金黄仓鼠病毒抗体ELISA检测方法建立及其应用

用酶标兔抗仓鼠ＩｇＧ,建立了检测金黄仓鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、仙台毒、呼肠孤病毒３型和小鼠肺炎病毒感染的ＥＬＩＳＡ方法。本法与酶标ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ法比较,金黄仓鼠抗体阳性检出率高一倍且特异性高。结果表明此法是一种敏感性和特异性均理想的方法。e     

大鼠细小病毒H-1株和KRV株双重PCR检测方法的建立及应用

目的 建立大鼠细小病毒H-1和KRV株双重PCR方法并对方法进行初步应用。 方法 根据NCBI发表的H-1(NC_001358)和KRV(U790330)基因组序列分别设计特异引物, 以H-1和KRV 病毒DNA为模板建立双重PCR方法, 对方法进行优化后验证方法的敏感性和特异性;经口感染大鼠, 分为H-1和KRV单独感染组和混合感染组, 感染后第2, 4, 6, 8, 10天采集大鼠粪便, 第10天处死所有大鼠, 采集心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物等组织, 用建立的方法对粪便和组织样本进行检测。结果 建立的双重PCR方法以H-1和KRV为模板能够分别扩增出183 bp和302 bp 2个条带, 敏感性验证显示能够检测到的最低H-1量为3.8 pg/mL, 最低KRV量为0.73 pg/mL;在以小鼠微小病毒、犬细小病毒和猫细小病毒为模板时无任何条带扩增出, 特异性良好。感染第2天在所有大鼠粪便中均检测到病毒核酸, 感染大鼠均无明显临床症状, 感染第10天采集组织, H-1在各组织的检出率分别是心50%(4/8), 肝50%(4/8), 脾62.5%(5/8), 肺50%(4/8), 肾37.5%(3/8), 盲肠内容物62.5%(5/8), 且单独感染组检出率高于混合感染组;KRV在各组织的检出率分别是心0(0/8), 肝25%(2/8), 脾87.5%(7/8), 肺12.5%(1/8), 肾25%(2/8), 盲肠内容物62.5%(5/8), 混合感染组检出率高于单独感染组。结论 建立的H-1和KRV双重PCR方法能够高效的检测大鼠粪便及组织中的病毒感染, 可作为实验动物国家标准的有力补充。     

肿瘤及对照人群血清细小病毒H1抗体检测

细小病毒能抑制自发和诱发的肿瘤形成，具有明显的抗肿瘤作用。人群血清流行病学研究表明细小病毒ＡＡＶ感染和宫颈癌的低发生率有关。本文用血凝抑制试验检测肿瘤患者乾和健康对照人群血清细小病毒Ｈ１抗体。结果表明，４１４例肿瘤患者血清中３例抗细小病毒Ｈ１抗体阳性（０．７５％），对照血清４２０例中有２１例阳性（５．０％）。肿瘤患者血清细小病毒Ｈ１抗体阳性率明显低于对照人群（Ｐ〈０．００１）。提示细小病毒Ｈ１感染     

细小病毒H-1感染对胃癌细胞核修复相关基因表达的影响

目的 探讨细小病毒H-1诱导胃癌细胞死亡的可能机制。方法 选取对细小病毒H-1敏感和不敏感的胃癌细胞株HGC27和BGC823，H-1病毒感染48h后提取细胞总RNA。应用不同标记的dCTP逆转录制备荧光探针，与含有8000点人类体细胞基因序列的表达谱cDNA芯片杂交，计算机荧光扫描分析HGC27细胞核修复相关基因表达谱的改变。实时定量PCR检测HGC27和BGC823细胞部分核修复相关基因的表达。结果基因芯片分析显示，HGC27细胞的64对核修复相关基因中，12对基因表达水平下调至0．5以下，6对基因表达水平上调至2倍以上。PCR定量检测证实，HGC27细胞BTG2表达明显下调，MBD2表达显著上调，XRCC4和H2A-Z的表达无明显改变；BGC823细胞BTG2表达明显下调，XRCC4、H2A．Z和MBD2表达无明显改变。结论 细小病毒H-1可能通过影响胃癌细胞核修复通路相关基因的表达，使细胞基因转录或细胞周期停止，从而诱导胃癌细胞死亡。     

大鼠细小病毒双重PCR检测方法的建立

目的 建立快速检测大鼠细小病毒的PCR方法.方法 根据大鼠细小病毒基因序列的特点,建立鉴别检测大鼠细小病-(RPV)与其他三种大鼠细小病毒(H-1、KRV、RMV)的双重PCR方法.根据RPV核酸序列的性质,在VP2基因筛选了一对用于特异扩增RPV株的引物,在NS1基因设计了一对用于特异性扩增H-1,KRV和RMV的引物.结果 两对引物组成的二重PCR方法可以特异性的扩增RPV而不扩增核酸同源性高的小鼠细小病毒和多种其他病原微生物;敏感性实验表明,二重PCR的最低检测限可达1 000拷贝/μL.双重PCR结合测序在检测23份临床样本中,检测出7份RMV阳性,包括1份与RPV共感染阳性样本.结论 本研究建立的检测RPV的双重PCR方法具有特异性好、灵敏度高及操作简单等优点,是一种简便、可靠的检测方法.     

细小病毒H-1感染对胃癌细胞核修复相关基因表达的影响

目的探讨细小病毒H-1诱导胃癌细胞死亡的可能机制.方法选取对细小病毒H-1敏感和不敏感的胃癌细胞株HGC27和BGC823,H-1病毒感染48 h后提取细胞总RNA.应用不同标记的dCTP逆转录制备荧光探针,与含有8 000点人类体细胞基因序列的表达谱cDNA芯片杂交,计算机荧光扫描分析HGC27细胞核修复相关基因表达谱的改变.实时定量PCR检测HGC27和BGC823细胞部分核修复相关基因的表达.结果基因芯片分析显示,HGC27 细胞的64对核修复相关基因中,12对基因表达水平下调至0.5以下,6对基因表达水平上调至2倍以上.PCR定量检测证实,HGC27细胞BTG2表达明显下调,MBD2表达显著上调,XRCC4和H2A.Z的表达无明显改变;BGC823细胞BTG2表达明显下调,XRCC4、H2A.Z和MBD2表达无明显改变.结论细小病毒H-1可能通过影响胃癌细胞核修复通路相关基因的表达,使细胞基因转录或细胞周期停止,从而诱导胃癌细胞死亡.     

ELISA法检测孕妇巨细胞病毒抗体

应用ＥＬＩＳＡ技术，对６０名正常育龄妇女，５８名正常孕妇、５３名有异常妊产史孕妇进行巨细胞病毒抗体ＣＭＶ－ＩｇＧ、ＣＭＶ－ＩｇＭ检测，结果正常孕妇及异常妊产史孕妇的ＣＭＶ－ＩｇＭ检出率分别为１２．１％和１７％，明显高于正常育龄妇女的ＣＭＶ－ＩｇＡ检出率１．７％，ＣＭＶ－ＩｇＧ检出率无显著性差异。     

ELISA检测流行性出血热病毒抗体价值的探讨

为了探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断流行性出血热(出血热)的价值,我们应用本法,并用间接免疫荧光抗体法(IFAT)作对照,对同期出血热患者血清进行了出血热病毒抗体的检测。报告如下。材料和方法一、待检血清,采自1985年12月至1987年12月期间收入我院传染科,按1981年全国《流行性出血热防治(试行)方案》的诊断、分型标准确诊的不同病型、病日的出血热患者的血清367份。同时收集     

巨细胞病毒IgM抗体捕捉ELISA法的建立及其应用

建立巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩgＭ抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法（ＡＣ－ＥＬＩＳＡ），并用该法 调查１９１７例杭州市不同人群的巨细胞病毒感染情况。结果显示：抗原浓度、抗ＣＭＶ抗体酶结合物浓度对所测得的标本ＯＤ值都有不同程度的，用最适的实验条件建立的ＡＣ－ＥＬＩＳＡ法检测杭州市不同人群，表明儿童组ＣＭＶ感染率高于成人组，工人组的感染率高于其他职业人群。以本方法测定ＣＭＶ－ＩgＭ抗体的敏感性和特异性较高，可广泛应用于     

猴B病毒抗体及B病毒相关抗体ELISA检测结果比较

采用以人单纯疱病毒为抗原的ＥＬＩＳＡ法在国内外测得相同猕猴血清样本中的Ｂ病毒相关抗体阳性率分别为６５％和７０％。相同标本在则昨Ｂ病毒抗体阳性率为８５％。结果表明以ＨＳＶ－１为抗原不能检出全部Ｂ病毒感染动物。     

氧氟沙星ELISA检测方法的建立

目的:建立氧氟沙星(OFL)的ELISA快速检测方法。方法:在制备抗OFL单克隆抗体基础上,采用间接竞争酶联免疫吸附方法(ciELISA)检测OFL的含量。结果:筛选得到特异性分泌抗OFL的单克隆抗体细胞株3G3和3D9,应用3G3所制备腹水建立的ciELISA工作曲线的线性范围为0.5-128 ng/mL(r2=0.985 8),最低检出浓度为0.5 ng/mL,半数抑制浓度IC50为7.0 ng/mL,样品加样回收率为84%~120%,批内变异系数和批间变异系数均小于15%。结论:本文建立的氧氟沙星ELISA检测法可满足OFL残留检测的需要。     

抗猪鼻支原体单克隆抗体的研制及双抗体夹心ELISA检测法的建立

目的 制备多种抗猪鼻支原体的单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA方法用于该病原体的检测.方法 用猪鼻支原体CVCC361免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术和酶联免疫吸附实验筛选出抗该病原体的单克隆抗体;运用免疫双向扩散试验、Westem blotting确定IgG亚类及针对抗原的相对分子质量;筛选出配对抗体,建立双抗体夹心ELISA的检测方法,并评价其灵敏度和特异性.结果 共筛选出17株单克隆抗体,抗体亚类分别为ISG1、IsG2、 IgG2b、IgG3,免疫印迹结果表明单抗ZBI、ZB2及ZB16与相对分子质量为35×103的抗原有特异性结合,而ZB3和ZBl0与相对分子质量为70 × 103的抗原有特异性结合.确定了2个配对抗体(ZBI-ZBI-HRP和ZB1-ZB2-HRP),可检出最小抗原量为30ng/mL,检出猪鼻支原体活菌8.34×102CFU/mL,与人呼吸道常见的致病菌及支原体均无非特异性反应.结论 筛选的单克隆抗体具有较高的特异性和敏感性,应用双抗体夹心ELISA方法可用于猪鼻支原体的检测.     

细小病毒H－1对猕猴血清IL－2、TNF诱生能力的观察

采用健康猕猴为实验对象，经股静脉接种ＰＶＨ－１（１×１０９ｐｆｕ），在７２ｈ内动态观察血清细胞因子（ＩＬ－２、ＴＮＦ）诱生情况。结果表明，ＰＶＨ－１诱生ＩＬ－２、ＴＮＦ的能力低下，且再次接种也仅见轻微增高。提示ＰＶＨ－１体内经诱生细胞因子而发挥间接抗肿瘤作用的可能性不大。     

抗旋毛虫单克隆抗体竞争酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

作者选用1株高特异性抗旋毛虫单克隆抗体2G_8B_(10)H_2,建立了单克隆抗体竞争酶联免疫吸附试验(competitive ELISA,简称cELISA),并进行了初步应用。结果表明:20只日本大耳兔在感染旋毛虫后17天有35％呈现阳性,31天全部阳性.对其中5只感染兔的血清终点滴度观察了142天,了解特异性抗体的变化规律.该规律为病程估计提供了线索。另外,其他蠕虫感染兔血清29份无1例假阳性发生。可以认为,单克隆抗体cELISA是一种灵敏、特异的旋毛虫病免疫诊断方法。     

双抗夹心ELISA法检测骨唾液酸蛋白的初步建立

目的 建立快速检测骨唾液酸蛋白的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法,为试剂盒的研制奠定基础。方法 用鼠抗人骨唾液酸蛋白（BSP）单克隆抗体包被酶标板,兔抗人BSP检测,辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠二抗与兔抗人BSP相结合,初步建立BSP的双抗夹心ELISA检测方法。结果 自建双抗夹心ELISA法检测骨唾液酸蛋白的灵敏度为1.5ng/ml,标准曲线的线性范围为2-100ng/ml,回归方程y=0.2548x+0.0775 (r=0.992);批内批间变异系数分别为4.6％-5.4％和5.2％-7.1％,对人血清做50、25和10ng/ml三个加标浓度的回收率实验,回收率在47.2％-101％之间;4℃有效期至少360天。结论：成功建立双抗夹心ELISA检测BSP的方法。     

钙调素ELISA定量检测方法的建立与实验条件优化

目的：研究ELISA法定量测定钙调素(CaM)的最优条件。方法：用重组人CaM、兔抗CaM,通过对聚苯乙烯反应板进行紫外辐照处理,改善抗原固相化条件;通过对抗原包被液、包被时间等条件优化,建立简便、快速、准确的ELISA定量技术。结果：以PH7．40．01mool/L的PB为包被液,包被及后续封闭时间为4℃,静置72h,CaM包被浓度为5μg/m1,抗原抗体反应时间为37℃60min,可获最佳CaM定量结果。结论：建立检测CaM的ELISA测定方法,敏感性、重复性均在临床检测可接受的范围内,标准曲线的线性也较好,可用于CaM的定量研究。     

EXPERIMENTAL STUDY ON THE CYTOCIDAL EFFECT OF AT-1840 AND PARVOVIRUS H-1 AGAINST STOMACH CANCER CELLS

We had given evidences of cytocidal effect in vitro of either parvovirus H-I(PV H-1) or AT-1840 (lycobetaine) on gastric cancer cells. They act on different phase of the cell cycle of the gastric cancer cells, with PV H-1 on the late stage of S phase and AT-1840 on M phase. Combined use of these drugs gives better killing effect than the individual drug alone. In gastric cancer-bearing nude mice (ascites and solid tumor forms), both AT-1840 and PV H-1 increased the survival peroids and decreased the size of solid tumors. Depsite these are the experimental study which may not to be the same in human being. However, the study has layed down a solid foundation for our further exploration of these two substances as anti-gastric cancer drugs in the future.