NS398 induces apoptosis of COX-2 negatively expressed human prostate cancer cell line PC-3 in vitro

NS398 induces apoptosis of COX-2 negatively expressed human prostate cancer cell line PC-3 in vitro@杨波$Dept Urol,Peop Hosp,Peking Univ,Beijing 100044     

Inhibitory effect of 2′-o-methoxyethyl-modified antisense oligonucleotides targeting vascular endothelial growth factor A on SKOV3 human ovarian cancer cells

Background  Ovarian cancers are often at an advanced stage at diagnosis because early detection is difficult. The poor prognosis of ovarian cancers highlights the crucial need to develop better therapeutic agents and strategies. The objective of this study was to investigate the inhibitory effects of a new modified antisense oligonucleotides targeting vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) in SKOV3 ovarian cancer cells.

Methods  Antisense oligonucleotides targeting VEGF-A was designed, synthesized and transfected into SKOV3 ovarian cancer cells. Western blotting and real-time RT-PCR were used to analyze the inhibitory effects of antisense oligonucleotides on VEGF-A protein and mRNA expression. Transwell matrix assay was used to detect cell migration inhibition.

Results  The antisense oligonucleotides targeting VEGF-A significantly decreased VEGF-A protein and mRNA expression and inhibited cell migration in SKOV3 ovarian cancer cells.

Conclusions  This new modified antisense oligonucleotides targeting VEGF-A can decrease VEGF-A expression and inhibit cell migration in SKOV3 ovarian cancer cells. This new oligonucleotides may be a promising therapeutic agent for ovarian cancers.

     

Effect of human mesenchymal stem cells expressing secreted protein IFN-β/EGFP on proliferation in prostate cancer cells line PC-3

目的 β干扰素(interferon-beta,IFN-β)/增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)真核质粒转染人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs),观察转染后的hMSCs (IFN-β-hMSCs)对前列腺癌细胞株PC-3增殖情况的影响.方法 构建IFN-β/EGFP分泌型真核表达质粒pEGFP-N2-IFN-β,脂质体介导下转染hMSCs,使用荧光显微镜检测IFN-β/EGFP蛋白中绿色荧光的表达;ELISA法检测细胞上清中IFN-β的表达水平.将IFN-β-hMSCs与PC-3在Transwell培养体系中共培养,同时设立hMSCs共培养组、空质粒转染hMSCs共培养组、PC-3单独培养组为对照组,分别于共培养后第1、3、5天对PC-3进行台盼蓝染色,计数存活细胞数目.结果 荧光显微镜下观察到IFN -β-hMSCs显示出绿色荧光,ELISA检测证实IFN-β-hMSCs的细胞上清中存在IFN-β的分泌表达.实验组PC-β细胞增殖受抑制,实验组与各对照组之间比较差异存在统计学意义(P＜0.05).结论 分泌型蛋白IFN-β/EGFP在hMSCs中可获得表达且保持其各自的生物学特性,在Transwell共培养中可以有效抑制前列腺癌细胞增殖.     

KDR反义寡核苷酸对人前列腺癌PC-3细胞增殖调控的研究

目的探讨血管内皮生长因子受体2(kinase insert domain-containing receptor,KDR)反义寡核苷酸(antisense oligode-oxynucleotides,ASODN)对人前列腺癌PC-3细胞的增殖调控作用。方法设计并合成KDR的正义、反义寡核苷酸,经脂质体介导转染人前列腺癌PC-3细胞。用噻唑盐法观察不同浓度(0.01,0.05,0.1,0.2,0.4μmol/L)正义、反义寡核苷酸及阳离子脂质体对肿瘤细胞增殖的抑制作用,RT-PCR方法检测不同浓度(0.01,0.05,0.1,0.2,0.4μmol/L)ASODN转染后KDRmRNA的表达情况,流式细胞仪分析细胞周期分布和细胞凋亡。结果转染ASODN后48 h达抑制高峰,低浓度(0.01μmol/L)即发生抑制,抑制强度与反义寡核苷酸浓度有相关性,而正义寡核苷酸和阳离子脂质体对PC-3细胞的增殖无显著影响。转染KDR反义寡核苷酸各浓度组细胞中KDR mRNA的表达都不同程度地降低,各浓度组与空白对照组相比KDR mRNA表达的差异有统计学意义。各组均出现不同程度的细胞凋亡,但各浓度组间细胞周期分布无显著性差异。结论 KDR基因在促进人前列腺癌PC-3细胞增殖中发挥着一定的作用,有望成为治疗雄激素非依赖性前列腺癌的分子靶点。     

姜黄素对前列腺癌PC-3细胞作用的研究

目的观察姜黄素对前列腺癌PC-3细胞的体外作用,并探讨其可能的作用机制。方法应用光镜形态学、MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察10、20和30μmol/L浓度的姜黄素在体外对前列腺癌PC-3细胞的作用,与其对细胞DNA含量和对bcl-2表达的影响。结果20μmol/L以上浓度的姜黄素对前列腺癌PC-3细胞具有明显的生长抑制作用(抑制率>54.5%,P<0.05),诱导凋亡(凋亡率>26.6%,P<0.05),下调bcl-2的表达,(表达率<9.5%),与阳性对照组bcl-2表达率30.7%相比,差异有显著性(P<0.05)。结论姜黄素对前列腺癌PC-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡的作用,为姜黄素应用于临床激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据。     

键合多西紫杉醇的聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用

目的研究键合多西紫杉醇(TSD)的聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物(PLA-PEG/TSD)对人前列腺癌细胞PC-3的增殖抑制作用。方法 TSD、PLA-PEG/TSD和聚乳酸-聚乙二醇(PLA-PEG)作用于PC-3细胞,应用MTT法检测各组药物在不同浓度下作用24、48、72 h后PC-3细胞的抑制率,应用流式细胞仪检测PC-3细胞周期变化,应用电镜观察PC-3细胞凋亡的形态学特征。结果 PLA-PEG/TSD和TSD比较,对PC-3细胞的增殖抑制作用相似(P>0.05),并且两组均具有浓度和时间依赖性,随药物浓度和作用时间的增加,抑制率逐渐增高。PLA-PEG和对照组比较,对PC-3细胞的增殖没有影响(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示:PLA-PEG/TSD和TSD两组PC-3细胞明显阻滞于G2/M期,两组相比较差异无统计学意义(P>0.05),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。电镜观察:PLA-PEG/TSD和TSD两组PC-3细胞凋亡的形态学特征一致。结论 PLA-PEG/TSD与TSD相比较,抑制PC-3细胞增殖的特点和机制相似,PLA-PEG/TSD在治疗前列腺癌方面有研究价值。     

人p27~(kipl)可调控性重组腺病毒载体的构建及其在PC-3细胞中的表达

目的:体外构建人p27kipl可调控性重组腺病毒载体,并观察其在前列腺癌细胞系PC-3细胞中的表达及其对细胞生长的影响。方法:采用Ad-X Tet-Off表达系统,将人全长p27kipl cDNA经过穿梭载体,与可调控性腺病毒载体骨架连接,得到重组人p27kipl基因腺病毒(Ad-p27kipl),在HEK293细胞包装、扩增,获得高滴度病毒,采用空斑试验测定病毒滴度,体外转染PC-3细胞,RT-PCR、Western杂交分别检测目的基因不同水平的表达,并通过MTT法观察转染前后细胞增殖力的变化。Ad-X-TRE-β gal病毒作为对照。结果:构建的Ad-p27kipl病毒滴度为1.2×109 pfu/ml,RT-PCR、Western杂交检测有特异的高表达,转染后对细胞的生长有抑制作用。结论:体外连接法成功地构建携带人p27kipl基因的可调控性重组腺病毒载体,在人前列腺癌细胞系PC-3中有高表达并对细胞生长有抑制作用。     

熊果酸诱导前列腺癌细胞株PC-3凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸(Ursolic acid,UA)对人前列腺癌细胞株PC-3细胞周期、凋亡的影响及其作用机制.方法:人前列腺癌细胞株PC-3以不同浓度的UA作用不同的时间后,分别使用四甲基偶氮唑蓝比色法(4 methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT),免疫组织化学SP法,流式细胞术(Flow cytometry,FCM),Western blot等实验方法检测PC-3细胞的增殖抑制情况,细胞周期和凋亡率的变化,以及细胞内bcl-2、bax 2个重要的细胞凋亡相关基因和细胞凋亡相关特殊蛋白cox-2、caspase 3表达的变化.结果:UA对PC-3细胞有增殖抑制作用,其作用随着药物浓度和作用时间的增加而增强.24、48 h和72 h 3个时间段UA分别作用于PC-3细胞后的IC_(50)分别为50.87、37.91 μmol/L和27.86μmol/L;熊果酸作用后PC-3细胞周期的主要特点是大量细胞累积于G_1期,进入S期的细胞减少.UA能够诱导PC-3细胞凋亡,经过24、48 h和72h 3个时间段UA浓度50μmol/L作用后,细胞凋亡率为6.21%、7.81%和13.31%;细胞内bcl-2和cox-2的表达随着药物浓度增加逐渐减少;bax和caspase 3蛋白的表达随着药物浓度增加逐渐增加.结论:UA能够抑制PC-3细胞的增殖,并使细胞大量累积于G_1期,进入s期的细胞减少.可能通过使bcl-2和cox-2的表达减少、bax和caspase 3蛋白的表达增加来诱导细胞凋亡.     

表皮生长因子对前列腺癌PC-3细胞分泌内皮素-1的影响

目的:探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对激素非依赖性前列腺癌(hormone refractory prostate cancer,HRPC)PC-3细胞中内皮素-1(endothelin-1,ET-1)分泌和mRNA表达的影响.方法:EGF干预后,RT-PCR测定PC-3中ET-1mRNA的表达;放免检测ET-1蛋白分泌;不同剂量EGF干预后,放免检测ET-1分泌量的变化.结果:EGF干预后,ET-1mRNA表达上调,ET-1蛋白分泌增加,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05);不同剂量EGF干预后,ET-1分泌随EGF浓度增加而增加,单因素方差分析表明,不同剂量的EGF对PC-3细胞ET-1分泌的影响不同,差异具有显著性(P＜0.05).结论:EGF可上调激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞中ET-1mRNA表达及蛋白分泌,在前列腺癌的进展中起协同作用,为HRPC的治疗提供了分子生物学基础.     

Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis Ligand Induces Apoptosis in Prostate Cancer PC-3M Cell Line

Summary： To study the effect of tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand （TRAIL） on PC-3M cell line, PC-3M cell line was incubated with gradient concentrations of TRAIL for 4-24 h. Annixin-V fluorescence staining and TUNEL method were employed to detect the apoptosis of PC-3M cells. The morphology of apoptotic PC-3M cells was observed by electron microscopy. The relationship between TRAIL concentrations and the percentage of apoptotic cells was evaluated by flow cytometry. The proliferation inhibitory ratio was calculated by using MTT colorimetry. Our results showed that apoptosis of PC-3M cells could be induced by treatment with TRAIL for at most 4 h. The results of flow cytometry and MTT colorimetry demonstrated a time-and concentration-dependent relationship between cell apoptosis rate and TRAIL concentration. It is concluded that apoptosis of PC-3M cells can be induced by TRAIL. Because of the selective killing effect of TRAIL on tumor cells, it may become a potential alternative for the treatment of advanced prostate cancer.     

糖皮质激素抑制人前列腺癌PC-3细胞系增殖的可能机制

目的:观察地塞米松对前列腺癌PC-3细胞中转录因子NF-κB及其下游靶基因cyclinD1的调节作用,探讨其抑制PC-3细胞增殖的可能机制.方法:MTT法检测地塞米松对PC-3细胞增殖的影响;转染和报告基因的方法比较多种肿瘤细胞中NF-κB的基础转录活性并检测地塞米松对PC-3细胞NF-κB转录活性的调节;Western 印迹法检测地塞米松对PC-3细胞cyclinD1蛋白表达的影响.结果:地塞米松抑制PC-3细胞的增殖;PC-3细胞中NF-κB处于组成型激活状态,地塞米松抑制PC-3细胞中转录因子NF-κB的转录活性;地塞米松下调PC-3细胞中cyclinD1蛋白的表达.结论:地塞米松抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,这可能与其抑制转录因子NF-κB的转录活性及其下游的靶基因cyclinD1的蛋白表达有关.     

Cx43在前列腺癌组织和PC-3细胞株中的表达及其意义

目的探讨缝隙连接蛋白43（Cx43）在前列腺肿瘤中的生物学意义。方法免疫组化法观察Cx43在正常组织和肿瘤组织以及体外培养的前列腺癌PC-3细胞株中的表达,并采用半定量RT-PCR法检测mRNA水平的变化。结果本实验在mRNA水平上证实PC-3细胞有Cx43 mRNA的表达,在蛋白水平上证实PC-3细胞和前列腺癌组织均有Cx43的表达,但其表达较正常者减弱,蛋白异常定位于胞浆中而非胞膜上。而且Cx43在前列腺癌组织中的表达与前列腺癌病理分级呈负相关。结论Cx43降低可能影响前列腺癌组织及前列腺癌细胞的发生和发展。     

IL-24基因联合电离辐射对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨人白细胞介素24（IL-24）基因联合X射线对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响，为IL-24基因联合电离辐射治疗肿瘤奠定实验基础。方法：检测电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为假照射组及2、4、6、8、12和18 Gy X射线照射组；检测IL-24目的基因的表达分为对照组（0.01 mol•L^-1PBS）、空载体组［pcDNA3.1(+)载体］和IL-24基因组；检测IL-24基因联合电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组（6 Gy）、空载体联合照射组以及IL-24基因联合照射组。碱裂解法提取纯化质粒DNA，用PEI转染质粒DNA至PC-3细胞中，目的基因表达的检测采用RT-PCR法。Annexin V-FITC和PI双染后，采用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果：与假照组比较，2和4 Gy X射线照射48 h后PC-3细胞凋亡百分率无明显变化，6 Gy X射线照射后细胞凋亡百分率开始明显升高（P<0.01），且细胞凋亡百分率随剂量增大而增加，约是假照组的1.6～3.0 倍。PC-3细胞中对照组和空载体组均未观察到IL-24基因的表达，而IL-24基因组则可见IL-24基因的表达；以上3组均有GAPDH基因的表达。IL-24基因联合照射组与对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组和空载体联合照射组比较，早期凋亡细胞数均有上升趋势，除单纯照射组外，与其他组比较差异均有显著性（P<0.05）；晚期凋亡和坏死细胞数也均有上升趋势，其中与对照组、单纯照射组和空载体联合照射组比较显著升高（P<0.05或P<0.001）；凋亡和坏死的总细胞数均有上升趋势，除IL-24基因组外，与其他组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：IL-24基因联合电离辐射能够有效诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡。 