单细胞电泳法检测肿瘤患者化疗后淋巴细胞DNA损伤

应用单细胞电泳 (SCGE)检测肿瘤患者环磷酰胺化疗后外周血T淋巴细胞DNA损伤。在标准SCGE条件下应用彗星图象分析系统定量分析人T淋巴细胞DNA的损伤程度。彗星图象分析研究结果显示 ,肿瘤患者外周血T淋巴细胞DNA损伤明显强于正常对照组 ,肿瘤患者外周血T淋巴细胞拖尾动量为 10 42± 1 98,正常人群为 1 2 6± 0 77;两者差异极显著 (P <0 .0 1)。肿瘤患者化疗后T淋巴细胞的拖尾长度为 3 3 69± 7 56μm ,DNA损伤的百分比为 3 1 5± 5 46% ;正常人群T淋巴细胞的拖尾长度和DNA损伤的百分比分别为 16 2± 1 5μm和7 46± 1 15% ;两组数据相比差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :单细胞电泳可快速灵敏地检测细胞DNA损伤 ,能用于肿瘤化疗患者的流行病学观察。对于指导临床用药和预后也有指导意义     

单细胞凝胶电泳检测非小细胞肺癌患者淋巴细胞DNA损伤

摘要：目的：探讨单细胞凝胶电泳（SCGE）检测淋巴细胞DNA双链断裂（DSBs）水平在非小细胞肺癌（NSCLC）诊疗中的应用价值。 方法：收集132例NSCLC患者、39例肺部良性疾病以及42例体检健康者血液标本,分离外周血淋巴细胞,用SCGE检测DNA DSBs情况,并分析尾部DNA百分含量（%Tail DNA）及Olive尾距（OTM）与NSCLC患者病理类型、临床分期和疗效间的关系。 结果：SCGE结果表明,NSCLC患者%Tail DNA和OTM均高于肺部良性病变组（t=2.637、2.460,P<0.05）及健康对照组（t=8.832、9.682, P<0.05）;NSCLC组%Tail DNA和OTM与患者病理类型及临床分期之间无关（P均>0.05）;NSCLC治疗有效患者治疗后淋巴细胞DSBs水平显著低于治疗前（P<0.05）。 结论：SCGE分析淋巴细胞DNA DSBs可能成为NSCLC辅助诊断和疗效评价的新指标。     

吡哆胺修复糖基化终产物诱导的脾淋巴细胞DNA损伤的实验研究

目的　观察吡哆胺 (PM)对糖基化终产物 (AGEs)诱导的脾淋巴细胞DNA损伤的修复情况。方法　采用单细胞凝胶电泳 (SCGE)技术 ,根据AGEs BSA浓度的不同所致离体小鼠脾淋巴细胞的DNA损伤进行研究 ,并对PM修复AGEs BSA诱导的DNA损伤不同时点的修复能力作了分析。结果　① 5 0、10 0 μg/mLAGEs BSA组脾淋巴细胞DNA迁移率与阴性对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。 2 0 0、4 0 0、80 0 μg/mLAGEs BSA组脾淋巴细胞DNA迁移率明显高于阴性对照组 (P <0 0 1) ,且两者呈正相关 (r=0 95 6 3)。②以能引起明显DNA断裂剂量 (2 0 0、4 0 0、80 0 μg/mL)的AGEs BSA作用小鼠脾淋巴细胞 ,PM最佳修复时点为 2h。结论　AGEs可引起离体脾淋巴细胞DNA链损伤 ,并存在一定的剂量 反应关系 ;PM对此有修复作用     

微量全血单细胞凝胶电泳评定过度训练大鼠淋巴细胞DNA损伤

背景：微量全血单细胞凝胶电泳技术是检测有核细胞DNA损伤与修复的一种方法，具有敏感性高、取材方便、细胞制备简单、不需体外活化、费用低、实验周期短等优点。目的：采用微量令血单细胞凝胶电泳技术评定过度训练对大鼠血液淋巴细胞DNA损伤的情况。设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照实验，于2004-08／09在沈阳体育学院研究生实验室完成。材料：雄性Wistar大鼠29只，按随机数字表法分为2组，正常对照组12只、运动组17只。方法：正常对照组大鼠不参加运动。运动组大鼠在玻璃池中进行游泳训练。采用6周递增负荷游泳训练建立过度训练动物模型，训练结束后24h，避光眼眶取血。主要观察指标：采用微量全血单细胞凝胶电泳法柃测单个血液淋巴细胞的DNA尾长、尾矩、椭圆矩，以反映DNA的损伤情况。结果：荧光显微镜下运动组大鼠淋巴细胞的DNA断裂比正常对照组明显，断片离开头部向阳极方向迁移，形成一个像彗星样的拖尾。运动组反映大鼠血液淋巴细胞DNA损伤的指标尾长、尾矩和椭圆矩显著高于正常对照组，差异有显著性意义（P〈0．01）。结论：6周递增负荷过度训练后大鼠血液淋巴细胞存在DNA损伤。     

哮喘患者外周血淋巴细胞DNA的损伤及意义

目的 探讨哮喘患者外周血淋巴细胞DNA的损伤及意义.方法 选取32例哮喘患者和30例健康时照者,其中哮喘急性发作期15例,缓解期17例,采用胞质分裂阻断微核(CBMN)法观察外周血淋巴细胞的DNA损伤.结果 哮喘患者组的微核率、核芽率、染色体桥率分别为(26.34±6.79)‰、(2.99±1.66)‰、(7.68±5.26)‰;健康对照组的微核率、核芽率、染色体桥率分别为(13.16±3.81)‰、(1.72±0.64)‰,(4.59±2.22)‰;微核率、核芽率、染色体桥率两组比较差异有统计学意义(P<0.01或<0.05).哮喘急性发作期和缓解期患者微核率比较差异无统计学意义(P>0.05).哮喘患者微核率与病程有相关性(rs=0.424,P<0.05).结论 哮喘患者外周血淋巴细胞存在DNA的损伤,可能与哮喘的气道慢性炎症及氧化应激相关.     

新生牛肝再生刺激素对HL-60细胞DNA的损伤作用

本研究旨在观察分子量小于10kD的肝再生刺激素(hepatocyte growth-promoting substance，HGS)在体外液体培养中对HL-60细胞增殖的影响，并探讨其作用机制。实验分为3组：22．5μg/ml组、40μg/ml组和对照组，用胎盘蓝染色法计数HL-60细胞生长曲线，观察HGS对HL-60细胞增殖的影响；应用单细胞凝胶电泳法比较不同剂量HGS引起HL-60细胞的DNA损伤情况；采用基因组DNA体外电泳技术，观察HL-60细胞在HGS作用后凋亡的DNA片段断裂情况。结果表明，22．5μg/ml和40μg/ml 2个组在2天培养后均观察到HL-60细胞的增殖受到抑制；基因组DNA体外电泳结果证明，在上述2个剂量的组内，出现了明显的DNA梯形条带，并于培养第2天有HL-60细胞凋亡；单细胞凝胶电泳(SEGE)显示，HL-60细胞在加入HGS后出现有慧尾的细胞数量增多。结论：HGS能够抑制白血病细胞系HL-60细胞的增殖，并通过诱导凋亡导致DNA损伤来杀伤对HL-60细胞。     

超声增强顺铂对耐药性卵巢癌细胞的DNA损伤效应

目的探讨超声能否增强顺铂对耐药性卵巢癌细胞的DNA损伤效应。方法人卵巢癌顺铂耐药细胞COC1/DDP以顺铂处理,同时在给予药物后加以超声辐照。以单细胞凝胶电泳（彗星实验）检测DNA损伤。结果对照组、DDP组、US组及DDP＋US组的慧星长度（像素）分别为26.9&#177;2.86、48.4&#177;14.29、31.3&#177;3.42、71.7&#177;8.90。DDP组、DDP＋US组对细胞DNA的损伤均较对照组高（P〈0.05、P〈0.05）。结论增强顺铂对DNA的损伤是超声逆转卵巢癌细胞顺铂耐药性的机制     

脑梗死患者外周血淋巴细胞DNA损伤与凋亡相关基因的研究

目的 通过检测外周血淋巴细胞DNA损伤与凋亡相关基因的研究,判断脑梗死患者DNA损伤水平与凋亡的关系,为防治缺血性脑血管病提供实验依据.方法 采用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,再行单细胞琼脂糖凝胶电泳.应用流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡.应用实时荧光定量聚合酶链反应法,检测Bcl-2 mRNA和BaxmRNA表达.结果 脑梗死组和对照组DNA损伤积分分别为(65.8±16.5)分vs(24.6±8.9)分;凋亡细胞率分别为(14.3±4.5)%vs(6.9±1.5)%,坏死细胞率分别为(6.1±2.3)%vs(2.1±0.8)%;Bcl-2 mRNA表达分别为0.50±0.03 vs 2.50±0.30,Bax mRNA表达分别为1.53±0.14 vs 0.68±0.09.3项检测结果差异均有统计学意义(P<0.01).结论 脑梗死时外周血淋巴细胞DNA损伤和凋亡相关基因表达均显著增高,提示与该病的发生发展有关.     

肿瘤放射治疗的副损伤与防治（五）

８　医源性放射线致癌医源性放射线致癌由诊断和治疗两方面引起,如Ｘ线胸透诱发乳腺癌,放射线治疗良、恶性病变时,在照射范围内正常组织发生新的癌瘤。临床上常见的有头颅高剂量照射后诱发脑膜瘤、肉瘤（特别是纤维肉瘤）、神经胶质瘤,颈部照射诱发甲状腺癌、咽癌、颈段食管癌,妇科良性疾病盆腔放射治疗诱发子宫体恶性肿瘤,霍奇金病放疗后诱发白血病等。８．１　发病机理　①自由基与细胞核酸的相互作用。②放射线的直接与间接作用,使ＤＮＡ合成过程发生紊乱,并在修复过程中错构,引起染色体崎变、基因组突变,异常蛋白质的合成,引…     

10—羧基喜树碱对人膀胱癌细胞染色质DNA的断裂作用的研究

目：探讨10－羟基喜树碱（10－Hydroxyl camptothecine,10-HCPT)对T24人膀胱癌细胞染色质DNA的断裂作用。方法：采用快速，灵敏的检测细胞DNA损伤的单细胞凝胶电泳（Singe cell gel electrophoresis,SCGE)技术，观察不同浓度10－HCPT（0.01-0.1mg/ml)分别作用于T24人膀胱癌细胞不同时间（24h和48h)后细胞DNA的损伤情况，以“彗星样”淋巴细胞出现率（计数一定量细胞其中彗星样细胞所占的比例），总彗星长度（“彗星”电泳方向上的最大长度，即尾长）和尾距（尾部DNA占总DNA的百分比与头尾部中心间距的乘积）来评价淋巴细胞DNA的损伤程度。结果：10－HCPT能剂量依赖性地导致T24人膀胱癌细胞DNA的明显断裂损伤，能使“彗星样”膀胱癌细胞出现率，总彗星长度和尾距显著增加（P＜0．05，P＜0．01），并随着时间的延长损伤加重。结论：HCPT对膀胱癌细胞具有很强的细胞毒作用，10－HCPT作用下T24人膀胱癌细胞DNA断裂损伤的增加，可能就是10－HCPT抗肿瘤效应的重要作用机理之一。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者外周血淋巴细胞的DNA损伤及意义

目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)患者外周血淋巴细胞DNA损伤及意义.方法 选择在兰州大学第一附属医院就诊,经睡眠监测(PSG)确诊的30例男性OSAHS患者和22例男性健康志愿者,并用Epworth嗜睡量表(ESS)进行评估.用胞质阻滞法(cytokinesis blocked micronucleus,CBMN)检测外周血淋巴细胞DNA损伤情况.结果 OSAHS组外周血微核发生频率(以下简称微核率)显著高于时照组,(38.60±11.85)‰vs(12.40±5.47)‰(P<0.01),且0SAHS组的微核率在轻、中、重各组间差异有统计学意义,(28.46±8.42)‰vs(38.01±10.46)‰vs(42.43±11.72)‰(P<0.05).OSAHS组的微核率与睡眠呼吸低能气指数、夜间最低血氧饱和度、夜间平均血氧饱和度均有相关性(rs=0.517,P<0.01;rs=-0.549,P<0.01;rs=-0.370,P<0.05).而OSAHS组染色体桥的发生频率也高于对照组,(7.65±6.30)‰vs(3.93±2.23)‰(P<0.05).结论 OSAHS患者外周血淋巴细胞存在较高的DNA损伤现象,这种损伤可能与间断性缺氧引起的氧化应激相关,并且可能进一步参与了心脑血管等靶器官损害的发病机制.     

DNA 氧化损伤对人外周血淋巴细胞微核率的影响

目的：探讨 H2 O2诱导淋巴细胞氧化损伤对其微核率的影响。方法采用10、50、100、1000μmol/L H2 O2诱导静息期淋巴细胞 DNA 损伤;体外培养淋巴细胞,有丝分裂原刺激其进入细胞周期,于培养不同时间点加入1000μmol/L H2 O2诱导DNA 损伤,常规培养法检测微核率的变化。结果各实验组微核率并无明显变化。结论 H2 O2可以诱导淋巴细胞 DNA 损伤,但对微核的形成无影响,可能与 DNA 损伤类型及快速修复有关。     

缺氧对心肌细胞DNA链损伤的体外实验研究

目的 :研究缺氧条件下对体外培养的心肌细胞DNA链的损伤及其探讨损伤机制。方法 :利用单细胞电泳技术结合激光扫描共聚焦显微镜来观察乳鼠心肌细胞的DNA损伤 ,以慧星样细胞出现率、慧尾长度和尾距 (尾部DNA占总DNA的百分比与头尾部中心间距的乘积 )来评价心肌细胞DNA的损伤程度。结果 :缺氧 12h后 ,心肌细胞DNA发生了损伤 ,慧星样细胞出现率、慧尾长度和尾距均增加 ,与对照组有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;并随缺氧时间的延长 ,DNA的损伤程度和慧星样细胞的出现率均随之增加 ,呈现明显的时间———效应趋势。结论 :单细胞电泳可快速、灵敏地检测缺氧引起的心肌细胞DNA损伤。缺氧导致细胞的DNA损伤可能是诱导心肌细胞凋亡发生的重要机制之一。     

持续气道正压通气缓解阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并慢性阻塞性肺疾病患者的DNA损伤研究

目的探讨经鼻持续气道正压通气(nCPAP)治疗前后阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)合并慢性阻塞性肺病(COPD)患者外周血淋巴细胞微核率的变化和意义。方法选择2012年10月至2013年10月在江苏大学附属宜兴医院老年医学科就诊的住院患者,经多导睡眠仪器睡眠监测(PSG)确诊的34例患者(包括OSAHS 12例,COPD 8例,OSAHS合并COPD 14例)和21例对照组(体检的健康志愿者),使用Epworth嗜睡量表(ESS)评估白天嗜睡状况和睡眠呼吸暂停的严重程度,使用肺功能测定结果评估COPD患者的严重程度,用胞质阻滞法(CBMN)检测外周血淋巴细胞DNA损伤情况。结果 CPAP治疗后,OSAHS组(AHI:26.4±16.5 vs.23.2±14.8;ESS:11.6±4.4 vs.8.4±2.5;LSpO2:75.2±10.4 vs.83.2±3.7;MSpO2:87.2±3.5 vs.92.2±1.8)和OSAHS合并COPD组(AHI:67.6±22.0 vs.42.6±14.1;ESS:15.6±3.7 vs.10.8±3.2;LSpO2:57.0±6.3 vs.74.0±6.1;MSpO2:82.7±9.3 vs.89.4±3.8)的睡眠呼吸暂停情况有所好转,OSAHS合并COPD组肺功能有所增强(FEV1/pred:60.5±10.7 vs.72.3±7.3;FEV1/FVC:55.4±6.6vs.63.9±6.4),而OSAHS组[微核率:37.2(17.1⁴7.3)vs.17.6(12.147.3)vs.17.6(12.1²0.2);染色体桥率:4.3(1.020.2);染色体桥率:4.3(1.0¹4.2)vs.2.7(014.2)vs.2.7(0⁸.8);核芽率:4.5(1.28.8);核芽率:4.5(1.2¹2.0)vs.3.3(012.0)vs.3.3(0⁶.8)]和OSAHS合并COPD组[微核率:40.0(31.26.8)]和OSAHS合并COPD组[微核率:40.0(31.2⁷1.2)vs.19.3(10.771.2)vs.19.3(10.7³0.4);染色体桥率:9.1(1.830.4);染色体桥率:9.1(1.8²0.0)vs.4.9(020.0)vs.4.9(0⁹.9);核芽率:10.0(3.29.9);核芽率:10.0(3.2²1.7)vs.5.9(021.7)vs.5.9(0¹1.0)]微核率、染色体桥率、核芽率都有明显降低(P<0.05)。结论 CPAP能有效增强OSAHS合并COPD患者的肺功能,并能有效降低患者的DNA损伤。     

新生儿缺氧缺血性脑病血谷胱甘肽过氧化物酶水平与DNA损伤的关系探讨

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)水平与外周血单个核细胞DNA损伤程度的关系。方法HIE患儿20例,分别在急性期、恢复期采血,用动力学检测全血中GSHPx水平,用碱性单细胞凝胶电泳(SCGE)检测外周血中单个核细胞的彗星率及尾矩。12例新生儿作为正常对照组。结果急性期HIE患儿血中,GSHPx水平明显减低,与对照组比较有统计学意义(P<0.01),恢复期GSHPx水平上升,与对照组比较无统计学意义(P>0.05);急性期HIE患儿外周血单个核细胞彗星率及尾矩显著增高,与对照组比较有统计学意义(P<0.01),恢复期两者水平下降,但与对照组比较仍有统计学意义(P<0.01)。结论自由基及DNA损伤参与了新生儿HIE的病理发展过程,GSHPx可作为HIE患儿体内自由基水平检测指标之一。     

新生儿缺氧缺血性脑病血谷胱甘肽过氧化物酶水平与DNA损伤的关系探讨

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）血液中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平与外周血单个核细胞DNA损伤程度的关系。方法HIE患儿20例，分别在急性期、恢复期采血，用动力学检测全血中GSH-Px水平，用碱性单细胞凝胶电泳（SCGE）检测外周血中单个核细胞的彗星率及尾矩。12例新生儿作为正常对照组。结果急性期HIE患儿血中，GSH-Px水平明显减低，与对照组比较有统计学意义（P〈0．01），恢复期GSH-Px水平上升，与对照组比较无统计学意义（P〉0．05）；急性期HIE患儿外周血单个核细胞彗星率及尾矩显著增高，与对照组比较有统计学意义（P〈0．01），恢复期两者水平下降，但与对照组比较仍有统计学意义（P〈0．01）。结论自由基及DNA损伤参与了新生儿HIE的病理发展过程，GSH-Px可作为HIE患儿体内自由基水平检测指标之一。     

珍珠美容霜对头颈部肿瘤患者放射治疗过程中的皮肤保护作用的研究

目的探讨珍珠美容霜对头颈部恶性肿瘤患者放射治疗过程中的皮肤保护作用。方法将符合条件的患者200例,随机分成观察组(158例)和对照组(42例),观察组开始放疗即采用珍珠美容霜外涂照射野皮肤。对照组采用基本皮肤护理。对比2组患者皮肤反应出现的时间、严重程度。结果观察组出现皮肤反应时间迟,程度轻;对照组反应皮肤出现早,程度重。比较有明显差异(P<0.01)。结论珍珠美容霜对头颈部肿瘤患者放射治疗过程中的皮肤有保护作用,减少副作用,缩短疗程,减轻患者的经济负担,提高生活质量。