hBMP-7基因修饰犬骨髓基质干细胞复合珊瑚羟基磷灰石修复下颌骨缺损

目的:构建携带人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)基因的重组腺病毒载体,体外转染犬骨髓基质干细胞(dMSCs)复合珊瑚羟基磷灰石(coral hydroxyapatite, CHA),观察其修复下颌骨缺损的效果。方法:利用AdEasy腺病毒表达系统,体外构建高效表达hBMP-7重组腺病毒载体,转染dMSCs 与珊瑚羟基磷灰石支架材料复合,再分别植入取材动物的自体下颌骨缺损区,分别于4周和8周取材观察成骨情况。结果:大体观察、X线检查及组织学观察均发现构建组织工程骨在祼鼠皮下及骨缺损处均有明显新骨组织形成。结论:构建携带人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)基因的重组腺病毒载体,体外转染dMSCs后复合珊瑚羟基磷灰石有较多量骨组织形成,可有效修复下颌骨缺损。[关键词] 人骨形态发生蛋白7 骨髓基质干细胞 腺病毒 组织工程     

BMP-9/EPO双基因共转染ADSCs复合nHAC/PLA支架修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的：探讨腺病毒介导BMP-9/EPO双基因共转染脂肪干细胞（ADSCs）复合nHAC/PLA支架材料促进体内成骨的可行性。方法：分离培养兔ADSCs,利用重组腺病毒构建携带BMP-9、EPO、BMP-9/EPO基因的表达载体,并转染至兔ADSCs。14 d后,在荧光显微镜下观察各组细胞荧光表达情况,计算病毒转染效率,采用Western免疫印迹检测各组细胞 BMP-9及EPO蛋白的表达。50只大白兔随机分为5组,A组为空白组,B组为单纯材料组,C组为BMP-9/nHAC/PLA组,D组为EPO/nHAC/PLA组,E组为BMP-9/EPO/nHAC/PLA组。制备兔双侧下颌骨缺损模型,按照实验分组,将转染组细胞分别与nHAC/PLA支架复合培养后植入兔下颌骨缺损处,于4、8、12周在缺损处取材进行影像学、组织学检测及扫描电镜观察,比较各组动物下颌骨缺损修复情况。采用 SPSS17.0软件包对结果进行统计学分析。结果：荧光显微镜下观察,BMP-9、EPO及BMP-9/EPO重组腺病毒均能稳定转染 ADSCs,转染效率为 80%～93%。转染后,BMP-9、EPO及BMP-9/EPO基因和蛋白均能稳定表达。转染后的ADSCs与nHAC/PLA支架复合,其骨缺损区修复情况优于对照组,且BMP-9/EPO/nHAC/PLA组成骨情况优于其他各组。扫描电镜下见转染组骨缺损与材料结合修复情况优于对照组,BMP-9/EPO/nHAC/PLA组修复最明显。结论：BMP-9、EPO均可转染ADSCs并稳定表达。与nHAC/PLA支架材料复合后,可显著促进下颌骨缺损的修复,为骨组织修复工程提供了新的选择。     

布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究

目的 观察布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）对破骨细胞增殖及分化的影响,探讨BTK对根尖周炎骨破坏的作用。方法 破骨前体细胞RAW264.7经100 ng·L ^-1核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导5 d后,通过观察细胞形态、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法,验证破骨细胞是否诱导成功。破骨细胞诱导成功后,转染BTK-小干扰RNA（siRNA）24 h,利用RT-qPCR检测TRAP mRNA的表达,采用CCK-8和TRAP酶活性检测法检测破骨细胞的增殖及分化情况。结果 RAW264.7细胞经RANKL诱导5 d后,可见大量体积较大,外观呈圆形、椭圆形,周围有不规则突起及TRAP染色阳性的多核破骨细胞。经BTK-siRNA转染24 h后,破骨细胞TRAP mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）,其增殖及分化能力也明显受到抑制（P<0.05）。结论 抑制BTK表达,可以抑制破骨细胞的增殖及分化;BTK可作为抑制破骨细胞的新靶点。     

布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究

目的 观察布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）对破骨细胞增殖及分化的影响,探讨BTK对根尖周炎骨破坏的作用。方法 破骨前体细胞RAW264.7经100 ng·L ^-1核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导5 d后,通过观察细胞形态、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法,验证破骨细胞是否诱导成功。破骨细胞诱导成功后,转染BTK-小干扰RNA（siRNA）24 h,利用RT-qPCR检测TRAP mRNA的表达,采用CCK-8和TRAP酶活性检测法检测破骨细胞的增殖及分化情况。结果 RAW264.7细胞经RANKL诱导5 d后,可见大量体积较大,外观呈圆形、椭圆形,周围有不规则突起及TRAP染色阳性的多核破骨细胞。经BTK-siRNA转染24 h后,破骨细胞TRAP mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）,其增殖及分化能力也明显受到抑制（P<0.05）。结论 抑制BTK表达,可以抑制破骨细胞的增殖及分化;BTK可作为抑制破骨细胞的新靶点。     

hOPG转染对大鼠BMSCs及种植体周围成骨的影响

目的：研究体内、体外人骨保护素（hOPG）基因对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨功能和种植体周围成骨的影响。方法：构建含hOPG的重组腺病毒,蛋白印迹杂交法Western Blot检测转染细胞OPG蛋白功能表达。倒置显微镜观察转染细胞形态差别,茜素红S染色鉴定转染细胞的体外成骨能力。建立大鼠股骨干骺端羟基磷灰石涂层种植体植入动物模型。植入种植体前,实验组于植入体窝注入10μL的病毒悬浮液;对照组注入10μL的PBS。4周后取材,HE染色,光镜下观察,定量分析。结果：Western blot结果显示OPG在蛋白水平高表达;茜素红S染色转染组和未转染组都出现了较多散在的致密圆形矿化结节,萃取染色后分光光度检测两者无明显差异;体内实验显示实验组种植体周围成骨明显高于对照组。结论：体外pDC316-hOPG-EGFP成功转染大鼠BMSCs,转染hOPG基因的BMSCs能持续稳定的高表达hOPG。转染不影响BMSCs的成骨活性。种植体周围注射hOPG具有促进种植体周围成骨的作用。     

重组腺病毒载体Ad5-hOPG-EGFP介导hOPG基因在犬牙周韧带细胞中的表达检测

[摘要]目的：观察人骨保护素（humanosteoprotegerin,hOPG）在犬牙周韧带细胞（periodontalligamentcells,PDLCs）中的表达情况,为后期的牙周组织再生实验制备高表达目的基因hOPG的种子细胞。方法：体外构建携带hOPG基因的腺病毒载体Ad5-hOPG—EGFP,并将其转染Beagle犬PDLCs,通过流式细胞术、实时定量RT．PCR、ELISA以及WesternBlot检测目的基因的转录和表达。结果：重组腺病毒Ad5一hOPG—EGFP成功转染犬PDLCs,转染72h后转染效率达到80％以上,转染的细胞发出较强的绿色荧光;基因和蛋白水平检测表明,hOPG在犬PDLCs中得到了有效表达。结论：重组腺病毒介导的hOPG基因可以在PDLCs中有效表达。     

腺病毒介导的人端粒酶反转录酶牙周膜细胞系的建立

目的 通过腺病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶反转录酶（hTERT）基因的牙周膜细胞系,以构建腺病毒介导的高效、稳定的hTERT牙周膜细胞系。方法 聚合酶链反应（PCR）法扩增hTERT基因编码序列,构建同源重组腺病毒质粒pAd-pshuttle-cmv-hTERT,收集腺病毒颗粒后感染人牙周膜细胞,实时荧光定量PCR检测hTERT及成骨相关基因碱性磷酸酶、核心结合因子2、骨涎蛋白、骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达水平,茜素红染色观察成骨分化能力,CCK-8检测细胞增殖能力。结果 成功构建了含hTERT基因的腺病毒颗粒并感染牙周膜细胞,感染细胞与正常牙周膜细胞形态相似;实时荧光定量PCR结果显示hTERT及成骨相关基因在感染细胞中高表达;茜素红染色显示牙周膜细胞系成骨能力强;CCK-8结果示牙周膜细胞系增殖能力强。结论 通过腺病毒法成功建立了过表达hTERT的人牙周膜细胞系,其具有较强的成骨分化能力,这为研究牙周膜再生机制提供了一个理想的细胞系。     

种植体＋bFGF基因修饰骨髓基质细胞复合Bio-Oss胶原修复犬颌骨缺损的实验研究

目的:(1)观察经bFGF基因转染的犬骨髓基质细胞(BMSC)复合多孔矿化Bio-Oss胶原骨修复下颌骨极限骨缺损的效果.(2)观察骨融合种植体与骨髓来源的成骨细胞及多孔矿化Bio-Oss胶原支架复合体,植入体内后新骨的形成及与种植体的愈合情况.方法:用脂质体转染技术将bFGF基因转入犬BMSC,将转染和未转染细胞分别与Bio-Oss及凝胶复合.杂种犬8只,按植人物不同分为2组:(1)种植体+犬BMSC+凝胶+Bio-Oss胶原材料组;(2)种植体+bFGF基因转染犬BMSC+凝胶+Bio-Oss胶原材料组,修复犬下颌骨极限骨缺损.于术后24周取材,分别行大体、放射线、组织学观察骨缺损的修复情况.结果:(1)种植体+犬BMSC+凝胶+Bio-Oss骨胶原组,基本上由新生骨组织所修复,但骨组织密度稍不均匀,种植体与周嗣骨组织基本上形成骨结合.(2)种植体+bFGF基因转染犬BMSC+凝胶+Bio-Oss胶原材料组:骨缺损区基本由新生成熟的骨组织所修复,骨小梁形成,与种植体骨结合良好.结论:Bio-Oss骨胶原为载体的自体骨髓基质细胞移植能有效地修复骨缺损,是骨组织工程良好的支架材料,并且种植体与组织工程骨能够形成良好的骨结合.     

自体颏外板在眶底骨折缺损重建中的应用

目的 探讨自体颏外板修复眶底骨折缺损的效果。方法 对11例眶底骨折缺损患者,采用自体下颌骨颏外板进行眶底重建修复,术后随访6~12月。结果 11例患者术后伤口均一期愈合,眶底结构恢复,无视力下降和眼球运动受限,移植物均无感染排出或吸收,供区无并发症发生。结论 自体颏外板是眶底骨缺损较为理想的一种修复材料。     

蓬乱蛋白2在高脂血症大鼠种植体周围早期表达的实验研究

目的 研究蓬乱蛋白2（Dvl2）在高脂血症大鼠种植体周围早期的表达。方法 24只雄性Wistar大鼠,随机均分为实验组和对照组,分别给予高脂和普通饲料。8周后,检测大鼠血脂水平并于股骨干骺端植入种植体,术后1、3、5 d处死,获得种植体周围骨组织。采用亚甲基蓝-酸性品红染色观察种植体-骨界面,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测Runt相关转录因子2（Runx2）、组织蛋白酶K（CatK）和Dvl2的表达,免疫印迹和免疫共沉淀法检测Dvl2、磷酸化Dvl2和泛素化Dvl2的表达。结果 与对照组相比,实验组的成骨细胞、Runx2、Dvl2和磷酸化Dvl2减少（P<0.05）,而破骨细胞、CatK和泛素化Dvl2增多（P<0.05）。结论 高脂血症可能通过上调Dvl2及磷酸化、下调泛素化而抑制种植体周围早期骨改建。     

载银锌介孔钙硅纳米粒子与聚己内酯复合材料的体外生物活性研究

目的 评价载银(Ag)或锌(Zn)的介孔钙硅纳米粒子(mesoporous calcium-silicate nanoparticles,MCSNs)和聚己内酯(poly-ε-caprolactone,PCL)的复合材料的理化性能、体外生物活性及促进成骨能力.方法 通过加热熔融法制备PCL-MCSNs、PCL-Zn-M...     

选择性激光烧结多孔钛种植体及其性能研究

目的 分析选择性激光烧结（SLS）多孔钛种植体的机械性能及生物相容性,探讨其与壳聚糖（CS）/羟磷灰石（HA）复合涂层结合后的促骨结合作用。方法 制备Ti6Al4V试件,部分试件表面进行CS/HA涂层处理;对试件进行扫描电子显微镜观察和机械性能检测;体外培养MC3T3-E1细胞,进行活/死细胞染色、甲基噻唑基四唑（MTT）及碱性磷酸酶（ALP）水平检测;将柱状螺纹种植体植入兔股骨髁部,分析其体内生物学性能。结果 试件准弹性梯度随孔隙率增大而减小,孔隙率为30%时与皮质骨接近,70%时与松质骨接近;试件具有良好的生物相容性。复合CS/HA涂层后可促进MC3T3-E1细胞增殖、分化,有利于骨组织长入孔隙,形成良好的骨结合。结论 多孔钛种植体具有良好的机械性能和生物相容性,与CS/HA涂层结合后具有骨诱导性,利于形成稳定的骨结合。     

��п���������մɴٽ��������ɴ������Ǽ���ȱ���޸�ʵ���о�

??Objective    To evaluate the advancement of zinc for bone repair with osteoporosis. Methods    The osteoporosis model have been established by ovariectomy??OVX??in female rats  for 12 weeks. Then??critical defects??5 mm??were prepared in bilateral mandible with a trephine and the rats were divided into three groups as the repair methods??in which experimental group were restored with zinc-releasing calcium phosphate ceramic/hydroxyapatite??Zn-TCP/HA????control group with β-TCP and blank control group were sutured directly. After 12 weeks??improved bone repair and shorten healing time in the OVX rats would be tested through biomechanical tests??radiographic and histological examination. Results    Osteoporosis in mandibular of female rats had been confirmed by bone density testified. Then??12 weeks after implantation??experimental group showed better bone repair than control group and blank control group through biomechanical tests??radiographic and histological examination. Conlusion    Zn-releassing scaffolds would obviously improved bone regeneration of the critical-sized defect in OVX rats model and provides valuable information for the therapy of osteoporosis related diseases by tissue engineering approach.     

可载药的磁性聚己内酯/明胶微球支架的制备及其体外成骨性能的研究

目的 制备出可载药的磁性颗粒支架,并研究其体外成骨性能.方法 使用复乳法制备聚己内酯(polycaprolactone,PCL)/明胶微球(PCL/gel microsphere,PGM)支架,通过相差显微镜、场发射电子显微镜(field emission scanning electron micro?scope,F...     

含锌磷酸三钙陶瓷促进骨质疏松大鼠下颌骨极限缺损修复实验研究

目的    评价含锌生物材料对于骨质疏松骨修复的作用。方法    通过摘除成年雌性大鼠双侧卵巢（去势）的方法建立下颌骨骨质疏松动物模型,12周后检测模型成功后,建立下颌骨极限缺损模型,随后将动物随机分为3组。实验组植入含锌磷酸三钙陶瓷（Zn-TCP/HA）,对照组植入双相磷酸钙陶瓷（β-TCP）,空白对照组不植入材料。在植入材料12周后处死动物,进行组织学观察和生物力学检测。结果    通过骨密度仪测试证实去势大鼠的下颌骨有骨质疏松发生;材料植入骨缺损部位12周后,通过影像学检查、生物力学检测以及组织学观察发现,实验组骨修复效果明显优于对照组和空白对照组。结论    锌离子能够加速和改善骨质疏松骨缺损的修复。     

微小RNA-29a-3p调节卷曲蛋白4表达影响高脂血症大鼠种植体骨整合的实验研究

目的 研究microRNA-29a-3p（miR-29a-3p）对高脂环境下大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化和高脂血症大鼠种植体骨整合的影响及其作用位点。方法 1）体外实验：对BMSCs分别进行普通和高脂成骨诱导,通过逆转录实时定量聚合酶链反应和Western blot检测miR-29a-3p及成骨相关因子碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关基因2（Runx2）的基因和蛋白质表达;高脂培养的BMSCs分别转染miR-29a-3p模拟物、抑制物及阴性对照（NC）质粒,RT-qPCR检测miR-29a-3p、ALP及Runx2基因表达情况,Western blot检测ALP、Runx2蛋白表达情况。通过靶基因预测软件（Target Scan、MiRNA.org等）预测miR-29a-3p与成骨相关的靶基因为卷曲蛋白4（Fzd4）,双荧光素酶报告检测miR-29a-3p与Fzd4的相互作用关系。2）体内实验：高脂血症大鼠为实验组,普通大鼠为对照组,两组分别植入种植体,检测种植体周围骨组织中miR-29a-3p、ALP、Runx2的表达差异;行种植体-骨组织的硬组织切片,亚甲基蓝-酸性品红染色,进行组织学观察。分别将miR-29a-3p过表达慢病毒载体及空白对照慢病毒载体注射入高脂血症大鼠,种植体植入后3、10 d检测种植体周围骨组织中ALP、Runx2的表达变化以研究miR-29a-3p对高脂血症大鼠成骨的作用。结果 高脂组与普通组相比,ALP、Runx2和miR-29a-3p表达下调,BMSCs成骨分化能力下降。miR-29a-3p模拟物组与抑制物组相比,ALP、Runx2表达升高,BMSCs成骨分化能力增强。体内实验也得到了相似结果。双荧光素酶报告基因分析证实miR29a-3p通过直接结合3’-UTR抑制Fzd4表达。结论 miR-29a-3p对高脂环境下大鼠BMSCs成骨分化起正向调节作用,可直接与Fzd4结合调节成骨分化;miR-29a-3p能够促进高脂血症大鼠种植体周围成骨标志基因的表达,有利于骨整合。     

CAD/CAM制作个性化钛网联合髂骨移植重建单侧下颌骨大型轮廓缺损

目的 探讨CAD/CAM技术联合个性化预成型钛网及游离髂骨移植修复单侧下颌骨大型轮廓缺损的可行性及有效性.方法 选取四川大学华西口腔医院正颌及关节外科2015年11月—2019年12月的15例单侧下颌骨大型轮廓缺损的患者.采用基于逆向工程的计算机辅助设计/计算机辅助制作(CAD/CAM)技术,镜像重建患侧下颌骨轮廓并制...     

BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的：探讨BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究的可行性。方法：36只新西兰大白兔随机分为3组,每组12只,双侧下颌骨制备缺损模型。A组植入BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料;B组植入BMSCs复合载蛇床子素支架材料,C组单植入纳米羟基磷灰石支架材料。分别于术后2、4、8、12周处死实验动物,制备组织标本,行大体观察、影像学分析、HE染色、扫描电镜检测,并对影像学分析值及成骨情况加以评价,对分析数据结果使用SPSS17.0统计软件进行分析,P〈0.05有统计意义。结果：影像学检查及组织学染色显示A组骨缺损处愈合程度,成骨速度及其质量明显优于B组C组;扫描电镜显示A组该复合材料与组织相容性好,无炎症刺激反应;统计牙CT分析数据及新生骨面积,A组的成骨情况明显优于B组与C组（P〈0.05）。结论：BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料有明显骨诱导作用,是一种新型复合材料,可望成为临床应用中修复颌骨缺损的新型材料。     

Dimensional stability of the alveolar ridge after implantation of a bioabsorbable bone graft substitute: a radiographic and histomorphometric study in rats

This study evaluated reconstruction of the alveolar ridge after molar extraction in rats with bioabsorbable bone repair scaffolds. The material was prepared from the unsaturated polyester poly(propylene glycol-co-fumaric acid) (PPF), which may be cured in situ to form a porous scaffold. The intention is to use this material either as a stand-alone bone graft substitute or as an extender to autograft harvested from mandibular reconstruction sites. The bioactivity of the graft substitute was investigated in a rat residual ridge resorption model. PPF bone repair material was injected into the defect site, where it cross-linked in situ in the presence of a hydroxyapatite (HA) filler and effervescent agents. The PPF-based material develops porosity during an in situ cure by generating carbon dioxide during the effervescent reaction of citric acid and sodium bicarbonate. The incorporation of HA promotes osteoconduction within the bone repair scaffold. In this study, bioactivity of the porous scaffold was evaluated as a function of HA particle size (micrometer-sized vs nanometer-sized particles). The maxillary or mandibular molars on the right side were extracted from 96 adult Sprague-Dawley rats. A 2-mm round bur was used to create a uniform trench defect measuring 2 mm in diameter, 2 mm in depth, and 4 mm in length at each extraction site. The defect site was (1) treated with PPF bone repair material containing nanometer-sized HA, (2) treated with PPF material containing micrometer-sized HA, (3) treated with demineralized freeze-dried bone allograft, or (4) left untreated. Rats were sacrificed at 2, 4, 7, and 12 weeks postoperative. Resorption of the residual alveolar ridge was assessed by radiographic outcomes. Bone ingrowth through the defect site was measured by histomorphometric outcomes. Mandibular and maxillary ridge heights increased for all treatments used in this study. There were no clinical indications that addition of either of the PPF bone repair materials retarded hard- or soft-tissue healing of the extraction sites. Although not statistically significant, the mandibular defects treated with PPF containing nanometer-sized HA healed at a faster rate as determined by ridge height and new bone formation measurements when compared with the other treatments. These findings suggest the feasibility of using PPF bone graft substitutes for oral-maxillofacial applications.