人眼组织中共刺激分子、Fas/FasL及主要组织相溶性复合体类分子的免疫组织化学研究

目的　探讨正常人眼组织 (虹膜睫状体、脉络膜、视网膜 )中共刺激分子 B7- 1和 B7- 2、与凋亡相关的分子 Fas/ Fas L、人类白细胞抗原 ( human leukocyte antigen,HL A) - DR及 CD6 8(抗巨噬细胞抗体 )分子的表达及意义。　方法　 12只正常供体人眼 (死后 16～ 2 4h)均来自中山眼科中心眼库 ,将 6只供体眼组织 (虹膜睫状体、脉络膜、视网膜 )行常规冰冻切片 ,另 6只做视网膜平片 ,分别于各部分眼组织切片及视网膜平片进行免疫组织化学研究 ,探讨正常人眼组织中 B7- 1、B7- 2、HL A- DR、CD6 8、Fas/ Fas L分子的表达。　结果　人虹膜睫状体中有 B7- 2、Fas L、CD6 8、HL A- DR分子的表达 ;脉络膜中有 B7- 1、Fas L、CD6 8、HL A- DR分子的表达 ;视网膜中可见 HL A- DR、CD6 8、Fas L分子的表达 ,而无 B7- 1、B7- 2、Fas分子的表达。　结论　共刺激分子 B7- 1和 B7- 2、Fas/ Fas L及主要组织相溶性复合体 ( major histocompatibility com-plex,MHC- )类分子在不同人眼组织中的表达不同 ,这些分子的表达可能对维持人眼组织免疫环境的稳定性起着重要作用。     

交感性眼炎眼组织中共刺激分子表达的变化

目的:探讨交感性眼炎眼组织(虹膜睫状体、脉络膜、视网膜)中共刺激分子B7-1,B7-2,CD28和CTLA-4的表达意义。方法:交感性眼炎眼球石蜡标本4例,行常规石蜡切片,免疫组织化学方法探讨交感性眼炎各部分眼组织中上述分子的表达,并与正常人眼组织中各分子的表达进行比较。结果:正常人眼组织虹膜睫状体中有B7-2分子,无B7-1,CTLA-4和CD28分子;脉络膜中有B7-1分子,但无B7-2,CTLA-4和CD28分子;视网膜内无B7-1,B7-2,CTLA-4和CD28分子。而交感性眼炎的虹膜睫状体和脉络膜中均有B7-1,B7-2,CTLA-4和CD28分子,视网膜的色素上皮细胞有B7-1和B7-2分子表达,而无CD28和CTLA-4分子表达,视网膜内可见少量B7-1,B7-2,CTLA-4和CD28分子表达。结论:眼组织中B7与CD28和CTLA-4分子之间的相互作用与交感性眼炎患者葡萄膜处于持续免疫激活状态密切相关。     

γ-干扰素对人眼组织共刺激分子及Fas/FasL分子表达的影响

目的 探讨γ-干扰素对人眼组织中共刺激分子及Fas/FasL分子表达的影响。 方法 正常供体人眼9只用于实验。其中6只眼作视网膜平片，每只眼取12片视网膜平片；分别将视网膜平片放于24孔培养板中，共分为3组，每孔含Dulbecco改良Eagle(DMEM)/F12培养液2 ml，3组γ-干扰素（IFN-γ）浓度分别为0、200、1000 U/ml；37℃培养箱中培养(95%O 2，5%CO 2)24h后取出固定，用免疫组织化学方法检测各视网膜平片上B7-1、B7-2、Fas/FasL分子的表达。同时取另外3只正常人眼制作视网膜平片做为正常对照组，直接用免疫组织化学方法检测平片中上述分子的表达。 结果 正常人视网膜平片中有FasL分子的表达，但无B7-1、B7-2和Fas分子表达；当视网膜平片与IFN-γ体外培养后，视网膜中出现B7-1、B7-2和Fas分子的表达，并且FasL分子表达量增多。 结论 IFN-γ可通过诱导共刺激分子及Fas/FasL分子表达参与免疫反应的发生和诱导细胞凋亡，在T淋巴细胞的激活中起着重要作用。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 117-119)     

MMP-1、TIMP-1及TIMP-2在正常人眼前段组织的表达

目的观察正常人眼前段组织中基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)和TIMP-2的表达,探讨正常生理状态下MMP及TIMP在小梁网房水流出及葡萄膜巩膜房水流出通道中的作用。方法应用酶免疫组织化学技术,检测正常人眼前段组织中MMP-1、TIMP-1和TIMP-2的定位。阳性结果应用图像分析系统进行定量分析。结果免疫组织化学结果显示MMP-1和TIMP-2广泛分布于人眼的虹膜、睫状体(包括睫状突上皮细胞和睫状肌)、小梁网、视网膜色素上皮(RPE)层、脉络膜及巩膜,TIMP-1分布于除小梁网外的其余组织。结论MMP-1、TIMP-2广泛分布于人眼小梁网及葡萄膜巩膜房水流出通道、RPE、脉络膜,TIMP-1广泛分布于人眼葡萄膜巩膜房水流出通道及RPE、脉络膜,对维持人眼正常房水流出及维持RPE、脉络膜功能可能具有一定作用。     

增生性玻璃体视网膜病变玻璃体切割液内的细胞凋亡

目的检测增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)玻璃体切割液标本内是否存在细胞凋亡,观察Fas抗原(Fas)和Fas配体(Fas ligand,FasL)与细胞凋亡的关系。方法11例PVR新鲜玻璃体 切割液标本细胞离心涂片,末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine 5-triphosphate nick-end labelling,TUNEL)染色检测凋亡细胞,以及Fas、FasL和细胞类型特异抗原细胞角蛋白(cytokeratin,CK)免疫组织化学检测, 并与2例角膜移植后的供体眼正常对照标本的上述检查结果相对比。　结果正常人视网膜Fas和FasL弱表达。Fas、FasL、CK和凋亡见于所有PVR玻璃体切割液标本。TUNEL阳性细胞占总细胞数的20.53%。70.35%、51.58%和82.97%的细胞分别高表达Fas、FasL和CK。Fas和凋亡的直线相关系数为0.99(P<0.001)。结论PVR眼玻璃体切割液标本可见Fas、FasL的表达和细胞凋亡。Fas和FasL的高表达可能与PVR中增生的视网膜色素上皮细胞凋亡有关。(中华眼底病杂志,1999,15:78-80)     

视网膜变性小鼠视网膜组织中FasL蛋白表达的动态变化

背景 视网膜移植是治疗视网膜变性性疾病的新方法,但如何避免或减少视网膜移植后的免疫排斥反应是亟待解决的问题之一.目前的实验研究中常将正常C57 BL/6小鼠视网膜作为供体,视网膜变性(rd)小鼠作为受体.研究表明视网膜中Fas配体(FasL)蛋白通过FasL/Fas途径诱导Fas+炎症细胞凋亡,推测可能与视网膜移植后的免疫排斥反应密切相关. 目的 探讨FasL蛋白在不同鼠龄C57BL/6小鼠和rd小鼠视网膜中的表达特点,揭示小鼠视网膜的免疫特性,为视网膜移植免疫排斥反应的研究提供参考依据.方法 分别将出生后(PN)-0周(出生日)、PN-1周、PN-2周、PN-3周、PN-4周的正常C57BL/6小鼠和rd小鼠处死制备眼球冰冻切片,采用免疫荧光技术摄片,并经激光扫描共焦显微镜采集图片,用图像分析软件对各鼠龄不同品系小鼠间视网膜中FasL蛋白表达的荧光强度(FI)变化进行半定量分析. 结果 PN-1周C57BL/6小鼠视网膜发育尚不完善,FasL蛋白在视网膜各层均呈阳性表达.PN-2、3、4周C57BL/6小鼠已发育成10层的视网膜结构,FasL蛋白在视网膜色素上皮(RPE)、内节段(IS)、外界膜(OLM)、外丛状层(OPL)、内核层(INL)、内丛状层(IPL)及节细胞层(GCL)呈阳性表达.PN-1周rd小鼠视网膜结构与同龄C57BL/6小鼠接近,FasL蛋白在视网膜各层均呈阳性表达.PN-2周至PN-4周rd小鼠视网膜中外核层(ONL)细胞随着鼠龄增大逐渐减少,FasL蛋白在RPE、OPL、INL、IPL及GCL呈阳性表达;PN-2、3、4周rd小鼠RPE中FasL蛋白表达FI值分别为184.199±16.747、186.797±7.904和184.319±18.795,均明显高于同龄C57BL/6小鼠的160.402±22.851、160.995±22.799和105.787±17.676,差异均有统计学意义(t=-3.360,P=0.002;t’=-4.277,P=O.000;t=-12.175,P=0.000);各周龄rd小鼠与C57BL/6小鼠间视网膜IPL中FasL蛋白表达的FI值差异均无统计学意义(均P＞O.05).结论 rd小鼠随着鼠龄增加视网膜ONL细胞逐渐减少,其RPE内免疫赦免相关抗原FasL蛋白的表达强度明显高于同龄C57BL/6小鼠.     

人视网膜组织中核因子—κB的免疫组织化学研究

目的：探讨正常和病理条件下人视网膜组织中核因子（NF）-κB的表达和活化。方法：应用NF-κB的特异性p65单克隆抗体对7只视网膜脱离和2只继发性青光眼的人眼病理视网膜进行免疫组织化学观察。以2只正常尸体眼视网膜作对照。结果：9只病理眼视网膜均有细胞内NF-κBp65阳性染色,NF-κB活化（胞核阳性染色）主要见于内、外核层细胞,少数见于毛细血管内皮细胞和神经节细胞;2只对照眼视网膜细胞核内未见阳性染色。结论：正常人视网膜组织中无NF-κB活化,病理情况下视网膜中NF-κB活性增强。提示NF-κB可能在人视网膜病变的病理机制中发挥作用。     

大鼠角膜碱烧伤后视网膜细胞凋亡的研究

目的研究严重眼前段碱烧伤后视网膜组织内的细胞凋亡情况,以及Fas抗原(Fas)和Fas配体(Fas ligand,FasL)表达与细胞凋亡的关系。方法制作大鼠角膜严重碱烧伤模型。在烧伤的不同阶段,应用TUNEL法检测凋亡细胞、免疫组织化学法检测Fas、FasL在视网膜组织中的表达和变化,并与正常大鼠相对照。结果正常视网膜中基本未见TUNEL阳性细胞,碱烧伤3d后在视网膜神经节细胞、内核层细胞和内层血管内皮细胞中均可见不同程度的TUNEL阳性细胞。正常视网膜未见Fas表达,实验各组中均可见不同程度的Fas表达;正常视网膜FasL弱表达,实验各组FasL表达显著增强,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)。Fas和FasL表达与凋亡之间具有较好的相关性,相关系数分别为0.899(P<0.01)和0.504(P<0.01)。结论严重眼前段碱烧伤后视网膜组织细胞存在异常凋亡,凋亡可能与Fas/FasL系统有关。     

Behcet病周围血淋巴细胞Fas和FasL的表达

目的 观察Behcet病周围血淋巴细胞Fas和FasL的表达及其意义。方法 应用Oligod(T)18和M-MuLv逆反录酶方法，观察19例Behect病患者和19个正常人周围血淋巴细胞的Fas和FasL mRNA表达，并用流动细胞计和免疫荧光法进一步观察T淋巴细胞的Fas和FasL的表达。结果 Behcet病组Fas和FasL的表达明显高于对照组。Fas抗原在CD4^ 和CD86 的表达明显高于对照组，但FasL的表达与对照组无明显表达明显增设，但其分子表达不平衡，此可能是Behcet病慢性和复发性炎症的一个重要机制。     

Behcet病患者外周血淋巴细胞共刺激分子的表达

目的观察Behcet病患者外周血淋巴细胞CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、CD28、CTLA-4分子的表达。方法采用流式细胞三色直接免疫荧光标记法，对24例Behcet病患者(Behcet病组)和20个正常人(对照组)外周血T、B淋巴细胞亚群的共刺激分子CD80、CD86、CD28和CTLA-4的表达进行检测。结果Behcet病患者外周血CD ⁴⁺ T细胞表面 CTLA-4 分子的表达[(3.18±1.18)%]高于对照组[(1.73±0.66) %]，两者差异有显著性的意义(t=-3.722,P<0.01)；CD19⁺ B细胞表面CD86分子的表达[(4.49±1.73)%]高于对照组[(2.40±1.49) %]，两组比较差异有显著性的意义(t=－2.071,P<0.05)。比较两组间其它分子的表达，差异均无显著性的意义。结论Behcet病患者 B7、 CD28的相互作用促进了葡萄膜炎的发生，阻断其相互作用可能为今后葡萄膜炎的治疗提供一种新思路。(中华眼底病杂志,2003,19:357-359)     

内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎细胞凋亡的研究

目的探讨大鼠内毒素诱导的葡萄膜炎（EIU）中葡萄膜和视网膜组织浸润细胞的凋亡,及Fas-FasL的表达与细胞凋亡的相关性。方法注射霍乱弧菌内毒素诱发大鼠EIU模型,内毒素注射后6、12、18、24、48h进行临床观察评分并行组织病理学检查。应用TUNEL法检测葡萄膜和视网膜中的凋亡细胞,免疫组织化学法检测Fas和FasL在葡萄膜和视网膜中的表达和变化。结果实验组大鼠均发生了EIU;葡萄膜和视网膜组织浸润细胞中可见TUNEL染色阳性凋亡细胞,18h达高峰,以虹膜和睫状体最为明显,凋亡阳性细胞数与正常对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）;实验各组中均可见Fas表达,实验各组中FasL表达显著增强,与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。Fas和FasL的表达与凋亡之间呈正相关（r=0.923,0.807,P〈0.01）。结论EIU中葡萄膜和视网膜的浸润细胞存在凋亡现象,凋亡参与了炎症的迅速消退,Fas和FasL的高表达可能与内毒素诱导的葡萄膜炎眼组织的细胞凋亡有关。     

脂质体介导基因转染活体眼组织的研究

目的　了解活体内不同途径应用脂质体转染外源基因在眼组织的分布情况。方法　将包有 β 半乳糖苷酶基因质粒的脂质体DOSPER ,分别采用玻璃体腔内注射、尾静脉注射、表面点药及球后注射到小鼠体内 ,2h ,1,2天、1,2 ,4周后用 β gal染色法观察 β 半乳糖苷酶基因在眼组织内的分布情况。 结果　玻璃体腔内注射、尾静脉注射、表面点药及球后注射 4组的小鼠眼球组织包括角膜、虹膜、睫状体、视网膜 ,均有 β 半乳糖苷酶基因表达 ,除表面点药组外 ,其他 3组小鼠脉络膜也有 β 半乳糖苷酶基因表达。用药 1天后开始出现 β 半乳糖苷酶基因阳性表达 ,持续达 1个月以上。 结论　脂质体能有效、稳定地转染外源基因到活体眼组织的角膜、虹膜、睫状体、脉络膜、视网膜。     

葡萄膜炎的玻璃体荧光光度测定

为了比较各种类型的葡萄膜炎患者的血-视网膜屏障损害的程度,作者为38例(71眼)各种类型的葡萄膜炎患者作了玻璃体荧光光度测定。这38例包括:(1)视网膜葡萄膜炎型的Behcet病14例(27眼);(2)虹膜睫状体炎型Behcet病5例(5眼);(3)原田氏病4例(7眼);(4)虹膜睫状体炎5例(6眼);(5)后部葡萄膜炎7例(11眼);(6)视     

Vogt-小柳原田综合征患者外周血和脑脊液淋巴细胞共刺激分子的表达

目的　探讨Vogt-小柳原田综合征 (VKH)患者外周血及脑脊液淋巴细胞上B7、CD2 8和CTLA -4分子的表达及意义。方法　采用流式细胞三色直接免疫荧光标记法 ,检测了 3 9例VKH综合征患者外周血T、B淋巴细胞亚群上共刺激分子CD80 (B7-1)、CD86(B7-2 )、CD2 8和CTLA -4的表达。VKH综合征患者分为葡萄膜炎活动期 (18例 )和静止期 (2 1例 )两组。对于 3例初发的VKH综合征患者 ,我们还检查了脑脊液中T淋巴细胞上共刺激分子的表达。结果　VKH综合征活动期患者外周血CD4 T细胞表面CD2 8分子的表达有所增高 (97 0 %± 3 71% ,正常人为 95 3 %±3 19% ) ,而静止期患者有所下降 (93 7%± 7 5 6% ) ,但三组比较无显著差异。静止期患者CD4 T细胞表面CTLA -4分子的表达 (2 72 %± 1 42 % )显著高于正常人 (1 73 %± 0 66% ) (P <0 0 5 )。另外 ,VKH综合征活动期患者外周血CD4 和CD8 T细胞表面CD86分子的表达显著低于静止期患者和正常人 (P <0 0 5 )。与自身外周血淋巴细胞比较 ,3例初发VKH综合征患者脑脊液CD4 T细胞显著增多 (t=3 3 2 5 ,P <0 0 5 ) ,CD4/CD8比值显著升高 (t =3 2 76,P <0 0 5 ) ,CD2 8分子的表达也显著增高 (t =4 2 42 ,P <0 0 5 )。结论　VKH病患者外周血及脑脊液淋巴细胞上B7、CD2 8     

Fas和FasL在鼻息肉组织中的表达

目的探讨Fas和FasL在鼻息肉组织中的表达情况以及这二种凋亡相关蛋白在鼻息肉发病中的关系.方法应用S-P免疫组化法检测35例鼻息肉组织及15例下鼻甲组织中Fas和FasL的表达情况.结果(1)Fas在鼻息肉上皮及腺上皮的表达弱于对照组(P＜0.05),在嗜酸性粒细胞中表达广泛.(2)FasL在鼻息肉上皮及腺上皮的表达强于对照组(P＜O.05),未见FasL在嗜酸性粒细胞中表达.(3)鼻息肉上皮细胞中Fas和FasL蛋白的表达无相关性(P＞0.05).结论(1)Fas和FasL在鼻息肉发生发展中起一定的作用.(2)Fas、FasL在鼻息肉上皮细胞的凋亡过程中各自独立起作用.     

试题与答案

1．青少年黄色肉芽肿多累及眼部下列何种组织？ A．角膜； B．虹膜和睫状体； C．视网膜和脉络膜； D．眼外肌及眼附属器。 2．下列关于眼结节病的实验室检查结果不正确的是 A．血清血管紧张素转化酶升高； B．血清溶菌酶增加； C．OT试验阳性； D．Kveim试验阳性。     

大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中Fas/FasL表达

目的：研究大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的病理变化和Fas／FasL的表达及IL-lra对Fas／FasL表达的影响。方法：用40只Wistar大鼠作为受体，20只SD大鼠作为供体，用缝线法诱导受体大鼠角膜新生血管，建立高危角膜移植动物模型。将实验大鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。实验组从术后第一天起用IL-lra 5mg／ml点眼治疗，4次／天，共30天。对照组用相同的方法生理盐水点眼治疗。应用免疫组织化学染色方法检测IL—1ra治疗组和生理盐水对照组术后不同时期角膜植片中Fas和FasL的表达。结果：角膜移植术后Fas／FasL的表达明显升高，IL-1ra可对此产生明显的抑制作用。结论：Fas／FasL与角膜移植免疫排斥反应密切相关，IL—1ra可以抑制角膜移植免疫排斥反应中Fas／FasL的表达。     

牛眼组织中的自由基测定

使用顺磁共振仪,测定比较了真空低温条件下冻干的正常牛眼7种组织中的自由基含量。结果显示,从7种组织中均获得了明确的自由基信号(g因子=2.0048),但不同眼组织中的自由基含量差异颇大。每克干重的虹膜、睫状体、脉络膜、巩膜、视网膜、角膜和晶状体之自由基含量依次为1.74(±0.27)×10~(16)自旋数(N)、1.71(±0.18)×10~(16)N、1.54(±0.23)x10~(16)N、1.00(±0.09)×10~(15)、7.29(±1.43)×10~(14)N,4.45(±0.92)×10~(14)N和1.06(±0.16)×10~(14)N。     

人眼组织中的组胺

以往的研究表明,多种哺乳类和非哺乳类动物的不同组织都或多或少地含有组胺,其眼部的各种组织中也含有不等量的组胺。但人眼组织是否含有组胺尚无人报道。为研究人眼组织中的组胺水平及分布,作者取20个新鲜眼球测定了视网膜、脉络膜、虹膜、睫状体、巩膜及视神经等部位的组胺含量。这20个眼球源于三组病人:第一组为眼内炎组,共6例,平均年龄为57.1岁;第二组是角     

内皮素及其眼部效应

内皮素是重要的调节肽，参与机体自身调节络的功能调节。近年研究发现，眼组织中内皮素及其受体主要存在于虹膜、睫状体、脉络膜、视网膜和视神经。