MOLECULAR CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF THE IMMUNOGLOBULIN LIGHT CHAIN VARIABLE REGION GENE OF A MURINE ANTI-HUMAN C1-INH IgG

获得抗体的可变区基因是由鼠源性ＭｃＡｂ制备重组抗体的前提，本实验合成与轻链可变区（ＶＬ）ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出Ｆ７ＶＬ的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两端进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＬｃＤＮＡ是由３０３个碱基组成，编码１０１个氨基酸残基。由国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现：Ｆ７ＶＬ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因特征，同源性为６０％～８０％。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＬ基因推导的氨基酸序列应归属于小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因ＩＶ亚组，是由Ｖｋ－Ｊｋ１重排产生。ＣＤＲ３含有９个氨基酸残基，其中含３个不相同氨基酸残基，ＶＬ大多数的氨基酸变化集中在ＦＲ１和ＣＤＲ１区，Ｆ７ＶＬ符合ＩｇＶＬ氨基酸残基变化的基本特征。Ｃｙｓ２３和Ｃｙｓ８８残基位于Ｆ７ＶＬＣＤＲ１和ＣＤＲ３的起始点，与二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＬ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下了良好的基础。     

人巨细胞病毒单克隆抗体识别的抗原表位的筛选

目的找出人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）单克隆抗体识别的抗原表位以进行ＨＣＭＶ多肽疫苗的研制。方法通过链亲和素－生物素的作用将ＨＣＭＶ单抗固定在酶联板上，加入噬菌体随机六肽文库，经过三轮捕捉、洗脱、扩大培养的筛选过程，并逐轮增加冲洗强度，与ＨＣＭＶＭｃＡｂ具有亲合力的噬菌体得到了富集；从最后得到的三级库中，随机挑选１６个单克隆，测定其所携带的外源ＤＮＡ的序列，找出一致序列并进行同源性查询。结果１６个克隆中有１５个序列相同，５＇－ＡＧＴＧＣＴＧＧＴＴＧＧＧＣＴＴＣＴ－３＇，对应的氨基酸序列为Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｓｅｒ，此序列同源性查询结果显示与ＨＣＭＶ病毒膜糖蛋白ＵＬ０１有７８．８％的同源性，其中有４个氨基酸残基（ＡＧＷＡ）是完全相符的。结论所筛选到的六肽序列可能为ＨＣＭＶ抗原表位，从而说明用噬菌体肽库技术寻找抗原表位的可行性     

丝裂素活化蛋白激酶活性测定

丝裂素活化蛋白激酶活性测定李田昌，庞永政，苏静怡，唐朝枢（北京医科大学心血管研究所，北京１０００８３）丝裂素活化蛋白激酶（Ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎＫｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）是一族胞浆内广泛分布的含有丝氨酸／苏氨酸残基的蛋白质激酶...     

2型登革病毒04株基因组结构特点的研究

报告了２型登革病毒０４株结构蛋白Ｃ，ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和非结构蛋白ＮＳ１基因的核苷酸及氨基酸序列，并与国际参考株新几内亚Ｃ株、牙买加株和候选疫苗Ｓ１株进行了比较。结果表明，从壳体蛋白Ｃ到主要非结构蛋白ＮＳ１，这一开放读码框架核苷酸总数为３３８１，编码１１２７个氨基酸；在Ｅ蛋白区有３个保守的氨基酸序列，分别位于Ｅ区的９８－１１１、３７１－３７８、４１６－４２２；有２个潜在的糖基化位点，分别位于Ｅ区的Ａｓｎ－６７和Ａｓｎ－１５３位；有１２个保守的半胱氨酸残基。非结构蛋白ＮＳ１有两个糖基化位点，位于ＮＳ１区的１３０和２０７位，有１０个保守的半胱氨酸残基。在结构蛋白Ｃ、ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和非结构蛋白ＮＳ１中，Ｅ蛋白表现最为保守，其次是Ｃ蛋白。Ｄ２－０４株病毒在核苷酸水平与氨基酸水平上与其他２型病毒株比较，我国０４株较类似于牙买加株，其次是ＮＧＣ株，与Ｓ１株类似性最小。说明我国病毒株与牙买加株相关性较大，与Ｓ１株相关性较小。     

中国广西狂犬病毒野毒株（CGX89—1株）糖蛋白基因核…

本报告了中国广西狂犬病毒野毒株（ＣＧＸ８９－１株）糖蛋白基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因从起始密码ＡＴＧ到终止密码ＴＡＡ共有１５７５个核苷酸残基，可编码形成５２４个氨基酸残基的多肽链，经修饰后形成具有５０５个氨基酸残基构成的狂犬病毒糖蛋白。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因和核苷酸组成分别为：Ａ占２７．１１％，Ｔ占２６．２９％，Ｃ占２１．９７％和Ｇ占２４．６３％     

日本猴脑内阿片μ—受体样免疫反应物质的分布：Ⅱ.颈,胸,腰,骶段脊髓及？…

通过应用识别大鼠阿片μ受体Ｃ末端３０个氨基酸残基行异性位点的豚鼠抗体，本文对日本猴颈、胸、腰骶段脊髓和背根节内ＭＯＲ－样免疫反应物质的分布形式和特点进行了免疫组织化学研究。     

近交系小海马结构兴奋性氨基酸受体密度的变化

应用定量放射自显影技术，以氚标配体ＭＫ－８０１、ＡＭＰＡ和ＫＡ分别标记ＮＭＤＡ、ＡＭＰＡ和ＫＡ受体，定量观察了七种近交系小鼠海马结构内兴奋性氨基酸受体的区域分布类型和受体密度变化。结果表明，海马ＣＡ１区含有高密度ＮＭＤＡ和ＡＭＡＰ受体，ＣＡ３和齿状回含高密度ＫＡ受体。三种受体在海马各区的分布类型无明显系间差异，而其受体密度存在着明显的系间差别。ＮＭＤＡ和ＡＭＡＰ受体在ＢＡＬＢ／ｃ鼠海马显示最高密度     

CLONING AND SEQUENCE CHARACTERIZATION OF THE RE-ARRANDED VH GENE FROM HYBRIDOMA CELLS SECRETING ANTI-HUMAN C1-INHIBITOR McAb

由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，合成与ＶＨ基因ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，以ＲＮＡ反转录合成的第一链ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ法克隆出Ｆ７ＶＨ基因的ＤＮＡ片段。将分离获得的目的ＤＮＡ片段亚克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两头进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＨ基因是由３３３个碱基组成，编码１１１个氨基酸残基。通过国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现，Ｆ７ＶＨＤＮＡ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因特征；同源性为６０％～８５％，应归属于Ｉｇ的ＶＨ基因。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＨ基因推导的氨基酸顺序属于小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因的Ⅱ（Ａ）亚组，是由ＶＨ－Ｄ－ＪＨ３重排产生；其框架区的９和６７位点为脯氨酸（Ｐｒｏ）和赖氨酸（Ｌｙｓ）（非芳香族氨氨酸），符合Ⅱ（Ａ）亚组框架残基结构模式；其ＣＤＲ３区含有７个氨氨酸残基，表明Ｃ１－ＩＮＨ抗原表面结构并不复杂；ＦＲ２和ＦＲ３的２２和８９位点为半胱氨酸残基（Ｃｙｓ），与ＶＨ片段二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＨ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下良好的基础。     

我国登革2型病毒43株非结构蛋白NS1基因的特征

对我国１９８７年从广西分离的登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因的核苷酸序列进行了分析，结果表明登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因含有１０５６核苷酸编码３５２个氨基酸，并就其核苷酸序列及其相应的氨基酸序列与我国１９８５年海南流行高峰期分离的Ｄ２－０４株、国际参考株新几内亚Ｃ株（ＮＧＣ）、牙买加株（ＪＡＭ）、候选疫苗株（Ｓ１）和马来西亚流行株Ｍ１（登革出血热）、Ｍ２（登革休克综合征）、Ｍ３（登革热）进行比较，发现核苷酸序列的同源性分别为９２．２％，９３．７％，９３．３％，９０．７％，８９．９％，８９．５％，８９．３％，氨基酸的类似性分别为８９．８％，９２．６％，９３．３％，９１．２％，９０．６％，９０．１％，８９；９％，推断的氨基酸序列含有两个糖基化位点，分别位于氨基酸残基的１３０和２０７位，一个可能的蛋白裂解位点３５０～３５２和１０个保守的半胱氨酸残基。     

HLA—E的研究进展

非经典的ＭＨＣＩｂ类分子ＨＬＡ－Ｅ是继ＨＬＡ－Ａ－Ａ．Ｂ．Ｃ之后发现的第四个ＨＭＣＩ类分子，具有有限的多态性，广泛的组织分布和低水平的细胞表面表达等特点，其与ＮＫ细胞受体ＣＤ９４／ＮＫＧ２的相互作用在抗肿瘤免疫，抗病毒免疫，自身免疫病和母一胎相互作用及体内免疫稳定等方面具有重要的意义。     

一株具有中和活性抗rHuIL—4单克隆抗体的制备和鉴定

白细胞介素４（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－４，ＩＬ－４）是１９８２年由Ｈｏｗａｒｄ发现于Ｔ细胞培养上清中、具有促进Ｂ细胞增殖活性的细胞因子，１９８６年基因克隆成功统一命名。成熟人ＩＬ－４分子为糖蛋白，由１２９个氨基酸残基组成，Ｍｒ１５０００，具有广泛的免...     

rHBsAg结合载脂蛋白H的机理研究

用酶免疫测定、配体印迹、酶水解、化学修饰等方法研究ｒＨＢｓＡｇ结合ａｐｏＨ的机理。实验结果表明，ｒＨＢｓＡｇ结合ａｐｏＨ是不依赖于Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋等二价阳离子的，其最适ｐＨ在６．５～８．０。切除ａｐｏＨ上的神经氨酸和Ｎ－糖苷键，ａｐｏＨ结合力无变化，说明糖基不是ａｐｏＨ结合ｒＨＢｓＡｇ所必需的。化学修饰ａｐｏＨ的精氨酸残基对ａｐｏＨ的结合力无影响。然而，修饰其中几个赖氨酸残基即可减弱直至完全破坏ａｐｏＨ的结合力，说明赖氨酸残基与ａｐｏＨ结合ｒＨＢｓＡｇ有关。由于ａｐｏＨ与脂蛋白，特别是ＣＭ和ＨＤＬ结合，ＨＢＶ有可能通过ａｐｏＨ，结合ＣＭ、ＨＤＬ等，在脂蛋白代谢过程中进入肝细胞。     

人C5aR(CD88)序列结构分析及其B细胞表位预测

采用ＫｙｔｅＤｏｏｌｉｔｔｌｅ氨基酸亲水性标准及Ｂａｉｒｏｃｈ的ＧＧＢＳＭ方案对人Ｃ５ａＲ分子的亲水性基序、Ｂ细胞表位及二级结构进行了预测，并用吴氏建立的Ｂ细胞表位预测方法进行评述。结果显示，不同的预测方案所得结果一致，人Ｃ５ａＲ分子中，构成螺旋结构，伸展构象及无规卷曲的氨基酸残基数比例分别为３３．７％，３４．６％，３１．７％。三个高亲水性区域为第１５～１８位的ＤＤＫＤ，第１９５～２００位的ＤＫＲＲＥＲ和第３３０～３３３位的ＲＥＳＫ，其Ａｈ值分别为３．０、３．０、２．３２。其平均抗原性指数ＡＩ值分别为０．０６４、０．０９１、０．０７０。Ｎ－端第９～３０氨基酸序列的ＡＩ＝０．０４２，是Ｂ细胞优势表位区，以此制作短肽单克隆抗体是可行的。     

病毒性肝炎受体导向药物L－HSA－Ara AMP的导向性实验

选用乳糖化人血清白蛋白（Ｌ－ＨＳＡ）为载体，与单磷酸阿糖腺苷（Ａｒａ－ＡＭＰ）交联成乳糖化人血清白蛋白单磷酸阿糖腺苷（Ｌ－ＨＳＡ－Ａｒａ－ＡＭＰ）交联物，观察了１２５Ｉ标记的该交联物在小鼠体内的分布。结果，１２５Ｉ－Ｌ－ＨＳＡ－ＨＳＡ及１２５Ｉ－Ｌ－ＨＳＡ－ＡｒａＡＭＰ在肝脏内的含量明显高于其他各脏器，前者在肝脏含量最高为第３ｄ，后者为第１ｄ，在第７ｄ仍有一定浓度，二者次于肝脏含量的组织均为肾脏和血液。     

病毒性肝炎受体导向药物L—HSA—Ara AMP的导向性实验

选用乳糖化人血清白蛋白（Ｌ－ＨＳＡ）为载体，与单磷酸阿糖腺苷（Ａｒａ－ＡＭＰ）交联成乳糖化人血清白蛋白单磷酸阿糖腺苷（Ｌ－ＨＳＡ－Ａｒａ－ＡＭＰ）交联物，观察了＾１２５Ｉ标记的该交联物在小鼠体内的分布，结果，＾１２５Ｉ－Ｌ－ＨＳＡ－ＨＳＡ及＾１２５Ｉ－Ｌ－ＨＳＡ－ＨｒａＡＭＰ在肝脏内的含量明显高于其他各脏器，前者在肝脏含量最高为第３ｄ，后者为第１ｄ，在第７ｄ仍有一定浓度，二者次于肝脏含量的组织均为     

人乳腺癌细胞系白细胞介素—2基因转导及成瘤性研究

由于人白细胞介素２（ｈＩＬ－２）在体内能刺激宿主的抗肿瘤免疫反应，我们用逆转录病毒为载体将编码ｈＩＬ－２基因导入人乳腺癌细胞素ＭＤＡ－ＭＢ－４３５，并研究转导铁生物学特征及在动物体内的成瘤性，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法显示原病毒基因已整合到转导细胞基因组内。ＥＬＩＳＡ法证实１０＾６个转导细胞在２４小时内分泌高达１５ｎｇｈＩＬ－２逆转录ＰＣＲ出现ｍＲＮＡ表达，ｈＩＬ－２基因转导细胞在裸鼠体内失去成瘤性。     

卵巢癌患者接受抗CEA鼠单克隆抗体C_（50）放射免疫显像后血清中人抗鼠抗体的检测

我们用ＥＬＩＳＡ对２２例接受抗ＣＥＡ单抗Ｃ（５０）放射免疫显像的卵巢癌病人进行了血清人抗鼠抗体（ＨＡＭＡ）产生的动态检测。４５．５％（１０／２２）的患者产生ＨＡＭＡ，人抗鼠抗体在给药后２～３周即可出现，４～５周达高峰，并在体内持续至少９个月。所产生的ＨＡＭＡ在双向琼脂扩散中仅与抗人ＩｇＧ有沉淀线，且与标准ＩｇＧ的沉淀线相连，与抗人Ｉｇ轻链ｋ、λ单抗、葡萄球菌Ａ蛋白、羊抗人ＩｇＧ均起反应，证明该抗体属于ＩｇＧ。     

甲型肝炎病毒龙甲株结构蛋白基因cDNA序列与国外毒…

将甲型肝炎病毒龙甲株（ＬＪ）结构蛋白基因（包括部分５端非编码基因ｎｔ６３０－３０４９）ｃＤＮＡ序徇与国外ＨＭ１７５、ＭＢＢ和ＬＡ三个母株相应区域相比较，结果显示，ＬＪ株结构蛋白基因与ＭＢＢ株的同源性最高，为９６．７％，与ＨＭ１７５和ＬＡ的同源率分别为９５．４％和９１．４％。推导的氨基酸变异率分别为０．９１％，０．９１％和２．９８％。ＬＪ与ＬＪ株氨基酸差异在整个结构蛋白区均有分布，而与ＨＭ１７５和Ｍ     

大鼠三叉神经尾侧亚核和脊髓内离子型谷氨酸受体、GABA_A受体和甘氨酸受体的分布

为了搞清兴奋性和抑制性氨基酸受体在伤害性刺激信息传递和调制初级门户内的精确定位，本研究用免疫组织化学技术观察了大鼠三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）和脊髓内离子型谷氨酸受体（ＮＭ－ＤＡ受体、ＡＭＰＡ受体和Ｋａｉｎａｔｅ受体）、ＧＡＢＡＡ受体和甘氨酸（Ｇｌｙ）受体的分布。ＮＭＤＡ受体１亚型分布于Ｖｃ和脊髓的各层，ＮＭＤＡ受体２Ａ／Ｂ亚型、Ｋａｉｎａｔｅ受体和ＧＡＢＡＡ受体α亚单位散在性地分布于Ｖｃ和脊髓后角的Ⅰ层，ＧＡＢＡＡ受体α亚单位仅见于Ｖｃ和脊髓Ⅰ层内轴突样结构。ＡＭＰＡ受体、ＧＡＢＡＡ受体β亚单位和Ｇｌｙ受体较密集地分布于Ｖｃ和脊髓的各层，尤其是它们的浅层（Ⅰ和Ⅰ层）。结合机能学研究的结果，讨论了这些受体阳性神经元在伤害性刺激信息传递和调制方面的作用。     

中国广西狂犬病毒野毒株（CGX89－1株）糖蛋白基因核酸序列测定和分析

本文报告了中国广西狂犬病毒野毒株（ＣＧＸ８９－１株）糖蛋白基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因从起始密码ＡＴＧ到终止密码ＴＡＡ共有１５７５个核苷酸残基，可编码形成５２４个氨基酸残基的多肽链，经修饰后形成具有５０５个氨基酸残基构成的狂犬病毒糖蛋白。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因和核苷酸组成分别为：Ａ占２７．１１％，Ｔ占２６．２９％，Ｃ占２１．９７％和Ｇ占２４．６３％。核苷酸序列和巴斯德株（ＰＶ株），国际标准攻击毒株（ＣＶＳ株），中国狂犬病毒疫苗株（３ａＧ株）相比，同源性分别为８４．１％，８３．１％和８４．５％。其推导的氨基酸序列和ＰＶ株、ＣＶＳ株和３ａＧ株相比其同源性分别为９２．４％，８９．７％和８９．５％。ＣＧＸ８９－１株也具有３个Ｎ－糖基化位点，分别位于第３７位、１５７位和３１９位的氨基酸残基上。糖蛋白的膜外区部分重要抗原位点和ＰＶ株、ＣＶＳ株及３ａＧ株具有较高的一致性。