恒河猴经瞳孔温热疗法与热休克蛋白相关研究

目的探讨恒河猴经瞳孔温热疗法（transpupillary thermotherapy，TTT）治疗后视网膜和脉络膜组织热休克蛋白70（heat shock protein 70，HSPT0）表达。方法利用恒河猴做动物模型。于1TIrr治疗后不同时间点（1h、1d、1周、2周、1月、4月）摘除双眼固定。应用免疫组化技术，分析TTT治疗对猴眼视网膜和脉络膜组织HSP70的影响。结果TTT治疗后，于1d起，在强反应光斑边缘视网膜和脉络膜有HSP70的表达，4个月时仍有弱表达。弱反应光斑1d时，在视网膜全层及脉络膜均有HSP70表达，4个月时消失。同时,TTT治疗可以引起视网膜不同程度组织病理学的损害。结论TTT可以引起视网膜、脉络膜组织病理学损害。局部温度的升高会诱导视网膜、脉络膜内源性HSP70的产生，并且这种表达在激光治疗后1～4个月的猴眼中仍可以存在。     

实验性脉络膜新生血管经瞳孔温热疗法后热休克蛋白70的表达及意义

目的 探讨热休克蛋白70（HSP70）在经瞳孔温热疗法（TTT）治疗脉络膜新生血管（CNV）中的作用及机制.方法 通过氪红激光眼底光凝诱导C57BL/6J小鼠30只（30只眼）产生CNV,6 d后,观察眼底荧光血管造影（FFA）,给予阈值上、阈值、阈值下TTT治疗及不治疗对照.正常C57BL/6J小鼠16只（16只眼）,给予相应阈值上、阈值、阈值下TTT治疗.TTT治疗后7 d,观察FFA,摘除眼球,做病理学检查和HSP70免疫组织化学检测.结果 C57BL/6J小鼠CNV进行TTT治疗后7 d,与未治疗对照组相比,阈值下和阈值TTT组CNV复合体明显变薄 阈值上TTT组CNV复合体未见明显变薄,新生血管腔无明显减少.正常眼和未经TTT治疗的CNV眼,HSP70阴性.实验性CNV和正常视网膜经TTT治疗后,HSP70免疫染色阳性可见于视网膜视锥视杆细胞层、外丛状层,染色范围取决于TTT能量大小.结论 阈值下TTT治疗CNV,眼底镜下视网膜尚无明显变化时,HSP70在视网膜已有表达.HSP70在TTT抑制CNV的形成中起重要作用.TTT的能量、热休克蛋白的表达与CNV减少,三者之间的关系有待量化以指导临床.     

经瞳孔温热疗法对大鼠视神经钳夹视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨经瞳孔温热疗法（TTT）阈下反应对BN大鼠视神经钳夹后视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法采用阈下TTT对BN大鼠视网膜进行照射后3d,通过逆行标记RGCs的方法,对TTT＋视神经钳夹组（A组）、TTT＋假手术组（B组）、单纯视神经钳夹组（C组）和空白对照组（D组）在视神经钳夹后1、2、4周进行RGCs计数并比较;检测视网膜TTT阈下反应的热休克蛋白70（HSP70）表达;观察TTT阈下反应对视网膜的影响。结果视神经钳夹后4周,A组RGCs数显著高于C组（P=0.006）,而1周和2周时2组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;各时间点B组和D组的RGCs数差异无统计学意义（P〉0.05）。视网膜经阈下TTT干预后,HSP70表达高于对照眼。阈下TTT照射能引起视网膜组织形态上的改变。结论阈下TTT可显著提高视神经钳夹4周后RGCs的存活数量;其保护机制可能与诱导视网膜内源性HSP70表达、启动内源性保护机制有关。     

热休克蛋白70在TTT小鼠视网膜中的表达

目的　研究热休克蛋白 70 (heatshockprotein 70 ,HSP 70 )在经瞳孔温热疗法(transpupillarythermotherapy ,TTT)小鼠视网膜中的表达。方法　首先对10只C57BL/ 6J小鼠进行TTT照射,激光功率5 0mW ,光斑直径1.2mm ,曝光4 0s,然后分别于激光后2h ,1d、3d ,1周、2周取材,采用免疫组化方法检测视网膜内核层HSP 70的表达情况,计算其阳性率及强阳性率。结果　HSP 70蛋白存在于正常C57BL/ 6J小鼠除视杆、锥细胞外节的视网膜各层细胞,TTT后小鼠视网膜内核层细胞HSP 70表达有一动态变化,2h时阳性表达细胞(阳性率和强阳性率分别为6 6 .85 %±4 .83% ,4 .91%±3.19% )即较正常视网膜明显增加,1d时达到高峰(78.12 %±8.0 9% ,8.15 %±3.4 5 % ) ,然后逐步下降,2周时(3.74 %±1.73% ,0 .5 5 %±0 .2 7% )已基本接近正常水平(2 .91%±0 73% ,0 )。结论　TTT引起的视网膜温度轻微升高可以诱导小鼠视网膜内核层细胞HSP 70的过度表达,从而提高其耐热能力,发挥内源性保护作用,减小TTT靶组织邻近部位的损伤     

经瞳孔温热疗法对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的研究低阈值经瞳孔温热疗法（TTT）对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞（RGC）是否具有保护作用。设计实验研究。研究对象BN大鼠。方法采用810nm二极管激光机对10只大鼠视网膜进行热刺激，照射光斑1．2mm，能量50mW，照射时间20s，干预后3d光镜下观察视网膜形态结构的改变，免疫组化方法检测HSP70、HSP27在视网膜组织表达。采用上述激光参数，照射视网膜后3d，制作急性高眼压模型（TTT＋I/R组，n=10），采用TUNEL法检测RGC层细胞凋亡数量，及计数高倍镜下RGC层细胞数，与未干预的急性高眼压模型组（I/R组，n=10）、单纯TTT干预组（TTT组）及正常对照组（n=6）进行比较。主要指标免疫组化染色RGC细胞数及RGC层细胞凋亡数。结果采用低阈值TTT可诱导BN大鼠视网膜神经节细胞HSP70及HSP27表达，且光镜下未出现明显视网膜脉络膜形态的改变。TTT＋I／R组RGC层细胞凋亡数量明显少于I／R组（P=0．048），且前者RGC层细胞数量明显多于后者（辟0．016）；TTT组与正常对照组比较RGC层细胞凋亡数量无显著性差异（P=0．882），但RGC层细胞数明显少于正常对照组（P=0．001）。结论低阈值TTT可诱导BN大鼠视网膜HSP70、HSP27表达，并在急性高眼压损伤下对大鼠RGC凋亡具有抑制作用。（眼科，2007,16：48—51）     

经瞳孔温热疗法的现状

经瞳孔温热疗法(transpupillary thermotherapy, TTT)是采用810 nm波长二极管激光通过散大的瞳孔对眼底病灶进行加热的治疗方法，在临床上应用不过才几年时间，却在脉络膜黑色素瘤、脉络膜血管瘤、视网膜母细胞瘤、老年性黄斑变性的治疗中取得了较好的疗效，并具有非侵入性和较少并发症的优点，但还有待进一步的研究并验证和发展。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 247-249)     

经瞳孔温热疗法治疗眼底病

经瞳孔温热疗法治疗眼底病作为一种新的治疗方法,正日益受到临床医生的重视。本就其发展史、原理、适应证、方法、并发症和亟待解决的问题进行较全面的综述。     

经瞳孔温热疗法在眼科应用的研究进展

经瞳孔温热疗法因其效率高。损伤小、已被应用于脉络膜黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜血管以及脉络膜新生血管的治疗,初步的临床研究结果令人鼓舞,但要对其疗产进行全面评价。仍有待于进一步的大样本及长期随访研究。     

经瞳孔温热疗法治疗视网膜大动脉瘤的疗效观察

目的观察经瞳孔温热疗法(TTT)治疗视网膜大动脉瘤的疗效。方法采用经瞳孔温热疗法对视网膜大动脉瘤24例(24只眼)进行治疗。根据荧光素眼底血管造影(FFA)显示的瘤体大小及荧光渗漏情况,采用810 nm激光照射,激光功率、光斑直径和曝光时间为500～1000 mW、800～1200μm和60 s。结果经1年随访,视力增进2行以上者9只眼。视力提高1行者8例,视力不变者5例,视力下降1～2行者2例。3个月后FFA显示:24例瘤体完全萎缩,无荧光素渗漏。结论 TTT治疗视网膜大动脉瘤安全、有效。     

经瞳孔温热疗法在眼科的应用

经瞳孔温热疗法 (transpupillary thermotherapy,TTT)是近年来国外应用于眼科治疗的一种新方法 ,主要应用于脉络膜黑色素瘤 (choroidal melanoma)、视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma,Rb)、脉络膜血管瘤(circumscribed choroidal hemangiomas)、视网膜血管瘤 (von- Hippel- L indau disease)以及年龄相关性黄斑变性 (age- related macular degeneration,AMD)引起的脉络膜新生血管 (choroidal neovascularizationCNV)等疾病 ,在国内也已受到重视并开始应用。本文就此作一综述。一、经瞳孔温热疗法1.原理 :自 1860年 ,温热疗法作为一种抗肿…     

Serum melatonin levels following enucleation and transpupillary thermotherapy in patients with choroidal melanoma

Purpose : To study serum melatonin levels in patients with choroidal melanoma preoperatively and following enucleation and transpupillary thermotherapy. Methods: Forty patients with preoperative choroidal melanoma were included in the study. Of these, 15 patients underwent enucleation (group 1) and 25 patients received transpupillary thermotherapy (group 2). A further 20 patients without melanoma acted as age‐matched controls. Serum melatonin levels were determined 1 day preoperatively, and at the first and sixth months postoperatively using ELISA. Results: Preoperative serum melatonin levels were highest in group 2 followed by group 1, but this was not statistically significant compared to controls. Postoperatively, a constant decrease of serum melatonin was observed in both groups after the first month, which reached statistical significance at the sixth month (P = 0.003). Also, a significant regression in tumour thickness was documented in group 2 (P = 0.003). Three patients in group 1 developed hepatic metastases. Conclusions: Patients with choroidal melanomas had higher levels of serum melatonin compared to individuals without tumours. Smaller tumours were associated with more elevated melatonin levels compared to larger tumours. Serum melatonin levels fell considerably following enucleation and transpupillary thermotherapy.     

经瞳孔温热疗法后视网膜和脉络膜的细胞凋亡研究

目的探讨经瞳孔温热疗法（TTT）对视网膜、脉络膜层细胞凋亡表达的影响。方法利用恒河猴做动物模型，于治疗后不同时间点摘除双眼。应用组织学及TUNNEL检测技术，研究TTT治疗与细胞凋亡的相互关系，及对视网膜、脉络膜的组织病理学影响。结果正常猴眼视网膜及脉络膜均未见细胞凋亡发生。TTT治疗后，可见光斑中央细胞坏死、周边细胞凋亡发生。1h至4周，均可见凋亡阳性细胞，4个月时，仍可见少量凋亡细胞存在。同时，TTT治疗可引起视网膜不同程度的组织病理学损害。结论TTT可引起视网膜组织病理学损害。局部温度的升高会诱导视网膜脉络膜细胞凋亡的产生，减少坏死和炎症的程度。     

兔视网膜脉络膜经瞳孔温热疗法生物学效应初探

目的：探讨经瞳孔温热疗法（TTT）对灰兔视网膜脉络膜的生物学效应,为临床合理应用提供参考依据.方法：使用半导体激光器对8只灰兔视网膜进行照射,光斑直径1.2mm,曝光时间1min,激光功率分别为150,200,250,300mW,分别于激光后1h及1mo行光、电镜观察.结果：150mW激光照射时,仅使视网膜色素上皮（RPE）轻度变化;200mW时除RPE变化外,脉络膜细胞变性,毛细血管内红细胞淤滞、变形;随能量加大（250mW）,RPE受损加重,外层视网膜也同时受累,晚期视细胞层及外颗粒层消失;当激光能量达到300mW时,全层视网膜均受到损伤,并可引起脉络膜出血,甚至出现新生血管内皮细胞.结论：TTT对正常灰兔视网膜脉络膜的效应与激光能量成正比,RPE及邻近脉络膜是TTT的主要作用部位.     

经瞳孔温热疗法治疗渗出型相关性黄斑变性的临床观察

目的 观察经瞳孔温热疗法(TTT)对渗出型老年性黄斑变性(AMD)的临床效果。方法 对19例荧光素眼底血管造影(FFA)和吲哚菁绿血管造影(ICGA)检查确诊为AMD的患者的22只患眼进行TTT治疗。采用810mm半导体激光，光斑0．5～3．0mm，能量200～400mW，照射时间60s。对三面镜眼底检查、FFA、ICGA图像所显示的脉络膜新生血管(CNV)进行照射，照射区未出现颜色变化或旱淡灰白色。对比分析患者治疗前后视力、眼底及OCT检查。结果 22患眼治疗后1～10个月，平均随访观察时间4．8个月，视力不变者13例，占59．1％；进步者7例，占31．8％；下降者2例，占9．1％。20眼OCT复查者中，黄斑水肿不变者11例，占55％；好转者7例，占35％；恶化者2例，占10％。再次行TTT治疗者5眼，占接受TTT治疗者的22．7％。治疗随访期间无明显治疗副作用。结论 TTT治疗能使大部分渗出性AMD患眼视力稳定或提高，使用安全，值得临床推广应用。     

HSP60在人视网膜母细胞瘤中表达的研究

目的 研究热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)在未接受治疗的视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)患者的视网膜内原发肿瘤细胞和脉络膜、视神经等侵袭部位的肿瘤细胞中的表达,初步分析HSP60在眼球不同部位Rb细胞的表达特点及其可能与Rb细胞凋亡的关系.方法 收集22例(22眼)未接受治疗的Rb患者所摘除眼球的石蜡切片.用免疫组织化学方法测定HSP60、HSP10和Caspase 3在视网膜内和脉络膜、视神经等侵袭部位的表达.结果 22例患者手术后病理检查眼内均见肿瘤细胞.侵袭部位见肿瘤细胞的患者21例,其中肿瘤单独侵犯视神经7例(33.3％),肿瘤单独侵犯脉络膜5例(23.8％),肿瘤同时侵犯视神经和脉络膜9例(42.9％).脉络膜与视神经部位肿瘤细胞HSP60、HSP10的表达均比眼内肿瘤细胞高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).脉络膜与视神经部位肿瘤细胞Caspase 3的表达比眼内肿瘤细胞低,差异均有统计学意义(均为P=0.000).结论 Rb肿瘤细胞在从视网膜内向外侵袭的过程中,可能通过升高HSP60、降低Caspase 3来促进侵袭部位肿瘤细胞的存活.但是HSP60在侵袭部位的升高是肿瘤细胞向外侵袭的原因还是结果,以及是否会进一步增强肿瘤细胞向远处转移等还需进一步研究.     

兔眼经瞳孔温热疗法阈值能量治疗的组织病理反应和细胞凋亡

目的:观察兔眼视网膜经瞳孔温热疗法(transpupillary thermotherapy,TTT)阈值能量照射后组织病理反应和细胞凋亡情况.方法:健康青紫兰兔20只,采用阈值能量对实验眼采用1.2mm光斑的810nm激光照射60s.采用眼底镜和眼底照相对光斑进行形态学研究,采用光镜和电镜的方法研究光斑的组织病理和超微结构的改变,采用TUNEL法、荧光素标记Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色流式细胞测定法观察视网膜细胞的凋亡.结果:TTT后1d可见视网膜轻度灰白色水肿,后视网膜逐渐出现色素沉着.组织病理学切片显示神经节细胞无显著性破坏.TUNEL染色可见视网膜全层均有细胞凋亡的发生,以内颗粒层为主,流式细胞双染测定显示以凋亡为主.结论:阈能级TTT照射未引起神经节细胞严重损伤,较安全,其作用机制以细胞凋亡为主.