生物素-亲和素呈色法测定血清载脂蛋白多态性

目的 探讨用生物素-亲和素作呈色系统在检测血清载脂蛋白(ApoA)多态性时的灵敏性。方法 应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺垂直板电泳(SDS—PAGE)及免疫印迹分析技术，以ApoA单克隆抗体为一抗，生物素标记的抗IgG为二抗和链霉素亲和素-过氧化物酶系统检测ApoA多态性。结果 检测210例人群，检出率81．4％，检出最小量92ng。结论本法特异性强，灵敏度高。     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

BSA系统ELISA检测前列腺特异抗原方法的建立

前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1].国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备.我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍.     

结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用

目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.     

BSA系统ELISA检测前列腺特异抗原方法的建立

前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1]。国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备。我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍。一、材料和方法1.材料　PSA及兔抗PSA血清见文献[2];活化生物素及链霉亲和素(SA),章谷生教授惠赠。2.方法(1)活化生物素标记兔抗PSA及最佳条件选择　活化生物素用二甲基酰胺法标记兔抗PSA。经多次棋盘滴定确定,每mg抗体标记150μg活化生物素最好,抗体最佳包被浓度为2.5μg/ml,Bio-Ab最适工作滴度为1∶300。(2)SA…     

靶向纳米脂质超声造影剂制备及其体外寻靶能力实验研究

目的 制备一种靶向乳腺癌的纳米脂质超声造影剂,并观察其体外寻靶能力.方法 制备生物素化抗人乳腺癌细胞单克隆抗体Neu(F-11),并检测其生物素化程度和活性;通过生物素-亲和素系统制备靶向纳米脂质超声造影剂,用免疫荧光染色定性检测造影剂与抗体的连接情况,通过靶向造影剂与不同细胞的结合实验检测其寻靶能力.结果 每分子抗体可结合的生物素数目平均为7个,生物素化抗体的活性与游离单抗相比未见明显降低;免疫荧光染色显示靶向纳米脂质超声造影剂表面可见明亮的红色环状荧光,细胞结合实验显示其可与乳腺癌细胞特异性牢固结合.结论 生物素-亲和素系统可使造影剂与抗体牢固结合,所制得的靶向纳米脂质超声造影剂在体外具有较强的寻靶能力.     

铁蛋白笼形纳米颗粒应用于HIV-1P24抗原高灵敏检测的研究

目的构建以铁蛋白笼形纳米颗粒为基础的分子展示平台,并应用于HIV-1P24抗原检测,实现低丰度、高灵敏检测。方法采用分子生物学手段,构建生物素耦联的铁蛋白笼形纳米颗粒,基于链霉亲和素与生物素特异性结合,将其应用于HIV-1P24抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测中,并测试其检测灵敏度。结果构建出具有链霉亲和素特异性结合能力的生物素化铁蛋白笼形纳米颗粒,应用到HIV-1的P24抗原ELISA检测中,实现0.1ng/mL的检测下限,显著提高检测灵敏度。结论成功建立基于铁蛋白笼形纳米结构的分子展示平台,以HIV-1P24抗原ELISA检测为例,该平台能够应用于低丰度、高灵敏检测。     

生物素-亲和素-酶复合物免疫酶斑点法检测抗DNA抗体

我们用自制的生物素-葡萄球菌A 蛋白(B-BPA),建立了生物素-亲和素-酶复合物免疫酶斑点法(BAC-IEST),检测血清中的抗DNA 抗体,与免疫酶斑点法(IEST)相比,能提高检测的敏感度。     

免疫PCR检测HIV-p24抗原的实验研究

目的建立检测HIV-p24抗原的高灵敏度免疫PCR方法。方法以金磁微粒为免疫PCR载体、鼠抗HIV-p24单抗为捕获抗体、生物素化的羊抗p24多克隆抗体为检测抗体,通过链亲和素的桥联标记生物素化的多抗,被双抗体夹心捕获的人重组HIV-p24抗原通过PCR扩增报告DNA的方式予以检测;用方阵滴定法确定最适链亲和素和标记DNA浓度,用Quantity One凝胶定量软件分析电泳图像。结果链亲和素浓度和用于标记的DNA的浓度分别控制在0.1mg/L和10ng/L;免疫PCR检测的灵敏度为0.1ng/L,比传统ELISA法检测的灵敏度高。结论高灵敏度的免疫PCR适用于早期筛检HIV-p24抗原。     

甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素化学发光免疫检测方法的建立及分析性能评估

目的 构建甲氧基肾上腺素(MN)和甲氧基去甲肾上腺素(NMN)的化学发光免疫检测试剂.方法 将MN、NMN的特异性抗体分别包被到磁微粒表面,通过标本前处理工艺将待测物生物素化,把与生物素特异性结合的亲和素用辣根过氧化物酶(HRP)标记,通过免疫反应,可以形成固相化的抗体-待测物-生物素-亲和素-HRP免疫反应产物.结果 分别建立了MN、NMN的校准曲线,通过性能评估试验测得该检测试剂与多种结构类似物均无明显的交叉反应;MN检测试剂的分析灵敏度为10.21 ng/mL,NMN检测试剂的分析灵敏度为6.91 ng/mL;MN、NMN检测试剂变异系数分别为4.79％～5.25％、3.85％～4.73％;且两种检测试剂的稳定性评估结果显示试剂稳定性较好.结论 该研究成功构建了MN、NMN化学发光免疫检测试剂.     

BA-免疫印迹法检测AFP异质体

本文将生物素－亲和素系统与免疫印迹技术相结合,提高了ＡＦＰ异质体的检测灵敏度,操作简便快速、便于临床批量标本的检测。１材料与方法１．１材料马抗人ＡＦＰ,抗人ＡＦＰ单抗均为上海生物制品研究所产品。胃蛋白酶为Ｓｉｇｍａ公司产品,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００为...     

平行板流动腔法评价生物素化脂质微泡制备效果

目的 制备生物素化脂质微泡,并应用平行板流动腔检测流体切应力对生物素化脂质微泡与链亲和素结合稳定性的影响,为进一步开展超声分子成像研究奠定基础.方法 采用声振法制备出表面携有生物素分子的脂质微泡,与普通脂质微泡对照,应用平行板流动腔模型,设置不同流体剪切应力,观察与链亲和素靶向结合的生物素化微泡的黏附效果.结果 在不同浓度链亲和素包被的平行板流动腔中均见生物素化微泡结合;随着链亲和素包被浓度的提高,靶向结合的生物素化脂质微泡抗流体剪切应力能力明显提高.结论 应用平行板流动腔模型能成功检测生物素化微泡的靶向黏附效果,该模型可推广应用于其他靶向微泡制备成功后靶向黏附能力的体外检测.     

生物素—链霉亲和素免疫学法测定地高辛直接包被方法的研究

笔者曾经成功地应用德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｈｅｉｍ公司生产的现成的链霉亲和素包被管建立了生物素－链霉亲和素免疫学潮测定地高辛的反应模型。本文用国产的链霉亲和素自行包被，采用的是一种直接包被方法，即将链霉亲和素溶于去离子水，冰箱过液包被２４ｈ，并应用到地高辛的临床检测中，其灵敏度为０．０７８１μｇ／Ｌ，最低检测限为０．１９５２μｇ／Ｌ，测定三份低、中、高浓度血清标本，批内变异系数分别为８．７％     

超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响

目的 探讨超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响.方法 应用生物素-链霉亲和素连接系统,使注射用六氟化硫微泡(SonoVue)与特异性抗血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)抗体相连接,用间接免疫荧光法检测抗体与微泡的连接,用马尔文激光粒径分析仪分别测定生物素化处理前后微泡的粒径,采用超声诊断仪评价微泡靶向化构建前后的显像效果.结果 SonoVue与特异性抗体成功连接,间接免疫荧光检测呈阳性.生物素修饰后的微泡粒径分布变窄,与普通微泡的超声显像效果略有差异.结论 通过生物素-链霉亲和素系统可以成功靶向化构建超声微泡,靶向化处理因素对微泡的粒径有一定影响,对微泡的超声显影效果略有影响.     

BAS-TRFIA法检测抗环瓜氨酸肽抗体方法学的建立

目的利用生物素-链霉亲和素放大系统建立一种可快速、灵敏地定量检测患者血清中抗环瓜氨酸肽(anticyclic citrullinated peptide,CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)。方法将链霉亲和素同铕标记二乙烯三胺五乙酸酐结合制备铕标记链霉亲和素衍生物;生物素同兔抗人IgG抗体结合制备生物素化IgG抗体,后者在免疫检测系统中可联结铕标记亲和素和抗CCP抗体从而形成复合物。最后通过测量Eu3+-链霉亲和素在615nm的荧光值计算血清抗CCP抗体水平。结果该方法具有更宽的线性范围,其线性范围为0.58-9463U/ml,而应用ELISA试剂盒检测线性范围只有18.48-591.4U/ml。此外,该方法的抗CCP抗体检测限可达0.5U/mL。回收率为96.45-104.63%。用BAS-TRFIA和ELISA法测得的值具有很好的相关性(R2=0.892 7)。结论本研究数据表明我们的建立的BAS-TRFIA法在测定抗CCP抗体上较传统ELISA试剂盒有很大改进,为RA的诊断和治疗提供了一个更为理想的免疫方法学选择。     

生物素-亲和素系统用于DNA芯片显色分析乙型肝炎病毒基因多态性

目的 利用生物素-亲和素系统使DNA芯片显色,用于乙型肝炎病毒基因(HBV DNA)多态性分析。方法 将标记生物素的dUTP在双重聚合酶链反应(PCR)时掺入DNA样品目的断片,并将目的断片杂交于含HBV核苷酸序列(1896、1814、1762、1764、P区552)的野生型及突变型探针的DNA芯片上,用亲和素-碱性磷酸酶进行显色,并转印于尼龙膜上,再用光学扫描仪读取结果。结果 42例乙型肝炎患者HBV核苷酸序列1896、1814、1762、1764、P区552位点突变率分别为40％、31％、50％、50％、10％;该法检测敏感度为5.6×10~2病毒考贝数/ml;特异性高;强、弱阳性批内变异系数(CV)分别为15.1％和19.8％。结论 生物素-亲和素系统用于HBV DNA多态性芯片显色,方法简便,不需特殊设备,易于推广应用。     

肺移植前后可溶性细胞间黏附分子1的变化

背景:应用生物素一链亲和素系统建立的可溶性细胞间黏附分子1测定法,是一种敏感度高、可测范围广的检测方法.目的:建立可溶性细胞间黏附分子1生物素链亲和素系统时间分辨荧光免疫分析方法并应用于临床,探讨肺移植前后血清可溶性细胞间黏附分子1的变化及临床意义.方法:使用2株匹配的单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体,利用制备的铕标记链亲和素(SA-Eu")作为示踪物并与生物素化的检测抗体特异结合,建立双位点多层夹心法,通过对30例健康人血清可溶性细胞间黏附分子1检测和26例肺移植受者手术前后血清可溶性细胞间黏附分子1的变化测定,对可溶性细胞间黏附分子1生物素链亲和素系统方法学和在肺移植术前后的临床应用价值进行评价.结果与结论:30例健康对照测定结果为(348.63±69.12)μg/L.移植前可溶性细胞间黏附分子1与对照组无显著性差别;移植后,各组与对照组之间比较差异有显著性意义(P<0.05),急性排斥反应时血清可溶性细胞间黏附分子1升高,并发感染时降低,但各组之间比较无明显差别.表明可溶性细胞间黏附分子1生物素一链亲和素系统是一种新型的高灵敏度、宽范围的非放射性标记免疫分析法,对肺移植受者移植前后监测血清可溶性细胞间黏附分子1可作为辅助诊断急性排斥反应的免疫学指标.     

生物素对生物素-链酶亲合素免疫分析系统干扰的研究进展

外源性生物素对生物素-链酶亲合素免疫分析系统的干扰,近几年引起了关注。对使用该系统方法进行检测的常规项目,如激素、心肌标志物和肿瘤标志物检测结果受到生物素不同程度的干扰,导致结果异常,甚至造成疾病的误诊或误治。本文对生物素的应用及其干扰生物素-链酶亲合素免疫分析系统的情况及其对策进行概述。     

超声微泡-阳离子纳米脂质体复合体制备的实验研究

目的 利用生物素亲和素系统连接超声微泡与阳离子纳米脂质体,制备一种新型的基因载体.方法 机械振荡法制备生物素化超声微泡(Bio-MB).薄膜分散-膜挤压法制备生物素化阳离子纳米脂质体(Bio-CNLP).采用生物素亲和素系统偶联Bio-MB与Bio-CNLP.以非生物素化超声微泡(MB)加非生物素化阳离子纳米脂质体(CNLP)组作为对照,行激光共聚焦显微镜观察复合物形态与连接效果.结果 Bio-CNLP的平均粒径约291.7 nm,平均表面电荷约(21.6±2.1)mV.激光共聚焦显微镜下Bio-MB+Bio-CNLP组可见绿色Bio-MB壁因连接Bio-CNLP而不光滑,周围可见红色小圆形点状Bio-CNLP呈花环状聚集,而MB+CNLP组MB壁光滑,周围未见CNLP聚集.结论 生物素亲和素系统可成功将Bio-CNLP与Bio-MB牢固连接,有望为肿瘤基因治疗提供一种新的手段,为探索基因载体和转染方法提供一种新的思路.     

含生物素化脂膜超声造影剂的制备与初步评价

目的 制备一种含生物素化脂膜的超声造影剂,并对其功能进行初步评价.方法 以冷冻干燥法在自制＂脂氟显＂（对照微泡）的基础上制备含生物素化脂膜超声造影剂微泡,检测其理化性质和造影功能,同时应用激光共聚焦显微镜和平行板流动腔法观察含生物素化脂膜微泡与链亲和素的黏附性.结果 ①含生物素化脂膜微泡造影剂在理化性质与小鼠肝脏造影显像方面能力与对照微泡比较差异无统计学意义（P〉0.05）;②与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的链亲和素孵育后,含生物素化脂膜微泡荧光检测呈阳性,对照微泡为阴性;③含生物素化脂膜微泡可结合于链亲和素包被的培养皿上,且随着链亲和素包被浓度的增加其结合稳定性也相应提高.结论 应用冷冻干燥法在制备＂脂氟显＂微泡造影剂的基础上,可成功制备含生物素化脂膜超声微泡造影剂,为今后制备靶向显影及载药（基因）超声造影剂奠定了基础.