布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究

目的 观察布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）对破骨细胞增殖及分化的影响,探讨BTK对根尖周炎骨破坏的作用。方法 破骨前体细胞RAW264.7经100 ng·L ^-1核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导5 d后,通过观察细胞形态、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法,验证破骨细胞是否诱导成功。破骨细胞诱导成功后,转染BTK-小干扰RNA（siRNA）24 h,利用RT-qPCR检测TRAP mRNA的表达,采用CCK-8和TRAP酶活性检测法检测破骨细胞的增殖及分化情况。结果 RAW264.7细胞经RANKL诱导5 d后,可见大量体积较大,外观呈圆形、椭圆形,周围有不规则突起及TRAP染色阳性的多核破骨细胞。经BTK-siRNA转染24 h后,破骨细胞TRAP mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）,其增殖及分化能力也明显受到抑制（P<0.05）。结论 抑制BTK表达,可以抑制破骨细胞的增殖及分化;BTK可作为抑制破骨细胞的新靶点。     

蛋白酪氨酸磷酸酶调控破骨细胞作用机制的研究进展

破骨细胞蛋白酪氨酸磷酸酶(osteoclastic protein-tyrosine phosphatase,PTP-oc)是一种特异性表达于破骨细胞和破骨细胞前体细胞中的蛋白质酪氨酸磷酸酶,通过多种机制参与调控破骨细胞的生物学行为.本文从PTP-oc调节破骨细胞活性、分化、粘附3个方面,对其作用机制进行综述,为深入研...     

大黄对破骨细胞性骨吸收作用的研究

从出生２４小时内的日本大耳白兔的四肢长骨中分离出破骨细胞，与牛骨磨片共同培养，培养液中加入大黄素，使终浓度为５×１０６ｍｏｌ／Ｌ和ｌ０５ｍｏｌ／Ｌ，另做空白对照。利用相差显微镜动态观察破骨细胞吸收骨的情况，连续观察７天。计数每个骨片上所形成的吸收陷窝数，并做统计学分析。结果表明：１０５ｍｏｌ／Ｌ的大黄可抑制破骨细胞性骨吸收，使破骨细胞在骨片上形成的吸收陷窝数减少（Ｐ＜０．０５）；而５×ｌ１０－６ｍｏｌ／Ｌ的大黄素虽可部分抑制破骨细胞性骨吸收，但对破骨细胞在骨片上形成的吸收陷窝数无明显影响（０．０５＜Ｐ＜０．２）。     

牙周炎牙槽骨吸收的基础研究—PGE2对破骨细胞性骨吸收的作用

本研究采用分离破骨细胞的体外培养方法,将分离的兔破骨细胞与牛骨片共同培养。相差显微镜观察前列腺素E_2.(Prostaglaodin E_2,PGE_2)对破骨细胞所形成的骨吸收陷窝数及形态学影响。并利用图象分析系统计算吸收陷窝的表面积。结果表明:PGE_2对体外分离的破骨细胞所形成的吸收陷窝数及吸收陷窝面积具有抑制作用。     

补骨脂对分离破骨细胞作用研究

本研究从日本大耳白兔的四肢长骨中分离出破骨细胞，与牛骨片在体外共同培养。在培养液中添加不同浓度补骨脂并设立对照，用倒置相差显微镜观察。结果表明：较高浓度补骨脂（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）能抑制分离的破骨细胞在骨片上形成的吸收陷窝的增加与扩张（Ｐ＜０．０５）。低浓度（５Ｘ１０一５ｍｏｌ／Ｌ）对破骨细胞作用不显著（Ｐ＞０．５）。     

骨形成蛋白对破骨细胞的调节作用

骨形成蛋白与骨、软骨、肌腱、牙周组织、牙本质的形成有极为密切的关系,具有明确的诱导骨形成作用。但是,国外学者研究发现,骨形成蛋白对破骨细胞也具有正向作用,可以促进骨髓基质细胞和脾细胞等分化成为多核的破骨样细胞。本文就骨形成蛋白对破骨细胞调节作用的研究进展作一综述。     

内毒素对破骨细胞性骨吸收和成骨细胞介导作用的影响

采用扫描电统图像分析技术定量研究牙髓类杆菌和具核梭杆菌内毒素对破骨细胞性骨吸收和成骨细胞介导作用的影响,发现在低深度下,内毒素能促进破骨细胞骨吸收量的增加,而高浓度(50μg/ml)则可抑制破骨细胞.未见内毒素对成骨细胞的介导作用。     

破骨细胞分化因子诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞的实验研究

目的:探讨破骨细胞分化因子(ODF)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)联合应用进行体外诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞(OC)的能力。方法:收集5～6周小鼠骨髓细胞,在含M-CSF(10 ng/ml)的α-MEM全培养液中培养24h,然后将悬浮生长的细胞接种到24孔培养板,并加入不同浓度的ODF和M-CSF。,通过观察抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色的阳性细胞和能否在骨磨片上形成吸收陷窝来鉴定OC形成情况。结果:在只加入ODF或M-CSF一种细胞因子时,未见有TRAP阳性或CTR阳性细胞形成,同时加入ODF和M-CSF,可形成典型的OC。TRAP阳性多核细胞的数目和培养液中钙离子浓度的增加与ODF的浓度呈正相关。结论:小鼠骨髓来源的单核细胞在ODF和M-CSF共同作用下可形成具有骨吸收功能的OC,为体外研究OC的分化发育和功能调节提供了一种新的方法。     

Notch1蛋白高表达抑制破骨细胞增殖和分化

目的探究体外培养条件下Notch1蛋白高表达对细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（MCSF）诱导的骨髓源破骨细胞增殖分化的影响。方法体外培养Rosa-notch1转基因小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,采用RANKL和MCSF刺激BMSCs向破骨细胞方向分化。培养至第3天,实验组和对照组分别转染携带Cre重组酶和绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒（Ad-Cre-GFP）和携带GFP的重组腺病毒（Ad-GFP）,启动实验组Notch1高表达,采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch信号通路成分（Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Delta1、Delta3、Delta4、Jagged1）、靶基因（Hes1）mRNA表达量以及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）在诱导后mRNA的表达量。采用TRAP染色法观察破骨细胞增殖分化情况。结果TRAP染色显示实验组破骨细胞形成数量明显少于对照组（P<0.05）。与对照组相比,实验组Notch1、Notch3、Jagged1、Delta3、Hes1 mRNA表达量明显增高（P<0.05）,TRAP的mRNA表达量明显降低（P<0.05）。结论Notch1高表达抑制RANKL和MCSF诱导的破骨细胞增殖分化。     

牙龈卟啉单胞菌对破骨前体细胞分化的调控及其机制研究

目的:探究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)在体外直接共培养刺激和在体内远处局部刺激对破骨前体细胞(osteoclast precursors, OCPs)分化的调控及其机制。方法:提取培养6～8周雄性C57/BL6小鼠股骨OCPs。将OCPs与不同感染复数的P.g直接共培养6 h后,检测并比较各组OCPs的活性及亚型比例。去除P.g后,继续诱导OCPs向破骨细胞分化。于小鼠右侧股骨制造骨缺损,并在骨缺损处注射含或不含P.g的悬液,每周两次。4周后提取培养小鼠左侧股骨OCPs,并诱导OCPs向破骨细胞分化。分别在各组OCPs培养的第4天和第6天,检测并比较各组间的成熟破骨细胞数量、相关基因和蛋白的表达水平。结果:P.g的体外直接共培养刺激不影响OCPs的活性及各亚型比例,但抑制了OCPs向破骨细胞分化,这与P.g刺激后OCPs的破骨分化相关基因和蛋白均下降有关。P.g的体内远处局部刺激,上调了OCPs部分与破骨分化和炎性相关基因的表达,但OCPs向破骨细胞分化的能力不受其影响。结论:P.g的体外直接共培养刺激会抑制OCPs向破骨细胞分化,而体内局...     

破骨细胞促进骨重建的研究进展

骨重建在口腔医学领域具有重要的价值,而破骨细胞对于骨重建具有不可替代的促进作用。目前,以破骨细胞-成骨细胞耦联为靶向,即利用破骨细胞促进骨重建的研究和应用极少。本文就骨吸收和骨生成间的动态耦联、破骨细胞对骨重建的促进作用、破骨细胞促进骨重建的分子机制等研究进展作一综述。     

白介素-23对破骨细胞分化及功能直接调节作用的实验研究

目的检测白介素-23（IL-23）是否对破骨细胞分化及功能有直接调节作用。方法在体外培养小鼠破骨细胞的过程中加入不同浓度的IL-23,观察破骨细胞形成数量及吸收陷窝的变化以及组织蛋白酶-K mRNA的表达变化。同时,以RAW264.7诱导破骨细胞,采用RT-PCR及FACS方法检测IL-23刺激下,RANK mRNA及蛋白的表达变化情况。结果 IL-23作用下,小鼠破骨细胞数量增加,形成的吸收陷窝增多,组织蛋白酶-K mRNA的表达增强。同时在IL-23刺激下,破骨前体细胞表面RANK mRNA及蛋白的表达增强。结论 IL-23可以通过调高破骨前体细胞表面RANK的表达,直接促进小鼠破骨细胞分化。     

钛颗粒对破骨细胞骨吸收功能影响的研究

目的:研究钛颗粒对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法:分别将含有和不含有钛颗粒的培养基与诱导的破骨细胞联合培养48h后,检测破骨细胞的骨吸收陷窝,破骨细胞对钛颗粒的吞噬及钛颗粒对破骨细胞骨架的影响。结果:钛颗粒培养基组份的骨吸收陷窝面积明显大于比不含钛颗粒培养基的组份,钛颗粒可被破骨细胞吞噬,但对其细胞骨架无显著影响。结论:钛颗粒可促进破骨细胞的骨吸收功能。     

CXC-型趋化因子4对单核巨噬细胞破骨向分化影响的实验研究

目的:研究CXC-型趋化因子4(CXCL4)对体外核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导小鼠骨髓来源单核巨噬细胞(BMDM)向破骨细胞分化的影响。方法:无菌分离小鼠BMDM,使用50 ng/mL M-CSF以及不同浓度的CXCL4刺激细胞,CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力。在M-CSF及RANKL均存在的前提下,以不同浓度的CXCL4作为干预因素,体外诱导细胞分化为破骨细胞,另设组加入BX471阻断剂处理细胞。TRAP染色法观察破骨细胞的形态并统计破骨细胞数目,RT-PCR检测JDP-2、NFATc1、c-Fos、MMP-9、TRAP、CTSK mRNA的表达情况。结果:不同浓度梯度的CXCL4均可增强BMDM的增殖活性及迁移能力;在RANKL及MCSF均存在的前提下,加入不同浓度CXCL4的各实验组的TRAP染色阳性的细胞数量明显多于对照组(P<0.05),而在BX471阻断剂预处理组中TRAP染色阳性的细胞数量低于各实验组,但高于对照组(P<0.05)。此外,CXCL4能够上调破骨相关基因的表达,而BX471则能部分抑制上述mRNA表达的增高(P<0.05)。结论:CXCL4能提高BMDM的增殖及迁移能力,并促进RANKL介导的BMDM向破骨细胞分化,其促进作用可能与CXCL4/CCR1通路有关。     

JNK在牙囊细胞破骨细胞向分化的实验研究

目的　通过特异性抑制剂SP600125抑制JNK信号通路,探究大鼠牙齿萌出中JNK信号在成熟破骨细胞形成过程中的相关调控机制。方法 分离培养SD大鼠牙囊细胞。用不同浓度的SP600125对细胞预处理,实时定量PCR检测DFCs中核因子κB受体活化剂配体、骨保护素基因表达量。DFCs和BMMs建立共培养体系,TRAP染色观察OC的数量。结果 SP600125在20μmol/L浓度范围内对DFCs的增殖无显著影响（P﹥0.05）,RT-PCR结果示：SP600125干预72h后,RANKL基因表达量下降,OPG上升,与对照组比较差异均有统计学意义（P﹤0.05）。TRAP染色阳性计数结果：各组均有OC生成,9d较7d产生的OC数显著增加,加入不同浓度的抑制剂组破骨细胞数均有减少,与对照组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论 本研究阐明了在大鼠牙齿萌出中,SP600125通过抑制JNK信号通路,对OC形成具有一定的抑制作用,可为牙齿萌出、牙槽骨改建等破骨细胞相关性口腔疾病提供研究基础。     

张力作用下牙周组织破骨细胞分化因子、破骨细胞发生抑制因子表达变化的研究

目的:运用原位杂交的方法,观察破骨细胞分化因子(ODF)、破骨细胞发生抑制因子(OCIF)在正畸大鼠牙周组织改建过程中张力侧的表达变化,探讨ODF、OCIF与正畸牙周组织改建的关系。方法:8周龄成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、牙齿移动1d组、3d组、5d组、7d组,共5组,每组6只。在大鼠上颌右侧第一磨牙与上颌切牙之间安置正畸矫治器装置,施力50g。在相应时间段处死实验动物,取材固定,进行原位杂交染色、图像分析。结果:在牙齿移动3d后,OCIF原位杂交染色在张力侧逐渐深染,OCIF mR-NA阳性细胞数量逐渐增多,OCIF阳性表达在5d时达到最高,并可见到有新骨形成;7d时OCIF阳性表达及分布情况与3d时相类似。张力侧牙周膜细胞、成骨细胞的ODF原位杂交染色阳性反应随天数的增加有逐渐增强趋势,并可观察到有ODFmRNA阳性破骨细胞出现,但表达变化并不明显。结论:ODF及OCIF参与了正畸牙周组织改建过程,OCIFmRNA在张力区随正畸牙齿移动表达升高具有时间依赖性。     

降钙素对人骨巨细胞瘤组织中破骨细胞的影响

目的观察降钙素对人骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCT)组织中纯化的破骨细胞的数量以及细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)蛋白表达的影响。方法利用破骨细胞贴壁快以及耐胰蛋白酶的特性,采用0.25%胰蛋白酶和0.2%I型胶原酶来分离纯化骨巨细胞瘤中的破骨细胞,设立对照组和试验组,在实验组培养液中加入浓度为10-8mol/L的降钙素,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞数目、形态,用免疫组化方法观察RANKL的表达。结果从骨巨细胞瘤中纯化方法得到的破骨细胞数量较多,加药组破骨细胞数目较对照组明显减少(P<0.05)。RANKL的蛋白表达两组未见明显差异(P>0.05)。结论降钙素可显著的抑制骨巨细胞瘤中纯化破骨细胞的分化和功能。     

Avagacestat抑制破骨细胞形成及溶骨功能改善骨关节炎骨破坏

目的 探究γ-分泌酶抑制剂Avagacestat通过抑制破骨细胞的形成及溶骨功能,抑制骨关节炎的进展。方法 提取6周龄C57鼠骨髓细胞诱导为巨噬细胞扩增培养,加入M-CSF及RANKL诱导后通过CCK8测定Avagacestat对该细胞的半数抑制浓度(IC₅₀),设置0、120、240 nmol/L 3种Avagacestat浓度组,对比破骨细胞形成实验、功能实验并检测3组细胞TRAP、C-fos、Cath-K等破骨相关基因的表达。建立LPS诱导关节炎实验动物模型,通过三维骨重建检测软骨下骨溶解情况、通过HE染色及TRAP染色检测破骨细胞分布情况。结果 在24、48、96 h 3个时间点,Avagacestat对破骨细胞的IC₅₀分别为493、426、405 nmol/L。TRAP实验显示Avagacestat抑制破骨细胞形成,骨板骨吸收实验证实Avagacest抑制溶骨功能,且240 nmol/L浓度的Avagacestat对破骨细胞形成及功能的抑制显著高于120 nmol/L;RT-PCR结果提示,加药后溶骨相关基因TRAP、C-fos、...