原发性胆汁性肝硬化患者B淋巴细胞刺激因子基因表达的测定及临床意义

目的建立检测人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)mRNA的相对定量方法,探讨其基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法基于TaqM an-MGB探针技术,以18SrRNA为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差(△CT值)定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30名正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)BLyS基因的表达。结果PBC患者外周血单个核细胞BLyS mRNA表达的△CT值为9.5±2.5,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其原始模板浓度为正常对照组的4.3倍。PBC患者中抗核抗体(ANA)阳性占80%;其中ANA 1∶100组BLyS检测的△CT为11.4±0.9,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而ANA 1∶1 000和ANA 1∶10 000组BLyS的△CT值与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001),两组间△CT值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论PBC患者PBMC BLyS mRNA表达水平明显升高,且与ANA滴度相关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL基因表达水平初探

目的 建立检测人增殖诱导配体（APRIL）mRNA的实时荧光定量PCR方法,探讨外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法 采用实时荧光定量PCR法检测30例正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）APRIL基因的相对表达量,以Ct值比较法计算APRIL基因相对表达水平。结果 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA的△Ct值为9．3±2.0,与正常对照组比较．差异显著（P〈0．05）。采用2^-△△Ct法进行数据分析后,PBC组APRIL mRNA相对表达量比正常对照组高3．5倍。PBC患者中抗核抗体（ANA）阳性占80％,其中荧光模式为核膜型19例。其他型13例（着丝点型10例,混合型3例）,其APRIL基因相对表达量比正常对照组高6.5和1．7倍。结论 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平显著升高,且与ANA荧光模式相关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血TRAIL基因表达水平初探

目的建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)mRNA的实时荧光相对定量方法,探讨其基因表达与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法基于TaqMan-MGB探针技术,以β-actin基因为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差,即△Ct值定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30例PBC患者、25例乙型肝炎(简称乙肝)后肝硬化患者及30名正常人外周血单个核细胞(PBMC)TRAIL基因的表达,同时检测血浆γ-谷氨酰转肽酶(GGT)和碱性磷酸酶(ALP)浓度,并作相关性分析。结果PBC患者PBMC TRAIL基因检测的△Ct值为2.4±1.2,其相对表达量是正常对照组的6.96倍,差异有统计学意义(P<0.05),乙肝后肝硬化患者TRAIL基因△Ct值为3.3±1.7,其相对表达量是正常对照组的3.73倍,差异有统计学意义(P<0.05),而PBC组与乙肝后肝硬化组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。PBC患者TRAIL的△Ct值与GGT浓度的对数值呈显著相关(r=-0.396,P<0.05)。结论PBC患者及乙肝后肝...     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血TRAIL基因表达水平初探

目的建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）mRNA的实时荧光相对定量方法,探讨其基因表达与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法基于TaqMan—MGB探针技术,以B—actin基因为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差,即△Ct值定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）相对定量方法,检测30例PBC患者、25例乙型肝炎（简称乙肝）后肝硬化患者及30名正常人外周血单个核细胞（PBMC）TRAIL基因的表达,同时检测血浆γ－谷氨酰转肽酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）浓度,并作相关性分析：结果PBC患者PBMCTRAIL基因检测的△Ct值为2．4±1．2,其相对表达量是正常对照组的6．96倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,乙肝后肝硬化患者TRAIL基因△Ct值为3．3±1．7,其相对表达量是正常对照组的3．73倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,而PBC组与乙肝后肝硬化组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。PBC患者TRAIL的△Ct值与GGT浓度的对数值呈显著相关（r=－0．396,P〈0．05）。结论PBC患者及乙肝后肝硬化患者PBMC TRAIL基因表达水平明显升高,提示TRAIL在自身免疫性肝病及肝脏病毒损伤中均具有重要作用。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中趋化因子受体CXCR3 mRNA表达水平变化

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR3mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系.方法 采用逆转录实时荧光定量(FQ-RT)-PCR的方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测59例PBC患者(活动期29例、缓解期30例)、结缔组织病(CTD)患者20例(疾病对照组)、健康体检者29名(健康对照组)外周血PBMC中CXCR3 mRNA的表达水平和含量.以Act=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)比较基因表达水平的变化.结果 活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于缓解期PBC患者(Act=7.77±2.74,t=3.39,P＜0.01);活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于正常对照组(Act=7.16±2.76,t=2.45,P＜0.01)和疾病对照组(Act:7.24±2.75,t=2.53,P＜0.01);缓解期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PBC患者CXCR3 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示CXCR3的表达与PBC的发生发展存在一定关联性.     

粒细胞集落刺激因子受体基因在原发性胆汁性肝硬化外周血单个核细胞的表达及临床意义初探

目的探讨粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)基因在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBM C)的表达情况及其临床意义。方法建立以18S rRNA基因为内参的实时荧光逆转录聚合酶链反应相对定量方法,检测30例PBC患者和30例正常人PBM C中G-CSFR基因的相对表达量。结果PBC患者PBM C中G-CSFR mRNA的ΔCT值为10.6±2.2,其相对表达量是正常对照组(8.9±0.4)的30%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论G-CSFR基因在PBM C中的表达降低与PBC的发病密切相关,提示G-CSFR在PBC的发病中可能具有一定作用。     

GP210与原发性胆汁性肝硬化患者TLR3表达的关系及其临床意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血细胞TLR3的表达及其在GP210抗体阳性和阴性患者之间的表达差异。方法选择初次确诊的PBC患者65例,其中男15例,女50例。GP210抗体阳性患者21例,阴性患者44例。对照组选择性别和年龄相匹配的慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB)患者22例。对所有患者分离外周血单个核细胞(peripheral blood monuclear cell,PBMC),抽提总RNA,定量PCR分析其TLR3的mRNA表达水平。分别以anti-CD3、anti-CD4、anti-CD8和anti-TLR3抗体对PBMC进行染色,流式细胞术分析各细胞亚群中TLR3的表达情况。结果 PBC组患者血清碱性磷酸酶(ALP)显著高于CHB组(P=0.002),而且GP210阳性PBC患者ALP高于阴性患者(P=0.004)。PCR结果表明,PBC组PBMC中TLR3的mRNA表达量显著高于CHB组(P=0.01),而且PBC组内GP210阳性患者表达高于阴性患者的表达水平(P0.001)。流式细胞术分析结果发现,PBC组PBMC、CD3+、CD4+、CD8+T细胞表面的TLR3表达量均显著高于CHB组,差异有统计学意义(P0.05);其中PBC组GP210阳性患者PBMC、CD3+和CD8+T细胞表达量较GP210患者均显著升高,差异有统计学意义(P0.05),而CD4+T细胞无显著差异(P0.05)。结论 GP210阳性PBC患者中PBMC和T细胞表面TLR3的基因和蛋白表达水平均高于GP210阴性患者,TLR3的表达差异对于PBC的诊断和预后判断具有一定临床价值。     

原发性胆汁性肝硬化患者中β-arrestin 1表达增高及其意义

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中β-arrestin 1的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR检测60例PBC患者、60例乙肝后肝硬化患者和60例健康体检者PBMCs中β-arrestin 1 mRNA水平,采用免疫印迹(western-blotting)技术检测β-arrestin 1蛋白表达水平.结果 PBC患者PBMCs中β-arrestin 1 mRNA的表达显著高于健康对照组和疾病对照组(P＜0.01),而疾病对照组和健康对照组PBMCs中β-arrestin 1 mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05),并且β-arrestin 1表达水平与Mayo risk score正相关(Pearson r2=0.593 5,P＜0.001).PBC患者PBMCs中β-arrestin 1蛋白水平显著高于健康对照组和疾病对照组(P＜0.01),而疾病对照组和健康对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PBC患者中β-arrestin 1表达显著增高,提示β-arrestin 1在PBC发病机制中可能起着重要作用,有可能作为PBC疾病进程的一个新的免疫状态标志.     

雌激素受体α基因多态性对女性原发性胆汁淤积性肝硬化患者T细胞亚群及其相关细胞因子变化影响的研究

目的 探讨雌激素受体α(ERα)基因多态性对女性原发性胆汁淤积性肝硬化(PBC)患者T细胞亚群及其相关细胞因子变化的影响.方法 以未经治疗的60例女性PBC患者为研究组,性别、年龄匹配的健康体检的52例为对照组进行研究.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法 检测ERα基因1号内含子PvuⅡ和XbaⅠ酶切位点多态性.流式细胞仪定量检测外周血CD+、CD8+、CD4+CD25+、CD4+CD28-T淋巴细胞.RT-PCR方法 检测外周血单个核细胞TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10 mRNA的表达.结果 女性PBC患者的ERot基因PvuⅡ酶切基因亚型中Pp的阳性率明显高于正常对照组(P<0.05),pp基因亚型的阳性率则明显低于对照组(P<0.05).XbaⅠ基因型以及等位基因频率在女性PBC组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).PBC患者的XxPp和xxPp基因型的阳性率均明显高于正常对照组(P<0.05).PBC患者ppxx基因型的阳性率低于正常对照组,但两组间差异无统计学意义(P>0.05).女性PBC患者的其他ERα基因型阳性率与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05).PBC患者的T淋巴细胞中CD+T淋巴细胞比例增高(P<0.05),CD8+T淋巴细胞比例降低(P>0.05).PBC患者CD4+CD25+T细胞比例与对照组比较明显降低(P<0.05),CD4+CD28-T细胞比例则明显升高(P<0.05).PBC患者外周血单个核细胞TNF-α、IL-2和IFN-γmRNA表达水平明显高于对照组(P<0.01).IL-4和IL-10 mRNA表达水平虽高于对照组,但组间差异无统计学意义(P>0.05).IL-6 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05).结论 PvuⅡ基因的Pp基因型是女性PBC的遗传易感基因型,P等位基因是易感基因.PBC患者外周血以Thl细胞亚群及其细胞因子占优势.ERα基因多态性可作为遗传易感背景影响PBC患者体内T细胞亚群的偏移及其相关细胞因子的表达.     

PD-L1在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中的变化及意义

目的探究程序性细胞死亡配体1(PD-L1)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达情况及意义。方法收集2013年2月～2015年12月于长海医院确诊的23例PBC患者和23例健康对照者外周血,用密度梯度离心法分离出PBMC后进行培养,以实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测PBMC中PD-L1的mRNA表达状况,以酶联免疫吸附反应(ELISA)法检测培养液中TNF-α,TGF-β,IL-23和IL-17等细胞因子的表达量,两组之间的变量比较采用两独立样本t检验,以Pearson相关系数表示两变量之间的关系。结果实验组与对照组PD-L1的mRNA表达水平为0.23±0.08 vs 1.27±0.40(t=12.23,P0.000 1),差异具有统计学意义。Pearson相关性分析显示PD-L1与IL-23成负相关(r=-0.531,P=0.009),差异具有统计学意义。结论 PD-L1可能参与了PBC疾病形成过程,是该病预测和治疗潜在的生物标志物。