不同片段的Dig—HBV—DNA探针在检测血清HBV—DNA的比较

本文运用分子克隆技术、随机引物法用非放射性Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记制备ＰＢＲ３２２－ＨＢＶ－ＤＮＡ全基因探针、单纯ＨＢＶ－ＤＮＡ全基因探针及经ＢｇＬⅡ限制性内切酶切割后片段ＨＢＶ－ＤＮＡ探针。通过检１３０份血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，比较三种探针的敏感度和特异性。     

不同片段的Dig－HBV－DNA探针在检测血清HBV－DNA的比较

本文运用分子克隆技术、随机引物法用非放射性Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记制备ｐＢＲ３２２－ＨＢＶ－ＤＮＡ全基因探针（７．５ｋｂ）、单纯ＨＢＶ－ＤＮＡ全基因探针（３．２ｋｂ）及经ＢｇＬⅡ限制性内切酶切割后片段ＨＢＶ－ＤＮＡ探针（２．４ｋｂ）。通过检测１３０份血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，比较三种探针的敏感度和特异性。     

人白细胞介素—10基因探针的制备及应用

本文应用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出人ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ６１０ｂｐ基因片段，将此片段插入ｐＵＣ１８质粒中，经电泳检测和序列分析证实，扩增片段和发表序列一致酶切电泳回收纯化片段，地高辛随机引物标记，制备了ｈＩＬ－１０基因探针，应用斑点杂交检测了探针的灵敏度和特异性，结果表明该基因探针具有特异性强，灵敏度高，应用方便等特点，初步用于细胞系及ＥＢ病毒阳性的淋巴瘤组织中ｈＩＬ－１０ｍＲＮＡ表达的检测，所得结果     

免疫—PCR技术研究进展

免疫－ＰＣＲ技术是近年兴起的一种新的标记免疫分析方法，该技术具有高灵敏度及特异性的特点。本文从ＤＮＡ标记免疫探针的构建、标记用ＤＮＡ分子、免疫－ＰＣＲ反应载体等几方面对该技术近年来的研究进展进行简要的综述。     

HLA—DQA反相杂交法分型与多聚酶链反应—单链构象多态性配型的…

为了验证多聚酶链反应－单链构象多态性方法在骨髓移植型中的可靠性和准确性，采用掺入生物素的多聚酶链反应对ＨＬＡ－ＤＱＡ位点基因进行特异性扩增。将所选区分ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因的特异性探针点于尼龙膜上，用标记的扩增产物与膜上探针杂交，并用碱性磷酸酶显色法杂交信号，确定待测标本的基因型。     

地高辛标记炭疽杆菌DNA探针的研究

本文介绍了试用地高辛标记，将炭疽芽孢杆菌的ＰＸＤ１和ＰＸＤ２两质粒上分别扩增到２９０ｂｐ和２８８ｂｐ基因片断制成非放射性标记探针，利用菌落原位杂交方法进行检测，表明两探针的敏感性、特异性均良好，提示该两探针将能为基层工作提供更准确、快速的炭疽杆菌检验技术。     

大鼠脑创伤后白细胞介素—1β和肿瘤坏死因子—αmRNA在脑组？…

目的：研究大鼠实验性脑创伤脑组织中白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）及肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ表达水平的变化。方法：由液压型创伤装置致大鼠一侧脑挫伤，利用地高辛标记的寡核苷酸探针原位杂交技术观测ＩＬ－１β和ＴＮＦ－α的基因表达。结果：鼠脑创伤后上述两种细胞因子的基因表达水平迅速增高，在伤后１小时即可达取最高水平，并持续至伤后６小时，伤后２４小时后基本恢复到正常水平，两种细胞因子在脑组织中     

PCR—ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方法学，探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规ＰＣＲ引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成份，再通过亲合素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯小孔中，通过固相探针与ＨＢＶＤＮＡ扩增产物进行杂交，与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经ＮＰＰ显色，根据其Ａ４０５ｎｍ值大小，推算样品中ＨＢＶ ＤＮＡ模板含量。建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ的最     

乙型慢性活动性肝炎者外周血单个核细胞IL—1R和IL—6…

本文采用Ｄｉｇ随机引物法标记探针，行政点杂交法对２０例ＣＡＨ－Ｂ和１０例健康人的外周血单个核细胞中ＩＬ－１β，ＩＬ－１Ｒ和ＩＬ－６ｍＲＮＡ进行检测，     

分子杂交化学发光法检测血清中乙型肝炎病毒DNA

目的：用非放射性的异羟基洋地黄毒甙（地高辛，Dig)标记探针与靶DNA杂交，结合化学发光检测系统检测乙肝患者血清中HBV DNA。方法：应用灵曼公司生产的Dig DNA标记检测试验盒。将Dig标记的HBV DNA探针与点印迹在尼龙膜或硝酸纤维素膜上的靶DNA杂交，杂交后的膜与Dig－AP抗体保温，然后用化学发光底物CSPD与之作用，导致在波长477nm处发光，感光于X光底片上。结果：待检的129份血清标本，用此法检测HBV DNA阳性率达58．4％，敏感性2.0pg-0.5pg。为了比较，329份血清标本用显色法测定，阳性率45．0％，敏感性5.0pg-1.0pg。对照组呈阴性结果。结论：Dig标记探针分子杂交化学发光法具有较高特异性，敏感性和简便等优点，可用于血清中HBV DNA的检测。     

两个糖尿病家庭HLA—DQA1和—DQB1等位基因比较

糖尿病是一种多病因的疾病，具有遗传因素的作用。胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）的遗传与ＨＬＡ－ＤＱ基因具有高度相关性。本文通过对ＭＯＤＹ和ＩＤＤＭ两个糖尿病家庭成员的ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＱＡ１和ＤＱＢ１基因ＰＣＲ扩增，以Ｂｉｏ－１１－ｄＵＴＰ标记核苷酸探针杂交分析，证实：１，ＭＯＤＹ的遗传与ＨＬＡ－ＤＱ基因无关联。２．ＩＤＤＭ的遗传不仅与ＨＬＡ－ＤＱ基因高度相关而且具有环境因素作用。３．易感基因之间     

核酸探针在结核病实验室诊断中的应用进展

核酸探针杂交技术在结核分枝杆菌的分子生物学研究、细菌分类与鉴定、流行病学调查等方面具有十分重要的作用。本文综述了同位素标记核酸探针（包括全染色体探针、克隆重DNA片段探针、cDNA探针）和非同位素标记核酸探针（包括AP－DNA探针、AAF－DNA探针、AE－DNA探针、Dig－DNA探针）在结核病实验室诊断中的应用进展。     

核酸探针在结核病实验室诊断中的应用进展

核酸探针杂交技术在结核分枝杆菌的分子生物学研究、细菌分类与鉴定、流行病学调查等方面具有十分重要的作用。本文综述了同位素标记核酸探针（包括全染色体探针、克隆重ＤＮＡ片段探针、ｃＤＮＡ探针）和非同位素标记核酸探针（包括ＡＰ－ＤＮＡ探针、ＡＡＦ－ＤＮＡ探针、ＡＥ－ＤＮＡ探针、Ｄｉｇ－ＤＮＡ探针）在结核病实验室诊断中的应用进展。     

核酸分子杂交的方法及其在医学检验中的应用

核酸分子杂交技术能特异地检测细胞及微生物的核酸序列,广泛地使用于肿瘤学、遗传学、病理学、微生物学、细胞学、流行病学的基础研究和临床诊断。核酸分子杂交的技术主要包括标本的处理、探针的制备和标记、杂交及杂交物的检测。标本的处理用10%中性缓冲甲醛溶液固定石蜡包埋的病理切片,可用于作原位杂交;使用高浓度的硫氰酸胍直接裂解细胞并使所有的蛋白(包括核酸酶)变性形成一个适宜于杂交的液相环境,可直接进行杂交。探针的制备和标记,重点介绍了非放射性标记法,较详细介绍了生物素标记探针、地高辛标记探针、磺基化标记及叮啶酯化学发光标记等技术。杂交中使用脱(低)脂奶粉、液相杂交等简化提高检测速率。杂交物的检测,同位素标记可通过放射自显影并用计算机辅助成象分析进行定量检测;非放射性标记通过酶联产生显色反应等方法检测;化学发光检测更可能取代同位素法。     

tal—1基因重排及其应用的研究进展

ｔａｌ－１基因位于第１号染色体，由于色体易位和基因缺失引起重排，形成断裂融合基因，具有特异的核苷酸序列，作为白血病细胞克隆特异性标记，可用于微小列留病的检测。     

反义RNA探针检测人外周血单个核细胞IL—9 mRNA

反义ＲＮＡ探针检测人外周血单个核细胞ＩＬ－９ｍＲＮＡ周韧陈培辉要准确地研究白细胞介素９（ＩＬ－９）等细胞因子生物学特性，需要有精确有效的手段。我们用体外转录系统制备地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＩＬ－９反义ＲＮＡ探针，检测激活后人外周血单个核细胞ＩＬ－９ｍＲ...     

HLA-DQA反相杂交法分型与多聚酶链反应－单链构象多态性配型的比较

为了验证多聚酶链反应－单链构象多态性方法在骨髓移植配型中的可靠性和准确性，采用掺入生物素的多聚酶链反应对ＨＬＡ－ＤＱＡ位点基因进行了特异性扩增。将所选区分ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因的特异性探针点于尼龙膜上，用标记的扩增产物与膜上探针杂交，并用碱性磷酸酶显色法检测杂交信号，确定待测标本的基因型。对２０对异基因骨髓移植的供、受者进行ＨＬＡ－ＤＱＡ位点的基因分型，并与多聚酶链反应－单链构象多态性配型作比较。结果表明，２０对供、受者的多聚酶链反应－单链构象多态性配型结果与该反相杂交法基因分型结果一致。多聚酶链反应－单链构象多态性方法是一种骨髓移植的供、受者配型，快速可靠的方法     

逆转录—聚合酶链反应—酶联夹心杂交法定量检测IL—6mRNA

目的：建立一支高灵敏度、高特异性、精确、简便的逆转录－聚合酶链反应－微孔板酶联夹心杂交技术定量检测人IL－6mRNA的方法。方法：从人外周静脉血单个核细胞提取总RNA，进行RT－PCR扩增，PCR产物经热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交，用链亲和素－辣根过氧化物酶（SAV－HRP）及底物系统检测杂交信号。结果：该方法检测IL－6mRNA的灵敏度明显高于逆转录－聚合酶链反应－琼脂糖凝胶电泳；特异性高，RT－PCR和酶联夹心杂交均无非特异性阳性信号出现；重复性良好。结论：本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化，适合于细胞因子mRNA的定量检测。     

PCR—DNA指纹图识别异基因骨髓移植后重建造血的细胞起源

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增多态性小卫星ＤＮＡ的３３．１，３３．６位点，联合地高辛标记寡核苷酸探针杂交方法，以小卫星ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹图为特异性遗传标志，识别２例慢性粒细胞白血病患接受同供髓的骨髓移植后造血重建的细胞起源。结果显示均有供源性造血细胞植活。该方法灵敏度高，特异性强，无同位素污染，尤其适用于同性别、同血型、ＨＬＡ全相合的异基因骨髓移植植活指标的监测。     

胃癌及癌前病变中c—myc基因蛋白表达的定量研究

了解ｃ－ｍｙｃ基因蛋白在胃癌及癌前病变中的表达，并探讨ｃ－ｍｙｃ基因表达与细胞增殖活性之间的关系。应用流式细胞术和细胞免疫荧光染色技术，对胃癌及癌病变中ｃ－ｍｙｃ基因蛋白进行定量测定，用免疫组化法研究增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在组织中的表达，结果表明，ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达和ＰＣＮＡ标记指数在正常胃粘膜，肠化生，异型增生，胃癌中依次递增，且两者呈显著正相关，Ⅲ型肠化ｃ－ｍｙｃ基因表达显著高于Ｉ型和