五味沙棘散抗电磁辐射能力的动物实验

<正>五味沙棘散,由沙棘、甘草、木香、栀子等药物组成,具有清热祛痰,止咳定喘功效。用于肺热久嗽,喘促痰多,胸中满闷,胸胁作痛;慢性支气管炎等病症,是蒙古族呼吸系统常用药。经对方药的前期研究结果表明有很好的辐射防护作用。为探究其疗效机制,笔者进行了五味沙棘散对提高受高功率微波辐射大鼠的学习和记忆能力及受高功率微波辐射大鼠的精子活动度的实验研究。1材料与方法1.1药品试剂五味沙棘散由库伦蒙药厂提供,批号     

卷柏中单糖抗辐射作用的研究

目的：分析卷柏（Selaginella tamariscina）中糖类化学成分,观察其对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）和BALB/c小鼠的辐射防护作用,为探讨卷柏抗辐射作用机制提供参考依据。方法：薄层色谱法分析卷柏中糖类化学成分;V79细胞经木糖、果糖、阿拉伯糖处理24 h后接受60Co γ射线照射,分别观察细胞活力、克隆形成率和细胞周期;BALB/c小鼠接受6 Gy 60Co γ射线照射前1周给予木糖,观察受照射小鼠的 30 d存活率。结果：卷柏中含有葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、海藻糖等;其中木糖、果糖、阿拉伯糖在20~200 μg?mL-1浓度范围内可剂量依赖地促进照射后V79细胞增殖,在200 μg?mL-1时可提高照射后V79细胞克隆形成率,增加S期细胞比例,缓解G2/M期阻滞,修正紊乱的细胞周期;照射前分别给予木糖100,500 mg?kg-1可剂量依赖地提高受照射小鼠存活率达20%,30%。结论：卷柏中的单糖类成分可提高受照射小鼠的30 d存活率,其机制可能是通过调节受照射后紊乱的细胞周期而发挥辐射防护作用。     

芦荟多糖对肿瘤细胞生产周期的影响

目的研究芦荟多糖(A loe Polysaccharides,AP)对接受辐射的正常细胞株和肿瘤细胞株的防护作用是否存在差异性。方法应用流式细胞仪检测细胞周期,W estern b lot法检测细胞p53、p21基因蛋白表达。结果AP预处理可以显著降低293和C.L iver细胞G2/M期阻滞,同时使G0/G1期细胞比例明显上升,对3株肿瘤细胞周期则无显著改变或加重G2/M期阻滞。AP预处理可抑制C.L iver p53蛋白的高表达,对CNE1p53蛋白表达则有提高作用,对293、CNE2和SUNE1p53表达均无影响。p21C IP1/WAF1蛋白在3株肿瘤细胞均无表达,在C.L iver和293细胞均于辐射后高表达。结论AP对正常细胞株有显著辐射防护作用,对肿瘤细胞则无显著影响,这种差异可能与p53、p21介导的细胞周期调节通路有关。     

氟对小鼠成釉细胞DNA损伤、细胞凋亡和增殖周期的影响

目的探讨氟对小鼠成釉细胞DNA损伤、细胞凋亡和增殖周期的影响。方法取小鼠成釉细胞,分为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L剂量组,经氟化钠染毒24 h后,收集细胞,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、脂质过氧化物丙二醛(MDA)和8-OHd G含量、DNA单链断裂情况、细胞凋亡、细胞增殖周期以及细胞增殖活性。结果小鼠成釉细胞在氟浓度为2.00和4.00 mmol/L下作用24 h后,细胞SOD、GSH-Px的活性降低(P0.05),MDA含量升高(P0.05)。1.00和4.00 mmol/L剂量组的小鼠成釉细胞DNA尾长、Olive尾距、尾DNA%、尾/头长比均明显高于对照组(P0.05),且在此剂量条件下,小鼠成釉细胞8-OHd G的含量明显升高(P0.05),而在2.00 mmol/L剂量条件下,小鼠成釉细胞DNA损伤各指标的变化不明显。在2.00 mmol/L剂量条件下,G0/G1和G2/M期细胞均显著增多,S期细胞较对照组明显减少(P0.05)。在4.00 mmol/L浓度下,成釉细胞凋亡率明显升高,而细胞增殖活性则在0.25 mmol/L浓度就开始出现了明显的下降(P0.05)。结论在一定剂量条件下,氟可引起小鼠成釉细胞氧化应激,DNA损伤,细胞凋亡,细胞增殖周期改变和细胞增殖活性的降低。氟在2.00 mmol/L剂量条件下可诱导小鼠成釉细胞抗氧化应激反应,但相关机制需结合Nrf2信号通路深入研究。     

白术内酯Ⅰ体内外的抗黑色素瘤研究

目的:探讨自术内酯Ⅰ对人黑色素瘤细胞A875的作用、对肿瘤血管生成的作用和对小鼠黑色素瘤荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制.方法:MTT法检测白术内酯Ⅰ对A875细胞增殖的影响,流式细胞仪检测白术内酯Ⅰ对A875细胞周期及其凋亡的影响;白术内酯Ⅰ对体外血管内皮细胞成管的影响;白术内酯Ⅰ对荷瘤小鼠肿瘤生长及小鼠体质量的影响.结果:白术内酯Ⅰ抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖;作用48 h后,细胞周期中G2/M期和S期细胞比例显著提高,G0/G1期细胞比例减少;细胞凋亡比例显著增加;白术内酯Ⅰ显著抑制内皮细胞成管;白术内酯Ⅰ显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,而对小鼠体质量无影响.结论:白术内酯Ⅰ抑制黑色素瘤细胞A875增殖,诱导细胞凋亡,发生细胞周期阻滞;并且能够抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,不影响荷瘤小鼠的体质量.     

低剂量γ射线诱导丝裂霉素C损伤小鼠胸腺细胞的适应性反应

目的 :探讨低剂量辐射诱导小鼠拮抗丝裂霉素C(MitomycinC,MMC)损伤作用的机制。方法 :小鼠接受低剂量γ射线作用后6h ,再给予损伤剂量的MMC ,然后通过流式细胞术和 3H_TdR掺入法观察小鼠胸腺细胞周期和DNA含量的变化。结果 :50mGy和100mGy照射加MMC组小鼠胸腺细胞 3H_TdR自发掺入率、S期细胞百分率明显高于单纯MMC对照组 (P<0.01,P<0.05)。胸腺细胞G0/G1 期细胞百分率明显低于单纯MMC对照组 ,100mGy照射加MMC组小鼠胸腺细胞G2/M期细胞百分率明显低于单纯MMC对照组。结论 :低剂量γ射线对MMC损伤小鼠胸腺细胞自发掺入能力和细胞周期进程具有刺激作用。     

山萘酚通过抑制伽马辐射诱导的氧化应激和凋亡发生来发挥辐射防护作用

目的在从动物水平和细胞水平研究一种黄酮醇类化合物山萘酚的体内外辐射防护作用,并对其作用可能机制进行探索。方法将C57小鼠分为正常对照组、8.5 Gy辐射模型组、8.5 Gy辐射+山萘酚15 mg·kg~(-1)组、7 Gy辐射模型组、7 Gy辐射+山萘酚15 mg·kg~(-1)组,小鼠在辐射前连续灌胃给药五天,之后一次性分别接受8.5 Gy或7 Gy剂量全身γ射线辐射,观察并记录8.5 Gy辐射后各组动物在辐射后30 d的生存情况以及十天体重变化。在辐射后的第7天,记录各组动物体重,全部处死7 Gy辐射的各组动物,取小鼠脾组织和胸腺组织测定脏器指数并分别检测组织中SOD和MDA水平变化,取小鼠外周血利用抗体标记和流式细胞仪检测外周血中EPCs水平变化,取小鼠小肠组织利用HE染色和TUNEL染色观察小肠组织病理形态变化和凋亡情况,利用Western印迹检测小肠组织蛋白表达变化。使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株,实验分为正常对照组、辐射模型组、山萘酚给药组,辐射前24 h给予药物孵育,之后一次性接受24 Gy剂量γ射线辐射,辐射后24 h,利用MTT法检测各组细胞的存活率,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡、试剂盒检测细胞ROS,NO,SOD和MDA水平、实时PCR和Western印迹检测细胞prx5,Cyt-c,Bax,胱天蛋白酶,活化胱天蛋白酶9,胱天蛋白酶3和活化胱天蛋白酶3在m RNA和蛋白水平表达变化。结果山萘酚可以明显的增加辐射后动物生存率,减少辐射引起的体重降低,提高辐射后脏器指数,增加辐射后组织中SOD水平,降低组织中MDA水平,显著保护辐射后肠结构完整性,增加辐射后小肠平均绒毛高度,增加隐窝数,减少辐射诱导的绒毛细胞和隐窝细胞凋亡,并且提高外周血中内皮祖细胞水平;山萘酚可以增加辐射后细胞生存率,减少细胞凋亡,清除辐射产生的过剩ROS和NO,降低MDA水平,增加SOD水平,恢复辐射后prx-5,Cyt-c,胱天蛋白酶9,活化胱天蛋白酶9和胱天蛋白3,活化胱天蛋白3在m RNA和蛋白水平的异常高表达。结论山萘酚通过减少辐射诱导的氧化应激和细胞凋亡发挥辐射防护作用。     

茶多酚对肺癌PG细胞生长的调控研究

目的：探讨茶多酚对人PG细胞生长的影响。方法：采用MTT法体外观察不同浓度茶多酚对PG细胞的杀伤作用；应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分析，检测用药后PG细胞内Ca^2 浓度，CD44V6表达和细胞增殖周期分布的变化。结果：3个浓度的茶多酚对PG2细胞的有杀伤作用，呈剂量依赖分析。细胞增殖受到明显抑制，使细胞阻滞于G0／G1期，不能进入S期及G2／M期，细胞增殖指数明显下降。细胞内Ca^2 浓度与对照组相比，逐渐上升；CD44V6表达水平则呈逐渐下降。结论：茶多酚对PG细胞的生长具有抑制作用，其作用机制与改变细胞内Ca^2 浓度和CD44V6表达有关。     

茶多酚对肺癌PG细胞生长的调控研究

目的:探讨茶多酚对人PG细胞生长的影响。方法:采用MTT法体外观察不同浓度茶多酚对PG细胞的杀伤作用;应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分析,检测用药后PG细胞内Ca2 +浓度、CD44 V6表达和细胞增殖周期分布的变化。结果:3个浓度的茶多酚对PG细胞均有杀伤作用,呈剂量依赖关系。细胞增殖受到明显抑制,使细胞阻滞于G0 / G1期,不能进入S期及G2 / M期,细胞增殖指数明显下降。细胞内Ca²⁺浓度与对照组相比,逐渐上升;CD44 V6表达水平则呈逐渐下降。结论:茶多酚对PG细胞的生长具有抑制作用,其作用机制与改变细胞内Ca2 +浓度和CD44 V6表达有关     

特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对B16黑色素瘤多途径抑瘤作用的研究

目的探讨特异性抗原致敏的树突状细胞(dentritic cells,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)细胞对B16黑色素瘤的作用。方法采用特异性肿瘤抗原致敏的DC与CIK细胞共同培养,分析其免疫表型,计算抑瘤率;流式细胞(FCM)检测癌细胞增殖周期中G0/G1期、S期、G2/M期细胞比率和细胞凋亡指数(apoptosis Index,AI)、细胞增殖指数(proliferation Index,PI)的变化;透射电镜观察形态学变化;并用MTT法检测其对肿瘤细胞的杀伤力。结果特异性抗原致敏的DC-CIK细胞组抑瘤率高于DC-CIK组和CIK组;FCM检测G0/G1期细胞比率、AI显著升高,S期无明显变化,G2/M期细胞比率、PI显著下降;特异性抗原致敏的DC-CIK细胞组杀伤活性明显升高(P<0.05)。结论特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对B16黑色素瘤的抑瘤作用明显高于DC-CIK细胞和单纯CIK细胞。