核因子-κB在脓毒症大鼠肾细胞凋亡中的作用

目的研究脓毒症时核因子-κB(NF-κB)在肾细胞凋亡信号转导中的作用,探讨脓毒症时肾功能降低的机制。方法将30只大鼠随机分为5组,其中6只作为对照组,另外24只采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型,以术后2 h、3 h、4 h、5 h时限分为4组作为实验组。各组均测定肾脏组织NF-κB蛋白及肾细胞凋亡的情况,同时测定肾功能的变化。结果CLP术后肾组织NF-κB蛋白表达升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);4 h组NF-κB的含量达高峰,3 h组相对较弱。CLP术后肾细胞凋亡数目与肾组织NF-κB蛋白表达相反。CLP术后血清尿素氮及肌酐增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论CLP所致的脓毒症过程中,NF-κB蛋白表达升高,其活性增强可抑制肾细胞凋亡。     

核因子-KB在脓毒症大鼠肾细胞凋亡中的作用

目的 研究脓毒症时核因子-kB（NF-kB）在肾细胞凋亡信号转导中的作用，探讨脓毒症时肾功能降低的机制。方法 将30只大鼠随机分为5组，其中6只作为对照组，另外24只采用盲肠结扎穿孔术（CLP）复制脓毒症模型，以术后2h、3h,4h,5h时限分为4组作为实验组。各组均测定肾脏组织NF-kB蛋白及肾细胞凋亡的情况，同时测定肾功能的变化。结果 CLP术后肾组织NF-kB蛋白表达升高，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；4h组NF-kB的含量达高峰，3h组相对较弱。CLP术后肾细胞凋亡数目与肾组织NF-kB蛋白表达相反。CLP术后血清尿素氮及肌酐增加，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 CLP所致的脓毒症过程中，NF-kB蛋白表达升高，其活性增强可抑制肾细胞凋亡。     

赖氨匹林对肝缺血再灌注细胞核因子κB的影响

目的 :探讨赖氨匹林对肝缺血再灌注损伤细胞核因子κB(NF κB)的影响及作用机制。方法 :SD大鼠 72只 ,随机分为 3组 :正常对照组、肝缺血再灌注组和赖氨匹林预处理组。行血清转氨酶及免疫组织化学法测定肝细胞内NF κB。结果 :肝缺血再灌注后模型组和预处理组肝细胞内NF κB的表达均升高 ,赖氨匹林预处理组较模型组明显降低 (P <0 .0 5 ) ,肝组织损害程度轻 ,ALT及AST浓度低。结论 :赖氨匹林可抑制肝缺血再灌注时NF κB的表达 ,对肝缺血再灌注损伤起保护作用     

凝血酶敏感蛋白-1对脓毒症肝损伤影响的实验研究

目的利用RNA干扰(RNA)i方法探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)对脓毒症肝损伤的影响及机制.方法选用雄性Balb/c小鼠随机分为4组(n=10):假手术组(sham)、CLP对照组、阴性片段对照组、有效片段组.利用流体尾静脉注射法予以TSP-1特异性的siRNA片段进行RNAi,下调肝脏TSP-1表达,采用盲肠结扎穿刺(CLP)制作脓毒症模型,检测血清转氨酶、血清TNF-α含量,观察肝细胞凋亡,检测肝脏JNK蛋白表达变化.结果与假手术组相比,CLP组和阴性对照组转氨酶ALT和AST含量、TNF-α含量、凋亡细胞比例明显升高(P<0.05),磷酸化JNK蛋白表达明显降低(P<0.05),予以有效片段进行RNAi后,ALT和AST含量、TNF-α含量、凋亡细胞比例明显降低(P<0.05),磷酸化JNK蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 TSP-1参与介导脓毒症肝损伤,导致血清转氨酶及血清TNF-α含量升高、肝细胞凋亡增加,其机制与JNK通路的抑制有关.     

脓毒症模型大鼠肿瘤坏死因子-α和肝细胞凋亡的关系

目的:探讨脓毒症大鼠肿瘤坏死因子a(TNF a)与肝细胞凋亡的关系以及对肝功能的影响。方法:大鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症大鼠模型,分别于术后30、60、120、180min(CLP术后30、60、120、180 min组)处死动物,测定肝组织和血浆TNF a水平,并检测肝细胞凋亡的情况,同时测定丙氨酸氨基转移酶(ACL)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。正常对照组麻醉后不行CLP术,其余同实验组。结果: 与正常对照组相比,CLP术后30、60、120、180 min组肝细胞凋亡数、血清TNF-α、ALT水平均明显升高(P<0.01),有随着时间的延长增加的趋势;与正常对照组相比,CLP术后120、180 min组血清AST含量明显升高(P<0.01);CLP术后大鼠肝组织、TNF-α表达强度随时间延长而有增强的趋势。结论: CLP后大鼠肝脏产生大量TNF-α,与肝细胞凋亡有密切关系,肝功能受到损伤。     

脓毒血症中肝脏结构和功能关系的研究

目的：探讨脓毒症时TNF—α与肝细胞调亡的关系以及对肝功能的影响。方法：采用盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模型，动物随机分为正常对照组和脓毒症组。分别于术后30分钟、60分钟、120分钟、180分钟处死动物，测定肝组织和血浆TNF-α和Bcl-2蛋白的含量，并检测肝细胞凋亡的情况。同时测定肝脏的功能。结果：CLP后肝组织和血浆中TNF-α持续升高（P〈0.01），但30分钟与60分钟的变化不明显（P〉0．05），Bcl-2变化则与此相反。肝组织细胞凋亡数目呈进行性增加（P〈0．01）。同时丙氨酸转氨酶ALT＼天冬氨酸转氨酶AST也呈现异常改变，肝脏功能恶性发展（P〈0．01）。结论：CLP后肝脏产生大量TNF-α，与肝细胞凋亡有密切关系，使肝功能受到损伤。     

脓毒血症过程肝脏结构和功能关系的研究

目的：研究脓毒血症时肝吐功能降低的机制及糖皮质激素的作用机制。方法：将24只雄性Wistar大鼠随机分为4组，其中6只作为对照组，另外18只采用盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒血症模型，其中12只于术后60、180min时限又分为2组作实验组，另6只于术后即给予糖皮质激素地塞米松（5mg／kg）作为干预组。各组均测定肝组织TNF—α和Bcl-2蛋白表达及肝细胞凋亡的情况，同时测定肝脏功能的变化。结果：CLP术后肝组织中TNF—α水平持续升高，与对照组相比有统计学差异（P〈0．01）。血清TNF—α含量变化与肝组织TNF—α的表达具有一致性。CLP术后肝细胞凋亡数目与对照组相比有统计学差异，并呈进行性增加（P〈0．01）。肝细胞的凋亡数目与肝组织TNF—α的表达也呈现一致性。CLP术后肝组织Bcl-2蛋白与TNF—α蛋白相比表达较弱，但与对照组仍有统计学差异（P〈0．01）。血浆中ALT／AST呈异常改变，同时术后肝脏组织结构紊乱。结论：由CLP所致的脓毒血症过程中，肝脏组织TNF-α蛋白的表达和血浆中TNF—α蛋白的含量进行性增加，通过激活促细胞凋亡的程序，相对抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达而诱导肝细胞凋亡。与肝脏结构受损、功能下降是一致的。早期应用地塞米松处理脓毒血症对肝脏有一定的保护作用，其机制可能是抑制了脓毒血症早期细胞因子TNF-α的释放，以及由此导致的细胞凋亡的发生。     

缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨缺血预处理(IPC)对肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中细胞凋亡和Fas蛋白表达的影响.方法 60只SD大鼠随机分成正常对照组(N组)、缺血再灌注对照组(I/R组)、缺血预处理组(IPC组).比较各组血清AST、ALT和LDH水平,肝组织中凋亡细胞及细胞凋亡指数,肝组织Fas蛋白的表达情况.结果 IP组血清AST、ALT和LDH水平、细胞凋亡指数、Fas蛋白表达低于I/R组.IPC组血清ALT水平高于N组.结论 缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,可能与抑制Fas蛋白高表达、减少细胞凋亡有关.     

牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的　探讨牛磺酸对缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的保护及初步机制。方法　采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型。以TUNEL法检测心肌凋亡细胞 ,免疫组化法分析心肌细胞Fas/FasL、Caspase 8及Caspase 3蛋白表达变化。荧光分析法测定Caspase 3活性。结果　凋亡组 (心肌缺血 1h ,再灌注 2 4h)心肌细胞凋亡指数为 (16 .3± 4 .5 2 ) ,较对照组 (0 .4 3± 0 .0 4 )有显著性升高 ,Fas/FasL及Caspase 3蛋白水平也均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。牛磺酸保护组的心肌细胞凋亡指数、Fas/FasL、Caspase 3蛋白水平及Caspase 3活性均显著性低于凋亡组。结论　牛磺酸对缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡有较好的拮抗作用 ,其机制可能与降低Fas死亡受体通路中相关蛋白酶水平及其活性有关。     

核因子κB,Bcl-2在肝癌的表达及其相关性

目的 :探索核因子κB(NF κB)在肝癌的表达变化 ,以及与病理分期和抗凋亡基因Bcl 2表达的相关性 .方法 :采用免疫组织化学方法 ,检测NF κB在 4 0例肝细胞肝癌及 1 5例正常肝组织中的表达变化及抗凋亡基因Bcl 2的相应表达 .结果 :NF κB在肝癌组和正常肝组织组的阳性表达率分别为72 %、1 3% ,两者有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,而强阳性表达率分别 30 %和 7% ,Bcl 2在肝癌组和正常肝组织组的阳性表达率分别为 4 0 %和 7% ,两者有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,而强阳性表达率分别为 1 7%和 0 .NF κB的阳性表达在病理分级间有显著性差异 (P <0 .0 1 )且与Bcl 2的阳性表达有显著相关(r =0 .389,P =0 .0 1 3) .结论 :NF κB异常表达与肝癌的发生有关 ,并在一定程度上可以解释肝癌对化疗的抵抗作用 .NF κB与Bcl 2高度相关 ,表明NF κB可以通过对下游抗凋亡基因表达的调控 ,参与了肝癌的抗凋亡过程     

白藜芦醇对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用和机制研究

目的探讨白藜芦醇对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及作用机制。方法将45只C57BL/6雄性健康小鼠随机分成3组：假手术组（Sham组）、脓毒症模型组[盲肠结扎穿孔（CLP）组]和白藜芦醇实验组（CLP+白藜芦醇组）,每组15只,采用CLP术构建脓毒症小鼠模型,术后72h每组选取存活的5只小鼠处死并取材,检测血肌酐、尿素氮、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、肾损伤标志物-1（KIM-1）、沉默信息调节相关酶1（SIRT1）表达情况;观察小鼠肾脏结构、肾细胞凋亡情况,计算生存率,检测肾脏组织Caspase-3的表达。结果与Sham组相比,CLP组小鼠肾小球毛细胞血管扩张、充血,肾小管上皮细胞水肿、颗粒性变样,管腔缩小,大量炎症细胞浸润,血肌酐、尿素氮水平均升高（均P＜0.05）,血清NGAL、KIM-1水平均升高（均P＜0.05）;可见大量肾小管上皮细胞凋亡,SIRT1mRNA、蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）,Caspase3蛋白表达上调（P＜0.05）;小鼠7d成活率为0%。与CLP组相比,CLP+白藜芦醇组小鼠肾小球毛细血管扩张不明显,炎症细胞浸润有所减轻,血肌酐、尿素氮水平均降低（均P＜0.05）,血清NGAL、KIM-1水平均降低（均P＜0.05）;且肾小管上皮细胞凋亡明显减少,SIRT1mRNA、蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）,Caspase3蛋白表达下调（P＜0.05）,小鼠7d成活率为30%（P＜0.05）。结论白藜芦醇可能通过激活SIRT1信号抑制凋亡通路抑制肾小管上皮细胞凋亡,减轻脓毒症相关性急性肾损伤程度。     

低强度脉冲超声抑制脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞的凋亡

目的 探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对脓毒症SD大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的抑制效应及可能机制。方法 通过盲肠结扎穿刺术建立脓毒症SD大鼠模型,将78只雌性SD大鼠随机分为超声组（LIPUS,n=26）、盲肠结扎穿刺组（CLP,n=26）和假手术组（Sham,n=26）。超声参数如下：声强200 mW/cm2,辐照时间20 min,频率0.37 MHz。观察各组大鼠术后72 h内的存活情况;苏木精-伊红染色法观察脾脏淋巴细胞的数量变化;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法和流式细胞术检测脾脏淋巴细胞凋亡情况;免疫组化、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测线粒体凋亡通路B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)的蛋白及m RNA的表达水平。结果 Sham组72 h内全部存活,LIPUS组的存活率显著高于CLP组（P<0.05）;与CLP组相比,LIPUS组脾脏淋巴细胞凋亡率显著降低（P<0.05）,Bcl-2的蛋白及mRNA表达水平显著升高（P<0.05）,Bax及Caspase 3的蛋白及m RNA表达水...     

缺氧预处理对 L02肝细胞Bcl-2、Bax、Fas及FasL表达的影响

目的:研究缺氧预处理对正常肝细胞株L02缺血再灌注损伤的抗凋亡机制.方法:将体外培养的L02细胞分为3组:正常对照组(A组)、缺氧复氧损伤组(B组)、缺氧预处理组(C组).各组细胞缺氧复氧处理1、6、1 2、18、24 h后,使用流式细胞术检测细胞凋亡率,各组细胞分别缺氧复氧、缺氧预处理后12 h检测细胞Bcl 2、Bax、Fas及FasL蛋白表达,同时对细胞结构进行电镜观察.结果:C组和B组比较,细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),细胞Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05),Bax、Fas及FasL蛋白表达量显著降低(P＜0.05),透射电镜观察到缺氧预处理组细胞结构基本正常.结论:缺氧预处理明显减轻了缺氧复氧所导致的L02肝细胞损伤,降低了细胞凋亡率,缺氧预处理保护机制和Bcl-2、Bax、Fas及FasL蛋白表达有关.     

核因子-κB与感染性休克大鼠肝细胞凋亡的关系

目的探讨核因子-κB(NF-κB)与感染性休克大鼠肝细胞凋亡的关系,了解感染性休克时肝功能减退的机制。方法将20只大鼠随机分为2组,每组10只,实验组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备感染性休克大鼠模型;对照组大鼠不进行盲肠结扎穿孔术。2组均测定肝脏细胞NF-κB蛋白、肝功能及肝细胞凋亡的情况。结果与对照组比较,实验组肝细胞凋亡指数明显升高(P<0.01),肝细胞中NF-κB蛋白表达明显增强,血清谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶含量明显升高(P<0.01)。结论CLP所致的感染性休克过程中,NF-κB蛋白表达升高,可能导致肝细胞凋亡增加,以致肝功能减退。     

Survivin和NF-κB在肝细胞癌中的表达

①目的　探讨凋亡抑制因子Survivin和核因子NF κB在肝细胞癌 (HCC)组织的表达情况及与临床病理特征的关系。②方法　采用免疫组化方法检测 4 1例HCC中Survivin和NF κB蛋白的表达情况 ,以相应癌旁肝组织、肝硬化组织 (10例 )、肝血管瘤旁正常肝组织 (11例 )作对照 ,并分析其与病理特征的关系。③结果　Survivin蛋白在HCC组织阳性表达率为 4 8.8% ,在对照组中不表达 ,二者比较差异有显著性 (χ2 =37.5 3,P <0 .0 1) ;门静脉浸润者的阳性表达率显著高于无门静脉浸润者 (χ2 =5 .5 1,P <0 .0 5 ) ;肿瘤呈多发者的阳性表达率显著高于单发者(χ2 =3.98,P <0 .0 5 )。NF κB蛋白在HCC组织的阳性表达率为 6 8.3% ,显著高于对照肝组织 (χ2 =4 1.12 ,P <0 .0 1)。NF κB的表达与Suvivin的表达呈正相关 (r=0 .0 6 5 6 ,P <0 .0 5 )。④结论　Survivin、NF κB在HCC组织中的高表达参与了肝癌的发生、发展 ,可能的机制是抑制了肝细胞的凋亡。     

大鼠肝缺血再灌注后Fas及FasL蛋白表达变化及缺血预处理的保护机制

目的研究大鼠肝缺血预处理对缺血再灌注损伤时肝细胞Fas及FasL蛋白表达的影响,观察缺血预处理对肝缺血再灌注保护的机制。方法建立大鼠肝缺血再灌注损伤及肝缺血预处理的模型。随机分成3组:①为正常对照组,②缺血再灌注(IR组);③缺血预处理组+缺血再灌注组(IP+IR组)。术后在分析各组肝组织Fas及FasL蛋白表达变化的同时,检测血清ALT及AST的活性。并在电镜下观察各组肝细胞形态学改变。结果与c组比较,IR组Fas及FasL蛋白表达明显增高,而IP+IR组轻度增高。IR组ALT及AST活性显著高于c组,(P<0.05);而与IR组比较,IP+IR组ALT、AST活性明显较低(P<0.05)。电镜下观察到IR组肝细胞形态出现明显的凋亡损伤改变,而IP组改变较小。结论缺血预处理可以降低缺血再灌注损伤时肝细胞Fas及FasL蛋白表达,从而减轻缺血再灌注后肝细胞凋亡损伤。     

H_2O_2对PC12细胞Caspase-3和NF-κB P65基因表达的影响

目的 :探讨H2 O2 对PC12细胞半胱天冬酶 3(caspase 3)和核转录因子 kappaBP6 5 (uclearfactor kappaB ,NF κBP6 5 )基因表达的影响。方法 :不同剂量H2 O2 (0～ 4 0 0nmol·L-1)处理PC12细胞 8h ,采用RT PCR检测Caspase 3、NF κBP6 5mRNA表达变化 ,Westernblot检测Caspase 3P 2 0活性片段和NF κBP6 5蛋白表达的变化 ,用比色法检测Caspase 3相对活性。结果 :随H2 O2 浓度从 10 0～ 4 0 0nmol·L-1增加 ,Caspase 3、NF κBP6 5mRNA表达和Caspase 3P2 0活性片段及NF κBP6 5蛋白表达水平逐渐增加 ;随H2 O2 浓度从 5 0～ 4 0 0nmol·L-1增加 ,Cas pase 3相对活性增加 (P <0 .0 5 ) ,在 4 0 0nmol·L-1H2 O2 时Caspase 3相对活性达最大值。 结论 :H2 O2 可剂量依赖性的增加Caspase 3mRNA表达和Caspase 3P 2 0活性片段 ,增加Caspase 3活性 ;H2 O2 可剂量依赖性的增加NF κBP6 5mRNA表达和NF κBP6 5蛋白表达。     

一贯煎对CCl4诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:研究一贯煎对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响。方法:用50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)大鼠腹腔注射造模,每周2次,共9w。于造模3w和6w末,随机抽取正常及模型大鼠处死作动态观察。从第7w始模型大鼠随机分为模型对照组和药物干预组,药物干预组给予一贯煎灌胃,共计3w。9w末检测肝组织Fas、Bax、Bcl-xL、细胞色素(Cyt)C、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡情况。结果:①与正常组大鼠比较,3w、6w及9w时模型大鼠肝组织Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。与9w模型组比较,一贯煎组Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01),而Cyt C和Bcl-xl蛋白表达在各组之间无显著差异(P>0.05)。②与正常组比较,造模3w时肝组织Caspase-3蛋白表达达到高峰(P<0.01),肝细胞凋亡数量亦达到高峰;6w、9w模型组大鼠Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡较3w有降低的趋势。与9w模型组大鼠比较,一贯煎组大鼠Caspase-3蛋白表达显著降低,肝细胞凋亡显著减少。结论:一贯煎抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的作用机制可能与干预Fas和内质网凋亡通路有关。     

脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1和Toll样受体4基因的表达及相关性

目的 探讨脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达变化及其相互关系.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制成脓毒症大鼠模型.将50只Wistar大鼠分成正常对照组(10只)和CLP组(40只),CLP组分别于CLP术后6、12、18、24 h各处死10只大鼠,应用实时聚合酶链反应检测肝脏组织HMGB1和TLR4 mRNA的表达.结果 正常对照组大鼠肝脏组织存在微量的HMGB1、TLR4 mRNA表达.脓毒症组大鼠CLP术后各时间点的HMGB1、TLR4 mRNA表达均显著高于正常对照组(P值均<0.01),CPL术后6 h HMGB1、TLR4 mRNA表达开始升高,至12 h达峰值,18 h后开始下降,各时间点间HMGB1、TLR4 mRNA表达的差异均有统计学意义(P值均<0.05).直线相关分析表明,脓毒症大鼠肝脏组织HMGB1 mRNA与TLR4 mRNA的表达呈正相关(r=0.90,P=0.04).结论 HMGB1可能通过TLR4进一步激活炎性细胞,引起下游炎性因子释放的瀑布效应.