肾毒血清肾炎大鼠肾组织中NF-κB活化及其意义

目的：探讨肾毒血清性肾炎大鼠肾组织核因子—κB(NF—κB)活化及其意义。方法：肾毒血清肾炎应用兔抗鼠肾小球基膜肾毒血清制备。应用凝胶电泳迁移率(EMSA)和Western blot检测。肾毒血清。肾炎大鼠。肾组织中NF-κB活化及IκBα和IκBβ的降解；采用核酸酶保护法检测肾组织中IL-8表达，并分析其与NF—κB活化的关系。结果：模型组肾组织中IL-8表达显著高于正常对照组；肾毒血清肾炎大鼠肾组织中NF—κB活化显著增强，p65由胞质转移至咆核．咆质内IκBα和IκBβ降解明显增加；NF-κB活化与IL-8表达呈显著正相关。结论：NF—κB／IκB信号通路介导小球肾炎肾组织中IL-8表达。     

NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸体外抑制细胞因子表达效应的研究

目的设计合成靶向NF—κB的哑铃彤“圈套”ODNs，并检测其对NF—κB转录活性和肾小球系膜细胞细胞因子（TNF—d和IL-6)表达的抑制效应。方法采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应。提取大鼠肾小球系膜细胞，随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组。采用阳离子脂质体将2、4和8mg／L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞，6h后用LPS刺激，收集转染后8、12和18上清和细胞。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清细胞因子蛋白表达，逆转录PCR(RT—PCR)法检测细胞因子mRNA转录。结果哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF—κB与其顺式元件的结合；4、8mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TNF—d和IL-6转录与表达。结论靶向NF—κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF—κB的转录活性，从而对体外培养的肾小球系膜细胞细胞因子的表达具有抑制效应。     

NAC对烧伤大鼠单个核细胞内NF-κB活化及细胞因子mRNA表达的作用

目的：研究烧伤大鼠外周血单个核细胞(PBMC)内NF—κB活化及炎性相关细胞因子mRNA表达的规律，探讨NF—κB在严重烧伤后全身炎症反应中的作用机制。方法：选用SD大鼠制成30％TBSA三度烫伤模型，取全血分离单个核细胞，抽提核蛋白及总RNA，用凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)方法测定NF—κB的活化。用RT—PCR方法检测细胞因子mRNA表达的变化。用N-乙酰-L型半胱氨酸(NAC)阻断NF—κB活化，观察NF—κB对细胞因子表达的影响。结果：烧伤后PBMC内的NF-κB明显活化，在细胞核内积聚明显增加；促炎性细胞因子和Th2型细胞因子mRNA高表达。用NAC后NF—κB的活化水平被抑制，细胞因子表达水平相应地降低。结论：严重烧伤后活性氧(OFRs)至NF—κB的信号转导途径被激活，NF—κB过度活化，促炎性细胞因子失控性高表达。NAC可阻断OFRs至NF-κB信号转导途径，抑制细胞因子的过度表达。烧伤后T辅助细胞出现分化，Th2型细胞占优势，抗炎性细胞因子表达也明显增加。     

核转录因子NF—κB在血管内皮细胞组织因子表达中的作用

目的：探讨核转录因子NF－κ在肿瘤坏死因子α（TNF－α）,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管内皮细胞组织因子（TF）表达中的作用。方法：用发色底物法测定血管内皮细胞表面TF活性。分别采用凝胶电泳迁移率改变法（EMSA）和Western 鲩迹法检测血管内皮细胞核转录因子NF－κB的DNA结合活性和含量。结果：100U／ml TNF-α,^-6mol/l Ang II作用下,内皮细胞表面TF活性明显增高。分别较对照增高1＝65倍和1．61倍,TNF－α,AngⅡ处理后细胞核内NF－κB含量明显增加,分别为正常对照组的1．77倍和1．52倍。结论：TNF－α,AngⅡ可增强内皮细胞TF活性,这可能与其促进内皮细胞核转录因子NF－κB的核转位和DNA结合活性有关,进一步证实NF－B在内皮细胞TF诱导表达中的重要作用。     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞中通过IκBα的降解活化NF-κB

目的　阐明鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)活化核转录因子NF κB的机制。方法　利用强力霉素Dox诱导表达LMP1的鼻咽癌细胞株Tet on LMP1 HNE2为实验模型 ,首先应用免疫印迹方法测定Dox诱导后不同时相LMP1的表达动力学以及IκBs蛋白量及功能的改变。进而用间接免疫荧光法检测NF κB的亚细胞定位。最后采用瞬间共转染及报道基因活性分析分析NF κB的活性。结果　在鼻咽癌细胞Tet on LMP1 HNE2中 ,Dox处理 15分钟后LMP1的表达迅速升高并维持与较高水平直至 12 0分钟。LMP1的诱导性表达导致IκBα的磷酸化并降解 ,但IκBα蛋白总量无改变。继IκBα的磷酸化并降解 ,NF κB(P6 5 )自胞浆易位至胞核且活性升高。IκBα的显性负性突变子抑制NF κB(P6 5 )的核易位及报道活性。LMP1的诱导性表达并未引起IκBβ蛋白水平变化。结论　在鼻咽癌细胞Tet on LMP1 HNE2中 ,EB病毒LMP1通过IκBα的磷酸化并降解激活核转录因子NF κB的活性 ,并且 ,LMP1诱导的NF κB活性能被IκBα的显性负性突变子完全抑制。IκBβ在此信号传导途径中无改变。LMP1表达前后IκBα蛋白总量维持恒定可能是由于NF κB的活化迅速启动了IκBα的重头合成这一自身调节环路所致。     

重组腺病毒IκBαM在人肝癌细胞HepG2中的表达及对NF-κB活性的抑制

目的　检测重组腺病毒IκBαM (AdIκBαM)在肝癌细胞HepG2 中的表达及TNF α诱导下IκBαM变化情况 ,并观察此超级抑制物对NF κB活性的抑制作用。方法　利用GFP及有限稀释法测定病毒滴度和感染靶细胞的效率 ,Western印迹法检测 2 93细胞和HepG2 中重组腺病毒介导IκBαM的表达及TNF α诱导下IκBαM变化情况 ,EMSA观测感染AdIκBαM前后经TNF α处理的HepG2 细胞核中NF κB活性水平的变化。结果　扩增AdIκBαM的滴度为 2× 10 8pfu/ml,MOI为 2 0 ;AdIκBαM在HepG2 中能稳定高效表达且不因TNF α的诱导而降解 ,未感染细胞基础水平的IκBα及转入的AdIκBα对照则随诱导时间延长而呈现先逐渐降低后升高的趋势。EMSA显示 ,感染AdIκBαM的细胞在处理前后均无NF κB活化迹象 ,而未感染及感染AdIκBα的细胞经TNF α诱导后则有NF κB过度活化情况。结论　AdIκBαM能高效扩增并有效感染靶细胞HepG2 ,能在HepG2 细胞中稳定高水平表达 ,且不会被TNF α诱导而降解 ,能稳定有效的抑制HepG2 细胞中NF κB的过度活化 ,上述结果初步表明 ,通过IκBαM超级抑制物抑制NF κB的活性 ,再辅以常规的抗肿瘤治疗 ,有望成为一种十分有效的肿瘤基因治疗方法。     

白藜芦醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO和炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇（Res）对内毒素（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB（NF—κB）活化及炎性细胞因子（TNF—α、IL—1β、IL-6）基因表达的调节，为Res的临床运用提供理论依据。方法分别用LPS或Res＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞，采用电子顺磁共振（EPR）自旋捕集技术直接检测巨噬细胞产生的NO，电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测细胞中NF—κB活性，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF—α、IL—1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达。结果表明LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2—12h明显高于正常对照组（P〈0．01），而Res＋LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组（P〈0．01）。结论提示LPS可诱导巨噬细胞NF—KB活化，导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强，而Res能抑制NF—κB活化而调节TNF—α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

IκB激酶结构和功能研究进展

在哺乳动物中,核转录因子NF—κB家族包括五个成员：NF—κB1（p105／p50）,NF—κB2（p100／p52）,RelA（p65）,RelB,and c—Rel。它们调控与炎症反应,细胞增殖分化及凋亡相关基因的表达。IKK（IκB激酶）是一个蛋白激酶复合体,属于丝／苏氨酸激酶,在核转录因子的活化过程中起着重要的作用。外部刺激因子通过激活IκB激酶（IKK）,引起核转录因子的抑制蛋白IκB磷酸化,泛素化和降解,从而使核转录因子活化,进入细胞核内,调节相应基因的转录。此外,有很多研究也表明,IKK的组成性活化和细胞的恶性转化有密切关系。目前已经发现并克隆出了细胞因子诱导的IKK复合体的四个主要组分：IKKα、IKKβ、IKKγ和IKAP。本文综述了IKK的结构、功能,及其与肿瘤发病的关系。     

肿瘤坏死因子α对肠上皮细胞核因子κB的活化与细胞因子表达的影响

目的探讨炎症状态时肠上皮细胞核因子κB的活化对肠上皮细胞分泌促炎细胞因子的调节作用.方法将TNF-α(10 ng/ml)加入培养的结肠癌上皮细胞系H29细胞中,3 h后收集上清液,ELISA法测IL-8;分别提取细胞核蛋白、mRNA,经Western blotting检测核因子NF-κB P65的活化,PT-PCR检测IL-8的表达.结果对照组的HT29细胞低表达IL-8 mRNA,细胞核中很难检测出NF-κB P65,细胞培养液中IL-8的质量浓度为172 ng/L.经TNF-α刺激后,HT29细胞高表达IL-8 mRNA.核蛋白NF-κB P65表达明显增高,细胞培养液中IL-8的质量浓度为639 ng/L,明显高于对照组(P＜0.01). 结论炎症状态时,核因子κB的活化促进肠上皮细胞分泌促炎细胞因子,调节肠上皮细胞参与炎症反应.     

血管紧张素Ⅱ和醛固酮对肝星状细胞核因子κB信号转导通路的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮对肝星状细胞(HSC)核因子κB信号转导通路的影响。方法体内研究部分：Wistar大鼠60只,分为4组,每组15只鼠。模型组：40％ CCl4油0．25ml／100mg皮下注射,每周2次;培哚普利治疗组：40％ CCl4油0．25ml／100mg皮下注射,每周2次;培哚普利2mg／kg灌胃,每日1次。氯沙坦治疗组：40％ CCl4油0．25ml／100mg皮下注射,每周2次;氯沙坦10mg／kg灌胃,每日1次。对照组：橄榄油皮下注射。于第4、6周取材。Masson三色染色检测胶原,进行纤维化分级。电泳迁移率变更分析(EMSA)检测肝组织核因子κB的DNA结合活性。Western印迹检测抑制性核因子κBα(IκBα)的表达。体外研究部分：采用HSC-T6细胞株,分别予Ang Ⅱ-1μmol／L和醛固酮1μmol／L处理0．5、1、2．4h,观察对核因子κB DNA结合活性的影响。另外,观察AT-1受体阻断剂irbesartan、细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂U0126、抗氧化剂-乙酰半胱氨酸(NAC)、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和肿瘤坏死因子α(TNFα)对核因子κB DNA结合活性的影响。Western印迹检测IκBα的表达;免疫组织化学检测核因子κB表达的核转移;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNFα mRNA的表达。结果培哚普利和氯沙坦对实验性肝纤维化具有抑制作用;培哚普利和氯沙坦可抑制肝组织核因子κB活性。AngⅡ和醛固酮可激活HSC核因子κB活性,irbesartan、ACEI和NAC可抑制核因子κB活性,U0126不能抑制其活性。AngⅡ和醛固酮可促进核因子κB调控转录基因TNFα mRNA的表达,irbesartan、ACEI和NAC则抑制其表达。结论肝脏肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)促肝纤维化作用与核因子κB的激活有关。AngⅡ和醛固酮对核因子κB的激活作用不依赖ERK通路,而与IκBα的磷酸化和降解有关。     

烧伤血清对内皮细胞IκBα降解和NF-κB活化的影响

目的 了解烧伤血清对内皮细胞抑制性κB(IκBα)降解、核因子-KB(NF—KB)活化的影响，进一步探讨烧伤血清诱导内皮细胞活化分泌细胞因子的机制。方法 采用体外培养的内皮细胞，分别用正常人血清(对照组)、烧伤患者血清、烧伤患者血清 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)刺激内皮细胞。采用Westem印迹法检测血清刺激30、60、90、120min后内皮细胞IκBα蛋白降解情况，电泳迁移率分析检测血清刺激30、60、120、240min后NF—κB活性的变化。结果烧伤血清刺激内皮细胞后30min，IκBα发生明显降解，刺激后60min达高峰，2h后表达逐渐升高；烧伤血清刺激内皮细胞后30min，NF-κB活性迅速升高，30～60min达高峰，2h后逐渐回复基础状态。PDTC能有效抑制烧伤血清作用条件下内皮细胞IκBα降解、NF-κB活化。结论 烧伤血清可诱导内皮细胞IκBα降解，活化NF—κB，从而在烧伤后内皮细胞分泌细胞因子过程中起重要作用。     

厄贝沙坦对AngⅡ介导的肾小球系膜细胞核因子-κB活化及MCP-1表达的影响

目的 观察不同剂量厄贝沙坦(Irb)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的肾小球系膜细胞(GMC)核因子-κB(NF-κB)活化及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达的影响,探讨Irb抑制GMC炎症因子表达的可能机制.方法 分离培养大鼠GMC,用10-6mol/L Ang Ⅱ刺激后将其随机分为5组(n=4):对照组、Ang Ⅱ刺激组、Ang Ⅱ和3种不同浓度(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)的Irb共孵育组.分别采用ELISA法及半定量RT-PCR法检测细胞培养上清液中MCP-1、I κB、NF-κB的表达水平和GMC内MCP-1 mRNA的表达水平,并在酶联免疫激光扫描共聚焦显微镜下观察GMC内NF-κB p65核易位情况,计算核易位阳性率.结果 与Ang Ⅱ刺激组比较,其他各组MCP-1、I κB、NF-κB水平及MCP-1 mRNA表达均明显较低(P<0.05或0.01);与低浓度Irb组比较.高浓度Irb组MCP-1、IκB、NF-κB、MCP-1 mRNA表达及中浓度Irb组MCP-1水平均明显较低(均P<0.05);与中浓度Irb组比较,高浓度Irb组MCP-1、IκB、NF-κB水平及MCP-1mRNA表达均明显较低(均P<0.05).结论 Irb可能是通过抑制NF-κ B的活化,降低GMC MCP-1的表达以减少肾小球系膜区单核细胞的浸润,从而减轻肾小球炎症反应.     

NF-κB信号转导通路与胰岛素抵抗

核因子-κB（NF—κB）信号转导通路包括NF—κB、NF—κB抑制蛋白（IκB）和IκB激酶（IKK）。其中,NF—κB是一种重要的核转录因子,参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡及物质代谢等多种生物进程。IKK具有丝氨酸／苏氨酸激酶活性,能使多种蛋白的丝氨酸／苏氨酸残基磷酸化。NF—κB信号转导通路的活化与胰岛素抵抗的发生密切相关。文章就NF—κB在胰岛素抵抗发生中作用作一综述。     

护肾固精方对系膜细胞核因子-κB活性及炎性细胞因子表达的影响

目的 研究护肾固精方(Hu shen gu jing fang，HSGJF)对脂多糖(LPS)刺激大鼠肾小球系膜细胞(MeasangialCells，MsC)表达炎性细胞因子的影响及其作用机制。方法：分别以酶联免疫吸附法(ELISA)检测MsCIL-1β、TNF-α蛋白水平：电泳迁移率变动分析(EMSA)检测MCs核因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)的活性；反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测MsC TNF-amRNA表达。结果 HSGJF能抑制LSP刺激肾小球MsC分泌IL-1β、TNF-α蛋白质增加的同时、亦能抑制LSP刺激肾小球MsC中NF-κB活化，在HSGJF作用下炎性细胞因子表达均呈不同程度减弱。结论 HSGJF通过抑制MsCNF-κB的活性，下调炎性细胞因子的表达。为进一步认识和评价中医药在肾脏疾病防治中的作用提供了理论及实验依据。     

基于IL-37信号通路探讨口腔黏膜免疫稳态的机制

目的 ：基于白介素（IL）-37信号通路探讨口腔黏膜免疫稳态的机制。方法 ：通过牙龈绦虫感染后人巨噬细胞诱导的口腔炎症模型,在C57BL/6J小鼠中建立实验性牙周炎模型,分为对照组和rhIL-37b组。qPCR检测IL-37、炎症因子IL-6,肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-10和IL-1β和核转录因子（NF）-κB通路,蛋白印迹检测IL-37和NF-κB通路的表达。微电脑断层扫描（微CT）成像用于确定骨质流失。结果 ：THP-1细胞在牙龈绦虫感染后显示出IL-37 mRNA表达增高,与对照组相比,rhIL-37b处理的细胞显示牙龈绦虫感染后人巨噬细胞的IL-6、TNF-α和IL-1β的产生减少,IκBα降解增加,磷酸化的p65水平降低。在小鼠牙周炎模型rhIL-37b组牙龈炎症和骨质流失降低,差异有统计学意义。结论 ：IL-37通过抑制NF-κB信号通路来调节牙周炎的炎性细胞因子反应,降低了牙龈组织骨质流失和细胞因子表达。     

淋巴毒素β受体活化对膀胱癌细胞NF-κB信号通路及细胞增殖的影响

目的 研究淋巴毒素β受体(LTβR)的活化对膀胱癌细胞株5637核转录因子-κB(NF-κB)信号通路及细胞增殖的影响。 方法 以膀胱癌细胞株5637为研究对象,以配体淋巴毒素α1β2(LTα1β2)诱导LTβR信号活化。qRT-PCR检测NF-κB信号通路RelA、RelB mRNA,细胞因子LTα、LTβ、LIGHT、TNFα、IL-6、IL-1β mRNA和增殖相关基因细胞周期素D1(CyclinD1)、生存素(Survivin) mRNA的表达水平;WB法检测NF-κB经典信号通路活化状态;CCK-8法检测细胞增殖水平。 结果 LTβR活化后,RelA mRNA表达上调2.5倍(P=0.003),TNFα、IL-1β、CyclinD1、Survivin mRNA出现不同程度的上调(均P<0.05),随着LTβR表达下调,以上基因mRNA表达也下降(均P<0.05);WB结果显示活化标志蛋白p-p65表达出现升高趋势(P>0.05);与对照组相比,细胞增殖活性的差异未见统计学意义(P>0.05)。 结论 活化LTβR可促进NF-κB经典信号通路主要成员RelA的表达和活化,并有可能通过上调促炎细胞因子TNFα、IL-1β的表达参与膀胱癌炎性微环境的形成;有利促增殖相关基因CyclinD1、Survivin的表达,但在细胞增殖水平上并未见明显效应。      

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏核因子-κB表达的影响

采用糖尿病大鼠模型，以核因子（NF）－κB亚型P65多抗为抗体，应用免疫组织化学染色法观察氯沙坦（losartan)对糖尿病大鼠肾脏NF－κB表达的影响，并进一步分析NF－κB表达与肾小球内粘附分子（ICAM－1）蛋白表达、单核细胞浸润及肾脏功能和结构损害的关系。结果表明：糖尿病大鼠肾小球NF－κB正常较正常肾组织增高，氯沙坦可显著降低NF－κB的表达。且NF－κB阳性细胞数与肾小球ICAM－1蛋白表达，单核细胞浸润、肾脏功能和结构损害显著相关。结果提示氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏保护作用可能通过抑制血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)引起的NF－κB活化，下调受NF－κB调控的ICAM－1表达，减轻单核细胞浸润而实现。     

原花青素对CLA大鼠足爪组织中NF-κB／p6S蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响

目的研究原花青素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎（CIA）大鼠足爪组织中核转录因子NF-κB／p65蛋白表达的抑制作用和血清中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α等水平的影响。方法建立Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠模型，免疫组化法检测足爪组织中NF-κB／p65蛋白的表达，ELISA法检测CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量。结果原花青素能剂量依赖性地下调NF-κB／p65蛋白的表达，降低CIA大鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平。结论原花青素对CIA大鼠炎症的抑制作用可能与其下调NF—KB／p65蛋白表达、降低促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的水平有关。