低频超声联合微泡造影剂诱导人前列腺癌PC3细胞及DU145细胞自噬的实验研究

目的：研究低频超声联合微泡造影剂对人雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞及DU145细胞自噬的影响。方法2种细胞均各分为空白对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组和低频超声联合微泡组4组,每组设3个复孔。单纯微泡组加200μl的微泡造影剂混匀,不进行超声辐照;单纯低频超声组以声功率80 mW的20 kHz低频超声,不加造影剂,连续波辐照60 s;低频超声联合微泡组加200μl的微泡造影剂,混匀后以声功率80 mW的20 kHz低频超声,连续波辐照60 s;空白对照组不进行任何处理,辐照后的细胞继续培养24 h,吖啶橙染色荧光显微镜与透射电镜观察细胞自噬泡。结果经吖啶橙染色后,荧光显微镜下,2种细胞低频超声联合微泡组的胞质内可见大量红色荧光的酸性囊泡,明显多于其余3组;单纯低频超声组红色荧光的酸性囊泡量亦多于空白对照组,空白对照组与单纯微泡组红色荧光的酸性囊泡量差异不大。透射电镜下,2种细胞的低频超声联合微泡组细胞细胞核基本正常,但胞质内出现大量由双层膜包裹的自噬泡或自噬体,而空白对照组内的细胞形态基本正常,胞质内未见到明显的自噬泡的形成。结论低频超声联合微泡造影剂能明显诱导人雄激素非依赖型前列腺癌PC3细胞及DU145细胞的自噬。     

惰性气体微泡联合低频低强度超声辐照对人胰腺癌PANC-1细胞抑癌作用的实验研究

目的 探讨惰性气体微气泡联合低频低强度超声波连续辐照对人胰腺癌PANC-1细胞的抑癌作用。方法 取对数生长的浓度为1×106 /ml的人胰腺癌PANC-1单细胞悬液分成4组,具体为：空白对照组加入2 ml人胰腺癌PANC-1单细胞悬液;惰性气体微气泡组加入1600 μl人胰腺癌PANC-1单细胞悬液和400 μl惰性气体微气泡并充分混匀,使惰性气体微气泡浓度为20%;低频低强度超声波组加入2 ml人胰腺癌PANC-1单细胞悬液,再用声强0.60 W/cm2、频率1 MHz的低频低强度超声连续波连续辐照60 s;微气泡+超声波组加入1600 μl人胰腺癌PANC-1单细胞悬液和400 μl的惰性气体微气泡并充分混匀,使惰性气体微气泡浓度为20%,再以声强0.60 W/cm2、频率1 MHz的低频低强度超声连续波连续辐照60 s。采用细胞计数试剂法检测各组细胞增殖活性,应用分析型流式细胞仪测定各组细胞的凋亡情况。结果 空白对照组、惰性气体微气泡组、低频低强度超声波组、微气泡+超声波组人胰腺癌PANC-1细胞增殖活性分别为 0.9356±0.1652、1.1126±0.0738、0.3236±0.0126、0.1566±0.0137,微气泡+超声波组细胞增殖活性均低于其余各组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。空白对照组、惰性气体微气泡组、低频低强度超声波组、微气泡+超声波组细胞凋亡率分别为0.069±0.007、0.033±0.006、0.279±0.016、0.678±0.018,微气泡+超声波组细胞凋亡率均高于其余各组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 惰性气体微气泡联合低频低强度超声波连续辐照能降低体外培养的人胰腺癌PANC-1细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,具有明显的抑癌作用,为肿瘤治疗提供新的研究思路。     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。     

低频低能量超声联合微泡诱导人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的 研究低频低能量超声联合微泡诱导人雄激素非依赖型前列腺癌细胞凋亡及可能分子机制.方法 以频率21 kHz、声强为46 mW/cm2超声,采用连续波,辐照人前列腺癌PC-3细胞悬液.实验分3组:对照组、单纯超声组和超声联合微泡组(加声诺维200 μl).辐照后,细胞集落实验检测对细胞增殖的影响;辐照后培养24 h,透射电镜及TUNEL染色检测细胞凋亡,实时定量PCR检测对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响.结果 超声联合微泡组细胞集落数量明显少于对照组(153.33±10.80对313.33±25.82,P＜0.05),超声联合微泡能明显抑制人前列腺癌细胞的增殖.超声联合微泡组较对照组能明显诱导细胞凋亡(13.33±1.35对0.33±0.17,P＜0.05).超声联合微泡能够下调Bcl-2 mRNA的表达,上调Bax mRNA的表达(P＜0.05).结论 低频低能量超声联合微泡能够诱导人雄激素非依赖型前列腺癌细胞凋亡,并且可能通过下调Bcl-2 mRNA及上调Bax mRNA的表达来实现.     

载紫杉醇超声微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2增殖影响及诱导凋亡作用研究

目的 探讨超声辐照紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2增殖抑制的影响和诱导凋亡作用.方法 体外培养肝癌细胞,将细胞分4组,即空白对照组,紫杉醇组,超声空白微泡组,超声载紫杉醇微泡组.MTT法观察不同处理组不同时间点对细胞生长的影响,Annexin V-FITC荧光染色检测其对诱导细胞凋亡作用.结果 超声载紫杉醇微泡组对细胞的增殖抑制作用强于其他处理组及对照组;超声载紫杉醇微泡组能够诱导肿瘤细胞发生凋亡.结论 超声辐照紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2生长有明显抑制作用,并诱导细胞凋亡.     

低频超声联合SonoVue微泡促进裸鼠基因体内转染的可行性

目的 探讨利用低频超声联合SonoVue微泡造影剂促进基因转染人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤的可行性。方法 采用人前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后随机分为空白组（仅注射生理盐水）、单纯质粒组（注射生理盐水和质粒混悬液）、低频超声组（注射生理盐水和质粒混悬液后超声辐照）和低频超声+微泡组（注射超声微泡造影剂和质粒混悬液后超声辐照）。超声辐照条件：功率3 W/cm²,占空比5：5,频率80 kHz,辐照10 min。基因转染3天后在激光共聚焦显微镜下观察各组绿色荧光蛋白表达情况,并分析其平均荧光强度;同时行常规病理检查,观察低频超声联合微泡辐照对组织的损伤程度。结果 4组中,仅低频超声+微泡组可见明显绿色荧光,与其他各组差异均有统计学意义（P均<0.05）;空白组、单纯质粒组和低频超声组均未见明显绿色荧光。各组均未见明显组织损伤。结论 SonoVue微泡造影剂在低频超声辐照下能够安全有效地促进pEGFP基因转染进入人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤组织内。     

低频超声联合微泡影响前列腺癌DU145细胞血管内皮细胞生长因子表达的实验研究

目的探讨低频超声联合微泡对前列腺癌DUl45细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法体外培养前列腺癌DUl45细胞,细胞呈对数生长时分为4组进行实验：对照组（细胞悬液1ml）、单纯微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue）、单纯低频超声组（1ml细胞悬液以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30S）、低频超声联合微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue后立即以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30s）。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡率,Western印迹法检测细胞VEGF蛋白的表达。采用单因素方差分析比较对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率、凋亡率、VEGF蛋白表达量差异,进一步组间两两比较采用SNK-q检验。结果对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率分别为100％、（96．50±12．49）％、（93．20±5.31）％、（81．30±9．32）％;凋亡率分别为（1．10±0．26）％、（1．78±0．63）％、（5．85±0．45）％、（9．36±0．90）％;VEGF蛋白表达量分别为0．81±0．05、0．79±0．06、0．58±0．04、0．38±0．05。单纯微泡组、单纯低频超声组细胞存活率与对照组比较差异均无统计学意义,低频超声联合微泡组细胞存活率较对照组降低,且差异有统计学意义（q=5．88,P〈0．05）。单纯微泡组细胞凋亡率、VEGF蛋白表达量与对照组比较差异均无统计学意义;单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞凋亡率均高于对照组,VEGF蛋白表达量均低于对照组,且差异均有统计学意义（q=14．09、24．51、8．06、14．89,P均〈0．05）。低频超声联合微泡组细胞凋亡率高于而VEGF蛋白表达量低于单纯低频超声组,且差异亦均有统计学意义（q=10．42、6．83,P均〈0．05）。结论微泡能增强低频超声抑制前列腺癌DUl45细胞增殖及促进凋亡,其机制可能与其下调前列腺癌DUl45细胞VEGF表达有关。     

比较不同频率低频超声联合微泡促进脂质体介导的pEGFP质粒转染人前列腺癌细胞的实验研究

目的比较不同频率低频超声联合微泡促进脂质体介导的p EGFP质粒转染人前列腺癌PC3细胞。方法实验共分7组:空白对照组仅人前列腺癌PC3细胞株,不进行任何处理;质粒组每毫升细胞悬液中加入1μg质粒;脂质体组每毫升细胞悬液中加入100μl转染液;脂质体+微泡组每毫升细胞中悬液加入100μl转染液和200μl微泡,低频超声联合脂质体+微泡组每毫升细胞悬液中加入100μl转染液和200μl微泡,同时采用声功率为400 m W/cm2的脉冲超声波辐照模式,辐照时间240 s,占空比设为1∶1,依据辐照频率不同又分3个亚组,分别为20 k Hz超声组、500 k Hz超声组和1 MHz超声组。每组设6个复孔。各组经处理后继续培养24 h,荧光显微镜观察转染情况;流式细胞仪检测各组转染率。结果荧光显微镜下,低频超声联合脂质体+微泡组PC3细胞胞质内可见大量绿色荧光蛋白表达,明显多于其他各组,各亚组间又以20 k Hz超声组绿色荧光蛋白较多;脂质体组和脂质体+微泡组绿色荧光蛋白表达量亦多于空白对照组和质粒组。流式细胞仪检测显示,低频超声联合脂质体微泡组转染率高于质粒组,其中20 k Hz超声组转染率最高,明显高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。脂质体组与脂质体+微泡组之间、500 k Hz超声组与1 MHz超声组之间转染率比较差异无统计学意义。结论低频超声辐照微泡可显著促进脂质体介导的p EGFP质粒转染人前列腺癌PC3细胞。在相同声功率、相同辐照面积下,随着辐照频率的升高,转染率呈现下降趋势。     

低频低能量超声联合微泡抑制人前列腺癌细胞PC-3转移的研究

目的探讨低频低能量超声联合微泡抑制人前列腺癌细胞转移及分子机制。方法以频率21 k Hz、声强46 m W/cm2超声,采用连续波辐照人前列腺癌细胞PC-3悬液30 s。分为三组:对照组、单独超声辐照组及超声辐照联合微泡组(加声诺维200μl)。辐照后培养12 h,Transwell小室模型进行细胞体外转移实验,western-blot检测其基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果辐照后12 h,与对照组比较,单独超声辐照组及超声辐照联合微泡组细胞转移数量受到抑制,并且以超声辐照联合微泡组受到抑制最明显(均P0.05);细胞辐照24 h后,与对照组比较,单独超声辐照组及超声辐照联合微泡组MMP-2及MMP-9蛋白表达明显受到抑制,并且以超声辐照联合微泡组最为明显(均P0.05)。结论低频超声联合微泡能够抑制人前列腺癌细胞PC-3的转移,并且可能通过下调MMP-2、MMP-9蛋白表达来实现。     

高机械指数超声辐照微泡对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨高机械指数超声造影对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 体外培养结肠癌细胞株(Lovo细胞).分为对照组、微泡+超声组、单纯超声辐照组和单纯微泡组.使用超声造影剂SonoVue,探头频率1.5 MHz,机械指数1.7进行超声间歇辐照,采用MTT法、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡指数.结果 对照组、单纯辐照组及单纯微泡组的增殖能力、细胞周期与凋亡指数无明显差异(P>0.05);微泡+超声组与对照组比较,其增殖能力明显低于对照组(P<0.01),而凋亡指数明显高于对照组(P<0.01).结论 高机械指数超声辐照微泡击破效应对结肠癌细胞的增殖有明显抑制作用,而对结肠癌细胞的凋亡有明显促进作用.     

低频超声联合微泡增强脂质体介导Racl—shRNA质粒转染前列腺癌细胞及对其生物学行为的影响

目的研究低频超声联合微泡增强脂质体介导的Racl-shRNA质粒转染前列腺癌PC3、DUl45细胞,并探索其对前列腺癌细胞凋亡、侵袭能力的影响。方法基础情况下Westernblot检测RWPE-1细胞、PC3细胞和DUl45细胞的Rac1蛋白表达。根据不同处理方式将细胞分为四组：PC3细胞对照组（A组）、超声加微泡联合脂质体转染PC3细胞组（B组）、DUl45细胞对照组（c组）及超声加微泡联合脂质体转染DUl45细胞组（D组）。通过蛋白质体外结合实验技术检测各组Racl蛋白的活性及表达;流式细胞仪检测各组细胞早期凋亡情况;细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力。结果基础情况下前列腺癌PC3、DUl45细胞Racl蛋白表达均较正常前列腺细胞RWPE-1增加,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;低频超声携微泡介导Rac-1shRNA质粒转染细胞后,B组Racl蛋白表达量较A组表达减少,D组表达量较C组减少,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;早期细胞凋亡检测显示,B组高于A组,D组高于C组,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;同期细胞侵袭力实验显示,B组穿膜细胞数少于A组,D组的穿膜细胞数少于C组,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论低频超声联合微泡可促进脂质体介导的Racl-shRNA质粒转染人雄激素非依赖型前列腺癌细胞;通过抑制PC3、DUl45细胞中Racl蛋白表达可以促进癌细胞的早期细胞凋亡,同时可抑制癌细胞的侵袭能力。     

超声辐照和SonoVue微泡在介导hAng-1基因体外转染时的作用和量效关系探讨

目的 探讨超声辐照和SonoVue微泡分别使用和联用在介导hAng-1基因体外转染过程中的作用以及辐照强度和微泡浓度对转染效率和细胞活性的影响.方法 实验分四组A组:单纯超声辐照+质粒组;B组:微泡+质粒组;C组:超声辐照+微泡+质粒组和空白对照组D组. C组内转染参数分别设置为超声照射强度0.5、1.0 、1.5和2.0 W/cm~2,微泡浓度5%、10%、20%、30%和40%.将连接有eGFP-C_3-hAng-1质粒的SonoVue微泡对293T细胞进行转染,48 h后检测各组基因转染效率和细胞存活率. 结果转染48 h后C组转染效率最高,荧光阳性细胞数最多,强度最大;A组转染效率很低,见少量荧光表达;B、D组无明显基因转染发生.随着超声照射强度和微泡浓度的增加,基因转染效率会逐步升高,具有统计学意义.微泡浓度大于20%、超声照射强度超过1.5 W/cm~2后基因转染效率不再升高甚至降低,细胞死亡率显著增高(P<0.01).结论 SonoVue微泡介导外源基因转染必须联合超声辐照才能获得较好的转染效率.对于hAng-1基因和SonoVue微泡,选择声强1.5 W/cm~2,微泡浓度20%是相对最佳转染条件.     

超声辐照载羟喜树碱微泡对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的 探讨超声辐照载羟喜树碱微泡对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖抑制作用.方法 将SMMC-7721细胞随机分为6组,即载羟喜树碱微泡+超声组、羟喜树碱+超声组、单纯羟喜树碱组、载羟喜树碱微泡组、空白微泡+超声组及对照组.采用MTT法观察各处理因素对细胞的生长抑制情况;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期分布;Annexin V-FITC/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡状况.结果 载羟喜树碱微泡+超声组对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖有明显抑制作用,其24 h、48 h、72 h的抑制率分别为(49.56±1.57)%,(80.01±1.52)%,(91.41±0.64)%;FCM结果显示其将SMMC-7721细胞有效阻滞于G0/G1期;Annexin V-FITC/PI检测细胞早期凋亡率为(12.18±1.38)%;TUNEL法显示染成棕黄色的凋亡细胞,细胞中晚期凋亡率为(34.25±1.83)%.以上结果与其他组的检测结果相比,差异有统计学意义.结论 超声辐照载羟喜树碱微泡能明显抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖.其机制可能与阻滞细胞周期于G0/G1期同时诱导细胞凋亡有关.     

诊断超声产生的血流增强效应及肿瘤释药研究

目的采用诊断超声激励微泡的方法增强肿瘤组织的血流灌注,增加肿瘤组织局部阿霉素的释放。 方法选取健康雄性SD大鼠10只,双侧大腿内侧皮下种植Walker-256肿瘤20个,随机配对分为对照组（10例）与超声治疗组（10例）。治疗前后分别进行超声造影,对超声造影图像进行定量分析。治疗后获取部分肿瘤组织后行高效液相色谱法检测肿瘤组织的药物浓度,另外采用冰冻切片观察肿瘤组织内阿霉素的荧光强度。治疗组与对照组定量分析峰值强度（PI）、曲线下面积（AUC）及阿霉素药物质量浓度比较,采用配对t检验。 结果（1）超声治疗后视觉造影效果中,6个明显增强,4个无明显变化,定量分析PI及AUC明显高于治疗前（PI：75.74±17.67 vs 66.22±16.25,AUC：3354.91±796.15 vs 2937.52±677.51）,差异均有统计学意义（t=-5.212、-5.259,P均<0.001）;（2）治疗组阿霉素药物质量浓度是对照组的1.2倍[（1.15±0.25）μg/g vs（0.96±0.21）μg/g],差异有统计学意义（t=2.403,P<0.05）;（3）各组肿瘤组织光镜下表现：肿瘤细胞排列成条索状,核大深染,治疗组可见血管充血,有少量炎症细胞浸润;（4）激光共聚焦显微镜下可见治疗组肿瘤组织间质中外漏的阿霉素荧光明显多于对照组。 结论诊断超声激励微泡治疗可增强大鼠Walker-256肿瘤的血流灌注,有助于化疗药物局部释放。     

不同占空比诊断超声联合微泡对乏血供肿瘤血流灌注的影响

目的 探讨不同占空比诊断超声联合微泡对大鼠乏血供肿瘤血流灌注的影响。 方法 选用wistar大鼠45只,于右侧背部皮下建立大鼠C6胶质细胞瘤模型,根据不同脉冲时间及间隔时间随机分为5组,每组9只：A组,脉冲时间5s,间隔时间1s;B组,脉冲时间1s,间隔时间1s;C组,脉冲时间1s,间隔时间5s;D组,脉冲时间5s,间隔时间5s;E组,超声假照。各组对应的治疗脉冲占空比分别为0.167%、0.1%、0.033%、0.1%和0。每组荷瘤大鼠经超声联合微泡治疗/超声假照10min,于治疗/假照前、治疗/假照后即刻分别行超声造影检查,获得时间-强度曲线(TIC),比较各组峰值强度(PI)、曲线下面积(AUC);对比分析各组肿瘤超声造影图像进行超声造影视觉评分;各组随机选取3只大鼠取肿瘤组织行HE染色,观察治疗/假照后病理学变化。 结果 与组内治疗前比较,A组、B组治疗后AUC值增加,差异有统计学意义(t=-2.726,-3.922;P=0.026,0.004),各组治疗/假照后PI值及C组、D组、E组AUC值与组内治疗/假照前比较差异无统计学意义(均P>0.05)。与C组、D组、E组比较,A组、B组超声造影视觉评分值较高,差异有统计学意义(均P<0.05),余组间无明显统计学差异(均P>0.05)。A组、B组可见较明显的血管扩张,A组部分血管周围组织内可见少量红细胞渗出,C组、D组、E组血管扩张不明显。 结论 脉冲时间5s,间隔时间1s,占空比0.167%及脉冲时间1s,间隔时间1s,占空比0.1%的低强度诊断超声联合微泡可增强乏血供肿瘤血流灌注,后者为相对安全的超声治疗声学参数。     

The mechanisms of somatostatin induced enhanced chemosensitivity of gallbladder cancer cell line to doxorubicin: Cell cycle modulation plus target enzyme up-regulation

Background

Gallbladder carcinoma is known to be an aggressive malignancy and nonsensitive to routine chemotherapy. Its prognosis is quite poor. We have illustrated that somatostatin (SST) can enhance chemosensitivity of gallbladder cancer to Doxorubicin (DOX) in our precious studies. Here, we explored the possible mechanisms by which SST used to enhance the cytotoxicity of DOX on gallbladder carcinoma cell line.

Methods

Human gallbladder cancer cells line (GBC-SD cell line) were divided into four groups: control group, SST group, DOX group, SST + DOX co-treated-group. Cell cycle was detected by flow cytometry (FCM). Cell apoptosis index was detected by using Annexin V/Propidium Iodide Binding on FCM. The expressions of certain key cell cycle-related factors, including retinoblastoma protein (Rb) and E2F-1 protein were investigated by western blotting. ICBP90 protein, which could be a new downstream effector of E2F-1, was also detected by western blotting. The expression of Topo IIα protein, target enzyme of DOX, was assessed in synchronized GBC-SD cells by western blotting.

Results

After 24 h treatment with SST alone, cell cycle was arrested at S phase in GBC-SD cells line, followed by indistinctive increment of apoptosis index. After 24 h treatment with SST and DOX, apoptosis index significantly increased than that of DOX alone (P < 0.05). Compared with control group, the expressions of Rb and E2F-1 protein were significantly up-regulated at 24 h after treatment with SST. Similarly, the expressions of ICBP90 and Topo IIα protein were also enhanced at 24 h after treatment with SST.

Conclusion

These results suggested that SST could induce cell cycle block in S phase in GBC-SD cells line, the most sensitive phase of the cell cycle for DOX, through up-regulating Rb, E2F-1 and ICBP90 protein expression. Furthermore, ICBP90 induced the enhanced expression of Topo IIα protein which is the target enzyme of DOX and enhanced its cytotoxic effect on GBC-SD cells. We concluded that the mechanisms of SST enhanced chemosensitivity of GBC-SD cell line to DOX might be cell cycle arrest plus up-regulated target enzyme.     

超声微泡造影剂促腺病毒介导MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的作用机制及安全性研究

目的 探讨超声微泡造影剂促进以腺病毒为载体介导的多药耐药基因1(MDR1)体外转染兔骨髓单个核细胞的作用机制和安全性.方法 根据是否加入超声微泡造影剂和进行超声辐照将分选的兔骨髓单个核细胞分为常规培养组(A)、腺病毒转染组(B)、腺病毒转染+超声辐照组(C)、腺病毒微泡造影剂转染组(D)和腺病毒微泡造影剂转染+超声辐照组(E).不同实验因素处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞外源性MDR1基因的转染率,同时观测转染后不同时间各组细胞体外扩增情况;台盼蓝拒染法计数各组细胞的存活率;分别用扫描电镜和透射电镜观察超声辐照后细胞超微结构的改变.结果 流式细胞仪检测各组细胞MDR1基因的转染率分别为0.39%土0.11%、5.03%±0.35%、4.93%±0.38%、5.25%±0.80%,19.93%±1.51%,E组明显高于其余4组(P＜0.05);试验各组细胞在转染后不同时期体外增殖情况差异无统计学意义(P＞0.05),各组细胞存活率差异亦无统计学意义(P＞0.05);一定强度的超声辐照后,骨髓单个核细胞胞膜出现一过性的小孔,细胞器发生可逆性肿胀改变.结论 超声微泡造影剂可使兔骨髓单个核细胞通透性暂时性提高,促进腺病毒载体介导的MDR1基因转染;同时不会对细胞的增殖能力、存活率及超微结构造成严重的不可逆损害,证明其是一种安全可行的基因转移新方法.