石蜡包埋皮肤鲍温氏病病变组织中提取DNA ,再进行 β 连环蛋白基因 3号外显子PCR扩增。结果∶5mg组织提取DNA的PCR扩增未获成功 ,而用 10mg和 2 0mg组织提取的DNA可成功扩增 ;已包埋 10年以上的 5例标本仅 2例成功扩增 ,而 9例 10年以内的标本全部成功。结论 :10mg及 10mg以上且 10年以内的石蜡包埋表皮组织可用于目标基因PCR扩增。     

蕈样肉芽肿DNA含量流式细胞术测定及其临床意义

目的 探讨蕈样肉芽肿（MF）组织的DNA含量及细胞增殖水平与临床特征及预后的关系。方法 应用流式细胞术测定62例石蜡包埋的MF组织中DNA含量及细胞增殖水平。结果 红斑期、斑块期、肿瘤期MF患者,其DNA异倍体率及DNA指数（DI）随病情的延长而增高,红斑期与肿瘤期之间差异有显著性（P＜0．05）;同样,肿瘤期患者组织中S期细胞比率（SPF）及增殖指数（PI）均明显高于红斑期患者（P＜0．05）。结论 DNA异倍体及DI、SPF、PI值的高低与蕈样肉芽肿分期有关,而且它们是影响预后的重要因素。     

从福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA的研究

从福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA可望解决分子生物学研究中难以得到大量标本的难题。本文对几种不成熟的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法进行了比较,建立了一种简单、有效的方法;并对石蜡包埋组织中的DNA进行了ras基因点突变的分析。     

流式细胞仪与鼻咽癌石蜡包埋组织DNA含量分析

应用流式细胞仪对６３全石蜡包埋组织的鼻咽癌ＤＮＡ含量进行分析，结果显示：自角化型鳞癌和梭形细胞癌，非角化型鳞癌至泡状核细胞癌，ＤＮＡ指数和非整倍体率逐渐啬。结果表明泡状核细胞癌分化最低，梭形细胞癌介于角化型和非角化型鳞癌之间，并初步探讨ＤＮＡ与临床预后的联系。本文还简单介绍流式细胞仪应用于石蜡包埋组织的一些分析细胞技术。