微生物内氨基酸和小肽的分析方法及其应用进展

氨基酸和小肽是微生物内重要的活性组分和代谢产物.随着现代分析技术的日益革新,微生物氨基酸和小肽的定性定量分析方法也在不断发展.本文首先从淬灭、提取、样品衍生化和浓缩几个方面对微生物样品前处理方法做了介绍;进而分别从分离技术和检测方法两方面综述了氨基酸和小肽研究中所采用相关技术的特点及应用实例,并系统分析了各种方法的优缺点,同时展望了其发展趋势.     

微生物内氨基酸和小肽的分析方法及其应用进展

氨基酸和小肽是微生物内重要的活性组分和代谢产物。随着现代分析技术的日益革新,微生物氨基酸和小肽的定性定量分析方法也在不断发展。本文首先从淬灭、提取、样品衍生化和浓缩几个方面对微生物样品前处理方法做了介绍;进而分别从分离技术和检测方法两方面综述了氨基酸和小肽研究中所采用的相关技术的特点及应用实例,并系统分析了各种方法的优缺点,同时展望了其发展趋势。     

海洋天然产物中活性肽类成分研究进展

生物体内的活性肽是介于氨基酸与蛋白质之间的分子聚合物，它小至由2个氨基酸组成，大至有数百个氨基酸通过肽键连接组成，具有十分重要的研究价值和生理学意义。从1977年以来，各国已从海藻、海绵、腔肠动物、软体动物和微生物体内，分离得到了数千种的新型化合物，包括肽类、生物碱类、萜类、多糖类、大环类酯类、聚醚类等化合物。其中，许多具有抗癌、抗病毒、抗菌和抗真菌、治疗心血管疾病、神经系统活性、提高免疫力等生理活性，这方面的相关报道也已很多，对海洋生物的活性物质的研究起到了十分重要的指导作用。其中，对海洋天然产物中活性多肽成分的研究，现在已经进入了一个快速发展的阶段，并取得了一些显著的成果。现就海洋生物中活性肽类成分的种类、结构、生理活性等方面的研究与开发及其应用前景进行介绍。     

硒蛋白P同功型突变体短肽hSel P82m分析

目的: 切割硒蛋白P同功型突变体活性肽hSel P137m,以得到可能具备相同生物学活性而氨基酸数目更少的短肽.方法: 利用生物信息学技术分析hSel P280m,hSel P137m的活性功能域,用羟胺切割hSel P137 m,并用SDS-PAGE及蛋白质印迹加以分析验证.结果: 切割hSel P137m后得到了82(28aa-109 aa)个氨基酸的多肽,在特定的位置出现了预期的目的蛋白条带.利用生物信息学技术加以分析,认为hSel P82m基本具备hSel P137m的生物学活性.结论: 经切割硒蛋白P同功型突变体活性肽hSel P137m,成功得到82个氨基酸的短肽hSel P82m,并且认为其基本具备hSel P137m的生物学活性.     

生物活性肽的研究进展

生物活性肽(biologically active peptides或biopeptides)是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。自从1975年,Hughes等首先报道从动物组织中发现了具有类吗啡活性的小肽以来,已经从动、植物和微生物中分离出多种多样的生物活性肽。生物活性肽的结构可以从简单的二肽到较大分子的多肽。它们具有多种多样的生物学功能,     

复肝肽口服液中氨基酸含量测定

目的用氨基酸分析仪测定了复肝肽口服液中各种氨基酸的组成。方法复肝肽是一种天然活性物质,其口服液样品经酸水解处理,用氨基酸分析仪进行分析。结果复肝肽口服液中含有天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、精氨酸和色氨酸等18种氨基酸,其中人体必需氨基酸的含量占总氨基酸含量的40．78％。结论说明复肝肽口服液在营养学上有一定的研究价值,在食品中具有保健作用。     

衍生性聚偏二氟乙烯膜用于蛋白质及肽的固相序列测定

目的：研究衍生聚偏二氟乙烯（ＰＶＤＦ）膜用于蛋白质及肽的固相序列测定的可行性。方法：在ＰＶＤＦ膜上引入对苯二异硫氰酸基（ＤＩＴＣ）制成能与蛋白质及肽共价偶联的膜载体。用这种膜载体与蛋白质或肽样品偶联后,进行Ｅｄｍａｎ降解及氨基酸顺序分析。体化学性能稳定,偶联操作简单,结果准确,与蛋白质及肽的偶联率为７８．１９％,Ｅｄｍａｎ降解的重复回收率为９０．２７％,所测氨基酸序列与已序列安全相同。结论：衍生     

乙醇沉淀操作对羚羊角塞注射液中肽类成分和游离氨基酸含量的影响

利用程序升气相色谱法、凝胶色谱法和阴、阳离子交换色谱法及ＵＶ光谱监测等方法研究了羚羊角塞注射液制备过程中,乙醇沉淀操作对其中的肽类和１８种游离氨基酸含量的影响。实验结果表明该操作使游离氨基酸总量损失６１％,而总氨（即肽类和氨基酸）损失约７０％,阳离子交换色谱法和凝胶色谱法可分离纯化该注射液中的肽类成分,为乙醇沉淀工艺的使用和改进提供了实验依据。     

从噬菌体展示随机肽库中筛选豌豆凝集素的结合肽

目的:从噬菌体展示随机肽库中筛选能与豌豆凝集素(PSA)特异结合的短肽.方法:①用豌豆凝集素(PSA)作为靶蛋白,对噬菌体展示的随机六肽库进行亲和筛选;②α-甲基-D-甘露糖苷对筛选出的噬菌体和PSA结合的影响实验(点印迹法); ③选择性地合成了3条6肽ARMWSF、RYDYSY、LRLRQL,用不同浓度的6肽对PSA、ConA与HRP的结合进行竞争抑制实验.结果:经过三轮筛选后,这些噬菌体展示肽有明显的富集,从第三轮挑选的22个克隆的插入氨基酸序列可分为三大类;点印迹结果表明,这些噬菌体展示肽能与PSA特异结合,而α-甲基-D-甘露糖苷不同程度地抑制这种结合; LRLRQL不溶于水,ARMWSF和RYDYSY对PSA和HRP的结合有抑制,而对ConA和HRP的结合没有明显抑制.结论:人工合成的2条6肽和PSA的结合部位与α-甲基-D-甘露糖苷和PSA结合的部位并非相同.     

表皮生长因子受体与Dok1 PTB结构域结合关键位点的确定

目的:确定表皮生长因子受体(EGFR)与Dok1 PTB结构域结合的关键氨基酸残基位点.方法:合成包含磷酸化的酪氨酸残基的EGFR胞内域的5个小肽片段,利用谷胱苷肽S转移酶共沉淀技术确定能够抑制Dok1 PTB结构域与激活的EGFR结合的小肽.结果:pY1086或pY1148小肽能抑制激活的EGFR与Dok1 PTB结构域的结合.结论:pY1086和pY1148是激活的EGFR与Dok1 PTB结构域结合的关键位点.