微小RNA 27a在卵巢上皮性癌紫杉醇耐药细胞中的表达及其与耐药的关系

目的 研究微小RNA 27a(miR-27a)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)紫杉醇耐药细胞中的表达及其与耐药的关系.方法 采用实时PCR技术检测卵巢癌A2780细胞及其紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol中miR-27a的表达水平.利用脂质体lipofectamine 2000将成熟miR-27a的模拟物、阻遏物及阴性对照(NC)转染A2780和A2780/Taxol细胞,实时PCR技术检测转染细胞中MDRI基因mRNA的表达;蛋白印迹法检测转染细胞中P-糖蛋白(P-gp)和同源结构域相关的蛋白激酶2(HIPK2)蛋白的表达;采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪分别检测紫杉醇作用于转染后细胞的增殖情况及细胞凋亡率.结果 (1)miR-27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比表达水平增高2.2倍,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染miR-27a阻遏物后,A2780/Taxol细胞中MDR1 mRNA的表达水平为0.61±0.14,与转染NC细胞(表达水平为1.00)比较下降39%,差异有统计学意义(P<0.05);P-gp印蛋白的表达水平为(26±5)%,HIPK2蛋白的表达水平为(30±6)%,分别与转染NC细胞的P-gp蛋白[(43±7)%]和HIPK2蛋白[(19±4)%]的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性增加,半数抑制浓度(IC50)为0.5 μmol/L,与转染NC细胞(IC50为6.8 μmol/L)比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率明显升高,达(32.5±3.6)%,与转染NC细胞的凋亡率(5.6±2.1)%比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)转染miR-27a模拟物后,A2780细胞中MDR1 mRNA的表达水平为2.21±0.11,与转染NC细胞(表达水平为1.00)比较升高121%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-27a在卵巢癌紫杉醇耐药细胞中高表达,其町能通过调控靶基因HIPK2,间接调节MDB1及P-gp的表达和功能而参与耐药.     

微小RNA与卵巢癌研究进展

微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一组存在于真核生物中的长度约21~23个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,参与基因转录后水平的调控,在细胞增殖、分化和凋亡中起着非常重要的作用。越来越多的研究表明,mi RNA表达水平的改变与多种人类恶性肿瘤的发病和进展有关,如结直肠癌、宫颈癌、卵巢癌等。mi RNA在卵巢癌中异常表达,与其发生、发展、转移、耐药和预后密切相关,有望成为卵巢癌的早期诊断和预后的标记物,并为化疗耐药分析和个性化治疗提供新的临床思路。现就目前研究最多的mi R-200家族,let-7家族及mi R-199a在卵巢癌中的作用进行综述。     

微小RNA在妇科肿瘤中的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类在动植物中广泛存在的内源性21～25个核苷酸的短序列、高度保守的小分子非编码RNA.这类分子调节基因的表达,参与细胞分化、增殖和凋亡,肿瘤的发生、DNA甲基化及染色质改变等一系列的重要进程.综述miRNA的生物合成、作用机制及在妇科肿瘤中的一些研究进展.     

微小RNA在妇科肿瘤中的研究进展

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类在动植物中广泛存在的内源性21~25个核苷酸的短序列、高度保守的小分子非编码RNA。这类分子调节基因的表达,参与细胞分化、增殖和凋亡,肿瘤的发生、DNA甲基化及染色质改变等一系列的重要进程。综述miRNA的生物合成、作用机制及在妇科肿瘤中的一些研究进展。     

与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在卵巢上皮性癌浸润转移中的作用

目的 筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中与ezrin基因表达相关的微小RNA(miRNA),并分析其在卵巢癌浸润转移中的作用.方法 (1)实时逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法分别检测两对具有不同侵袭转移能力的卵巢癌细胞系SKOV3和SKOV3ip细胞、HO-8910和HO-8910PM细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达差异,选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系(即SKOV3和SKOV3ip细胞)用于以下实验.(2)用miRNA芯片筛选SKOV3和SKOV3ip细胞中差异表达miRNA,然后用生物信息学工具[三大数据库,即TARGETSCAN(http://www.targetscan.org)、MICROCOSM(http://www.ebi.ac.uk/enright-srv/microcosm/htdocs/targets/v5/)和PICTAR(http://www.pictar.mdc-berlin.de)数据库]预测并比对miRNA芯片的筛选结果,筛选出与ezrin基因表达相关的miRNA,并采用实时RT-PCR技术验证.将筛选出来的miRNA转染SKOV3ip细胞,用蛋白印迹法和实时RT-PCR技术检测其对SKOV3ip细胞中ezrin mRNA和蛋白表达的调控作用,以未做任何处理者为空白对照.结果 (1)SKOV3ip细胞中ezrin mRNA的表达水平是SKOV3细胞的(81.74±5.34)倍,HO-8910PM细胞中ezrin mRNA的表达水平是HO-8910细胞的(2.61±0.14)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);蛋白印迹法检测显示,SKOV3ip细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于SKOV3细胞,HO-8910PM细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于HO-8910细胞.选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系,即SKOV3和SKOV3ip细胞用于以下实验.(2)将miRNA芯片筛选结果与生物信息学工具预测结果对比分析,筛选出两个可能调控ezrin基因表达的特异miRNA,即miR-183和miR-22;实时RT-PCR技术检测显示,miR-183和miR-22在SKOV3和SKOV3ip细胞中的表达差异,与miRNA芯片筛选结果一致,SKOV3细胞中miR-183和miR-22的表达水平分别是SKOV3ip细胞的(5.84±0.66)和(6.67±0.67)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).miRNA转染SKOV3ip细胞后,其ezrin mRNA的表达水平是空白对照的(1.03±0.10)倍,两者比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而ezrin蛋白的表达强度则明显低于空白对照.结论 侵袭力强的卵巢癌细胞中ezrin mRNA和蛋白均高表达,与ezrin基因表达相关的miRNA--miR-183和miR-22的过度表达均能有效调节侵袭转移相关基因ezrin蛋白的表达水平,它们可能具有ezrin基因介导的抑制卵巢癌细胞浸润转移的潜在功能.     

微小RNA在妇科恶性肿瘤中的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是动、植物基因组中广泛存在的一类非编码单链小分子RNA,在转录后水平以完全或非完全互补的方式与其靶mRNA相结合,调节靶mRNA表达,从而影响生物学性状.研究发现,miRNA参与生命过程中一系列重要进程,参与人体生理或病理过程,与人类多种疾病密切相关.目前,关于miRNA在妇科...     

肿瘤标记物在卵巢癌诊断中的研究进展

卵巢癌是女性生殖器官常见的三大恶性肿瘤之一,病死率居妇科恶性肿瘤首位,已成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤.卵巢癌早期临床症状隐匿,70％的患者就诊时已是晚期,晚期卵巢癌患者5年生存率仅30％,而早期卵巢癌患者5年生存率则达90％.目前急需寻找特异度和敏感度高的肿瘤标记物用于卵巢癌的早期诊断,进一步提高生存率.糖链抗原,人附睾蛋白4(HE4),NECTIN4,溶血磷脂酸(LPA),酪氨酸激酶受体(trkA)和微小RNA(miRNA)在卵巢癌诊断中发挥了一定的作用,其中糖链抗原CA125临床应用最广.miRNA作为一种新的肿瘤标记物可以改善卵巢癌的诊断方法.     

微小RNA在卵巢癌中侵袭转移机制的研究进展

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类长约20～22个核苷的非编码RNA分子。miRNA通过调控靶基因影响肿瘤细胞的分化、增殖、转移及细胞坏死。大量研究提示miRNA与人类恶性肿瘤有关,其在卵巢癌组织中表达往往存在异常。卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,90%以上的卵巢癌是上皮性癌,5年生存率仅30%,因卵巢癌早期多无明显症状,故在诊断时,肿瘤发生转移率高。卵巢癌的侵袭转移机制涉及多种物质及通路,有大量研究表明肿瘤干细胞相关miRNA、上皮－间充质转换相关miRNA、细胞外基质相关miRNA以及血管形成相关miRNA与卵巢癌侵袭、转移过程有关,其在卵巢癌组织中的异常表达能通过调控下游物质的表达,从而参与卵巢癌的发生发展及侵袭转移。综述miRNA在卵巢癌中侵袭转移相关机制方面的研究。     

微小RNA-16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究

目的:研究微小RNA-16(miR-16)在人上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其与顺铂耐药的关系。方法:脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及阴性对照片段(NC)分别转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP。实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-16的表达;蛋白印迹法检测细胞中Bcl-2蛋白、c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50);caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:(1)SKOV3/DDP细胞顺铂耐药指数(RI)为5.33;(2)SKOV3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于SKOV3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001);(3)SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较SKOV3细胞明显升高,转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01);(4)SKOV3/DDP细胞转染miR-16 mim-ics后,顺铂IC50(14.19±0.06)较转染NC组(22.52±0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000);(5)顺铂(20μg/ml)作用24h、48h后,SKOV3组凋亡率明显高于SKOV3/DDP组,转染miR-16 mimics的SKOV3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。结论:miR-16可能通过靶向下调上皮性卵巢癌细胞Bcl-2蛋白,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。     

微小RNA与卵巢癌化疗耐药及预后

化疗耐药是导致晚期卵巢癌患者预后不良的主要原因。寻找卵巢癌化疗敏感性标记物是当前研究的热点。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类非编码小分子RNA,可在转录后水平负性调控基因表达。新近大量研究表明卵巢癌中一些异常表达的miRNAs可调节药物敏感性相关基因的表达,导致肿瘤细胞对抗肿瘤药物的敏感性发生改变;以特定miRNAs为靶点的治疗可能通过克服抗药性而为卵巢癌的治疗开辟新的途径。提示miRNAs可能成为一种潜在的预后分层及个体化治疗的有效工具。就miRNAs在卵巢癌化疗耐药及预后判断中的研究进展进行综述。     

肿瘤标记物用于卵巢癌早期诊断的研究进展

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,早期无明显临床症状,且缺乏有效的诊断方法,其病死率居于妇科肿瘤首位。基因组学、蛋白质组学和免疫学等方法已成为目前卵巢癌早期诊断研究的热点,以期找到高度敏感、特异的用于卵巢癌早期诊断的标记物。综述与卵巢癌相关的新的肿瘤标记物的研究进展。     

卵巢肿瘤干细胞耐药机制研究进展

卵巢癌治疗中的主要问题是高复发率和产生耐药性.肿瘤干细胞具有无限增殖的能力,对药物的耐受性增加,提示肿瘤干细胞与化疗耐药的关系密切.从耐药卵巢癌细胞中可分选出具有特定表面标志的肿瘤干细胞,其为肿瘤形成提供可自我更新并在传代中保持肿瘤特性不变,是卵巢癌耐药性产生和复发的根本因为.利用卵巢癌干细胞表面标志分子的特异性,使化...     

卵巢癌肿瘤干细胞的研究进展

肿瘤干细胞是存在于肿瘤组织中的一小群具有干细胞特性的细胞,具有自我更新、多分化潜能、高增殖能力和耐药性4个特点。卵巢癌是病死率最高、预后最差的妇科恶性肿瘤。由于部分卵巢癌细胞亚群具有干细胞特性,肿瘤较易产生化疗耐药性。很多研究表明肿瘤干细胞亚群存在于小鼠快速生长的肿瘤细胞中,并具有多向分化能力及耐药性。因此,深入了解肿瘤干细胞的生物学特性、表面标记以及如何靶向定位,对肿瘤干细胞的治疗具有重要临床意义。就卵巢癌干细胞的研究和临床应用进行综述。     

Fn14活化凋亡增强人上皮性卵巢癌细胞顺铂敏感度的研究

目的：探讨成纤维细胞生长诱导因子14（Fn14）对人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞的顺铂（DDP）敏感度的影响及其可能机制。方法：蛋白质印迹（Western blotting）法检测EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中Fn14蛋白的表达情况,选择低表达Fn14蛋白的细胞株转染Fn14过表达质粒后,观察转染后细胞株的Fn14蛋白、凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3和Bcl-2的表达情况。CCK-8法检测细胞增殖能力及DDP半数抑制浓度（IC50）。流式细胞学检测细胞凋亡。结果：人EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中,A2780/DDP细胞株Fn14蛋白表达水平最低。Fn14过表达质粒转染A2780/DDP细胞后,细胞内Fn14表达水平上调（P＜0.05）;细胞的增殖能力无变化,但细胞DDP的IC50显著降低（P＜0.05）。流式细胞学检测结果进一步显示Fn14可以增加DDP诱导的A2780/DDP凋亡细胞数目。同时,Western blotting结果显示促凋亡蛋白caspase-3表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降（P＜0.05）。结论：Fn14可能活化凋亡通路进而提高A2780/DDP细胞对DDP的敏感度。     

表观遗传学与卵巢癌耐药的关系研究

卵巢癌在妇科恶性肿瘤中致死率最高,目前其临床治疗手段主要是手术切除和辅助性化疗,但治疗后其易复发、易转移和易耐药的特性,使得很多抗肿瘤药对其作用仅限于初期治疗。研究表明肿瘤的发生、发展及其耐药机制与表观遗传学关系密切,而相关研究也证实卵巢癌的发生发展与耐药受表观遗传学的调控,如DNA甲基化,包括Ras相关区域1A基因(RASSF1A)和乳腺癌易感基因1(BRCA1)异常甲基化;组蛋白修饰,包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化等多种方式;微小RNA(mi RNA)调控相关基因等。同时研究表明通过调控表观遗传学如DNA甲基转移酶抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂等与传统抗肿瘤药物进行联合治疗能够显著提高卵巢癌的疗效,因此研究表观遗传学与卵巢癌的耐药机制有望为临床治疗卵巢癌提供新的思路与研究基础。