β-羟基异戊酰紫草素对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的通过体外实验研究β-羟基异戊酰紫草素(β-HIVS)对人肺腺癌A549细胞生长的抑制作用,并对其机制进行初步探讨。方法体外培养A549细胞,分为对照组和不同浓度的β-HIVS组。采用CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室法检测β-HIVS对A549细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移的影响;实时荧光定量PCR技术和Western blotting法检测β-HIVS处理后A549细胞p53、Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况。结果β-HIVS能抑制A549细胞的增殖;诱导A549细胞凋亡;阻滞细胞由G_0/G_1期向S期的发展;抑制细胞侵袭和迁移;呈浓度依赖性地上调p53蛋白和mRNA的表达,下调Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结论β-HIVS可显著抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调p53的表达和下调Bcl-2的表达有关。     

芪玉三龙汤药物血清对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的观察芪玉三龙汤药物血清对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法制备芪玉三龙汤药物血清,体外培养A549细胞。将A549细胞分为正常血清组、5%药物血清组、10%药物血清组和20%药物血清组。CCK-8法和集落形成实验检测A549细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2表达。结果与正常血清组比较,不同浓度芪玉三龙汤药物血清组A549细胞活力明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),10%药物血清组和20%药物血清组A549细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论芪玉三龙汤可能通过上调A549细胞Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

壳寡糖诱导肺癌细胞A549凋亡及其机制初探

目的 研究壳寡糖对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Survivin表达的影响.方法 利用金属配位氧化法制备壳寡糖,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的壳寡糖处理不同时间对A549细胞增殖的抑制作用,Wright's-Giemsa染色后观察壳寡糖处理后的A549的形态学变化,利用免疫组织化学法分析壳寡糖对A549细胞中Bcl-2、Bax、Survivin表达量的影响.结果 5.0 mg/ml壳寡糖处理A549细胞48 h后对细胞增殖的抑制率为56.70％.荧光显微镜下观察Wright's-Giemsa染色后细胞的细胞膜褶皱,细胞核固缩,并出现凋亡小体.免疫组织化学法分析表明,壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Bax的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达.结论 壳寡糖对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,推测其可能通过上调Bax和下调Bcl-2、Survivin的表达诱导细胞凋亡.     

血三七醋酸乙酯提取物促进肺癌细胞凋亡的调控机制研究

目的研究血三七Polygonum amplexicaule var. sinense醋酸乙酯提取物(EAEP)对人肺癌A549和H1299细胞凋亡的影响及其机制。方法通过CCK-8细胞增殖检测试剂盒及流式细胞术检测EAEP对A549和H1299细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westernblotting法检测EAEP对A549和H1299细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果 EAEP能显著促进A549和H1299细胞凋亡;显著提高促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA表达水平,降低抗凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达水平;显著提高Bax蛋白表达水平,降低Bcl-2蛋白表达水平。结论 EAEP能通过促进Bax的表达和抑制Bcl-2的表达诱导肺癌细胞凋亡。     

芒柄花苷的体外抗乳腺癌作用及机制研究

目的研究芒柄花苷对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法采用不同浓度芒柄花苷处理乳腺癌细胞MCF-7,噻唑盐(MTS)染色检测细胞活力,Ed U检测细胞增殖能力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western-blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)和基质蛋白酶(MMP)-9的表达。结果芒柄花苷剂量和时间依赖性的抑制MCF-7细胞的生长。MCF-7细胞经芒柄花苷干预后,Ed U阳性细胞数减少、侵袭及迁移细胞数减少和Hoechst阳性细胞数增加。芒柄花苷作用MCF-7细胞,可上调Bax的表达和下调Bcl-2、PCNA和MMP-9的表达。结论芒柄花苷可抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、诱导凋亡和减少侵袭,其机制可能分别涉及调节PCNA、Bcl-2/Bax和MMP-9的表达。     

山茱萸多糖对肺癌细胞的凋亡作用及Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨山茱萸多糖对人肺癌A549细胞凋亡的作用及凋亡相关基因表达的影响.方法 采用MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳法、免疫组化SP法检测山茱萸多糖对A549细胞凋亡作用及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 山茱萸多糖对A549细胞抑制作用明显,抑制程度与质量浓度呈正相关;DNA琼脂糖凝胶电泳出现相差约200 bp的DNA梯形条带,免疫组化SP法染色显示Bcl-2的表达下降,Bax的表达上升.结论 山茱萸多糖对人肺癌A549细胞的增殖有较强抑制作用,能诱导细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达有关.     

牡荆素对A549肺癌细胞凋亡和转移的作用及其机制

目的研究牡荆素抑制A549肺癌细胞转移和促进凋亡的作用及其机制。方法体外培育A549细胞系。采用CCK8实验观察牡荆素对A549细胞活力的影响,并计算50%抑制浓度(IC50)。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察牡荆素对A549肺癌细胞凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax的mRNA表达的影响。Western blot法检测MMP2、MMP9蛋白表达情况。结果CCK8结果表明牡荆素对A549细胞生长有明显的抑制作用,并呈浓度和作用时间依赖性,24h和48h的IC50分别是50.24、14.38μmol/L,且呈时间浓度依赖。划痕实验和Transwell小室实验表明牡荆素能降低肺癌细胞的侵袭和迁移能力。RT--PCR结果表明,牡荆素能上调Caspase9、Caspase3、Bcl-2和Bax的mRNA水平。Western blot结果表明,牡荆素能降低MMP2、MMP9蛋白表达。结论牡荆素能显著抑制肺癌细胞的增殖,促进非小细胞肺癌细胞凋亡、抑制细胞的迁移和侵袭,与调控线粒体依赖性的凋亡途径及抑制间质蛋白酶的活性有关。     

重楼总皂苷对A549细胞凋亡及Caspase3、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨重楼总皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用及对Caspase3、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:CCK-8法检测重楼总皂苷对细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色后激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态的变化;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测重楼总皂苷对细胞凋亡的影响;Western blotting检测重楼总皂苷对细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2表达的影响。结果:重楼总皂苷对A549细胞的生长有显著抑制作用,可引起细胞形态发生明显改变,诱导细胞发生凋亡,显著上调促凋亡蛋白Caspase3的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达,且与浓度成依赖关系。结论:重楼总皂苷可显著诱导A549细胞凋亡,其机制与上调促凋亡蛋白Caspase3的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达相关。     

益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

甘草酸对人肺癌细胞A549凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨甘草酸诱导人肺癌细胞A549凋亡作用及机制研究。方法 :采用噻唑蓝(MTT)法测定甘草酸对A549的生长抑制作用,倒置显微镜观察甘草酸对A549细胞作用后的形态改变,TUNEL实验检测细胞凋亡情况,罗丹明123(Rh123)荧光染色观察线粒体膜电位的改变,免疫印迹实验探讨甘草酸的作用机制。结果:与空白组相比较,不同浓度甘草酸(0.5⁴mmol/L)能够抑制A549肺癌细胞增殖并呈时间-浓度依赖性,确定甘草酸最佳作用时间为24 h,最佳作用浓度为1 mmol L。甘草酸(1 mmol/L)作用24 h后能够显著降低细胞线粒体膜电位并能够下调Bcl-2蛋白表达,上调促凋亡蛋白Bax和cytochrome c蛋白表达。结论:甘草酸能够显著抑制A549肺癌细胞增殖并通过线粒体依赖的凋亡途径发挥作用。     

大黄酚调控Wnt/β-catenin 通路对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡、侵袭能力及EMT 的影响

目的：探讨大黄酚调控Wnt/β-catenin 信号通路抑制胶质瘤细胞的作用机制。方法：体外培养人脑 胶质瘤细胞U87,用不同浓度（0、50、100、200 μmol/L） 的大黄酚处理后,采用CCK-8 法检测U87 细胞增 殖能力;划痕法检测细胞迁移能力;Transwell 法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质 印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2 以及Wnt 通路上皮细胞-间充质转化（EMT） 相关蛋白β-catenin、 E-cadherin、vimentin、MMP-9 蛋白表达。结果：大黄酚能抑制U87 细胞增殖、迁移及侵袭,诱导凋亡（P＜ 0.05）,下调Bcl-2、β-catenin、vimentin 与MMP-9 的表达水平,上调Bax 与E-cadherin 的表达水平（P＜ 0.05）,并呈浓度依赖关系。结论：大黄酚能抑制胶质瘤细胞U87 增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与抑制 Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

扶正消积胶囊对人肺癌细胞株A549增殖抑制及凋亡的影响

目的:研究扶正消积胶囊在体外对人肺癌细胞A549增殖抑制及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测扶正消积胶囊对A549细胞增殖的影响,应用流式细胞仪检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡的影响,应用Western bolt检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:与空白组比较,扶正消积胶囊作用A549细胞24h后,能显著抑制A549细胞的增殖,且这种抑制成浓度依赖关系。Annexin-V/PI双染法结果显示扶正消积胶囊能诱导A549细胞的凋亡,且呈现浓度依赖关系。Western bolt结果显示,扶正消积胶囊能上调Bax表达,下调Bcl-2表达,激活caspase-3、caspase-9、PARP的活性。结论 :扶正消积胶囊能有效抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase家族蛋白酶活性以及上调Bax、下调Bcl-2表达而实现的。     

中药单体汉黄芩素诱导肺癌细胞凋亡及其机制初步研究

目的 考察汉黄芩素对肺癌细胞株A549的增殖、凋亡的影响,并初步探讨其分子机制.方法 MTT法检测汉黄芩素对A549增殖的影响;Hochest染色、流式细胞仪等检测对细胞凋亡的影响;Western-blotting检测汉黄芩素对凋亡相关蛋白的影响.结果 汉黄芩素能抑制A549细胞的生长,其细胞增殖抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖关系.形态学上观察汉黄芩素明显诱导肺癌细胞A549凋亡,同时明显抑制了凋亡相关蛋白BCL-2、survivin蛋白的表达,提升Bax蛋白表达.结论 汉黄芩素可以明显诱导肺癌细胞A549的凋亡,其诱导凋亡分子机制可能与下调BCL-2、survivin蛋白表达有关.     

臭牡丹总黄酮通过调控Wnt/β-catenin通路影响A549细胞上皮间质转化研究

目的探讨臭牡丹总黄酮对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法将pcDNA3.1+空载体与S45位点突变的β-链蛋白(S45A-β-catenin)真核过表达载体转染A549细胞,给予臭牡丹总黄酮干预。MTT法检测细胞的相对存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转录因子Snail 2(Slug)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β的表达水平。结果转染S45A-β-catenin质粒后,A549细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显增强,β-catenin、vimentin蛋白表达水平显著上调,E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白的表达水平显著下调。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭能力,对转染S45A-β-catenin质粒组的细胞作用尤为明显。对转染空载质粒的A549细胞,可上调E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β表达,下调β-catenin、vimentin表达;对转染S45A-β-catenin质粒的A549细胞,可下调β-catenin、vimentin表达。结论抑制细胞中β-catenin的高表达并调控下游的一系列因子,从而影响Wnt/β-catenin通路诱导的上皮间质转化(EMT)现象可能是臭牡丹总黄酮抑制肺癌侵袭、转移的重要作用机制之一。     

石蒜碱诱导肺癌A549细胞凋亡作用研究

为探讨石蒜碱诱导肺癌A549细胞的凋亡作用及其机制。该研究以肺癌A549细胞为实验对象,通过不同浓度的石蒜碱(0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 μmol·L^-1) 处理A549细胞,MTT观察细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞的凋亡率;酶标仪检测凋亡因子Bcl-2,Bax,p53的活性;流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位变化;Real-time PCR检测凋亡相关基因Bcl-2,Bax,p53和Survivin的表达。研究结果表明:石蒜碱可显著抑制A549细胞增殖(P<0.05)、诱导A549细胞凋亡(P<0.05)。同时增强Bax和p53的活性,降低Bcl-2活性和线粒体膜电位,显著改变Bcl-2,Bax,p53和Survivin的基因表达(P<0.05)。综上表明石蒜碱可诱导A549细胞凋亡,具有治疗肺癌的应用前景,其机制可能与其调节Bcl-2信号通路中相关因子活性有关。     

益肺解毒方联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的影响

目的研究益肺解毒方联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的影响。方法 CCK8法、流式细胞术分别检测高剂量益肺解毒方、顺铂、两药联合对A549细胞增殖、凋亡的影响,Transwell、细胞划痕实验检测三者对A549细胞侵袭转移的影响,Western blot、qRT-PCR检测三者对A549细胞Bax、Bcl-2、MMP2、E-cad表达的影响。结果高剂量益肺解毒方、顺铂、两药联合对A549细胞增殖均有显著抑制作用(P0.05),以两药联合最强,联合指数为1.21;三者均可明显诱导A549细胞凋亡(P0.05),两药联合组更显著(P0.05)。与空白对照组比较,3组划痕愈合距离缩短,穿过的细胞数量减少,差异有统计学意义(P0.05),两药联合组更显著(P0.05)。与空白对照组比较,3组Bax、E-cad表达显著升高,Bcl-2、MMP2表达显著降低(P0.05),两药联合组变化更明显(P0.05)。结论益肺解毒方联合顺铂对抑制人肺腺癌A549细胞具有联合增效作用,其机制可能与抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡(促进Bax表达,抑制Bcl-2表达)、抑制细胞侵袭转移(下调MMP2表达,上调E-cad表达)有关。     

四逆汤协同壮观霉素B1诱导PTEN与SUMO1解离治疗肺癌的研究

目的从蛋白质类泛素化修饰角度解析温里剂四逆汤协同壮观霉素B1抑制肺癌细胞增殖、迁移和促进细胞凋亡的作用机制。方法实验分对照组、壮观霉素B1组、四逆汤组和联合药物组,于人非小细胞肺癌A549细胞株作用48 h后,采用Westernblotting法检测小泛素相关修饰蛋白-1(SUMO1)、10号染色体缺失磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷酸化Akt(p-AKT)和Caspase-9的蛋白表达水平;MTT实验绘制细胞增殖曲线;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果壮观霉素B1和四逆汤均能够降低A549细胞共价态SUMO1和p-Akt水平,增加PTEN和活化Caspase-9的蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,壮观霉素B1和四逆汤联合药物组对细胞的抑制作用显著强于各单独给药组。结论四逆汤能够协同壮观霉素B1诱导PTEN与SUMO1解离,进而抑制肺癌细胞增殖、转移和促进细胞凋亡。     

槲皮素单独及联合放射线对Hela细胞生物学行为的影响

目的研究槲皮素、放射线单独及联用对体外培养宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响并探讨分子机制。方法槲皮素、放射线单独及联合作用Hela细胞后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞法检测细胞凋亡,划痕法及Transwell法检测细胞迁移及侵袭,免疫印迹法检测MMP-9蛋白。结果槲皮素、放射线单独或合用均可对Hela细胞产生明显的抑制增殖和诱导凋亡作用(P0.05),联用效果更好;放射线可刺激Hela细胞迁移及侵袭并上调MMP-9蛋白表达,而槲皮素则可抑制这种作用并下调MMP-9蛋白表达。结论槲皮素可通过诱导凋亡方式增强宫颈癌细胞对放射线敏感性,并可通过下调MMP-9蛋白表达抑制放疗期间癌细胞的侵袭和转移。     

红蓝方通过线粒体凋亡途径促进人肺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的: 研究红蓝方( HLD) 对肺癌 A549 细胞的诱导凋亡作用,并基于线粒体凋亡途径探讨其效应机制。方法: 采用不同浓度 HLD 处理人肺癌 A549 细胞,使用 CCK-8 检测细胞毒性及增殖抑制作用;流式细胞技术检测细胞周期和凋亡; 活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧水平; 线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位; Western blot 检测细胞内线粒体 B 淋巴细胞瘤-2( Bcl-2) 家族以及凋亡相关蛋白的表达情况。结果: HLD 可明显抑制肺癌 A549 细胞的增殖,破坏线粒体膜电位,提高细胞内 ROS 水平,显著提高 Bcl-2 家族促凋亡蛋白 Bim_EL、Bim_L、Bax、Bok、Noxa 水平,降低抗凋亡蛋白 Bcl-2 水平以及 Mcl-1磷酸化水平,促进 A549 细胞凋亡。结论: HLD 可通过线粒体凋亡途径促进 A549 细胞凋亡。     

扶正抗癌方联合吉非替尼对A549细胞的协同抗癌作用及机制

目的:通过体外体内实验观察扶正抗癌(FZKA)方联合吉非替尼(Gefitinib)对人肺腺癌A549细胞增殖,凋亡及侵袭转移能力的影响,并探讨研究其相关作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测空白组,FZKA方组(0.2,0.4,0.8,1.6,3.2 g·L^-1),Gefitinib组(10,20,40,60,80,100μmol·L^-1)的干预A549细胞24,48,72 h及FZKA方(2 g·L^-1)联合Gefitinib(40μmol·L^-1)组干预A549细胞24 h的增殖能力;流式细胞术分析检测联合用药组细胞凋亡及周期的变化;划痕实验和transwell小室实验检测联合用药组的侵袭转移能力变化;蛋白免疫印迹法检测细胞联合用药组活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),F-盒和含蛋白7的WD重复结构域(FBW7)及髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白表达的变化情况。结果:与空白组比较,FZKA方,Gefitinib呈剂量依赖性、时间依赖性显著抑制A549细胞的增殖(P<0.05);与空白组比较,FZKA方组,Gefitinib组均能减弱细胞划痕愈合能力和侵袭能力,促进细胞凋亡(P<0.05),均能上调Bax,Caspase-3,FBW7蛋白表达,下调Bcl-2,MCL-1蛋白表达(P<0.05);与Gefitinib单独给药比较,FZKA方联合Gefitinib抑制A549细胞增殖能力和诱导细胞凋亡更明显(P<0.05);细胞划痕愈合能力与侵袭能力明显减弱(P<0.05);上调Bax,Caspase-3,FBW7蛋白表达,下调Bcl-2,MCL-1蛋白表达效果明显(P<0.05)。结论:FZKA方与Gefitinib合用后比单用Gefitinib更能诱导A549细胞凋亡,抑制其增殖及侵袭转移能力更强,两者具有协同抗癌作用,其机制可能与调控FBW7/MCL-1通路相关。