大鼠脑干向面口部运动核的P物质能和脑啡肽能投射

目的 观察大鼠脑干面口部运动核（三叉神经运动核、面神经核和舌下神经核）内Ｐ物质（ＳＰ）和亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）样阳性终末的中枢起源。方法 荧光金（ＦＧ）逆行追踪与ＳＰ样和Ｌ－ＥＮＫ样免疫荧光组织化学染色相结合的双重标记技术。结果 将ＦＧ分别注入三叉神经运动核、面神经核或舌下神经核后，ＦＧ逆标神经元主要位于臂旁核簇、三叉上核、三叉神经感觉主核、脑桥和延髓网状结构、巨细胞网状核α部和延髓中缝核簇。     

大鼠大脑运动皮质与脑干面口部运动前神经元的突触联系

目的 观察大脑运动皮质发出的下行投射终末或谷氨酸能终末与脑干面口部运动核内运动神经元的间接突触联系。方法 顺行与逆行追踪相结合及免疫组织化学染色与逆行追踪相结合的双重标记技术。结果 将ＰＨＡ－Ｌ电泳入大鼠额叶１区和／或２区和将ＨＲＰ分别注入三叉神经运动核（Ｖｍ）、面神经核（Ⅶ）或舌下神经核（Ⅻ）,ＰＨＡ－Ｌ顺标终末和ＨＲＰ逆标神经元的重叠分布区主要见于臂旁核族、三叉上核、Ｖｍ内侧的脑桥网状结构、延     

大鼠脑干面口部运动神经元与5—HT样,SP样,L—ENK样,GABA样和 …

为了观察５－羟色胺样、Ｐ物质样、亮氨酸－脑啡肽样，γ－氨基丁酸和甘氨酸样阳性终末与脑干面口部运动核间的突触联系，用ＨＲＰ逆行追踪免疫组织化学染色相结合的双标技术，在电镜下对５－ＨＴ样、ＳＰ样、Ｌ－ＥＮＫ样、ＧＡＢＡ样和Ｇｌｙ样阳性终末与ＨＲＰ逆标面口部运动神经元间的突触联系进行了观察。５－ＨＴ样、ＳＰ样、Ｌ－ＥＮＫ样和Ｇｌｙ样阳性终末在脑干面口部运动内呈均匀分布，没有区域特异性。将ＨＲＰ注入面口部     

大鼠中缝大核内5-羟色胺样P物质样和亮氨酸脑啡肽样突触结构的免疫电镜观察

用免疫电镜法在大鼠中缝大核内观察到:(1) 5-羟色胺(5-HT)样阳性轴突终末与阴性胞体、阳性和阴性树突以及阴性轴突终末,分别形成轴-体突触、轴-树突触和轴-轴突触;阴性轴突终末与阳性胞体和阳性树突分别形成轴-体和轴-树突触;(2) P物质样(SP样)和亮氨酸脑啡肽(L-Enk)样阳性轴突终末与阳性和阴性的胞体和树突,以及阴性轴突终末与阳性胞体和树突分别形成轴-体突触和轴-树突触,L-Enk样阳性轴突终末之间形成轴-轴突触;(3) 上述5-HT、SP和L-Enk样结构所形成的突触中,阴性轴突终末与阳性树突所形成的轴-树突触最多见;(4) 上述阳性轴突终末内主要含透明圆形小泡。免疫反应产物为电子密度高的物质,主要沉积于膜性细胞器的表面、透明圆形小泡和部分颗粒囊泡内和小泡膜上。     

大鼠腰骶髓后连合核SP受体免疫阳性神经元与SP免疫阳性终末的突触联系

应用免疫组织化学双重反应的方法研究了大鼠腰骶髓后连合核内ＳＰ受体免疫阳性神经元在光、电镜下的特征及其与ＳＰ免疫阳性终末的突触联系。结果证明，ＳＰ免疫阳性终末和ＳＰ受体阳性胞体及树突均密集分布于后连合核区。在光镜下双重免疫反应阳性结果显示二者重叠分布，且可见大量的ＳＰ样免疫阳性终扣与ＳＰ受体阳性胞体或树突紧密接触。电镜下证明ＳＰ受体免疫阳性产物不仅位于突触后部位而且分布于胞体和树突的非突触部位，有４２％的ＳＰ受体阳性树突与ＳＰ阳性终末形成突触连接。在此未发现ＳＰ受体免疫阳性终末。通过一系列实验证明：腰骶髓后连合核神经元接受由ＳＰ介导的外周伤害性信息的传入，且其主要为盆腔脏器内脏初级传入成分。     

大鼠延髓背角内GABA或甘氨酸免疫阳性终末与Fos阳性投射神经元的联系

目的　观察大鼠延髓背角 (MDH)内向丘脑或臂旁核投射的Fos阳性神经元与γ 氨基丁酸 (GABA)或甘氨酸 (Gly)阳性终末的联系。　方法　四甲基罗达明 (TMR)逆行追踪结合TMR、Fos、GABA或Gly的免疫荧光三重染色技术。　结果　GABA或Gly阳性终末主要分布于延髓背角浅层 (Ⅰ、Ⅱ层 ) ;给予面口部痛刺激后 ,Fos阳性神经元也主要分布于浅层 ;TMR注入一侧丘脑或臂旁核 ,逆标神经元分别主要见于对侧或同侧MDH的浅层 ;部分逆标神经元呈Fos阳性 ;GABA或Gly阳性终末与Fos阳性投射神经元形成密切接触。　结论　MDH内感受面口部伤害性刺激信息的部分神经元向丘脑或臂旁核投射 ,GABA或Gly可能对这些伤害性感受神经元发挥抑制作用。     

大鼠孤束核中P物质和亮氨酸-脑啡肽样神经元对咽肌运动神经元的调控——PRV和SP及L-ENK免疫荧光双标记法研究

用PRV和SP或L-ENK免疫荧光双标记法研究了大鼠孤束核中SP及L-ENK样神经元对咽肌运动神经元的调控.PRV注射大鼠咽肌后,在孤束核的中介亚核和中间亚核中可见少量PRV和SP或L-ENK双标记.首次证明了大鼠孤束核中的SP及L-ENK样神经元对咽肌运动元的调控.推测孤束核中的SP及L-ENK可能对咽肌运动的精确调控有关.     

大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区5-羟色胺样、P物质样和亮氨酸-脑啡肽样免疫反应阳性亚微结构的电镜观察

本文用免疫电镜技术研究了大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区内5-HT样、SP样和L-ENK样的免疫反应阳性亚微结构。5-HT样免疫反应阳性的胞体较多,常见5-HT样阳性树突与阴性轴突终末形成多为非对称性的轴-树突触;偶见阳性轴突终末与阴性树突以及阴性轴突终末与阳性胞体分别构成轴-树和轴-体突触.SP样阳性胞体数目较少,可见少量含多形性小泡的阴性轴突终末与之形成轴-体突触;由阴性轴突终末与阳性树突所形成的轴-树突触最常见;阳性轴突终末与阴性胞体和阳性树突分别构成轴-体突触和轴-树突触。L-ENK样阳性胞体数目也较少,L-ENK样阳性树突与阴性轴突终末所形成的轴-树突触最多见,可见L-ENK样阳性胞体与阴性轴突终末构成轴-体突触;偶见阳性轴突终末与阴性树突形成轴-树突触。上述各种突触均主要含圆形小泡,有时有少量扁平小泡、椭圆形小泡和颗粒囊泡。     

GAD67-GFP基因敲入小鼠5-羟色胺样和P物质样阳性终末与三叉神经中脑核神经元的联系

本研究应用免疫荧光组织化学三重标记技术,在激光共聚焦显微镜下观察了GAD67-GFP基因敲入小鼠三叉神经中脑核(Vme)内5-HT样和P物质(substanceP,SP)样阳性终末分别与小白蛋白(parvalbumin,PV)样和GFP阳性神经元之间的联系。结果显示:(1)Vme内有较多的PV样阳性神经元,这些神经元绝大多数为大、中型的假单极神经元,直径约为18～40μm;也可观察到少量的GFP阳性神经元,多为小的多极神经元,直径约为8～15μm;(2)5-HT样阳性终末广泛分布于Vme内,其中有部分阳性终末分别聚集在PV样或GFP阳性的Vme神经元的胞体周围,计数结果表明:大约有77.7%和22.3%的5-HT样阳性终末分别与PV样或GFP阳性胞体相接触;(3)SP样阳性终末也广泛分布于Vme内,并分别与PV样或GFP阳性神经元的胞体形成密切接触,其中有78.2%和21.8%的阳性终末分别与PV样或GFP阳性胞体相接触。以上结果提示,在口面部本体感觉信息向更高一级中枢传递过程中,5-HT能和SP能神经终末不仅对初级传入发挥直接的调控作用,还可能通过影响Vme内的GABA能神经元的活动,从而间接对该信息的传递发挥调控作用。     

大鼠伏核内5-羟色胺样和甲硫氨酸-脑啡肽样免疫反应阳性结构的观察

本文借助免疫组织化学技术,在光镜和电镜水平观察了大鼠伏核内5-羟色胺(5-HT)样和甲硫氨酸-脑啡肽(Met-ENK)样免疫反应阳性结构的分布。光镜观察:5-HT样免疫反应阳性的纤维和终末可见于伏核不同平面的各亚区,但内侧区和腹侧区的明显地多于背侧区和外侧区,尾段的阳性纤维多于吻段。根据伏核内5-HT样纤维的直径、行径和膨体的数量,可将其分为粗纤维、中等粗细纤维和细纤维3种,此3种纤维的区分以内侧区和腹侧区较明显。未见5-HT样阳性胞体。Met-ENK样免疫反应阳性的胞体仅见于腹侧区和内侧区腹侧部,少量散在分布。Met-ENK样阳性纤维和终末也主要分布于内侧区和腹侧区,外侧区和背侧区较少。Met-ENK样阳性纤维均属细纤维,行径弯曲,外观呈绒毛状。Met-ENK样阳性胞体、纤维和终末在吻尾方向上的分布无明显差异。电镜观察:5-HT样阳性轴突终末与阴性树突形成对称和非对称型轴树突触;Met-ENK样阳性树突与阴性轴突终末形成对称和非对称型轴-树突触。上述突触多见于内侧区和腹侧区。     

大鼠中枢运动核团内P物质受体的定位分布

观察大鼠脑干的躯体运动核,副交感运动核和脊髓前内Ｐ物质受体的定位分布,阐明ＳＰ在运动核团的作用部位。方法免疫组织化学染色技术。结论ＳＰ通过ＳＰ受体的介导在中枢运动核团内对运动神经元发挥调控作用。     

大鼠下丘脑催产素样和加压素样神经元与5-羟色胺及儿茶酚胺能传入纤维末梢的关系

用免疫组织化学ABC双标记法,显示下丘脑各神经分泌核区中催产素样免疫反应(oxytocin-like immunoreactivity,OT-li)、加压素样免疫反应(vasopressin-like immunoreaetivity,VP-li神经元及5-羟色胺样免疫反应(serotonin-like immunoreactivity,5-HT-li)和儿茶酚胺能,即酪胺酸羟化酶免疫反应(tyrosine hydroxylase-like immunoractivity,TH-li)纤维末梢,对这两种单胺能纤维末梢在视上核、室旁核及各种神经分泌副核中的分布,及其与OT-li和VP-li神经元相关的特点及异同加以分析。结果显示,5-HT-li与TH-li纤维末梢在下丘脑视上核、室旁核及各神经分泌副核中,与OT-li及VP-li神经元相接触的多寡程度多不相同。视上核、室旁核内有极高密度的TH-li纤维末梢,与OT-li及VP-li神经元相接触,并在多数神经分泌副核的OT-li及Vp-li神经元周围,也有多寡不等的分布;而中等至高密度的5-HT-li纤维末梢,主要与各神经分泌副核内的OT-li或VP-li神经元相接触。说明5-HT-li和儿茶酚胺能传入纤维末梢,可能分别侧重调控不同神经分泌核区的大细胞神经分泌细胞群。     

大鼠三叉神经本体觉中枢通路上第三级核团内PV样阳性终末与丘脑投射神经元的突触联系

目的 观察大鼠三叉神经本体觉中枢通路上第三级核团内Paralbumin样阳性轴突终末与丘脑投射神经元之间是否存在突触联系。方法 用HRP逆行追踪和包埋前免疫电镜相结合的双重标记法。将WGA-HRP注入丘脑腹后内侧核逆行标记投射神经元。结果 WGA-HRP注入丘脑腹后内侧核(VPM)后,WGA-HRP标记神经元主要分布在感觉主核背内侧部(Vpdm)、三叉上核尾外侧部(Vsup-CL)以及三叉神经运动核腹侧区(AVM)和上橄榄核背侧区(ADO)。电镜下可见PV样阳性神经元的轴突终末与WGA-HRP标记的胞体或者树突形成突触联系。另外PV阴性神经元的轴突终末也与WGA-HRP标记的胞体或树突形成突触联系,这些胞体或树突偶尔为PV阳性。结论 在三叉神经本体感觉信息从第三级神经元向丘脑腹后内侧核(VPM)传递的过程中,PV样阳性神经元可能通过突触传递机制而发挥作用。     

大鼠孤束核内5－羟色胺能轴突终末的突触联系

用顺行演变与免疫组织化学结合的双标技术，电镜下观察大鼠孤束核内５－羟色胺样免疫反应（５－ＨＴ－ＬＩ）轴突终末的突触联系，特别是与迷走神经初级传入（溃变）终末的关系。发现：１．５－ＨＴ－ＬＩ轴突终末和迷走神经初级传入终末终止于同一个树突形成轴－树突触；２．５－ＨＴ－ＬＩ轴突终末与树突形成轴－树突触；３．５－ＨＴ－ＬＩ轴突终末与迷走神经初级传入终末或非标记的轴突终未形成轴一轴相贴（ａｘｏ－ａｘｏｎｉｃ－ｃｏｎｔａｃｔ）。以上结果提示，孤束核内的５－ＨＴ能神经成分可能通过突触后、突触前机制调控经迷走神经传入的信息。     

大鼠三叉神经中脑核内GAD样阳性终末与PAG和GABAA受体α3亚单位阳性共存神经元的联系

目的：观察大鼠三叉神经中脑核（Vme)内谷氨酸脱羧酶（GAD）样阳性终末与磷酸激活的谷氨酰胺酶（PAG）、GABAA受体α3亚单位（GABAARα3）和小白蛋白（PV）样阳性神经元之间的联系。方法：免疫荧光组织化学三重染色技术，在激光共聚显微镜下进行观察。结果：在Vme内可观察到大量的GABAARα3样、PAG样和PV样免疫反应阳性神经元，吻尾方向几乎在其全长出现，多为大的假单极神经元（直径为25－50μm）。大约90％左右的PAG样阳性神经元同时呈GABAARα3样和PV样免疫阳性。在激光共聚焦显微镜下观察到，密集分布的GAD样阳性终扣聚集在PAG样和GABAARα3样双重标记的Vme神经元胞体周围，并与之形成密切接触。结论：GABA能神经元投射至Vme的神经终末可能通过位于Vme神经元胞体内的GABAARα3亚单位对谷氨酸介导的面口部本体感觉信息的传递发挥抑制性调控作用。     

大鼠GAD样阳性终末与三叉神经中脑核内GABA_B受体和PAG共存神经元的联系

本研究应用免疫荧光组织化学双重和三重反应技术 ,在激光共聚焦显微镜下观察了大鼠三叉神经中脑核神经元内GABAB受体和磷酸激活的谷氨酰胺酶 (PAG)的共存关系 ,以及谷氨酸脱羧酶 (GAD)样阳性终末与此二者共存的神经元之间的联系。结果证明 :在三叉神经中脑核内可见大量 GABAB受体样和谷氨酰胺酶样免疫阳性神经元 ,在吻尾方向上几乎亘其全长出现 ,多为大的假单极神经元。许多谷氨酰胺酶样阳性神经元同时呈 GABAB受体样免疫阳性 ,这种双重阳性的细胞约占磷酸激活的谷氨酰胺酶样阳性细胞的 85 %。在激光共聚焦显微镜下观察到密集分布的谷氨酸脱羧酶样阳性终末聚集于 GABAB受体样和磷酸激活的谷氨酰胺酶样双重阳性的三叉神经中脑核神经元胞体周围 ,并与之形成密切接触。以上结果提示 ,GABA能投射至三叉神经中脑核的神经终末可能通过 GABAB受体对谷氨酸介导的口面部本体觉信息的传递发挥抑制性调控作用