生物素-亲和素-酶复合物免疫酶斑点法检测抗DNA抗体

我们用自制的生物素-葡萄球菌A 蛋白(B-BPA),建立了生物素-亲和素-酶复合物免疫酶斑点法(BAC-IEST),检测血清中的抗DNA 抗体,与免疫酶斑点法(IEST)相比,能提高检测的敏感度。     

生物素——抗生物素ELISA法检测HB_sAg

我们用生物素——抗生物素ELISA检测318份经RPHA法检测HB_sAg阴牲的标本,结果本法有52份阳牲,方法与结果如下。一、操作步骤:加抗—HB_s0.1ml/孔包被,置4℃24小时,洗涤3次,加血清0.1ml/孔,并设阴性、阳性、空白时照孔,置37℃1.5小时,洗涤3次;     

生物素-亲合素ELISA技术检测HBV多聚白蛋白受体

HBV 的人血清多聚白蛋白受体P(HSA-R)与病毒的感染和复制有密切关系,对临床早期诊断、了解预后及制备高效价乙肝疫苗有重要意义。我们采用生物素-亲合素系统(BAS),建立测定PHSA-R 的生物素-亲合素ELISA 技术。本法灵敏度高,特异性强,重复性好,适于临床推广应用.一、材料与方法1.人血清白蛋白(上海生物制品研究所物批号86-86-1).按Lenkei 等(Experimentia1979;     

亲和素生物素化酶复合物—ELISA法定量检测红细胞相关IgG

以Coombs试验诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA),国外假阴性率约为10％,国内报告高达30％,以致许多研究者都拟建立精确定量的方法来协助诊断和观察疗效。我们于1988年建立亲和素生物素化酶复合物-酶联免疫吸附试验(ABC—ELISA法)定量检测红细胞相关IgG(erythrocyteassociated IgG,EAIgG)。     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

生物素-亲和素技术锚定肝素于胰岛表面

霄：罩胰岛微血管在胰岛分离过程中被破坏，进而影响移植后胰岛的营养供应。肝素对于血管的再生具有非常重要的意义；同时，临床胰岛移植多应用肝素来抑制血栓形成，但全身肝素化增加了出血的风险。而亲和素同时具备生物素和肝素2个较强的结合位点。目的：利用亲和素这一特性，应用生物素亲和素技术，将肝素锚定了二胰岛的表面，促进胰岛再血管化，同时达到避免全身应用大剂量肝素带来出血风险的目的。方法：根据Ricordi自动化法分离纯化成人胰腺，然后将成人胰岛依次和0，0．5，1，1。5，2g／L生物素（包括生物素N-羟基丁二酰亚胺酯、长臂活化生物素、肼化生物胞素、生物素酰肼、TFP-biotin），1g／L亲和素素，0．5，1．0，1．5，2．0g／L肝素孵育培养，观察肝素化变化。结果与理论；TFP－biotin介导胰岛表面肝素化效果最好，且其肝素化前后胰岛活力率变化的差异无显著性意义（P＞0．05），同时肝素化和未肝素化胰岛具备相似的胰岛素释放反应（P，O。05）。提示生物素一亲和素技术是一种安全、有效的胰岛表面肝素化处理方法。     

亲和素-生物素复合物在免疫学中的应用

亲和素—生物素复合物(avidin-biotinComplex,以下简称ABC)在免疫学中没有已知的天然作用,生物素是一种维生素,和其它维生素一样对免疫系统可能有间接的重要性。而亲和素是糖蛋白,它在组织损伤和胚胎发育中倒确实是在免疫系统中起着重要的抗微生物作用,虽然这种作用的精确性质还有待于确定。     

外源性生物素对基于生物素 - 链霉亲和素化学发光技术干扰的研究进展

基于生物素 - 链霉亲和素系统的化学发光技术被广泛应用，但外源性生物素会对其产生干扰，这种干扰与多种因素相关，如反应模式、检测平台、检测项目和反应体系中的相关要素等。这些因素任何一种发生改变都将对干扰产生不同程度的影响。及时准确的识别干扰有助于减少临床误诊和漏诊。该文对国内外所报道的影响干扰的因素进行综述，为临床实验室人员提供借鉴。     

生物素-亲和素-免疫印迹技术在癌胚抗原鉴定中的应用

目的建立CEA提取物纯度灵敏、可靠的免疫纯鉴定方法.方法使用生物素-亲和素-免疫印迹技术.用过碘酸钠偶联亲和素与辣根过氧化物酶;生物素与N-羟基琥珀亚胺反应生成N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯;再用生物素酯标记CEA单抗.结果 CEA提取物与标准分子量经SDS-PAGE电泳后,一半凝胶用考马思亮兰染色,另一半凝胶进行转移电泳.对硝酸纤维素膜进行BA-酶免疫染色.通过比较凝胶染色带和硝酸纤维素膜的染色带,判断CEA的提取物是否达到免疫纯.结论用建立的该方法可进行CEA提取物免疫纯的鉴定.     

生物素-亲和素-免疫印迹技术在癌胚抗原鉴定中的应用

目的建立CEA提取物纯度灵敏、可靠的免疫纯鉴定方法。方法使用生物素-亲和素-免疫印迹技术。用过碘酸钠偶联亲和素与辣根过氧化物酶：生物素与N-羟基琥珀亚胺反应生成N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯；再用生物素酯标记CEA单抗。结果CEA提取物与标准分子量经SDS—PAGE电泳后，一半凝胶用考马思亮兰染色，另一半凝胶进行转移电泳。对硝酸纤维素膜进行BA-酶免疫染色。通过比较凝胶染色带和硝酸纤维素膜的染色带．判断CEA的提取物是否达到免疫纯。结论用建立的该方法可进行CEA提取物免疫纯的鉴定。     

应用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统检测抗环瓜氨酸肽抗体

目的用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统建立一种敏感、特异、经济简便的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的测定法。方法用链霉亲合素(SA)预包被,使生物素化的CCP(bio-CCP)固相化,摸索检测抗CCP抗体的最优实验条件,并进行方法学考核和临床应用评价。结果本法对类风湿关节炎(RA)的诊断敏感性为69.4%,特异性为96.8%,阳性预测值为89.1%,阴性预测值为94.1%,阳性似然比为19.28,阴性似然比为0.317,Youden指数为0.658。与欧蒙试剂比对,两法所测抗CCP抗体吸光度/cutoff比值显著相关(n=61,r=0.9253,P<0.001)。在所统计的168例血清样本中,两法同时阳性者60例,同时阴性者105例,一致性百分率达98.2%,结果具有高度一致性(Kappa=0.961,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示本法所测抗CCP抗体对RA诊断准确性达到了一个较高水平(AUCROC值=0.901)。在13例诊断为早期RA者中,有10例抗CCP抗体阳性(阳性率76.9%),未发现抗CCP抗体与RA患者临床症状、疾病活动指标(ESR)及RF水平有关。结论成功将生物素-链霉亲合素ELIS...     

生物素链亲合素ELISA检测人肿瘤坏死因子

我们以国产重组肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）为原料，制备了高质量的抗血清，采用生物素链亲合素系统，建立了检测人血清ＴＮＦα的ＥＬＩＳＡ法，方法灵敏、准确。１材料和方法１．１试剂ＴＮＦα标准品购自北京邦定生物医学公司，重组人ＴＮＦα为南京军区军事医学研究所...     

生物素链霉亲和素系统基因芯片检测ApoE基因多态性

目的建立一种准确、简便、低成本的临床实用型Apo E基因多态性芯片检测技术。方法通过基因文库获取Apo E基因全序列;以Primer Primer 5.0设计探针和引物,oligo6验证。摸索PCR扩增条件,产物测序确认;质粒构建并测序确认。探针点样在含链亲蛋白的基因芯片(专利技术)上,待检样品以生物素d UTP标记3'端进行扩增,然后与基因芯片杂交洗脱,阳性结果为纳米金紫红色的圆点状,肉眼即可判断实验结果。以本法检测160例临床样本,并进行测序验证。结果基因芯片检测完毕后通过肉眼识别紫色点状(生物素-链霉亲和素系统biotin-streptavidin systems,BSAS)分布位置,由此可准确分辨Apo E基因型。临床样本实测结果与测序结果具高度一致性(kappa=0.971,P0.001)。结论在具备标准基因实验室的条件下即可应用此技术进行Apo E基因多态性分析,可临床常规应用。     

生物素-亲和素桥接系统在骨组织工程中的应用

目的:观察生物素-亲和素桥接系统(avidin-biotin binding system,ABBS)对骨组织工程中种子细胞与支架材料黏附的影响,探讨ABBS在骨组织工程的作用。方法:以脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为种子细胞、β磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)作为支架材料建立组织工程骨模型。实验分为两组,对照组:ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合;实验组:ABBS修饰的ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合。通过免疫荧光以及流式细胞仪检测ADSCs生物素化的效率。计算并比较两组的细胞黏附率;在扫描电镜下观察ADSCs与多孔β-TCP支架黏附的表面情况。结果:生物素化的ADSCs荧光染色显示生物素结合部位在细胞胞质,且流式细胞仪检测提示生物素化细胞阳性率为95%。ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合10min、30min、60min、12h、24h时,对照组和实验组的细胞黏附率分别为(2.31±0.14)%和(21.75±4.69)%、(11.96±2.53)%和(54.82±12.37)%、(33.48±9.51)%和(78.69±15.65)%、(78.29±10.63)%和(95.46±7.38)%、(94.79±10.42)%和(98.13±1.45)%。生物素化的ADSCs与亲和素化多孔β-TCP支架材料的黏附效果在10min、30min、60min、12h4个时间点明显高于未修饰的ADSCs与多孔β-TCP支架的黏附效果(P0.05)。电镜下观察,ABBS组与对照组无明显差别。结论:ABBS可以促进ADSCs在支架上早期黏附,有利于细胞增殖,并且对组织工程骨的生物相容性无明显影响。     

检测烟曲霉菌GM抗原生物素-亲和素-夹心酶联免疫吸附试验法的建立

本研究用重组烟曲霉半乳糖甘露聚糖 (ＡＦＭＰ1) ,制备免疫血清 ,建立一种以生物素 亲和素 (ＢＡ)系统为基础的夹心酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)法 ,快速检测烟曲霉ＧＭ抗原[1] 。一、材料与方法1.动物和菌株来源 :家兔和豚鼠购自第一军医大学动物所 ,表达ＧＳＴ ＡＦＭＰ1融合蛋白ＢＬ2 1菌种及全部真菌标准株均由香港大学微生物系提供。2 .主要试剂 :ＧＳＴ融合蛋白纯化试剂盒、ＰｒｏｔｅｉｎＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ 4Ｂ和ＥＣＬ底物显色剂 (ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａ公司 ) ,弗氏佐剂 (Ｓｉｇｍａ产品 ) ,活化Ｓｕｌｆｏ ＮＨ…     

血浆18-羟皮质醇亲和素-生物素酶联免疫测定方法的建立

本文用自制18-羟皮质醇抗血清,建立血浆18-羟皮质醇竞争性ABC-ELISA.同时测定部分正常人、原发性醛固酮增多症(原醛)和原发性高血压病人血浆18-羟皮质醇水平.结果该方法批内变异为6.6%～8.1%,批间变异为11.3%～12.2%,平均回收率为102.1%,最低可测定限为0.42 nmol.L-1,正常参考值为3.0±1.7 nmol.L-1.原醛腺瘤组血浆18-羟皮质醇明显高于原醛增生组,原发性高血压组和正常组(P＜0.05),后三组之间无显著性差异(P＞0.05).鉴于本法具有简便、灵敏、稳定等特点,可提供一种原醛诊断和鉴别诊断新的检测手段.     

生物素—链霉亲和素系统试剂在检测HBsAg中的应用

从ELISA用于检测抗原抗体以来,衍生的各种改良方法不断涌现,使乙型肝炎诊断技术逐步改进和完善。ELISA与生物素一亲和素系统的结合,增高了检测的敏感性,但由于亲和素(AV)对聚苯乙烯有较高的阴性显色,近几年,链霉亲和素(SA)的问世,     

生物素—链霉亲和素系统在检测HBe系统中的应用

应用链霉亲和素(SA)和生物素系统发展成ELISA 的改良法,用于检测HBeAg 和抗-HBe,取得较为满意的效果。标记SA—HRP 时,两者的重量比以0.5～0.8/1为佳,浓度以7μg/ml 时最为理想;SA-HRP 的反应时间以30 min 为适宜。本法和BA 法、普通法进行检测抗-HBe 的灵敏度比较,其相对灵敏度高于后二者。用Abbott 试剂作为标准。检测HBeAg 100人份、抗-HBe 87人份,其阳性、阴性及总符合率均高于BA 法和普通ELISA,BSA 法提高了方法的特异性及灵敏度,在应用上有着广阔的前景。