CVF联合小剂量CsA对大鼠同种异体心脏移植急性排斥反应的影响

目的 探讨小剂量环孢素A(cyclosporine,CsA)联合眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)对大鼠同种异体心脏移植急性排斥反应的影响.方法 采用改良Ono's 方法建立大鼠心脏移植排斥反应动物模型,将实验动物分为5组,每组9 只.A 组:对照组;B 组:半量CsA组;C 组 :全量CsA组;D组:CVF组;E组:半量CsA联合CVF组.分别在1、3、5、7 d从各组中取1只处死,其余5只观察移植心脏存活天数,应用HE染色进行供心排斥反应病理分级,免疫组织化学检查CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞浸润情况,RT-PCR法检测供心IL-2、IL-10 mRNA表达水平.结果 A、B、C、D和E组大鼠移植心脏存活时间分别为(7.88±0.99)、(14.94±1.43)、(20.76±0.94)、(14.96±2.29)d和(31.10±3.36) d,与A组相比,各治疗组大鼠心脏存活时间均明显延长(P＜0.01),E组移植心脏存活时间较B、C、D组明显延长(P＜0.01).各实验组免疫排斥发生时间延后,排斥反应分级减轻,CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞浸润减少,尤其C、E两组明显(P＜0.01).A与D组IL-2 、IL-10 mRNA含量无明显差异(P＞0.05),E组与B、C组比较,IL-2 、IL-10 mRNA含量也无明显差异(P＞0.05).结论 CsA和CVF在抗急性排斥反应上具有协同效应,小剂量CsA联合使用 CVF 能增强抗排斥反应疗效,优于大剂量CsA单用组,CVF能单独或者协同CsA抑制T细胞的浸润,但CVF对排斥相关细胞因子的分泌无明显作用,也不加强CsA抑制细胞因子分泌的效应,其抗排斥反应的机制还需进一步探讨.     

Activation of aryl hydrocarbon receptor prolongs survival of fully mismatched cardiac allografts

Recent data suggest that activation of aryl hydrocarbon receptor (AhR) by its high-affinity ligand 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) results in expansion of regulatory T (Treg) cells and suppresses the development of autoimmune and allergic diseases in several models. Treg cells have been increasingly documented to suppress allograft rejection and even to establish stable long-term graft acceptance. However, the involvement of TCDD in the regulation of solid organ transplantation rejection is largely unknown. Here, we examined whether activation of AhR with TCDD altered cardiac allograft rejection in an allogeneic heart transplant model. Recipient C57BL/6 (H-2b) mice were adminis-trated with a single intraperitoneal injection of TCDD, and the murine cardiac transplant models from BALB/c (H-2d) to C57BL/6 (H-2b) were built 24 h later. The complete cessation of cardiac contractility was defined as the observation endpoint. The effect of TCDD on T-cell proliferation was assessed by mixed lymphocyte reaction (MLR). Histological and immunohistochemical analyses were performed to estimate the severity of rejection. The phenotype and cytokine profile of lymphocytes were analyzed by flow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Activation of AhR remarkably prolonged the survival of cardiac allografts to more than 20 days. In vitro, TCDD ugregulated the frequency of CD4+CD25+Foxp3+ Treg cells and suppressed the proliferation of T lymphocytes. In vivo, the prolonged survival time was associated with increased number of Treg cells in allografts and spleens. Furthermore, the secretion of interferon-γ (IFN-γ) and interleukin-17 (IL-17) was reduced to less than 50% of that of the PBS treatment control group by TCDD treatment, whereas IL-10 was elevated to 10-fold of that of the PBS treatment control group. Collectively, our data indicate that activation of AhR with a single dose of TCDD significantly prolonged the survival of fully allogeneic cardiac grafts, and the mechanism underlying this effect might be involved in the induction of Treg cells.     

腺病毒介导的CTLA4Ig和OX40Ig基因转移诱导大鼠心脏移植物长期存活的作用

目的探讨腺病毒介导CTLA4Ig和OX40Ig基因转移延长异基因大鼠心脏移植物存活时间的作用及其相关机制。方法将Lewis大鼠随机分为5组对照组、空载病毒AdEGFP处理组、AdCTLA4Ig处理组、AdOX40Ig处理组和AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组。在心脏移植的同时,对照组不予其他处理,其他各组分别经尾静脉注射(1~5)×109pfu/ml AdEGFP、AdCTLA4Ig、AdOX40Ig、AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig进行耐受诱导,每天观察心脏移植物的存活情况,完全停跳的心脏经组织学证实后定为排斥。ELISA法测定目的基因的表达水平。混合淋巴细胞反应、过继转移实验、IL-2逆转实验和RT-PCR检测研究其诱导耐受的机制。结果心脏移植物的平均存活时间AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组(151.5d±42.8d),AdCTLA4Ig处理组(43.2d±11.1d),AdOX40Ig处理组(60.2d±11.4d)与对照组(5.7d±0.5d)和空载病毒AdEGFP处理组(5.2d±0.4d)比较明显延长(P均<0.01),并且AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组在延长移植物存活时间上明显优于AdCTLA4Ig和AdOX40Ig处理组(P均<0.01)。耐受Lewis大鼠脾细胞对供体DA大鼠脾细胞表现为低应答,并且该低应答状态能够被外源性白细胞介素-2(IL-2)部分逆转。过继转移结果说明该低应答状态能够转移给同系正常Lewis大鼠。在耐受大鼠体内发生了Th1/Th2型细胞因子偏移。结论AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig介导的基因转移能够在大鼠体内长期高效表达,并诱导异基因心脏移植物长期存活,其机制可能与T细胞无能、Th1/Th2型细胞因子偏移及其调节性T细胞等有关。     

CTLA-4 Ig融合蛋白抗小鼠同种心脏移植排斥的效果及其机制

目的：研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA－4,CD152）Ig融合蛋白（CTLA－4Ig)抗小鼠同种心脏移植排斥的效果及其体内作用的机制。方法：以C57BL／6小鼠为供,BALB／c小鼠为受行异位心脏移植术,分别腹腔注射CTLA4Ig[100μg/d,共15次]γ-球蛋白对照抗体及PBS,观察移植供心的存活时间;研究腹腔注射CTLA－4Ig后受体小鼠T细胞对同种抗原反应性的变化以及对T细胞亚群分化的影响。结果：同种心脏移植的小鼠腹腔注射CTLA－4Ig后,移植心脏存活时间较对照组显延长,40％移植心脏的存活时间长达2个月以上。CTLA－4Ig治疗后诱导受体小鼠T细胞对同种抗原低反应性,但对第三抗原的反应性无影响。受体血清中的Th1来源的IL－2、IFN－γ均明显低于PBS对照组,而Th2来源的IL－10的水平则明显高于对照组,IL－4未见明显的改变。结论：CTLA－4Ig治疗后可通过诱导受体小鼠T细胞对同种抗原低反应性以及受体T细胞由Th1向Th2分化,诱导供特异性免疫耐受的产生,显延长同种小鼠心脏移植存活期。     

环孢霉素A联合脾内肝细胞移植治疗急性肝衰竭的实验研究

目的探讨应用环孢霉素A（CsA）与同种异体肝细胞脾内移植联合治疗大鼠急性肝衰竭的疗效.方法采用硫代乙酰胺（TAA）诱导大鼠急性肝衰竭模型,24 h后随机分为三组：Ⅰ组：脾内注射浓度约为2×107个/mL肝细胞悬液1 mL,肌肉注射CsA 10 mg/（kg.d）;Ⅱ组：仅脾内注射约2×107个/mL肝细胞悬液1 mL,不用CsA;Ⅲ组：仅脾内注射生理盐水1 mL,作为空白对照.观察各组存活率、肝功能、肝脏病理变化及脾内移植肝细胞的存活情况.结果Ⅰ组、Ⅱ组1周存活率显著高于Ⅲ组（64.7%vs 12.5%,P〈0.01;56.3%vs 12.5%,P〈0.01）,但Ⅰ组和Ⅱ组之间比较无显著性差异（64.7%vs 56.3%,P〉0.05）.肝功能及病理情况在Ⅰ组、Ⅱ组有明显改善,尤以Ⅰ组最为显著.结论 CsA联合同种异体肝细胞移植能有效治疗大鼠急性肝衰竭,改善TAA诱导的肝衰竭大鼠的存活率,促进肝功能恢复及改善肝脏病理状况.     

共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用对移植肾存活的影响

目的:探讨共刺激阻断剂CTLA4Ig与雷帕霉素(Rapamycin,RPM)联合应用对大鼠移植肾存活的影响.方法:肾移植大鼠分为对照组、CTLA4Ig组、RPM组和CTLA4Ig RPM组,观察术后血肌酐和移植肾病理改变、移植肾存活时间.结果:与对照组相比,CTLA4Ig组、RPM组、CTLA4Ig RPM组移植肾存活时间均显著延长(P＜0.01),其中,CTLA4Ig RPM组移植肾存活时间最长(76.5±17.1d),术后15天、30天该组血肌酐浓度最低;术后30天,仍然存活的CTLA4Ig组移植肾显示较多淋巴细胞浸润,CTLA4Ig RPM组移植肾显示很少淋巴细胞浸润.结论:共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用可有效抑制排斥反应,显著延长大鼠移植肾存活时间.     

应用国产雷帕霉素延长肾脏移植物存活的实验研究

目的探讨国产雷帕霉素(rapamycin, RPM)及其与环孢素A(CsA)联合应用延长大鼠移植肾存活的效能.方法肾移植大鼠分为对照组、RPM组、CsA组、RPM 小剂量CsA组和RPM 大剂量CsA 4个治疗组.观察移植肾存活时间、血肌酐浓度和移植肾病理改变.结果与对照组相比,RPM组、CsA组、RPM CsA组移植肾存活时间均显著延长(P<0.01),其中,RPM 小剂量CsA组移植肾存活时间最长(69.2±10.3)d,术后15、30d组血肌酐浓度最低,未见明显的肾小管空泡变性.结论国产雷帕霉素可有效延长大鼠移植肾存活时间;与小剂量CsA合用可避免严重肾中毒,进一步延长移植肾的存活.     

短期大剂量应用CsA对甲状旁腺移植物存活期的影响

以大鼠子宫内膜下层为受区大鼠甲状旁腺同种异体移植。术前１天及术后１周短期应用口服大剂量ＣｓＡ〔２０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）〕，观察其对移植物存活期的影响。结果显示：口服ＣｓＡ组大鼠异体ＰＴＧ存活期较之对照组明显延长，说明短期应用大剂量ＣｓＡ在降低其对机体副作用的同时可起到肯定的免疫抑制作用。     

Anti-CD25 monoclonal antibody modulates cytokine expression and prolongs allografts survival in rats cardiac transplantation

Objective To investigate the role of anti- interleukin-2 receptor（CD25) monoclonal antibody in the regulation of cytokine mRNA expression of IL-1β, IL-2, CD25, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, tumour necrosis factor-α (TNFα), and interferon-γ (IFNγ) in cardiac allografts to elucidate its immunological mechanism and role in rats that have undergone cardiac transplantation. Methods These in vivo studies were conducted using a rat MHC mismatch SD to Wistar heterotopic cardiac transplant model. Simulect, an anti-CD25 antibody, was used to prevent allograft rejection. An increase in the rate of allograft survival was observed. Rats were sacrificed on day 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14 post-transplantation and hearts were harvested for furgher study. Cytokine mRNA expression was determined by semiquantitative RT-PCR. Results In the control group, cardiac allografts were rejected at 8.3±1.7 days after transplantation (mean±s).The rats who received CsA rejected the cardiac allograft at 26.4±5.7 days post-transplant. Allograft survival of Simulect-treated rats was 29.2±7.1 days (P&lt;0.05 vs controls). Rats treated with simulect and CsA had the longest survival of 55.0±11.6 days (P&lt;0.001 vs controls). CD25 mRNA expression in the heart tissue samples of treated rats was undetectable or very weak. However, the untreated group, CD25 expression increased, although anti-CD25 decreased this CD25 expression in the heart graft. Furthermore, in untreated allografts, IL-2, TNFα and IFN-γ were strongly expressed, an effect that markedly decreased after simulect treatment. Finally, IL-4, IL-5, IL-6 and IL-10 expression was strong in anti-CD25-treated allografts. Conclusions These results suggest that anti-CD25 antibody treatment may not only neutralize CD25 activity but also play a role in altering cytokine mRNA expression and prolong the survival of allografts.     

NBD多肽预处理的树突状细胞延长移植心存活时间的实验研究

目的 探讨NBD多肽预处理的供体源性树突状细胞(DC)在诱导心脏移植免疫耐受中的作用及可能机制.方法 体外培养供体源性BALB/c小鼠骨髓树突状细胞并以NBD多肽预处理(NBD多肽-DC,在小鼠心脏移植前7 d,将NBD多肽.DC输至受者C57BL/6小鼠体内.应用Cu-T建立小鼠颈部异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,病理分析检测排斥反应程度.混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性,并用ELISA方法测定受者血清Thl型细胞因子(IFN-γ和IL-12)和Th2型细胞因子(IL-4和IL-10)水平的变化.结果 NBD多肽-DC可使移植心脏存活天数延长至(21.83±3.54)d,较PBS对照组的(6.66±1.21)d明显延长(P＜0.01),降低排斥反应病理分级(Stanford 1～2级),能诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,使受者小鼠血清INF-γ和IL-12水平显著降低(P＜0.01).而IL-4和IL-10水平明显升高(P＜0.01).结论 NBD多肽预处理的供体源性DC能够诱导针对移植供者产生的特异性免疫耐受现象,其机制可能与诱导受者T细胞的抗原特异性低反应性及Th1/Th2免疫偏移有关.     

腺病毒介导CTLA4-FasL基因转移诱导大鼠心脏移植物长期存活的作用

目的　探讨腺病毒介导细胞毒T淋巴细胞相关抗原 (CTLA4 ) FasL基因转移延长异基因大鼠心脏移植物存活的作用及其相关机制。方法　供体DA大鼠心脏移植给受体LEW大鼠后 ,经门静脉注入 5× 10 9空斑形成单位 /毫升 (pfu/ml)CTLA4 FasL腺病毒 (AdCTLA4 FasL) ;随后 ,通过每天触摸受体大鼠腹壁 ,记录心脏移植物存活时间。受体大鼠尾静脉取血 ,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定CTLA4 FasL融合蛋白的体内表达 ;通过过继性转移试验、混合淋巴细胞反应 (MLR)及白细胞介素 (IL) 2逆转实验、细胞毒T细胞 (CTL)活性测定、辅助性T淋巴细胞前体 (HTLp)和细胞毒T淋巴细胞前体 (CTLp)频数测定及辅助性T细胞 (TH) 1/ 2型细胞因子检测 ,探讨耐受机制。结果　经AdCTLA4 FasL处理的受体大鼠 ,异基因心脏移植物平均存活时间达 (71 0± 2 3 7)d(n =6 ) ,而对照的未处理组、绿色荧光蛋白 (EGFP)腺病毒处理组和细胞毒T淋巴细胞相关抗原 4免疫球蛋白 (CTLA4Ig)腺病毒处理组平均存活时间分别为 (5 7± 0 5 )d(n =6 )、(5 2± 0 4 )d(n =6 )和 (4 5 7± 12 4 )d(n =6 ) ,差异具有显著意义 (均P <0 0 5 )。心脏移植物长期存活的受体大鼠对供体抗原的低应答可以被过继转移 ;MLR活性特异性降低 ,且不被外源性IL 2逆转 ;CTL活     

小鼠同种异位心脏移植模型中新型免疫抑制剂LF15—0195与环胞霉素A相互作用的研究

目的：检测LF15-0195联合环胞霉素A（CsA）治疗的相互作用。方法：在C57BL／6对BALB/c小鼠同种异位心脏移植模型中检测：（1）剂量相关作用对移植物存活的影响。（2）对长期存活的小鼠进行供体和第三方皮肤移植物移植用以评价其免疫耐受的状态。（3）LF联合应用CsA检测它们对移植物存活的相互作用。结果：单独应用高剂量LF（〉2mg／kg）可以诱导特种供体的手术免疫耐受。同时应用高剂量CsA（15mg／kg）可以阻止由LF（2mg／kg）诱导的免疫耐受。相反,短期应用LFOmg／kg）并联合应用低剂量CsA（5mg／kg）可成功诱导BALB／c小鼠心脏移植物长期存活（〉100days）。结论：单独应用高剂量LF（〉2mg／kg）可以诱导特种供体的手术免疫耐受。同时应用高剂量CsA可以阻止由LF诱导的免疫耐受,短期应用LF明显地减少了对CsA的需求量以防止免疫排斥。     

雷帕霉素联合未成熟树突状细胞诱导小鼠皮肤移植免疫耐受

目的 研究雷帕霉素联合供者骨髓来源的未成熟树突状细胞在诱导小鼠同种异基因皮肤移植免疫耐受中的协同作用.方法 健康雄性C57BL/6小鼠和BALB/C小鼠分别为供者、受者,建立同种异基因皮肤移植模型.对照组术前术后未给予任何免疫干预措施;雷帕霉素组术后第0天至第6天给予雷帕霉素灌胃;未成熟树突状细胞组将供者骨髓来源的未成熟树突状细胞于术前第7天经尾静脉输注给受者;联合组将供者骨髓来源的未成熟树突状细胞于术前第7d经尾静脉输注给受者,并在术后第0天至第6天给予雷帕霉素灌胃.结果 对照组、雷帕霉素组、未成熟树突状细胞组、联合组的皮肤移植物存活时间分别为(6.9±1.9)、(12.3±3.0)、(17.0±3.4)、(20.8±3.6)d.方差分析提示组间差异有显著性意义(P<0.05);SNK检验提示各组之间的差异均有显著意义.结论 雷帕霉素能延长小鼠皮肤移植物的存活时间;联合供者骨髓来源的未成熟树突状细胞可延长免疫耐受的持续时间.     

近交系小鼠不同供受体组合对移植心脏存活期的影响

目的:在小鼠异位心脏移植模型中观察近交系小鼠不同品系的供受体组合对于移植心脏生存时间的影响.方法:采用腹腔异位小鼠心脏移植模型,术后通过扪诊评估移植心功能,比较C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J常见近交系小鼠六种不同供受体组合生存时间的差异,并进行组织病理评分.结果:C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J六种不同供受体组合的受体心脏存活时间无统计学差异,中位生存时间均为7～8 d,而且组内生存时间差异小;移植心脏组织病理检查发现所有标本均表现为严重的排斥反应,各组间无明显差异.结论:C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J不同供受体组合均能符合移植免疫研究的要求,但是综合考虑手术难度、术后检测、喂养以及感染等因素,C57BL/6J和C3H/HeJ适合作为供体小鼠,而Ba1b/c更适合作为受体小鼠.     

62例心肌淀粉样变性患者的临床特点及预后分析

目的探讨心肌淀粉样变性（cardiac amyloidosis,CA）患者的临床特征及预后。方法回顾性分析解放军总医院经病理活检确诊为CA的62例患者临床资料,并采用COX回归模型分析影响CA预后的独立危险因素。结果 CA患者临床表现多样;心电图（ECG）以肢体导联低电压及胸前导联R波递增不良常见;心脏超声（UCG）示室间隔增厚,限制性舒张功能不全,心肌颗粒样闪光回声增强;心脏核磁（CMR）为双房扩大,左室向心性肥厚,舒张功能受限,延迟钆现象呈不同程度延迟强化。COX回归分析,影响CA预后的因素为NYHA分级、二尖瓣舒张早期血流峰速/舒张晚期血流峰速（E/A）〉1.5且心室舒张早期充盈减速时间（DT）〈150 ms。结论 CA临床表现多样缺乏特异性,心外组织活检结合临床表现、ECG、UCG及CMR可确诊。CA预后不佳,NYHA分级、E/A〉1.5且DT〈150 ms是CA预后的影响因素。     

抗ICOS单抗与小剂量环孢素A联用对大鼠心脏移植慢性排斥反应的影响

目的：探讨抗可诱导共刺激分子（inducible costimilator,ICOS）单克隆抗体与小剂量环孢素A（cyclosporine,CsA）联用对同种异基因大鼠心脏移植后移植物生存质量和慢性排斥反应的影响。方法：建立大鼠腹腔异位心脏移植模型,术后随机分为同基因移植对照组和同种异基因移植试验组,其中试验组根据术后处理不同又分为安慰剂组、常规剂量CsA组、抗-ICOS-单抗组、小剂量CsA组和抗-ICOS-单抗联合小剂量CsA组,观察各组大鼠移植心脏的存活时间及移植心组织病理学变化,对移植心长期存活（〉100d）的受体,应用流式细胞仪检测其外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。结果：单独使用不同剂量CsA者移植心脏的存活时间较安慰剂组明显延长（P〈0.05）;抗-ICOS-单抗联用小剂量CsA组移植心脏的存活时间较单用小剂量CsA组明显延长（P〈0.05）;与安慰剂组相比,单用抗-ICOS-单抗组移植心脏存活时间差异无统计学意义（P〉0.05）。移植心长期存活受体中,与常规剂量CsA组比较,联合治疗组移植心慢性排斥损伤明显减轻,而外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例有显著升高（P〈0.05）。结论：抗ICOS单抗加小剂量CsA联合免疫治疗,可有效延长大鼠移植心存活时间和减轻慢性排斥反应,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的高水平表达与诱导移植耐受、抑制慢性排斥反应有重要关联。     

雷公藤内酯醇抗心脏移植排斥反应的实验研究

目的验证雷公藤内酯醇的抗移植排斥反应作用。方法应用小鼠同种异位心肌移植模型。结果和结论雷公藤内酯醇可明显延长移植心的存活期,其免疫抑制效果与用药剂量和给药时机有关,术后给药可明显延长移植物存活期。     

心脏瓣膜术联合冠状动脉旁路移植对心脏瓣膜病患者心肌损伤的影响*

目的?探讨心脏瓣膜术联合冠状动脉旁路移植对心脏瓣膜病患者心肌损伤的影响。方法?选取2017年10月—2018年10月在新乡医学院第一附属医院治疗的心脏瓣膜病患者72例,依据入院时间单双数分为对照组和研究组。对照组进行心脏瓣膜术联合冠状动脉旁路移植非同期手术治疗;研究组进行心脏瓣膜术联合冠状动脉旁路移植同期手术治疗。比较两组心肌损伤指标水平、术后相关指标、不良事件发生状况及术后心功能指标水平。结果?两组T0、T1、T2时的心肌肌钙蛋白I（cTnI）、血清肌酸激酶同功酶MB（CK-MB）及N末端B型脑钠肽（NT-proBNP）在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P?<0.05）。两组体外循环前cTnI、CK-MB、NT-proBNP水平比较,差异无统计学意义（P?>0.05）;血运重建后cTnI、CK-MB水平均持续升高,研究组低于对照组;同时两组T0、T1时的NT-proBNP水平无变化,研究组T2时的NT-proBNP水平低于对照组（P?<0.05）。两组呼吸机应用时间、重症加强护理病房监护时间及住院时间与比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,研究组较对照组少。两组不良事件总发生率比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,研究组较对照组低。两组术前心功能指标比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。两组术后左心室射血分数、左心室舒张末期前后径、左心室收缩末期前后径及心胸比等心功能指标比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,研究组受损程度低于对照组。结论?心脏瓣膜术联合冠状动脉旁路移植是心脏瓣膜病患者治疗的有效方式。2种术式同期进行,有利于降低对患者心肌损伤的影响。术前积极改善患者心肺功能能够加强心肌保护,缩短心肌缺血时间,避免术后感染,有利于降低不良事件的发生概率,提升患者心功能指标水平,对促进患者康复有重要意义。     

白细胞介素10基因转染延长移植物存活的研究

目的　克隆大鼠白细胞介素 10 (IL - 10 )的cDNA序列并研究IL - 10基因转染对移植物的保护作用。方法　一步法从脂多糖 (LPS)刺激培养的脾细胞中提取细胞总RNA ,逆转录PCR(RT -PCR)克隆出IL - 10的cDNA。将IL - 10cDNA插入pcDNA3载体进行制备、纯化。建立大鼠异位心脏移植模型 ,在脂质体介导下将pcDNA-IL10重组体通过冠状动脉灌注转染移植心脏。观察移植心脏的存活时间 ,半定量RT -PCR法检测移植心脏IL- 10的转录水平 ,ELISA法检测IL - 10的表达水平。结果　大鼠IL - 10cDNA全长序列被成功克隆 ,序列测定证实与基因库报告的结果完全一致。基因转染的移植心脏平均存活时间明显延长 (17.8天vs 8.5天 ,P <0 .0 1) ;RT-PCR法在对照组未发现IL - 10转录 ,而在基因转染组有 3只移植心脏表现高水平转录 ;基因转染后 3天IL - 10的表达明显增加 (2 70 .8ng Lvs 3 1.5ng L ,P <0 .0 1) ,且移植心脏输出静脉血IL - 10高于外周静脉血 (2 70 .8ng Lvs 163 .5ng L)。结论　通过冠状动脉灌注能够进行基因转染 ,IL - 10基因转染可以延长移植心脏的存活时间     

二硫苏糖醇提取纯化Cavl.2钙通道片段CT3蛋白

目的：探讨二硫苏糖醇（DTT）有助于PreScission蛋白酶切除重组蛋白GST?CT3标签GST的方法。方法在大肠埃希菌BL21中转化入pGEX?6P?3/CT3重组质粒并诱导其表达,用B?PER提取纯化重组蛋白GST?CT3,在10 mmol/L DTT存在的情况下PreScission蛋白酶切除GST标签得到高浓度的CT3蛋白,进行SDS?PAGE电泳鉴定CT3蛋白。结果不含DTT情况下, PreScission蛋白酶很难切除重组蛋白GST?CT3的标签蛋白GST,而在10 mmol/L DTT存在的情况下,PreScission蛋白酶能够切除重组蛋白GST?CT3的标签蛋白GST,得到高浓度的CT3蛋白。结论10 mmol/L DTT有助于PreScission蛋白酶切除重组蛋白GST?CT3的标签蛋白GST,得到高浓度的CT3蛋白。