牛骨载体钙含量对小鼠体内载体植入局部α肿瘤坏死因子基因表达…

为了探讨不同钙含量牛松质骨载体植入局部α肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）的基因表达及载体钙盐对局部细胞免疫的作用，作者将两种经不同处理（不脱钙和部分脱钙）的牛松质骨载体植入小鼠股部肌袋内，于术后３，５，１０和２０天取材，制备石蜡切片，采用核酸分子原位杂交的方法，定性定位检测分析ＴＮＦαｍＲＮＡ的表达，结果发现，不脱钙组载体植入局部ＴＮＦαｍＲＮＡ的表达水平明显高于部分脱钙组；植骨术后１０天，ＴＮＦαｍＲＮ     

异种植骨局产肿瘤坏死因子—α和白细胞介素6mRNA表达与意义

目的：观察肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦα）和白细胞介素６（ＩＬ－６）ｍＲＮＡ在异种植局部的表达情况并探讨其意义。材料与方法；将经过一定化学处理的牛松质骨载体植入小鼠股部肌袋内，于术后３、５、１０、２０和３０天取材，制备石蜡切片，应用原位杂交技术检测植骨局部ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ的细胞定位表达并分析其表达规律。结果：术后３天植骨局部出现ＴＮＦ－αｍＲＮＡ阳性表达，术后５天出现ＩＬ－６ｍＲＮＡ阳性表     

骨形态发生蛋白在异种植骨局部的免疫调节作用

目的观察骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）在异种植骨局部对肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和白细胞介素６（ＩＬ６）基因及蛋白分子表达的调节作用。方法将含有一定抗原性的牛松质骨载体与不同剂量的牛ＢＭＰ复合,植入小鼠股部肌袋,于术后５、１０、２０天取材,制备石蜡切片,采用核酸分子原位杂交和免疫组化的方法,定性定位检测植骨局部ＴＮＦα和ＩＬ６ｍＲＮＡ及蛋白分子的表达情况,通过图像分析,确定ＴＮＦα和ＩＬ６ｍＲＮＡ及蛋白分子的表达强度,分析植骨局部不同计量ＢＭＰ对ＴＮＦα和ＩＬ６表达的影响。结果植骨术后５、１０、２０天,各组植骨局部均检测到ＴＮＦα和ＩＬ６ｍＲＮＡ及蛋白分子阳性表达,以单纯载体组表达最强,高剂量ＢＭＰ组表达最弱（Ｐ＜０．０１）;牛松质骨载体中复合的ＢＭＰ对植骨局部ＴＮＦα和ＩＬ６表达有抑制作用,其表达抑制程度与ＢＭＰ呈剂量依赖关系。结论外源性ＢＭＰ在异种植骨局部对ＴＮＦα和ＩＬ６基因及蛋白分子表达有抑制作用,提示ＢＭＰ参与异种植骨局部细胞免疫调节。     

β-转化生长因子对异种骨移植局部肿瘤坏死因子-α mRNA表达的影响

目的 研究β－转化生长因子（ＴＧＦ－β）在异种骨移植局部对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）－α ｍＲ－ＮＡ表达的调节作用。方法 将ＴＧＦ－β复合于牛松质骨载体中并植入小鼠股部肌肉内,在术后４、７、１４和２１ｄ,应用原位杂交技术检测骨局部ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ的表达与细胞定位,图像分析观察ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ表达量的变化规律。结果 术后４、７、１４和２１ｄ,植骨局部均可检测到ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ的表达。ＴＮＦ－     

异种植骨局部细胞因子表达与诱导成骨的关系研究

目的：观察异种骨移植局部肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）和白细胞介素－６（ＩＬ－６）基在表达对ＢＭＰ诱导成骨的影响。材料与方法：将牛松质骨制备成不同抗原性载体，并与牛骨形态发生蛋白（ｂＢＭＰ）复合，植入小鼠股部肌袋，于术后５，１０和２０天取材，制备石蜡切片，采用核酸分子原位杂交的方法，定位定性检测植骨局部ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达。通过碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性测定及组织成骨量图像分析，确定ＢＭ     

异种骨移植局部白细胞介素—8基因及蛋白表达与细胞定位

目的：观察白细胞介素８（ＩＬ－８）关异种骨移植局部的表达及定位。方法：将牛松质骨载体植入小鼠股部股肉内。于术后４、７、１４和２１天取材，应用原位杂交和免疫组织化学技术检测植骨局部ＩＬ－８ｍＲＮＡ及蛋白的表达与细胞定位。结果：术后４、７、１４和２１天，植骨局部均有ＩＬ－８ｍＲＮＡ及蛋白的表达。ｍＲＮＡ主要定位于载体周边的单核细胞和巨噬细胞，成纤维细胞、部分间充质细胞、血管内皮细胞也有阳性表达。免疫组     

急性坏死性胰腺炎生长抑素治疗后血内毒素,TNF—α和肝TNF—αmRNA …

目的 探讨急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）的血内毒素，ＴＮＦ－α和ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达的变化以进一步探讨多器官功能障碍综合征（ＭＯＤＳ）的发生机制，以及生长抑素的治疗作用，材料和方法 将ＳＤ大鼠随机分为ＡＮＰ组、ＡＮＰ＋生长抑素组和正常对照组。经这行注射３．５％牛磺胆酸在鼠ＡＮＰ模型后测定血内素和ＴＮＦ－α的浓度以及肝ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达。结果 ＡＮＰ大鼠血内毒素ＴＮＦ－α和肝ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠小肠中的表达及细胞定位的研究

为探讨严重烫伤后肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在大鼠小肠中的表达及细胞定位，应用斑点杂交及原位杂交方法，结合血浆ＴＮＦ、内毒素浓度的变化，探讨了ＴＮＦｍＲＮＡ的表达及细胞定位规律。结果发现，烧伤后小肠ＴＮＦｍＲＮＡ的表达量迅速升高，在伤后６小时达峰值，是正常值的５．５６倍。门静脉血浆ＴＮＦ、内毒素的变化与之类似。正常大鼠小肠有少量的细胞表达ＴＮＦｍＲＮＡ，主要是小肠固有层内的单核吞噬细胞。烧伤后固有层内的阳性细胞明显增多，而且固有层毛细管内皮细胞表达也是阳性，隐窝内也出现大量的阳性细胞。提示：ＴＮＦ的表达分泌，在烧伤早期与肠源性内毒素血症有非常密切的联系。固有层及粘膜下层间质中的内皮细胞及单核吞噬细胞是肠道分泌ＴＮＦ的主要细胞。ＴＮＦ分泌量明显增加，其结果是造成小肠局部微循环障碍或诱导自由基的产生，从而导致肠粘膜屏障的破坏。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠肝脏中的表达及细胞定位

作者采用原位杂交法检测了大鼠严重烫伤后肿瘤坏死因子ｍＲＮＡ（ＴＮＦｍＲＮＡ）在肝脏中的表达及细胞定位。结果发现，在正常大鼠肝脏中的枯否氏细胞就表达ＴＮＦｍＲＮＡ。烧伤后，ＴＮＦｍＲＮＡ表达阳性细胞数迅速增加。伤后６～１２小时达顶峰，２４小时与正常无明显差异。其动态变化与门静脉血浆内毒素的变化极为相似。同时还发现烧伤后血窦内皮细胞及门静脉周围浸润的炎症细胞ＴＮＦｍＲＮＡ表达也为阳性，其变化以伤后１２～２４小时最为明显。作者认为肠源性内毒素是ＴＮＦｍＲＮＡ表达的主要刺激物。内皮细胞、中性粒细胞表达阳性提示其已被活化。上述三种细胞在内毒素导致的肝脏损害中发挥了重要作用。     

细胞间粘附分子1,肿瘤坏死因子α转录水平在缺血再灌注大 …

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再澡注期细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）在转录水平的表达规律及相关性。方法 用插线法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）测定缺血再灌注期ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＴＮＦαＲＮＡ的表达变化。结果 缺血侧皮质ＴＮＦαｍＲＮＡ在缺血后１小时开始显著升高,至缺血再灌注２小时达到高峰,持续高表达１周;ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ     

细胞因子IL-1β和TNF-α mRNA在生育者精子的表达

目的 证实生育者精子可以合成细胞因子白细胞介素－１β（ＩＬ－β）和肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）。方法 应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和序列测定技术检测１０名正常生育者精子ＩＬ－１β和ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ的表达。结果 １０名生育精子均有ＩＬ－１β和ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ的表达,其ｃＤＮＡ序列与人其它组织细胞ＩＬ－１β和ＴＮＦ－α ｃＤＮＡ的序列完全一致。结论 生育者精子可以合成ＩＬ－１β和Ｔ     

白细胞介素10抑制核因子кB介导的肾小管上皮细胞表达细胞间黏附分子1

目的研究白细胞介素１０（ＩＬ－１０）对人近端肾小管上皮细胞（ＨＫ－２细胞）在促炎症因子肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）作用下表达细胞间黏附分子１（ＩＣＡＭ－ｌ）及其相关核转录途径的影响。方法 用ＨＫ－２细胞作靶细胞，用细胞酶联免疫吸附法（ＥＩＪＳＡ）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交观察ＩＣＡＭ－１的蛋白和基因的表达，以电泳迁移率变动法测定转录因子核因子ｋＢ （ＮＦｋＢ）和激活蛋白 Ｉ（ＡＰ－１）的活性。结果ＴＮＦα呈剂量依赖地诱导ＨＫ－２细胞ＮＦｋＢ的活化及ＩＣＡＭ－１的基因和蛋白表达，这些作用可以被ＮＦｋＢ的抑制剂对甲苯磺－Ｌ－苯丙氨酸氯甲基甲酮（ＴＰＣＫ）所抑制，但ＴＮＦα对ＨＫ－２细胞的ＡＰ－１活性无影响。 ＩＬ－１０（１～ ２０ｎｇ／ｍｌ）可抑制 ＴＮＦα诱导的 ＨＫ－２细胞 ＩＣＡＭ－ｌ基因和蛋白表达及 ＮＦｋＢ的活化。结论ＴＮＦα诱导人肾小管上皮细胞ＨＫ－２的ＮＦｋＢ活化，进而促进ＩＣＡＭ－ｌ基因和蛋白表达，ＩＬ－１０可抑制ＴＮＦα诱导的上述炎症效应。     

肿瘤坏死因子α诱导人肾近曲小管上皮细胞C_3mRNA表达和蛋白合成及其意义

目的 研究体外培养的人肾脏近曲小管上皮细胞（ＰＴＥＣ）自身以及在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）诱导下补体第三成分（Ｃ３）的基因表达和蛋白合成。方法 用单纯培养或ＴＮＦ－α诱导培养人肾组织的近曲小管上皮细胞，采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法测定Ｃ３ｍＲＮＡ和酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）测定Ｃ３蛋白。结果 基础状态的人ＰＴＥＣ可表达Ｃ３ｍＲＮＡ和合成Ｃ３蛋白，并在ＴＮＦ－α诱导后显著增高，且呈剂量和时间依赖关系。结论 人ＰＴＥＣ自身具有表达Ｃ３ｍＲＮＡ和合成Ｃ３蛋白的能力，并在ＴＮＦ－α的诱导下明显上调。     

肿瘤坏死因子mRNA在严重烫伤大鼠小肠中的表达及细胞…

为探讨严重烫伤后肿瘤坏死因子在大鼠小肠中的表达及细胞定位，应用斑点杂交及原位杂交方法，结合血浆ＴＮＦ，内毒素浓度的变化，探讨了ＴＮＦｍＲＮＡ的表达及细胞定位规律。结果发现，烧伤后小肠ＴＮＦｍＲＮＡ的表达量迅速高，在伤后６小时达峰值，是正常值的５．５６倍。门静脉血浆ＴＮＦ，内毒素的变化与之类似。     

膀胱癌基因治疗的实验研究：外源肿瘤坏死因子—α基因的表达及…

通过逆转录病毒载体将肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦα）基因单独或与白细胞介素－６（ＩＬ－６）基因联合导入膀胱癌细胞株ＥＪ和ＢＩＵ－８７。Ｎｏｒｈｅｒｎ杂交证明外源基因整合于细胞内基因组，并表达相应的ｍＲＮＡ。在转染的细胞培养上清检测到ＴＮＦα活性２～１７Ｕ／ｍｌ。体外标准培养条件下细胞生长速率无明显改变，但在软琼脂中生长减慢，裸鼠致瘤性降低。细胞增殖能力降低与细胞分泌的ＴＮＦα水平直接相关。两种细胞因子     

膀胱癌基因治疗的实验研究：外源肿瘤坏死因子－α基因的表达及作用

通过逆转录病毒载体将肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦα）基因单独或与白细胞介素－６（ＩＬ－６）基因联合导入膀胱癌细胞株ＥＪ和ＢＩＵ－８７。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证明外源基因整合至细胞内基因组，并表达相应的ｍＲＮＡ。在转染的细胞培养上清检测到ＴＮＦα活性２～１７Ｕ／ｍｌ。体外标准培养条件下细胞生长速率无明显改变，但在软琼脂中生长减慢，裸鼠致瘤性降低。细胞增殖能力降低与细胞分泌的ＴＮＦα水平直接相关。两种细胞因子联合未见明显的协同作用。     

异种骨移植对T淋巴细胞总数及亚群的变化

以新鲜小牛松质骨（ＦＸ），脱抗原处理的牛松质骨载体（ＢＣ）及不同复合比例的重组异种骨（ＲＢＸ）植入Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股部肌袋内，正常小鼠模拟手术做了对照组，术后７，１４及２８天，取材做组织学检查，同时以及间接免疫荧光法测定外周血及脾脏淋巴细胞中Ｔｈｙ１，Ｌ３Ｔ４，Ｌｙｔ２及Ｔａｃ阳性细胞百分数，结果示；脱抗原载体植入组与正常对照组无明显差异，ＦＸ组阳性淋巴细胞百分数均明显升高，以Ｔａｃ升高显著；组织     

鱼油对大鼠腹腔感染早期肝脏肿瘤坏死因子信使核糖核酸表达…

目的：了解鱼油对大鼠腹腔感染早期 脏肿瘤坏死因子信使核糖核酸（ＴＮＦｍＲＮＡ）表达的影响。方法：给大鼠口服鱼油，用反义差别ＰＣＲ方法检测腹腔感染早期肝组织ＴＮＦｍＲＮＡ表达水平的变化。结果：鱼油饮食后腹腔感染大鼠各时相点内血浆ＴＮＦ水平及肝脏ＴＮＦｍＲＮＡ表达量均显著低于单纯腹腔感染组（Ｐ〈０．０５）。结论：鱼油饮食能减少腹腔感染大鼠肝脏分泌ＴＮＦ的能力，且可能发生在转录水平上的调节。     

异种骨移植时T淋巴细胞总数及亚群的变化

以新鲜小牛松质骨（ＦＸ）、脱抗原处理的牛松质骨载体（ＢＣ）及不同复合比例的重组合异种骨（ＲＢＸ）植入Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股部肌袋内，正常小鼠模拟手术做为对照组。术后７、１４及２８天，取材做组织学检查，同时以间接免疫荧光法测定外周血及脾脏淋巴细胞中Ｔｈｙ１、Ｌ３Ｔ４、Ｌｙｔ２及Ｔａｃ阳性细胞百分数。结果示：脱抗原载体植入组与正常对照组无明显差异。ＦＸ组阳性淋巴细胞百分数均明显升高，以Ｔａｃ升高显著；组织学示局部免疫排斥而无骨诱导生成。ＲＢＸ植入组Ｔａｃ无增高，组织学见活跃的异位诱导成骨而无免疫排斥反应，但Ｔｈｙ１及Ｌｙｔ２细胞荧光染色阳性率增高，以Ｌｙｔ２增高明显，Ｔｈ／Ｔｓ比值下降或倒置，为ＲＢＸ中所含ＢＭＰ所致。这一现象可能与机体对异种ＢＭＰ及ＲＢＸ不引起明显免疫排斥有关。Ｔａｃ细胞阳性表达率对评价异种骨移植时免疫排斥反应有一定的意义。     

胶原—松质骨载体与成骨细胞相容性实验研究

目的：用胶原修饰松质骨载体表面,增加其生物相容性,方法：新鲜牛松质骨经脱脂,H2O2浸渍及部分脱钙处理,制成去抗原牛松质骨载体,载体表面经胶原处理后,将体外培养的兔骨膜成骨细胞复合在其表面,分别于4,10和20d取材,行扫描电镜观察,比较对照组,结果：4天后,松质骨面及孔内有了细胞粘附生长,20d全部长满,有胶原纤维形成,对照组细胞没有长满,结论：以MBC作为载体,其表面经胶原处理后与成骨细胞有更好的生物相容性。